RECUENTO DE COLIFORMES TOTALES, FECALES Y E.coli.Osorio A. Santiago.

RESUMENLa denominacin genricacoliformesdesigna a un grupo de especies bacterianas que tienen ciertas caractersticas bioqumicas en comn e importancia relevante comoindicadoresdecontaminacindel agua y los alimentos. En esta prctica lo que se busco fue determinar en el jugo de mango una posible contaminacin con este tipo de especies bacterianas. Para llegar a esto se prepararon 9 disoluciones para cada una de las pruebas que se realizaron, se incubaron, y se realizaron los anlisis correspondientes, as encontrando finalmente una contaminacin con coliformes totales.INTRODUCCIONDebido a que un gran nmero de enfermedades son transmitidas por va fecal-oral utilizando como vehculo los alimentos y el agua, es necesario contar con microorganismos que funcionen como indicador de contaminacin e higiene. Estos deben de ser constantes, abundantes y exclusivos de la materia fecal, deben tener una sobrevivencia similar a la de los patgenos intestinales y debe de ser capaces de desarrollarse extra intestinalmente. El grupo coliforme es constante, abundante y casi exclusivo de la materia fecal, sin embargo, las caractersticas de sobrevivencia y la capacidad para multiplicarse fuera del intestino tambin se observan en aguas potables, por lo que el grupo coliforme se utiliza como indicador de contaminacin fecal en agua; conforme mayor sea el nmero de coliformes en agua, mayor ser la probabilidad de estar frente a una contaminacin reciente. Cuando los coliformes llegan a los alimentos, no slo sobreviven, sino que se multiplican, por lo que en los alimentos el grupo coliforme adquiere un significado distinto al que recibe en el agua. En productos alimenticios que han recibido un tratamiento trmico (pasteurizacin, horneado, coccin, etc.), se utilizan como indicadores de malas prcticas sanitarias. (1) Las bacterias de este gnero se encuentran principalmente en el intestino de los humanos y de los animales de sangre caliente, es decir,homeotermos, pero tambin ampliamente distribuidas en la naturaleza, especialmente ensuelos,semillasyvegetales. Los coliformes se introducen en gran nmero al medio ambiente por lashecesde humanos y animales. Por tal motivo suele deducirse la mayora de los coliformes que se encuentran en el ambiente son de origen fecal. Sin embargo, an existen muchos coliformes de vida libre. Loscoliformes totalesse usan para evaluar la calidad de la leche pasteurizada, leche en polvo, helados, pastas frescas, frmulas para lactantes, fideos ydesayuno. Loscoliformes fecalesse usan para evaluar los mariscos frescos. Por ltimo, laE. colise usa como indicador en quesos frescos, quesillos, cereales, masas con relleno, alimentos infantiles, cecinas cocidas y verduras frescas. (2) METODOLOGIAPreparacin de las muestras:1. Medir 10 ml de jugo y diluir en 90 ml de agua peptonada.

Diluciones:Prueba presuntiva.1. Sobre la base de la dilucin inicial de 10 ml / ml en 90 ml de agua peptonada (dilucin 10-1). Transferir 1 ml de sta dilucin a tres tubos de ensayo que contienen previamente 10 ml de Caldo verde bilis lactosado.2. Transferir 1 ml de la dilucin 10-1, a un tubo de ensayo que contiene previamente 9 ml de agua peptonada (esta ser la dilucin 10-2). Transferir 1 ml de sta dilucin a tres tubos de ensayo que contienen previamente 10 ml de Caldo verde bilis lactosado.3. Transferir 1 ml de la dilucin 10-2, a un tubo de ensayo que contiene previamente 9 ml de agua peptonada (esta ser la dilucin 10-3). Transferir 1 ml de sta dilucin a tres tubos de ensayo que contienen previamente 10 ml de Caldo verde bilis lactosado.4. Homogenizar las muestras e incubar a 35C durante 24 horas. 5. Identificar los tubos positivos por produccin de gas en la campana Durham o que presenten turbidez.6. Obtener cdigo numrico (NMP) en la tabla. Prueba confirmativa.1. Tomar los tubos positivos de la prueba presuntiva.2. Introducir asa bacteriolgica tres veces en los tubos positivos y transferirla a tubos de ensayo que contienen previamente 10 ml de caldo triptfano.3. Esterilizar el asa cada vez.4. Incubar a 44,5C durante 48 horas.5. Adicionar reactivo de Kovacs (2-9 gotas). Observar si se forma un halo rojo, positivo para fecales. E. coli.1. Transferir un asa (de los tubos positivos al reactivo de Kovacs) a caja Petri con Agar Endo haciendo siembra por estra de los tubos positivos con anillo rojo.2. Por cada dilucin habrn dos cajas de Petri con Agar Endo. 3. Incubar a 44,5C durante 48 horas observar colonias de color verde metalizado.

RESULTADOS

Prueba Presuntiva: Se obtuvieron 8 tubos positivos. El parmetro de seleccin de los tubos se manej teniendo en cuenta la produccin de gas y la turbidez. En la figura 1, se puede observar una leve turbidez (mancha) en uno de los tubos, por lo tanto se marc como positivo para coliformes totales.

Figura 1.

Prueba Confirmativa: Se sigui el procedimiento indicado encontrando as que no se observ el anillo rojizo que indica la presencia de coliformes fecales, por lo tanto todos los tubos se marcaron como negativos. E.Coli: Esta prueba no se realiz, ya que al no encontrarse coliformes fecales se deduce que no hay presencia de escherichia coli.

Determinacin del nmero ms probable (NMP)

Para coliformes totales se obtuvieron:

Tres (3) tubos de concentracin 1x10-1 marcaron resultados positivos. Tres (3) tubos de concentracin 1x10-2 marcaron resultados positivos. Dos (2) tubos de concentracin 1x10-3 marcaron resultados positivos.

Teniendo como base la cantidad de tubos positivos podemos concluir la combinacin 3-3-2 para la determinacin del NMP.

Observando la tabla I para determinacin del nmero ms probable de bacterias por 100 g (ml) de material analizado empleando cinco tubos inoculados con 10, 1 y 0.1 ml o g de material. (3) Teniendo en cuenta la tabla I, podemos observar que para las concentraciones iniciales adecuadas tenemos como nmero ms probable el nmero 24. Multiplicando el NMP por la cantidad inicial de muestra (10 ml) se tiene que en el alimento probablemente hay 240 microorganismos por cada 10 ml de muestra. Consecuente a esto tenemos 24 microorganismos por cada mililitro de muestra.

DISCUSIONCon respecto a los resultados encontrados se puede concluir que el producto presenta al parecer una contaminacin con coliformes totales, sin embargo este resultado no funciona como indicador de contaminacin de fecal, ya que no necesariamente la contaminacin con coliformes totales proviene de materia fecal, entonces se concluye que muchas veces el agua utilizada en este tipo de jugos no tiene el tratamiento higinico adecuado.

BIBLIOGRAFIA Manual de Procedimientos Para El Control Microbiolgico de Alimentos, Bib. Orton IICA / CATIE, Paraguay, 2001. El manejo higienico de los alimentos / Hygiene Handling of Food:Guia para la obtencion del distintivo H / Guide for Obtaining the Distintive H, Francisco Bravo, Editorial Limusa,Jun 30, 2004-115 pages.WEBGRAFIA1. Camacho, A., M.Giles, A.Ortegn, M.Palao, B.Serrano y O.Velzquez. 2009. Tcnicas para el Anlisis Microbiolgico de Alimentos. 2 ed. Facultad de Qumica, UNAM. Mxico.2. http://es.wikipedia.org/wiki/Coliforme#Coliformes_e_Higiene_de_alimentos3. ENUMERATION OF COLIFORMS, FAECAL COLIFORMS AND OF E. COLI IN FOODS USING THE MPN METHOD MFHPB-19 April 2002 por Donna Christensen Crawford y Rick Szabo.