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QuPID Plus hCG Prueba de Embarazo de un sólo paso con

Controles Uso Para la determinación cual itat iva de gonadotropina coriónica ( h C G ) e n o r i n a y s u e r o e n l a d e t e c c i ó n t e m p r a n a d e l embarazo.

Resumen y Principio• La Gonadotrof ina Coriónica Humana (hCG) es una hormona g l icoproté ica secretada por la p lacenta en desarro l lo poco tiempo después de la ferti l ización. Durante el embarazo normal la hCG se puede detectar tan temprano como 6 días después de la concepción, dupl icándose cada 2 días. La detección de hCG es un exce lente ind icador para conf i rmar e l embarazo. La hCG consiste de una subunidad a y una 13. La subunidad a se comparte con otras hormonas glicoprotéicas, ej, hormona luteinizante (LH), la hormona folículo estimulante (FSH) y la hormona estimulante de tiroides (TSH). Las subunidades 13 de estas moléculas dif ieren y confieren especif ic idad biológica o cada una. La p rueba de QuP id P l u s hCG de S tanb io e s una p rueba inmunológica cual i tat iva para detectar la subunidad (3 de la hCG en suero u or ina. En la prueba de QuPid P lus hCG de Stanbio se utiliza una combinación monoclonal y policional de anticuerpos reactivas para en forma selectiva, detectar niveles e l e v a d o s d e h C G e n l a m u e s t r a . L a p r u e b a s e r e a l i z a añadiendo la muestra al or if ic io, seguido de la form9ción de líneas de color en el área de resultado. La muestra viaja vía la acc ión de los vasos capi lares a lo largo de la membrana y reacciona con el colorante conjugado. Las muestras positivas reaccionan con los anticuerpos hCG específ icos conjugados coloridos y forman una línea colorida en la zona de muestra (S) de la membrana. La ausencia de esta línea colorida sugiere un resu l tado negat ivo . Para serv i r como un contro l pos i t ivo , s iempre aparecerá una l ínea color ida en la zona de control (C) a pesar de la presencia o ausencia de hCG en la muestra.

Reactivos incluidos *QuP1D Plus hCG U n a b o l s a s e l l a d a c o n t i e n e : U n ( 1 ) c a s e t e d e p r u e b a compuesto de co lorante un ido a ant icuerpos po l i c lona les específicos para hCG, anticuerpos inmovilizados contra hCG y anticuerpos monoclonales IgG de ratón. 'Control Positivo y Control Negativo.

Precauciones: Para uso de diagnóstico In-Vitro. No lo utilice más al lá de su fecha de caducidad impresa en la caja o en la bolsa. Util ice las debidas precauciones al recolectar, manejar y

almacenar las muestras. No saque el casete de su bolsa hasta que lo necesite.

Almacenamiento y Estabilidad del Reactivo C a d a c a s e t e s e m a n t i e n e e s t a b l e h a s t a l a f e c h a d e c a d u c i d a d m a r c a d a e n s u b o l s a m e t á l i c a c u a n d o s e almacena y se mantiene a una temperatura de 2°C-30°C. NO SE CONGELE. L o s c o n t r o l e s p o s i t i v o y n e g a t i v o c e r r a d o s d e b e n s e r almacenados de 2 - 30 °C hasta su fecha de caducidad. NO SE CONGELE.

Material suministrado Casetes QuPID P lus hCG, Gotero desechab le para tomar muestra. Control Positivo y Control Negativo. Materiales NO suministrados Recipiente para la recolección de la muestra. Centrífuga Cronómetro

Recolección y Estabilidad de la muestra3 Orina: La muestra se debe recolectar en un recipiente limpio, seco, ya sea de plástico o vidrio sin preservativos, bajo las condiciones estándares de cada laboratorio. Se pueden utilizar muestras de orina recolectada en cualquier momento del día, sin embargo, la primera orina de la mañana es la que tiene la mayor concentración de hCG, por lo que es la más apropiada. Se deben centrifugar las orinas turbias antes de utilizarse. Si la prueba va a demorarse a lgunas horas , la or ina se puede almacenar de 2 a 8 °C hasta por 72 horas ó congelarla a -20 °C por 3 meses, pero debe llevarse a temperatura ambiente antes de realizar la prueba.

S u e r o : L a s m u e s t r a s d e b e n s e r r e c o l e c t a d a s u s a n d o condiciones de laboratorio estándares: evite la hemólisis. Las muestras se deben de probar dentro de 48 horas después de ser recolectadas y guardadas ,a temperatura de refr igeración de 2-8 °C hasta que se rea l ice la prueba. Las muestras se pueden congelar a -20 °C si la prueba se demora más de 48 horas. L leve a temperatura ambiente de 15-30 °C y mezc le bien antes de realizar la prueba. No se congele nuevamente.

Sustancias de interferencia: Se pueden presentar muestras de or ina con a l tas concentrac iones de hCG en pac ientes que sufren de epiteliomas canónicos o molas hidatiformes, en estos casos pueden ocurrir resultados falsos positivos. La excreción de hCG disminuye generalmente en embarazos extra uter inos, embarazos toxémicos o con amenazas de abor tos . Es tas circunstancias pueden dar resultados falsos negativos.

Se adicionaron substancias interferentes a orinas con niveles de hCG de O y 20 mUl/L, en todos los casos, no se presentaron interferencias con los resultados esperados.

Acetaminofen 20 mg/dL Acido Acetilsalicílico 20 mg/dL Ampicilina 20 mg/dL Acido Ascórbico 20 mg/dL Atropina 20 mg/dL Benzolecgonina 10 mg/dL Cafeína 20 mg/dL Canabidiol 10 mg/dL

Canabinol 10 mg/dL Acido gentísico 20 mg/dL Glucosa 2 g/dL Hemoglobina 1 mg/dL Tetraciclina 20 mg/dL Acido Urico 20 mg/dL

Hormonas Homólogas hTSH 1000 µUl/mL WHO 68/38 hLH 500 mlU/mL WHO 2° IRP HMG hFSH 1000 mlU/mL WHO 2° IRP HMG

Procedimiento de la prueba 1. Lleve la muestra a temperatura ambiente antes de usarla. 2. Ret ire e l casete de su bolsa protectora y póngalo sobre

una superficie plana, márquelo con la identificación del paciente ó de control.

3. Sosteniendo el gotero desechable en forma vertical, vierta 2 gotas (aprox imadamente 0.12 mL) de suero u or ina dentro del orificio de muestra.

4. Lea a los 3 minutos muestras de orina. 5. Lea a los 5 minutos muestras de suero.

Control de calidad: El QuPID Plus hCG contiene una zona de control (C). Esta línea siempre deberá aparecer si la prueba se rea l izó adecuadamente. La ausenc ia de esta l ínea ind ica que el procedimiento es incorrecto o el deterioro de los reactivas. Si e l color del fondo aparece en el área de resultado, lo cual interf iere con la capacidad de lectura del mismo, e l resultado es inválido.

Control de Calidad Externo: Las buenas práct icas de laborator io recomiendan el uso de controles externos para asegurarse que e l react ivo y e l ensayo se están l levando a c a b o c o r r e c t a m e n t e . P R E C A U C I O N : A g u a ( d e s t i l a d a o desionizada) no se debe de usar como un control negativo. La or ina f is io lógica normal cont iene cant idades adecuadas de electrolitos y proteínas necesarias para producir un resultado correcto. Los contro les externos se deben probar con cada nuevo l o t e o cua lqu i e r env í o de ma te r i a l e s de p rueba a l m e n o s u n a v e z ó s e g ú n l o s r e q u e r i m i e n t o s d e l o s procedimientos de control de calidad estándar de laboratorio. Procese los controles como si fuera una muestra de paciente. Cuando aparece una l ínea de color en la zona de muestra (S) junto con una l ínea de co lor en la zona de contro l (C) en e l á rea de resu l tado , es to i nd i ca un resu l tado pos i t i vo . Un resultado negat ivo se dará s i so lo una l ínea de color aparece en la zona de control (C) en el área de resultado.

Resultados Resultados Negativos: La prueba es negativa si aparece únicamente una l ínea en la Zona Control (C).            

C    S        

Resultados Positivos: La prueba es posit iva si aparecen las dos l íneas. Una l ínea de color aparecerá en la Zona de Muestra (S) y una en la Zona de Control (C). Cualquier l ínea de color que aparezca en la zona de muestra (S) se debe considerar como positiva. Si el resultado es débil positivo, se observará más clara la línea de la Zona de Muestra (S) que la línea de la Zona de Control (C).

C              C    S            S  

Importante: Esta no es una prueba cuantitativa!

Cualquier línea de color que aparezca en la zona de control, hace valida la prueba. la intensidad de color de las líneas no es indicativo de la concentración de hCG en la muestra. Resultados Inválidos:

La prueba es inválida si no aparece ninguna l ínea en la Zona Con t r o l ( C ) aunque s i a pa r e z ca una l í n ea en l a z ona de muestra (S) en este caso, se deberá repetir la prueba.

C              C    S            S  

Limitaciones Una muestra con bajo n ive l de hCG puede mostrar 'un co lor más intenso si lo deja mucho tiempo. El contenido de este equipo es para usarse en la detección cual i tat iva de hCG. Var ias condic iones (ver substanc ias de I n t e r f e r e n c i a ) a d e m á s d e l e m b a r a z o , i n c l u y e n d o e n f e r m e d a d e s t r o f o b l á s t i c a s y c i e r t o s n e o p l a s m a s n o trofoblásticos causan concentraciones elevadas de hCG. Estos d iagnóst icos deberán se conf i rmados por otros métodos de p rueba . No se puede d i s t i ngu i r en t re embarazo no rma l y e m b a r a z o e c t ó p i c o b a s á n d o s e ú n i c a m e n t e e n l a concentrac ión de hCG s implemente. Un aborto espontáneo también puede causar confusión al interpretar e l resultado de la prueba.

Las muestras de pacientes que han recibido preparaciones de anticuerpos monoclonales murinos para diagnóstico o terapia pueden con tene r an t i cue rpo humano an t i -mur ino (HAMA) . Estas muestras pueden mostrar resultados fa lsos posit ivos o falsos negativos cuando son probados con ensayos que utilizan anticuerpos monoclonales.

Se pueden segu i r de te c t ando n i ve l e s de hCG después de l par to norma l , por cesárea , de abor to espontáneo, abor to terapéut ico o inyecciones de hCG.

No utilice los casetes de prueba que se encuentren mojados o aque l l o s que l l even más de 24 ho ras fue ra de su bo l s i t a metál ica. Los resultados po s i t i v o s en e m b a r a z o s t e m p r a n o s po s t e r i o rmen te pueden da r c omo nega t i v o s deb i do a l a terminac ión natura l de l embaraza. Se est ima que esto ocurre en un 22% de los embarazos cl ínicamente no reconocidos y en un 31% de todos los embarazos. Una línea de color débil en la zona de muestra, nos indica un resultado positivo, sin embargo, e l r e su l t ado debe se r i n te rp re tado en e l con tex to de que pueden existir condiciones cl ínicas o f isiológicas que causen e levados n i ve les de hCG. Po r l o t an to se recomienda que cuando se ut i l ice una prueba sensib le de hCG como el QuPID Plus hCG, los resultados posit ivos débi les se vuelvan a probar 48-72 horas después.

Si una muestra de orina está muy diluida (por ejemplo: baja g ravedad e spec í f i c a ) puede no con tene r n i ve l e s de hCG representat ivos. Si se sigue sospechando de un embarazo, se debe recolectar la pr imera or ina de la mañana 48-72 horas después y volverse a analizar.

Como en todas las pruebas de embarazo, e l d iagnóst ico f ina l s e basa rá en r e l a c i ón a l o s r e su l t ados de l a p rueba , l o s resultados clínicos, signos y síntomas típicos.

Valores esperados8

Los hombres sanos y las mujeres que no estén embarazadas no t i e n e n n i v e l e s d e t e c t a b l e s p o r e l Q u P I D P l u s h C G . E n embarazos normales, niveles de 20 mIU/L de hCG se pueden alcanzar tan solo 2 a 3 días antes del primer retraso del periodo menstrual. El nivel máximo de hCG se alcanza a las 8 semanas después del últ imo periodo menstrual y después los valores disminuyen durante el resto del embarazo. Después del parto, los niveles de hCG disminuyen rápidamente y generalmente regresan a la normalidad.

Características de funcionamiento 4 Exactitud: Se realizo un estudio total de 300 muestras de orina 5 posit iva y negativa (150 de c/u) y 72 muestras de suero. Estas muest ras se probaron con e l QuPID P lus hCG y con la prueba 6 de Abo t t Tes t Pack P lus de acue rdo con sus in s t rucc iones 7 específicas, dando los siguientes resultados:

Abott Test Pack Plus

(+) (-) QuP ID P l u s hCG (+) 150 o (Orina) O 150 QuP ID P l u s hCG (+) 21 O (Suero) (-) O 51

E l e s t u d i o d e e x a c t i t u d t a m b i é n s e r e a l i z ó a l a ñ a d i r c on c en t r a c i o ne s c ono c i d a s d e hCG a un poo l d e o r i n a s negativas:

Conc. HCG Añadida

mIU/mL Esperado Observado

Pool O Negat ivo Negat ivo

de 20 Positivo Positivo Orina 25 Positivo Positivo

100 Positivo Positivo

Especificidad: Se realizó un estudio utilizando muestras de orina de 20 mujeres post-menopáusicas. Estas muestras se escogieron ya que la orina de este tipo de mujeres generalmente interfiere en las p ruebas de embarazo deb ido c i l a reacc ión c ruzada con otras hormonas gonadotropinas. Las 20 muestras de orina fueron negativas cuando se probaron con la prueba de QuPID Plus hCG.

Estandarización: La prueba de embarazo QuPID Plus hCG está estandarizada de acuerdo al 3er. Estándar Internacional de la OMS para gonadotrofina coriónica.

Precisión: La precisión intraensayo se determinó utilizando 12 replicas de muestras que contenían 0, 20 y 100 mlU/mL de hCG. Los valores posit ivos y negativos fueron 100% identif icados dentro del tiempo. En el interensayo de precisión, se utilizaron las mismas 3 muestras de 0, 20 y 100 mlU/mL de hCG en 11 diferentes pruebas, util izando 3 diferentes lotes en un período de 6 meses. Una vez más los valores positivos y negativos fueron 100% identificados correctamente dentro del tiempo.

Sensibilidad: La prueba de embarazo QuPID Plus hCG detecta concentraciones de 20 mIll/ml y mayores en muestras de suero u orina de acuerdo con el 3er. Estándar Internacional de la OMS. Cuando se probaron muestras que contienen niveles elevados de hCG (1,000,000 mUl/mL), consistentemente dieron resultados positivos.

Referencias 1 . Braunstein, G.D., Rasar, J., Aalder, D., Danzer, H., and Wade,

M.E•, AM J. Obstet. Gynecol., 126, 678-681 (1976). 2 Braunstein, G.D. Vaitukait is, J.L., Carbone, P.P., and Rose

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Endocrinoligy, 94, 1601-1060 (1974). • Koher, G. and Milstein, C., Nature, 256, 495-497 (197). • Thompson, R.J., Jackson, A.P. and Langlois, N., Clin., Chem,

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558 (1977). • Lenton, E.A., Neal, L.M. and Sula iman, R., Fert i l i ty and

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