8/16/2019 Prueba Flujo Vascular de KOH y de Patogenicidad en Tomate (2)

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 Métodos de diagnostico en campo

Prueba del flujo vascular del tallo

Es necesario efectuar una prueba de diagnóstico ya que la marchitez de la planta causada por la

 bacteria Ralstonia solanacearum puede confundirse con los síntomas inducidos por otros agentes

 patógenos como Fusarium eumartii, Verticillium sp., Pectobacterium spp., por daños mecánicos o por los causados por insectos en la base del tallo.

La prueba del flujo ascular consiste en! "#$ cortar un pedazo de tallo de %&' centímetros de la

 base de la planta marchita y laarlo con agua corriente( ")$ sujetar el trozo de tallo en posiciónertical con un alambre o clip en un tubo de prueba conteniendo agua est*ril( "%$ luego de unos

minutos se obseraran hilos lechosos parecidos al humo de cigarro que salen del sistema ascular 

del tallo. Este flujo es característico de R. solanacearum.

Prueba de KOH

Los síntomas de la pudrición parda en los tub*rculos se pueden confundir con los de la pudrición

anular causada por Clavibacter michiganensis  subsp.  sepedonicus  "antes llamada

Corynebacterium sepedonicum$. +e puede realizar una prueba diferencial y rápida directamentecon el eudado bacteriano del tub*rculo para diferenciar ambas bacterias. +e colocan dos gotas de

hidróido de potasio "-/$ al %0 en el eudado y se mezclan con una ansa o un mondadientes

de madera durante #1 segundos. La formación de un hilo lechoso al leantar el mondadientes

indica la presencia de R. solanacearum "bacteria 2ramnegatia$. En el caso de C. michiganensis

subsp. sepedonicus "bacteria 2rampositia$, no se forma el hilo.

 Aislamiento en medio TZC o Kelman

Estriar )1 µl del etracto de tallo enriquecido o de la solución del flujo ascular en placas

conteniendo el medio 345 "-elman #16'$ e incubar a %1o5 durante dos días. Este medio es 7til

 para distinguir R. solanacearum de otras bacterias durante su aislamiento. 8l cabo de dos días de

incubación a %1o5, las colonias irulentas se caracterizan por ser fluidas, irregulares, lisas, con borde redondeado y de color blanco cremoso con la parte central de color rosado difuso, a eces

en forma de espiral.

 Prueba de patogenicidad 

9ara esta prueba es necesario un cultio de  R. solanacearum en medio 592 "-elman sin 345$ de

dos días de incubación a %1o5. 9lántulas de tomate "c. :arglobe$ o de papa "cualquier ariedad

susceptible a la marchitez bacteriana$ de #1 a #6 cm de altura se inoculan inyectando )1 µl de una

suspensión de R. solanacearum de aproimadamente #1; c*lulas<ml en la aila de la tercera hoja

superior, con ayuda de una jeringa hipod*rmica. tro m*todo consiste en tomar una o dos

colonias de  R. solanacearum crecida en medio -elman sin 345 con el etremo de unmondadientes e insertarlo en la aila de la tercera hoja superior. Las plantas se mantienen bien

regadas en un ambiente con temperaturas entre )6 a %1o5 durante un mes con ;1&=10 de

humedad relatia y con luz natural del día. +i el aislamiento inoculado es una cepa irulenta de  R.

 solanacearum los síntomas aparecerán a partir de los cinco días y dentro de ' semanas. >espu*s

de la aparición de los síntomas, se puede realizar la prueba del flujo ascular del tallo y la bacteria puede ser re&aislada de la suspensión obtenida.