reaccion en cadena de la polimerasa
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Alcívar Mieles Ana MaríaChica Muñoz Nicolle
Demera Ganchozo WendyGarcía Palma Luis David
Intriago Basurto Cindy Intriago Santana Andrea
UNIVERSIDAD TECNICA DE MANABI
FACULTAD CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA DE LABORATORIO CLINICO DOCENTE:
Lcdo. Jorge Zambrano
BIOLOGÍA MOLECULAR Y CELULAR II
INTEGRANTES:
SENGUNDO SEMESTRE
“A”
REACCION EN CADENA DE LA POLIMERASA La PCR se considera
una de las técnicas mas sensibles y especificas
de las pruebas moleculares
Se basa en la replicación exponencial
in vitro del ADNg o ADNc.
Ciclos repetidos, que constan de tres de
temperaturas.
En cada uno de los ciclos las moléculas se duplican hasta que los reactivos se agoten
Esquema de la PCRExtensión.-Se produce a la temperatura óptima para el funcionamientode la ADN polimerasa empleada.
Amplificación final.-Una vez terminados los ciclos designados para la PCR, latemperatura de extensión (72°C) se mantiene por cincoMinutos.
Almacenamiento temporal.-Durante la programación de los ciclos de la PCR se programatambién un ciclo final de 4°C por varias horas
Cantidad del producto de PCR:Número de copias por cada ciclosegún la expresión p = (2)nT
El producto de PCR dependedel número inicial de copias del molde de ADN (T), por
lo que se aplica la fórmula que indica que si se parte deldoble de moléculas iniciales de ADN se obtendrá el doble
de producto:P = (2)nT
SENSIBILIDAD DE LA TÉCNICA DE PCR
una PCR puede proporcionar un diagnóstico temprano, pues tan sólo con pocas copias del genoma de un patógeno puede...
es una técnica altamente sensible y
específica,
en experimentación es difícil obtener estos resultados, ya que múltiples factores
La optimización de las condiciones de reacción, la concentración de reactivos
MODALIDADES DE LA TÉCNICA DE PCR
PCR convencional
PCR cualitativa
PCR semicuantitativa
permite detectar la presencia o ausencia de un fragmento de ADN determinado
Permite conocer los niveles de expresión de un gen (ARNm) en particular, y normaliza los niveles encontrados de este gen
la detección del producto de amplificaciónmediante una electroforesis en gel de agarosa o acrilamida.
MODALIDADES DE LA TÉCNICA DE PCR
PCR cuantitativa
PCR múltiple (varias
regiones o varios genes)
PCR selectiva (detecta genes
silvestres o mutados)
permite reportar en números absolutos la cantidad de un microorganismo o del ARNm de un gen en unamuestra.
se realiza la amplificación de más de un fragmento de ADN en una sola reacción de PCR con dos o más juegos de primers
se diseñan primers capaces de hibridarsolamente en secuencias con presencia de una mutación,