Riesgos genéticos asociados a técnicas

de reproducción asisitida

Presenta: Dr. Pedro A. Ponce BarberenaProfesor titular: Dr. Héctor S. Godoy Morales

Profesor asociado: Emb. Luciano Cedillo García-Lascurain

CURSO DE SUBESPECIALIDAD EN BIOLOGIA DE LA REPRODUCCION HUMANA

HOSPITAL ANGELES PEDREGALMarzo 2011- Febrero 2013

IntroducciónEnero 14 y 15 2005Hospital for Sick Children – Toronto – Ontario – Canadá 45 profesionalesRiesgos del embarazo y del fetoDespués de un periodo de infertilidad y con TRARecomendaciones

IntroducciónMás de 2 millones de niños nacidos por TRARCIU OR 1.59 IC95%( 1.20-2.11)Parto pretérmino < 33 SDG OR 2.99 IC95%( 1.54-5.80)Parto pretérmino < 37 SDG OR 1.93 IC95%(1.36-2.74)Bajo peso al nacer < 1,500 g OR 3.78 IC95%(4.29-5.75)Muerte in utero OR 2.40 IC95%(1.59-3.63)

IntroducciónSíndrome de Beckwith-WiedemannSíndrome de AngelmanInfertilidad

MétodosGrupo de investigadores y clínicos expertos en: epidemiología, ginecología y obstetricia, embriología clínica, biología molecular, genética clínica y de cáncer, impronta genómica, consejería genética, bioética , salud de la mujer y leyes.

PropósitoResumen de los conocimientos actuales de los riesgos de los hijos nacidos por ARTRedes de contactos y la transferencia de conocimientos entre los expertos en la materiaDeterminar si se ameritan más estudiosDesarrollar recomendaciones para futuras investigaciones en los desenlaces clínicos causados por alteraciones genéticas o epigenéticas despúes de la infertilidad o TRA.

Resumen de la revisión sistemática

Judith Hall MD.Niños de embarazo único están tienen mayor riesgo de parto pretérmino, muy bajo peso al nacer, muerte perinatal. * Anormalidades cromosómicas relacionadas al sexo ( anormalidades en cromosomas paternos)Los embarazos gemelares por TRA = espontáneos* Evidencia sugestiva pero no concluyente para la pérdida del imprinting genómico ( S. B-W y S. Angelman)

Resumen de la revisión sistemática

Los datos fueron insuficientes o no sugestivos para la asociación de FIV con :

- Infecciones respiratorias- Hipospadias- Trastornos del desarrollo y psicosociales- Malformaciones mayores- Cáncer infantil- Anormalidades del crecimiento

DificultadesHeterogéneo en indicaciones para el tratamiento y TRARiesgo a priori de parejas infértiles para defectos al nacimientoAsignación del grupo control con parejas infértiles que conciban sin tratamiento ó fértiles que conciban con TRA

Reporte de 2 casos no relacionados de Síndrome de Angelman concebidos por ICSI

Paciente 1 :3 años de edad Referido por retraso en el desarrollo : habla - hipotoníaPobre balance, dificultad para dormir, personalidad exageradamente feliz.Madre de 33 años y padre de 31 años (oligospermia y astenozoospermia)Embarazo normal

Paciente 1 :Cariotipo del paciente 46 XX y normal para X frágilRM y estudio metabólico normalExámen físico : macrosomia, obesidad, microbraquicefalico, facies de felicidad, brazos flexionadosFISH: normal

Paciente 1 :Southern Blot: anormal

- Una banda fuertemente no metilada y una con metilación débil (10% de la intensidad por densitometría) PCR del exon 1 del gen SNRPN : igual. METILACION EN MOSAICO Padres con estudio normal

Paciente 2:2 años 8 meses Referido por retraso mental y deficiencia en el hablaVómitos frecuentes , hiperactiva y muy amigableMicrobraquicefalia, boca ancha, prognatismo, hipotonía de tronco, marcha ataxicaElectroencefalograma: actividad epileptiforme Habla en sonidos no palabras

Paciente 2:Madre de 31 años y padre de 32 años (oligospermia , hipo-hipo)Embarazo normalCariotipo ambos padres normalFISH : normalSouthern Blot y PCR: anormal

- Una banda no metilada

Individuos normales:Gen SNRPN :

- Alelo materno metilado- Alelo paterno no metilado

Coincidencia o casualidad por ICSI Síndrome de Angelman :

- 1/15 000Defectos de imprinting : (< 5%)

- 1/300 000

2 casos (ambos por defecto de imprinting) ninguno por deleción del cromosoma 15q (70%).La metilación del cromosoma 15 no se realiza antes de la ovulaciónSino durante o después de la fertilización (defecto de imprinting)ICSI:

- Fertilización y activación del ovocito- Introducción del acrosoma y enzimas

Stress mecánico en el ovocito y daño de estructuras intracelulares50% de éxito ICSIFalta de producción o disfunción de factores para el imprinting del cromosoma 15.Young et al. (2001) : Bajo ciertas condiciones el cultivo in vitro de de pre-embriones de ovejas que se fertilizan en vivo pueden producir un crecimiento exagerado.El imprinting materno suceptible.Estudios prospectivos y de metilación prenatal.

IntroducciónSíndrome de Beckwith-Wiedemann (BWS)Defecto congénito : crecimiento excesivo y neoplasiaMacrosomía, macroglosia, defectos de linea media abdominal y predisposición a cáncer embrionalEpigenético – pérdida del imprinting 11p15 (15%)H19: RNA no traducidoIGF2: factor de crecimiento autocrino(100%)LIT1:RNA no traducido (gen KvLQT1)

IntroducciónPérdida del imprintig : hiper-hipo metilaciónActivación aberrante del IGF2.

Métodos1994 Registro de BWS en el Genetic Epidemiology Branch of the National Cancer Institute.(NCI)Diagnóstico clínico (2/5): macroglosia, peso y talla >90, hipoglicemia en el primer mes de vida, pliegues redundantes en las orejas, defecto de línea media.2001 Washington UniversityCuestionario 1994-2001 (natural o TRA por tipo)Genómica del DNA : linfocitos de sangre perifericaGen H19 y LIT1 ( Zeta-Probe GT blotting)

ResultadosIncremento en la frecuencia de FIV en niños con BWS:

- 7 BWS por FIV-TE- Esporádicos sin historia familiar de BWS- 6/7 ovocitos y espermatozoides propios- 1/7 ovocito donado y espermatozoide propio- 4/7 ICSI con espermatozoides eyaculados- 1/7 ICSI con TESE- 2/7 sin ICSI

Resultados3/7 Washington University y 4/7 NCIWashington University : TRA con (3/65)BWS 4.6%NCI: Estudio no sistemático de las TRAs.

ResultadosCaracterísticas clínicas de los niños con BWS que nacieron después de TRA:Sin diferencias comparado con niños nacidos de embarazos espontáneos.

Característica Frecuencia (%)

p

Macrosomía 5/7 (71%) 0.587Hipoglicemia 2/7 (29%) 0.390Defecto abdominal

6/7 (86%) 0.770

Macroglosia 6/7 (86%) 0.957Pligues en orejas

3/7 (43%) 0.306

Hemi-hipertrofia

3/7 (43%) 0.900

ResultadosAlteraciones del impronting en pacientes con BWS que nacieron después de TRA:6/7 muestras5/6 imprinting anormal de LIT1 ( hipometilación)

- 1/6 LIT1 + H19 (hipermetilación)1/6 metilación normal ( LIT1 y H19)

Resultados

Resultados

DiscusiónPrimera evidencia de asociación TRA y BWS.Defecto específico de imprinting (6/7)Sugieren el aumento en la frecuencia de defectos epigenéticos con algunos aspectos de la TRA.Síndrome de Angelman y BWS : Alelo materno afectado (no metilado)Improbable que sea relacionado a la diferenciación espermática.ICSI u otra TRA: interrupción de la metilación del genoma materno o en etapas tempranas del embrión.

ConlcusionesAsociación realNúmero de pacientes, llenado del cuestionarioFactores: medio de cultivo para el ovocito, tiempo de exposición a un medio específico o factores de crecimiento, la etapa de la diferenciación del espermatozoide al momento del ICSIICSI por sí mismoMás estudios para explicar la patogénesis y la asociaciónPrevención.