7/24/2019 RosaBengala.pdf

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Rosa de BengalaAglutinacin en porta

ROSE BENGAL

Determinacin cualitativa de anticuerpos anti-BrucellaIVD

Conservar a 2 - 8C.

PRINCIPIO DEL METODOEl Rosa de Bengala es una tcnica de aglutinacin en porta para ladeteccin cualitativa y semicuantitativa de anticuerpos anti-Brucela ensuero humano o animal. La suspensin bacteriana y coloreada, esaglutinada por anticuerpos IgG o IgM presentes en el suero delpaciente.

SIGNIFICADO CLINICOEl diagnstico de la brucelosis puede establecerse bien sea por elaislamiento del microorganismo en sangre o heces, o por lademostracin de la presencia de anticuerpos especficos en el suero delpaciente. El reactivo, debido a su formulacin en un tampn de pHcido, es capaz de reaccionar con anticuerpos IgG o IgM, por lo que esmuy til para el diagnstico de individuos en fase crnica de laenfermedad, los cuales presentan un nivel elevado de anticuerpos IgGdifcilmente detectables por el mtodo tradicional de aglutinacin en tubo(Wright).

REACTIVOS

Rose BengalSuspensin de Brucella abortus cepa 544, enTampn Lactato 1 mol/L, fenol 5 g/L, RosaBengala, pH 3,6.

Control +Tapn rojo

Suero animal, con un contenido de anticuerposanti-Brucella > 50 UI/mL. Azida sdica, 0,95 g/L.

Control Tapn azul

Suero animal. Azida sdica, 0,95 g/L

PRECAUCIONESFenol: Toxico (T) R24/25: Txico en contacto con la piel y por ingestin. R34:Provoca quemaduras. S28.2: En caso de contacto con la piel, lvese inmediata y

abundantemente con agua. S45: En caso de accidente o malestar, acudainmediatamente al mdico.

CALIBRACIONLa sensibilidad del reactivo est estandarizada frente a la 2 Preparacinde suero bovino anti-Brucella abortusde NIBS (UK).

CONSERVACION Y ESTABILIDADTodos los reactivos del kit estn listos para su uso.Indicadores de deterioro de los reactivos: Presencia de partculas.

Todos los componentes del kit son estables hasta la fecha de caducidadindicada en la etiqueta del vial, cuando se mantienen los viales biencerrados a 2-8C, y se evita la contaminacin durante su uso. Nocongelar: la congelacin de los reactivo altera irreversiblemente lafuncionalidad de stos.

MATERIAL ADICIONAL- Agitador mecnico rotatorio de velocidad regulable a 80-100 r.p.m.

MUESTRASSuero fresco. Estable 7 das a 2-8C o 3 meses a -20C.Las muestras con restos de fibrina deben ser centrifugadas antes de laprueba. No utilizar muestras altamente hemolizadas o lipmicas.

PROCEDIMIENTO

Mtodo cualitativo1. Atemperar los reactivos y las muestras a temperatura ambiente. La

sensibilidad del ensayo disminuye a temperaturas bajas.2. Depositar 50 L de la muestra a ensayar y una gota de cada uno

de los controles Positivo y Negativo, sobre crculos distintos de unporta.

3. Homogeneizar suavemente el reactivo de R. de Bengala antes deusar. Depositar una gota (50 L) junto a cada una de las gotasanteriores.

4. Mezclar las gotas con un palillo, procurando extender la mezclapor toda la superficie interior del crculo. Emplear palillos distintospara cada muestra.

5. Situar el porta sobre un agitador rotatorio a 80 100 r.p.m.

durante 4 minutos. El exceso de tiempo de agitacin puedeoriginar la aparicin de falsos positivos.

Mtodo semicuantitativo1. Realizar diluciones dobles de la muestra en solucin salina 9 g/L.2. Proceder para cada dilucin, como en la prueba cualitativa.

LECTURA E INTERPRETACIONExaminar macroscpicamente la presencia o ausencia de aglutinacininmediatamente despus de retirar el porta del agitador. La presenciade aglutinacin indica una concentracin de anticuerpos anti-Brucelaigual o superior a 25 UI/mL.En el mtodo semicuantitativo, se define el ttulo como la dilucinmayor que da resultado positivo.

CALCULOSLa concentracin aproximada de anticuerpos anti-Brucella en lamuestra del paciente se obtiene de la siguiente manera:

25 x Ttulo de anti-Brucella = UI/mL

CONTROL DE CALIDADSe recomienda utilizar el control positivo y negativo para controlar lafuncionalidad del reactivo, as como modelo de comparacin para lainterpretacin de los resultados.

VALORES DE REFERENCIAHasta 25 IU/mL. Es recomendable que cada laboratorio establezcasus propios valores de referencia.

CARACTERISTICAS DEL METODO

1. Sensibilidad analtica: 25 (5) UI/mL, en las condiciones descritasen el ensayo.

2. Efecto prozona: No se observa efecto prozona hasta valores de1000 UI/mL.

3. Sensibilidad diagnstica: 93,3%4. Especificidad diagnstica: 100%

INTERFERENCIASHemoglobina (10 g/L), lpidos (10 g/L) y factores reumatoides (300UI/mL) no interfieren. La bilirrubina interfiere a partir de 2,5 mg/dL.Otras sustancias pueden interferir

5.

NOTASEl diagnstico clnico no debe realizarse nicamente con losresultados de un nico ensayo, sino que debe considerarse al mismotiempo los datos clnicos del paciente.

BIBLIOGRAFIA1.Young E J. Clinical Infectious Diseases 1995; 21: 283-290.2. Alton GC. Techniques for Brucellosis Laboratory INRA Paris, 1988.3. ArizaJ. Current Opinion in Infectious Diseases 1996; 9: 126-131.4. Comit mixto FAO/OMS de expertos en Brucelosis. WLD Health Org Tech

Rep Ser 1958; 148: 1-60.5. Young DS. Effects of drugs on clinical laboratory test, 4th ed. AACC Press,

1995.

Cont.PRESENTACION

Ref. 1200901 50 test : 2,5 mL Rose Bengal

: 1 mL Control +

: 1 mL Control -

: 8 x 6 portas desechables

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