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M I C R O B I O L O G Í A A M B I E N T A L U T L A S E S O R A :

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ÁREA DE SUSTENTABILIDAD PARA EL DESARROLLO

PROGRAMA ACADÉMICO DE QUÍMICA

ESPECIALIDAD TECNOLOGIA AMBIENTAL

GRUPO

QU-301

MATERIA

MICROBIOLOGIA AMBIENTAL

TITULO

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE MICROORGANISMOS

DE LA MATRIZ AMBIENTAL: __________________

ASESORA

Dr. ROSA RICO MATA

DATOS DE IDENTIFICACIÓN DE LOS ANALISTAS

Fecha de inicio del análisis: 29 DE JUNIO DE 2015

Fecha de término: 10 DE JULIO DEL 2015

Nombre Cargo

MARTÍN DEL CAMPO ORTÍZ ISRAEL Responsable

GRIMALDO MÉNDEZ JESÚS ADIR Administrador

PEDROZA ÁLVAREZ JESÚS OMAR Laboratorista 1

PÉREZ RAMÍREZ MIRIAM ALEJANDRA Laboratorista 2

RAMÍREZ RAMÍREZ MIGUEL ÁNGEL Laboratorista 3

GENERACIÓN: 2014-2016

Suelo


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DATOS DEL SITIO EN ESTUDIO

1.- Breve descripción del estatus ambiental del sitio de estudio: En la presa desembocan todo tipo de desechos industriales y domésticos, el agua de dicha presa se conduce a través de un canal a cielo abierto, hacia las comunidades de Santa Rosa, Plan de Ayala y San Pedro del Monte y su destino final es para el riego de alfalfa y lechuga, estas aguas están fuertemente contaminadas química y bacteriológicamente, al no sufrir ningún tratamiento de remediación.

SITIO DE MUESTREO

Nombre Ubicación /coordenadas GPS

Imagen de mapa satelital

Presa Blanca

León Gto. Coordenadas: 21° 5'10.97"N 101°42'35.19"O

2. Evidencia fotográfica del sitio Fecha: 11/06/15 Hora: 10:32 am

Fecha: 11/06/15 Hora: 10:34 am

DATOS DE LAS MUESTRAS A ANALIZAR

1. Identificación

Matriz ambiental: Suelo Fecha y hora de toma de muestra: 11/06/15 a las 12:02 pm

Fecha y hora de siembra: 01/07/15 a las 10:36 am

Punto de Muestreo (ubicación /coordenadas GPS): 21° 5’ 40.97” N 121° 42’ 39.98” O

Tiempo de exposición (aplica solo para muestra de aire)

Nombre del/ los analistas que tomaron la muestra: Diana Eréndira Uribe Juárez

Nombre del/ los analistas que sembró la muestra: Diana Eréndira Uribe Juárez

2.Parámetros Fisicoquímicos

Color: café oscuro Temperatura (oC) ambiental: 23.4 °C pH: 6.5

Olor: Tierra húmeda Describir condiciones climatológicas: Soleado

3. Evidencia fotográfica del sitio de toma de muestra


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AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS

1. Justificación del proceso para la identificación bacteriana

A partir de la aplicación de una marcha bioquímica, es decir, en la identificación de una bacteria, nos es posible conocer sus procesos metabólicos lo que nos permite obtener un amplio panorama de cómo muchos microorganismos actúan en las diferentes matrices ambientales como lo es el suelo, ya sea degradando contaminantes o simplemente absorbiéndolos para que estos tengan un impacto menor al medio ambiente o no causen daños a la salud pública. El proceso realizado para la identificación de una bacteria en la matriz de suelo se realizó con la finalidad de poner en práctica la realización de una marcha bioquímica que en función de la bacteria aislada tendría en los distintos medios de cultivo un comportamiento específico del cual es factible interpretar su metabolismo y conocer su interacción con el medio ambiente.

2. Dos medios de siembra (Nombre y Receta)

1. Agar Rojo y bilis violeta (contenido por litro de preparación) Extracto de levadura- 3 g Peptona- 7 g Lactosa- 10 g Mezcla de sales biliares- 1.5 g Cloruro de sodio- 5 g Agar- 15 g Rojo neutro- 0.03 g Cristal violeta- 0.002 g

Morfología Colonial (Medio 1) Morfología Colonial (Medio 2)

Las colonias en el agar Rojo bilis violeta se perciben del color del medio, incoloras (Salmonella typhimurium, Proteus mirabilis y Pseudomonas aeruginosas), aquellas que fermentan la lactosa se aprecian rojizas de 1-2 mm de diámetro con halo de precipitación rojizo (Escherichia coli y Klebsiella pneumoniae), Enterococcus faecalis se observa en colonias rosadas, pequeñas y puntiformes. Su forma se aprecia redonda o irregular, la superficie es convexa y con bordes redondeados.

Las colonias de Pseudomona aeruginosa en el medio agar base sangre se observan de forma circular o irregular de color rosado, superficie convexa y borde redondeado. Otras bacterias que crecen satisfactoriamente en este agar son Escherichia coli y Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes y pneumoniae con características similares.

2. Agar base sangre (Contenido por litro de preparación) Infusión de musculo de corazón- 10 g Peptona- 10 g Cloruro de sodio- 5 g Agar- 15 g


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Imagen

Imagen

3. Dos Medios selectivos de resiembra (Nombre y receta)

1. Agar Cetrimida (Contenido por litro de preparación) Cloruro de magnesio- 1.4 g Peptona de gelatina- 20 g Cetrimida- 0.3 g Glicerina 10 mL Agar- 13.5 g

2. Agar E.M.B

(Contenido por litro de preparación)

Peptona- 10 g

Lactosa- 5 g

Sacarosa- 5 g

Fosfato dipotásico- 2 g

Eosina- 0.4 g

Azul de metileno- 0.065 g

Agar- 13.5 g

Colonias de Pseudomonas

aeruginosas

Colonias de Pseudomona

aeruginosa


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Morfología Colonial (Medio 1) Morfología Colonial (Medio 2)

Descripción Las colonias en el agar cetrimida (solo Pseudomonas aeruginosa) se perciben de un color amarillo verdoso-azulado, superficie convexa. Forma y bordes redondeados.

Descripción Las colonias observadas en este medio son negras azuladas y de brillo metálico (Klebsiella y Escherichia coli) si es que fermentan lactosa y/o sacarosa, si no lo hacen son visibles incoloras (Proteus mirabilis, Salmonella typhimurium, Shigella flexneri, Pseudomonas aeruginosa y Enterococcus faecalis). Mientras que Candida albicans tienen características rosadas puntiformes. Estas poseen características peculiares como son superficie convexa, forma irregular y bordes redondeados. También presentan un aspecto mucoide.

Imagen

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4. Procedimiento de Aislamiento (describir detalladamente la cantidad de materiales y los pasos a seguir)

Materiales/Reactivos/Medios de cultivo/ Equipo a utilizar

2 Cajas Petri

1 Isopo estéril

Matraz Erlenmeyer de 250 mL

1 Asa bacteriológica

1 Espátula

1 Piceta

1 Charola de pesado

1 Agitador

1 Probeta de 100 mL

1 Mechero Bunsen


aeruginosas

-1 Incubadora

- 1 Refrigerador

- 1 Autoclave

- 1 Balanza analítica

- 1 Campana de

flujo laminar

- Agua destilada

- Agar E.M.B

-Agar rojo bilis

violeta

-Algodón

-Papel aluminio

-Tijeras


aeroginosas


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Preparación de medio de cultivo:

1. Tomar los medios de cultivo agar E.M.B y Rojo bilis violeta y leer las instrucciones de preparado que se ubican en la etiqueta del frasco.

2. Realizar los cálculos necesarios para la preparación de los agares que en el caso del E.M.B (Eosina y Azul de Metileno) por cada litro de preparación serán 36 g de medio para el agar Rojo bilis violeta pesar por cada litro de agua 41.5 g de medio.

3. Lavar y enjuagar el material a utilizar con agua destilada. 4. Pesar el medio necesario para dos cajas que son aproximadamente 1.44 g de EM.B y 1.66 g de Rojo

bilis violeta. Preparar los agares en un matraz Erlenmeyer agitando para disolver grumos. 5. Fabricar un tapón de algodón y gasa para el matraz así como una capucha de aluminio y colocarlo. 6. Etiquetar los medios y llevar a esterilización en autoclave a 121 °C, durante 15 minutos (solo el agar

E.M.B). 7. Para el agar Rojo bilis violeta no es necesaria la esterilización por lo que es suficiente calentar con

agitación frecuente durante un minuto y etiquetarlo. 8. Dejar enfriar el tiempo necesario y vaciar en cajas Petri en la campana de flujo laminar. 9. Etiquetar las cajas preparadas para su posterior identificación. 10. Almacenar en refrigeración hasta su uso.

Pasos para el aislamiento del microorganismos (siembra, selección de la colonia y resiembra):

1. Recolectar la muestra de suelo en cantidad y el recipiente adecuado, en un frasco de vidrio estéril que debe ser llenado tres cuartas partes aproximadamente y cerrar inmediatamente.

2. Realizar la siembra de suelo en una caja Petri con medio de cultivo Rojo bilis violeta utilizando un hisopo estéril.

3. Colocar las cajas Petri con inoculadas de medio Rojo bilis violeta en la incubadora (muestra y blanco) a

una temperatura de entre 35 y 37 °C durante 18-48 horas. 4. Observar el crecimiento y morfología de los microorganismos y elegir la colonia que cumpla con las

características del microorganismo a aislar. 5. Esterilizar un asa bacteriológica, tomar un poco de colonia y estriar el medio selectivo agar E.M.B,

esterilizar nuevamente el asa.

6. Cerrar la placa y colocarla nuevamente en la incubadora junto con el blanco durante un intervalo de 18-48 horas.

7. Observar el crecimiento microbiano en la placa, llevar a refrigeración para evitar más crecimiento hasta la realización de la marcha bioquímica y verificar en la bibliografía el microorganismo aislado.

Estriado simple para el aislamiento de microorganismos.


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5. Esquema del Perfil bioquímico (metabólico )

para la identificación del microorganismo seleccionado

Pruebas de identificación

Bacterias

Gram positivasGram negativas

Móviles No móvilesCapsuladas

No capsuladasNo capsuladas

CapsuladasCitrato +Lactosa -

Sacarosa -Glucosa -

Indol -Catalasa +

H2S -RM -VP - Citrato +

Lactosa -Sacarosa -Glucosa +

Indol -Catalasa +

H2S +RM -VP -

Citrato +Lactosa -

Sacarosa -Glucosa +

Indol -Catalasa +

H2S +RM +VP -

Citrato +Lactosa -

Sacarosa -Glucosa +Indol - (+)

Catalasa +H2S +RM -VP +

-Citrobacter

-Salmonellagallinarum

-Pseudomona aeruginosa

-Klebsiellapseudomoniae

RM +VP +

-Salmonellaarizonae


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RESULTADOS DEL AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN

1. EVIDENCIA FOTOGRAFICA DEL CULTIVO DE LA MUESTRA (SIEMBRA)

AGAR E.M.B

AGAR E.M.B

2. MORFOLOGÍA COLONIAL OBSERVADA Tipo de colonia 1: Descripción

Morfología:

Forma: irregular Superficie: Irregular Color: rosado-aperlado Borde: ondulado

FOTO 1

Tipo de colonia 2: Descripción

Morfología: Forma: puntiforme Superficie: papilada Color: negro cromado Borde: circular

FOTO 2

Tipo de colonia 3: Descripción

Morfología: Forma: irregular Superficie: convexa Color: blanquecino Borde: Rizoide

FOTO


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3. EVIDENCIA FOTOGRAFICA DEL CULTIVO PURO ( RESIEMBRA)

FOTO 1 FOTO 2

AGAR E.M.B AGAR E.M.B

4. MORFOLOGIA COLONIAL OBSERVADA

Descripción

La primer fotografía se identificaron una serie de bacterias con crecimiento mucoide y fue la placa de la cual se tomó la colonia para crear el cultivo puro. En las que siguen se muestra el crecimiento obtenido en la resiembra a partir de los cuales se realizó la marcha bioquímica para la identificación de la bacteria. Dicho crecimiento tiene una morfología mucoide Elevación: Convexa Margen: Color rosado Cambiando medio a color rosa claro.

FOTO 1

FOTO 2

FOTO 3


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5. EVIDENCIA FOTOGRÁFICA DEL RESULTADO DEL PERFIL BIOQUÍMICO

Nombre de la

prueba Medio de cultivo

utilizado Resultado obtenido

(positivo/negativo)

Evidencia fotográfica

1. Tinción de

Gram

Ninguno

Negativo (-)

Aumento: ____100x____

Fundamento de la prueba El cristal violeta (colorante catiónico) penetra en todas las células bacterianas (tanto Gram positivas como Gram negativas) a través de la pared bacteriana. El lugol es un compuesto formado por I2 (yodo) en equilibrio con KI (yoduro de potasio) y Sl (Siulterio), los cuales están presente para solubilizar el yodo, y actúan de mordiente, haciendo que el cristal violeta se fije con mayor intensidad a la pared de la célula bacteriana. El I2 entra en las células y forma un complejo insoluble en solución acuosa con el cristal violeta. La mezcla de alcohol-acetona que se agrega, sirve para realizar la decoloración, ya que en la misma es soluble el complejo I2/cristal violeta. Los organismos Gram positivos no se decoloran, mientras que los Gram negativos sí lo hacen. Para poner de manifiesto las células Gram negativas se utiliza una coloración de contraste. Habitualmente es un colorante de color rojo, como la safranina o la fucsina. Después de la coloración de contraste las células Gram negativas son rojas, mientras que las Gram positivas permanecen violetas. Algunos microorganismos retienen el colorante violeta, aún después de tratarlos con un decolorante, y el color no se modifica al añadir éste; otros pierden con facilidad el primer tinte, y toman el segundo. Los que fijan el violeta, se califican de Gram positivos, y los que pierden la primera coloración y retienen la segunda, de gramnegativos. Basándonos pues, en la reacción Gram, podemos clasificar a los microorganismos en uno de los dos grupos. Los colorantes de p-rosanilina son los que mejores resultados dan en la coloración Gram. Los representantes más usados de este grupo son violeta de metilo y violeta cristal o de genciana. En realidad, violeta de metilo es el nombre atribuido al compuesto tetrametil-p-rosanilina. El matiz de color de la p-rosanilina se intensifica al aumentar el número de grupos metilo en la molécula; por consiguiente, de los tres grupos, el tono más oscuro es la hexametil-p-rosanilina, (violeta cristal), y el tinte más ligero, la tetrametil-p-rosanilina (violeta de metilo). Los nombres violeta de metilo 3R, 2R, R, B, 2B, 3B, etc., se refieren al número de grupos metilo contenidos. La letra R indica matices rojos, y la letra B, tonos azules. El violeta de cristal contiene seis grupos metilo, y se considera como el mejor colorante primario para teñir por el método de Gram.


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2. Tinción

de cápsula ( con tinta china)

Ninguno

Positivo (+)

Aumento: ____100x____ Fundamento de la prueba

Es la prueba que determina si la bacteria tiene capsula la cual es una capa rígida organizada en matriz impermeable que excluye colorantes como la tinta china. En cambio, la capa de material extracelular que se deforma con facilidad, es incapaz de excluir partículas y no tiene un límite definido. En esta prueba se puede ver si la bacteria cuenta con cápsula la cual no permite que la tinta china penetre en la bacteria lo cual se observa como un fondo negro (tinta) y una diferenciación de las bacterias.

3. Citrato

Agar citrato de

Simmons

Positivo (+)

Fundamento de la prueba

En su formulación contiene una mezcla de sales en la cual, el citrato de sodio es la única fuente de carbono. No posee azúcares ni tampoco inhibidores del crecimiento bacteriano. Un microorganismo que es capaz de utilizar el citrato como única fuente de carbono, utiliza también las sales de amonio como su única fuente de nitrógeno. Debido a la utilización de sales de amonio, se libera amoniaco, que alcaliniza el medio, y esto produce un viraje del indicador azul de bromo timol del color verde al color azul. Los productos obtenidos del metabolismo del citrato dependen del pH del medio:

pH básico: Citrato ------> CO2 + ácido fórmico + 2 ácido acético pH ácido: 2 Piruvato -----> acetato + CO2 + lactato

2 Piruvato -----> acetoína + 2CO2


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4. Catalasa

Ninguno.

Positivo (+)

Muestra de cultivo control -


La catalasa es una enzima perteneciente a la categoría de las oxidorreductasas que cataliza la descomposición del peróxido de hidrógeno en oxígeno y agua. Lo cual produce un desprendimiento de burbujas. La reacción que sucede es la siguiente:

2 H2O2 2H2 + 2 O2

Esta enzima se encuentra en algunas bacterias o cocos y se es posible identificar su presencia aplicado esta prueba.

5. Fermentación

de glucosa

Triple Sugar

Iron Agar (T.S.I)

Negativo (-)


En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano. La glucosa es un hidrato de carbono fermentable, partiendo de la glucosa producida por la degradación de la sacarosa, a esta reacción se le conoce como glucolisis. Se agrega un indicador de pH (rojo fenol) y cloruro de sodio, el cual mantiene el balance osmótico. El agar es el agente solidificante. Por fermentación de azúcares, se producen ácidos, que se detectan por medio del indicador rojo de fenol, el cual vira al color amarillo en medio ácido.

C6H12O6 (glucosa)+ 2 Pi + 2ATP+ 2NAD+2 ácido Pirúvico+ 2ATP +2NADH+ 2H+

6. Fermentación

de lactosa.

Triple Sugar

Iron Agar (T.S.I)

Negativo (-)


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En el medio de cultivo, el extracto de carne y la Pluripeptona, aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano. La lactosa es un hidrato de carbono fermentable, partiendo del ácido pirúvico producido por la fermentación de glucosa, dando como producto final ácido láctico. Se agrega un indicador de pH (rojo fenol) y cloruro de sodio, el cual mantiene el balance osmótico. El agar es el agente solidificaste. Por fermentación de azúcares, se producen ácidos, que se detectan por medio del indicador rojo de fenol, el cual vira al color amarillo en medio ácido.

Ácido Pirúvico+ NADH+ H+ Ácido láctico+ NAD+

7. Fermentación de sacarosa

Triple Sugar Iron Agar (T.S.I)

Negativo(-)


En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano. La sacarosa es un hidrato de carbono fermentable y asimilado por la enzima sacarasa la cual con una adición de agua se degrada en glucosa y fructuosa. El rojo de fenol es el indicador de pH, y el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico. El agar es el agente solidificante. Por fermentación de azúcares, se producen ácidos, que se detectan por medio del indicador rojo de fenol, el cual vira al color amarillo en medio ácido.

Sacarosa (C12H22O11)+ H2O Glucosa (C6H12O6)+ Fructosa (C6C12O6)

8. Ácido

sulfhídrico

Agar SIM Triple Sugar Iron Agar (T.S.I)

Negativo(-)


En el medio de cultivo, el tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la producción de ácido sulfhídrico, el sulfato de hierro y amonio, es la fuente de iones Fe3+ , los cuales se combinan con el ácido sulfhídrico y producen sulfuro de hierro, de color negro. El agar es el agente solidificante. El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrógeno que reacciona luego con una sal de hierro proporcionando el típico sulfuro de hierro de color negro. La proteólisis de las proteínas en aminoácidos individuales, algunas especies bacterianas son capaces de liberar azufre enzimáticamente de los diferentes aminoácidos que las contienen, produciendo el gas ácido sulfhídrico (SH2). La peptona, cisteína y tiosulfato, todos son fuentes de azufre, pero las diferentes especies utilizan distintos compuestos o aminoácidos que contienen azufre para producir SH2. La enzima responsable de esta actividad es la cisteinasa.


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El gas incoloro SH2 reacciona con una sal pesada, citrato férrico de amonio para producir un precipitado negro insoluble, sulfuro ferroso.

Bacteria (medio ácido) + tiosulfato de sodio gas SH2 SH2 + iones férricos sulfuro ferroso (pp. Negro)

9. Indol

Agar SIM

Negativo (-)


El triptófano es un aminoácido que puede ser oxidado por ciertas bacterias para formar tres metabolitos principales: indol, escatol e indolacético. Diversas enzimas intracelulares que intervienen en éste proceso reciben el nombre de triptofanasa, lo que implica el sistema completo de enzimas vinculadas con la producción del indol. El principal intermediario en la degradación del triptófano es el ácido indolpírúvico. La degradación del triptófano libera indol, ácido pirúvico, amoniaco y energía. El ácido pirúvico puede ser nuevamente metabolizado por medio del ciclo glucolítico o entrar en el ciclo de Krebs para liberar CO2 y H2O y una gran producción de energía.

Triptófano + indolpirúvico ----> Indol + ácido pirúvico + amoniaco + energía

10. Movilidad

Agar SIM

Positivo (+)


Determina si un organismo es móvil o inmóvil. Las bacterias tienen movilidad por medio de sus flagelos, que se encuentran principalmente entre los bacilos; sin embargo algunas formas de cocos son inmóviles. Las bacterias móviles pueden contener un solo flagelo o muchos; además su localización varía con su especie bacteriana y las condiciones de cultivo. A veces, las bacterias con movilidad producen variantes no móviles que parecen ser estables y raramente se revierten en formas móviles. Los organismos no móviles carecen de flagelos. El agar es el agente solidificante y a esta concentración le otorga al medio la propiedad de ser semisólido, condición necesaria para detectar movilidad, que se evidencia por el enturbiamiento del medio o por crecimiento que difunde más allá de la línea de siembra del microorganismo en estudio.


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11. Voges proskauer (Fermentación alcohólica)

MR-VP Negativo (-)

Fundamento de la prueba Determina la capacidad de algunos organismos de producir un producto final neutro, la acetoína a partir de la fermentación de glucosa. La reacción de VP se basa en la detección de acetoína como producto final neutro derivado del metabolismo de la glucosa. Esta es metabolizada en ácido pirúvico, intermediario clave en la glucólisis. A partir del ácido pirúvico, una bacteria puede seguir muchas vías. La producción de acetoína (precursor de la producción de 2,3-butanediol) es uno de los ciclos para la degradación de la glucosa en las bacterias. KOH condensación

Alfa-naftol (catalizador) + Acetoína -------------> Diacetilo + Núcleo de guanidina ----------------------> Color rojo rosado

O2 oxidado

12. Rojo de metilo (fermentación de la glucosa

MR-VP Negativo (-)


Permite comprobar la capacidad de un organismo de producir y mantener estables los productos terminales ácidos de la fermentación de la glucosa y vencer la capacidad amortiguadora del sistema. Es una prueba cualitativa de la producción de ácido (determinación de pH). Las bacterias que principalmente siguen la vía de fermentación de ácidos mixtos (La fermentación ácido mixta produce ácido acético, etanol, H2, CO2 y proporciones diferentes de ácido láctico o fórmico según las especies. Es un tipo de fermentación que llevan a cabo las enterobacterias. En esta ruta de fermentación se produce ATP además de la reoxidación del NADH+H+) a menudo producen suficiente ácido para mantener un pH menor de 4.4. La prueba de rojo de metilo se basa en el empleo de un indicador de pH para determinar la concentración de iones hidrógeno presentes cuando un organismo fermenta glucosa. Las bacterias RM positivas producen ácidos estables manteniendo una alta concentración de iones hidrógeno hasta alcanzar cierta concentración y entonces cesa toda actividad. Los organismos RM negativo también producen ácidos pero tienen una menor concentración de iones hidrógeno porque hay una reversión hacia la neutralidad debida a la nueva degradación de los ácidos orgánicos en carbonatos. Ocurre la fermentación de la glucosa, mediante la glucolisis que es la ruta metabólica mediante la que se degrada la glucosa hasta dos moléculas de piruvato, a la vez que se produce energía en forma de ATP y de NADH. C15H15N3O2 + fermentación del carbohidrato ----> ácidos orgánicos (viraje a rojo en el medio)


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IDENTIFICACIÓN DEL MICROORGANISMO AMBIENTAL

EN LA MATRIZ DE ESTUDIO: Suelo

1.- Nombre científico del o los microorganismo identificado de acuerdo a los resultados del perfil bioquímico planteado ( genero y especie)

Pseudomona aeruginosa y Salmonella presuntivamente arizonae

2. Taxonomía del o los microorganismo identificados

Al realizar nuestra marcha bioquimica usada para determinar microorganismos presentes en una muestra de suelo recolectado en presa blanca, sembrada en el agar E.M.B, encontramos el desarrollo de dos posibles microorganismos: Salmonella presuntivamente arizonae y Pseudomona aeruginosa, basándonos en las morfologías de las colonias crecidas en nuestro medio, después de realizar una amplia investigación y nuestras pruebas bioquímicas se logró determinar que el microorganismo que se desarrolló en el agar E.M.B es Pseudomona aeruginosa la morfología de las colonias desarrolladas en el medio contienen las características de las colonias de la Pseudomona aeruginosa , en un principio se creyó que el microorganismo detectado con las pruebas bioquímicas realizadas en este documento era Salmonella presuntivamente arizonae pero al investigar las condiciones en las que puede sobrevivir y/o desarrollarse nos dimos cuenta que esta bacteria no es termotolerante, la muestra de suelo recolectada duro aproximadamente 15 días en refrigeración, por lo tanto se descartó pues esta no puede sobrevivir a estas temperaturas, en cambio la bacteria Pseudomona aeruginosa si resiste a las temperaturas a las que se refrigero la muestra la cual fue a 4°C ya que esta es termotolerante, también se investigó en cuales matrices se puede desarrollar la Pseudomona aeruginosa y esta se desarrolla satisfactoriamente en la matriz de suelo por lo tanto podemos concluir que el microorganismo encontrado en la muestra de suelo recolectada en presa blanca es Pseudomona aeruginosa ya que cumple por completo su perfil bioquímico así como su morfología desarrollada en el medio EM.B. En base a las pruebas que se realizaron en el presente documento. Cabe mencionar que al realizar pruebas bioquímicas adicionales como la prueba de oxidasa, prueba de dihidralasa, prueba de la descarboxilasa ( lisina, ornitina, arginina) la fermentación de manitol y fermentación de maltosa nos ayudarían a confirmar nuestra identificación de Pseudomona aeruginosa. Además la bacteria Salmonella presuntivamente arizonae no cuenta con capsula por lo que hubiéramos tenido que descartar pruebas irrevocables como el H2S, RM y el VP las cuales se puede asegurar que se realizaron correctamente y los medios de cultivos son completamente útiles.


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A continuación se presentan las tablas comparativas de los perfiles analizados y el que se obtuvo en nuestro estudio:

En la siguiente tabla se presenta la taxonomía de la bacteria identificada:

Prueba Bioquímica

Perfil Bioquímico Salmonella

arizonae

Perfil Bioquímico Pseudomona aeruginosa

Perfil Bioquímico del microrganismo

a identificar

Citrato (+) (+) (+)

F. Lactosa ( -) ( -) (-)

F. Glucosa (+) (-) (-)

F. Sacarosa (-) (-) (-)

Indol (-) (-) (-)

Catalasa (+) (+) (+)

H2s (+) (-) (-)

R.M (+) (-) (-)

VP (+) (-) (-)

Capsula (-) (+) (+)

Tinción de Gram (-) (-) (-)

Movilidad (+) (+) (+)

Bacteria:

Pseudomona aeruginosa

Reino: Bacteria

Filo: Proteobacteria

Clase: Gamma Proteobacteria

Orden: Pseudomonadales

Familia: Pseudomonadaceae

Género: Pseudomonas

2. Características generales

https://es.wikipedia.org/wiki/Proteobacteria

https://es.wikipedia.org/wiki/Gamma_Proteobacteria

https://es.wikipedia.org/wiki/Gamma_Proteobacteria

https://es.wikipedia.org/wiki/Pseudomonadales

https://es.wikipedia.org/wiki/Pseudomonadaceae

https://es.wikipedia.org/wiki/Pseudomonas


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Pseudomona aeruginosa es una bacteria Gram-negativa perteneciente a la rama γ de las proteobacterias, misma a la que pertenecen las enterobacterias. La P. aeruginosa se encuentra ampliamente distribuida en la naturaleza. Se puede aislar de muestras de suelo, aguas prístinas y contaminadas, así como de plantas y animales. Esta bacteria es capaz de utilizar una enorme variedad de compuestos orgánicos como sustrato para crecer, capacidad que le permite colonizar nichos en los que son escasos los nutrimentos que otros organismos pueden asimilar. Se ha reportado el aislamiento de P. aeruginosa de ambientes tan inhóspitos como son el combustible de avión, soluciones de clorhexidina y el jabón.

4. Ciclo(s) biogeoquímicos en el(los) que intervienen

Ciclo del carbono y del nitrógeno

5. La función que juegan en la transformación de la materia orgánica a través de los ciclos biogeoquímicos

El metabolismo de la Pseudomona aeruginosa puede ser aerobio en el que se usa como aceptor de electrones al O2 o anaerobio en el que algunos usan NO. Presenta una versatilidad metabólica muy grande que se traduce en su capacidad de utilizar como fuente de carbono substratos muy variados. La Pseudomona aeruginosa es capaz de llevar a cabo procesos de desnitrificación (NO3

-, NO2-, N2) con lo que

se empobrecen los suelos de nitrógeno utilizable desde el punto de vista agrícola. Este proceso de reducción del nitrógeno (que actúa como aceptor de electrones en un proceso de respiración anaerobia) se denomina reducción disimilaría del nitrógeno. La versatilidad metabólica de la Pseudomona aeruginosa se debe a la presencia de un gran número de plásmidos que contienen operones inducibles para la síntesis de enzimas específicas que permitan catabolizar los compuestos presentes en el medio. Esto confiere una importancia grande a las bacterias del género Pseudomonas como digestores aerobios de materiales animales y vegetales, lo que contribuye al reciclaje biológico de materia orgánica. Las especies de Pseudomonas son utilizadas en birreactores ya que degradan la materia orgánica y la utilizan como fuente de energía, también tienen una importante participación en la depuración de metales pesados ya que al no ser especies exigentes nutrimentalmente tienen la capacidad de asimilar dichos metales reduciendo su grado de toxicidad o bien degradándolos a un grado en el que ya no se consideren peligrosos. cita: Campos, Víctor, Valenzuela, Cristian, Alcorta, Marcela, Escalante, Guisella, & Mondaca, María A. (2007). AISLAMIENTO DE BACTERIAS RESISTENTES A ARSENICO DESDE MUESTRAS DE ROCAS VOLCANICAS DE LA QUEBRADA CAMARONES, REGION PARINACOTA: CHILE. Gayana (Concepción), 71(2), 150-155. Recuperado en 15 de agosto de 2015, de http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0717-65382007000200003&lng=es&tlng=es. 10.4067/S0717-65382007000200003. Referencias:

-Anderson, G.,Williams, J. & Hille, R. 1992. The purification and characterization of arsenite oxidase from Alcaligenes faecalis: a molybdenum containing hydroxylase. J. Biol. Chem. 267: 23674-23682 -Cai, J., Salmon, K. & Dubow, M.1998. A chromosomal ars operon homologe ofPseudomonas aeruginosa confers increased resistance to arsenic and antimony in Escherichia coli. Microbiol. 144:2705-2713.


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6. Conclusión parcial sobre las interacciones bacterianas en la matriz estudiada y la importancia de la microbiología en el área ambiental

En conclusión podemos decir que la matriz de suelo está constituida por un sistema muy complejo ya que

este alberga una gran riqueza de microorganismos, los cuales establecen relaciones muy variadas y

contribuyen a conformar las características propias del suelo, participan en los ciclos del carbono, nitrógeno,

oxígeno, azufre, fósforo, hierro y otros metales; estos microorganismos aportan a la fertilidad del suelo y a la

degradación de compuestos xenobióticos. Además, el crecimiento de las plantas está condicionado por una

amplia gama de microorganismos que viven en el suelo, alrededor de las raíces vegetales. La bacteria

identificada en las muestras de suelo recolectadas de presa blanca ubicada en León Guanajuato corresponde a

Pseudomona aeruginosa la cual es capaz de precipitar metales pesados y radionúclidos como lo son carbonatos

e hidróxidos mediante un mecanismo de resistencia codificado en plásmidos, se sabe que es uno de los pocos

organismos capaces de degradar alcanos de cadena ramificada que produce biosurfactantes que son útiles para

la limpieza de suelos contaminados con hidrocarburos y que produce enzimas, como la lipasa, con distintas

aplicaciones potenciales. La Pseudomona aeruginosa interviene ampliamente en el ciclo del nitrógeno pues es

un desnitrificaste que transforma biológicamente el nitrato en gas nitrógeno, óxido nítrico y óxido nitroso.

También participa en el ciclo del carbono ya que tienen la capacidad de degradar a los hidrocarburos presentes

en el suelo.

La bacteria Pseudomona aeruginosa se logró detectar después de realizar todas las pruebas bioquímicas

presentes en el documento su perfil encaja perfectamente y se tiene la seguridad de que las pruebas se

realizaron correctamente ya que se incluyeron controles de calidad en cada prueba realizada garantizando la

esterilidad inicial de nuestros procedimientos y evitando la contaminación de estos en todo momento antes de

ser inoculados, por este motivo se descartó la posible presencia de Salmonella presuntivamente arizonae,

esta no resiste climas tan extremos en comparación a la Pseudomona aeruginosa y por qué aunque es común

encontrar al género Salmonella en muestras de suelo, ya que esta se encuentra en las heces fecales de los

animales y presa blanca es un desagüe de aguas residuales . También se descartó debido a que no cumplió

con el perfil que se obtuvo después de realizar las pruebas bioquímicas, pero como se mencionó anteriormente

la muestra de suelo duro alrededor de 15 en refrigeración por lo tanto la posible presencia de esta bacteria es

muy poca en comparación de Pseudomona aeruginosa ya que esta si logra sobrevivir en condiciones extremas

de temperaturas.

reporte análisis microbiológico matriz suelo.pdf

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