proyecto de biotecnologia

7/25/2019 Proyecto de Biotecnologia

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Evaluacin de la capacida

antagonista de cepas

de

Trichoderm a sp

Nativa

Comercial frente a Fusarium


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El manejo de enfermedades de plantas ocasionadaspor patgenos del suelo son verdaderos retos en laagricultura mundial que por su complejidadrequieren un trato ms cuidadoso que en el caso delos patgenos de la aerobiota.

En el mundo se conoce un grupo importante dehongos y bacterias que presentan efecto antagnicosobre otros microorganismos.

Este efecto es aprovechado por el hombre para laregulacin, tanto de patgenos cuyo hbitat es elsuelo, como aquellos que se desarrollan en la partefoliar de las plantas.

MARCO TERICO

Desde los primeros estudios enhasta el presente, entre laampliamente estudiadas y aplicbiolgico, se encuentragnero Trichoderma, debido acapacidad reproductiva, plastefecto estimulante sobre los culti

Los antagonistas utilizados penfermedades son generalmdebido a su facilidad de adaptasu alta capacidad de competenfrente a otros organismos, a su vmanipulacin.


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PLANTEAMIENTO DE

PROBLEMA

Cul es la diferencia que existe entre una Cepa Na

una Cepa Comercial de

Trichoderma

Sp

frente a

capacidad Antagonista frente al Hongo Fito pat

Fusarium

Sp

en los Cultivos de

Allium Cepa

en la ZoSama?


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HIPOTESIS

La Cepa Nativa de Trichoderma Sppes

significativamente ms efectiva que la cepa Comerciafrente al Hongo Fito patgeno de Fusarium Sppen locultivos de Allium Cepa en la zona de Sama.


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FUNDAMENTO DEL PROBLEMA

Se ha demostrado mediante estudios queTrichoderma Sppposee unaAntagonista frente a Hongos Fito patgenos como es el caso de FHongo muy comn en suelos agrcolas causante de muchas problemaa los cultivos.

El hongo Trichoderma sp es un eficiente controlador biolgico queampliamente usado en agricultura como agente de bio-control dhabilidad para colonizar sustratos rpidamente, inducir resistencadquirida en plantas, promover el crecimiento vegetal y poseeantagonista contra un amplio rango de hongos patgenos. El efecto insus antibiticos de la degradacin de componentes de la paredpatgenos de plantas, es citado como aspecto importante de santagonista.


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VARIABLES

1. Variable Dependiente: Fusarium Spp.

2. Variable Independiente: TrichodermaNativa y Comercia

3. Respuesta: Cantidad de Fusariumen Cm2.


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OBJETIVO GENERAL

Evaluar la capacidad antagonistas de unaCepa Nativa y una Cepa Comercial frente ael Fito patgenoFusariumsp.

Evaluar la capacidad antagonistas de unaCepa Nativa y una Cepa Comercial frente ael Fito patgenoFusariumsp.

OBJETIVOS ESPE

Aislar e identificar cepas de Tricultivos de Allium Cepa de la zon

Aislar e identificar cepas de Fcultivos deAllium Cepade la zon

Determinar la capacidad anTrichoderma Comercial y Nativ

patgenoFusarium sp. Invitro.


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Material de laboratorio

Placas Petri

Vaso de precipitados

Probeta de vidrio de 50 mL

Pipeta

Tijera estril. Mecheros

Bagueta.

Bolsas de polietileno de 4 x 10cm

Algodn

Cinta adhesiva

MATERIALES Y REACTIVOS

METODOLOGIA

Equipos de labo

Estufa. Autoclave Refrigeradora Microscopio balanza

Materiales de se

Mandil Barbijo Guantes


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Reactivos de laboratorio

Agar PDA. Agua destilada estril. Alcohol yodado. Alcohol Cloruro de sodio

Otros

Cmara fotogrfica.

Cuaderno de notas.

Lapiceros y marcado

Regla.


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Existen algunos materiales yreactivos que sern proporcionadospor el Laboratorio de Microbiologade la Upt.A continuacin detallamos elpresupuesto de materialesproporcionados por el grupo de

trabajo:

*Transporte: S/.20.00

PRESUPUESTO

MATERIAL PREC

Placas PetriS/. 30

Cinta adesivaS/. 1.

TijeraS/. 2.

Plumon idelebleS/. 2.

Hipoclorito al 2,5S/. 9.

PinzaS/. 1.

Bolsas de PolietilenoS/. 10

Pastilla de Cloranfenicol

S/. 3.

BarbijosS/. 6.00

GuantesS/. 14

Cepa Comercial de Trichoderma sp.

S/. 14.00 x


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AISLAMIENTO DE TRICHODERMA SP.

Las cepas deTrichoderma sp. se aislaron de muestras de suelo. Para ello se colocaron 10gde la muestra de suelo en un matraz con 90 ml de agua destilada estril. Luego serealizaron dos diluciones consecutivas de 1 en 10. Se sembraron en superficie 0.5 ml decada dilucin en placas Petri de 9 cm de dimetro conteniendo medio de cultivo PDA-Chloramphenicol 0.01% y se incubaron durante 4 das a 25C en alternancia de luzoscuridad. En base a las caractersticas macroscpicas se efectuaron aislamientos de lascolonias deTrichoderma en placas Petri de 4.5 cm de dimetro conteniendo medio decultivo PDA y se incubaron durante 4 das a 25C en alternancia de luz oscuridad. Seobtuvieron de esta forma cultivos puros de cada aislamiento.

PROCEDIMIENTO


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AISLAMIENTO DE FUSARIUM SPA PARTIR DE ALLIUM CEPA

Aislar el patgeno de plantas que presentan sintomatologa de marchitez y

pudricin en races de cebollas. Cortar varios trozos de tejido enfermo utilizandouna tijera estril. Desinfectar los trozos de muestra en placa Petri de 60 mm quecontenga una solucin de hipoclorito de sodio al 2.5%, durante 3 minutos.Enjuagar luego los trozos desinfectados con agua destilada estril en otra cajaPetri, vertiendo el agua sobre la muestra con una pipeta estril. Colocar lostrozos lavados sobre toallas de papel estriles durante 10 minutos para que sesequen.

Cuando los trozos estn secos, tomarlos con una pinza estril y sembrarlos en unaplaca Petri que contenga el medio de cultivo PDA.


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EVALUACIN DE CAPACIDAD ANTAGNICA DE TRICHODERMA SP POR CULTIVO DUAL

Para evaluar la eficacia deTrichoderma sp frente aFusarium sp, Inocular discos de PDA de

alrededor de siete mm de dimetro, tanto del antagonista como del patgeno, en los extremos

de la placa Petri, colocndolos unos frente del otro y en forma equidistante del centro de la

misma. Las placas Petri se incubaran durante un perodo de siete das a (272 C). Se realizar

la medicin del crecimiento radial del patgeno como testigo y del antagonista cada 24 horas

durante hasta que llene la placa el testigo.

El clculo del Porcentaje de Inhibicin del crecimiento radial (PICR), que mide el antagonismo de

los microorganismos evaluados Este se obtiene a partir del crecimiento de cada patgeno en

cultivo dual, junto con sus respectivos testigos, empleando la frmula utilizada por (Surez et al

2008).


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Fuente: Surez et al 2008

Donde:

R1 es el radio mayor (radio patgeno-testigo). R2 es el radio menor (radio del patgeno en cultivo dual).

Frmula para hallar PICR


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DISEO EXPERIMENTAL

El diseo establecido fue completamente alazar con 6 tratamientos correspondientes acepas nativas y comerciales deTrichodermaspp. frente al hongo Fusarium spp y uncontrol, con dos repeticiones y 12 unidadesexperimentales.

Yij = U + Ti + Eij

Donde:Yij = Variable respuestaU= efecto de la media generalTi= Efecto del tratamientoEij= Error experimental del tratamiento

TRATAMIENTO

Se utilizaron como tratamiento cunativas, una cepa comercial y un

Fusarium spp

Tratamientos

T1 TN1

T2 TN2

T3 TN3

T4 TN4

T5 TC

T6 ----

Donde:

TN = Trichodermacepa nativaTC = Trichodermacepa comercial


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METODOLOGIA DE FUSARIUM SP.


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FUS RIUM SP

De las siguientes muestras aisladas se obtuvieron las cepas de Fusarium Sp.

P1-M3(40x)

P2-M2(40x)

P2-M1(100x)


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Purificacion de Cepasde Fusarium Sp.

ObseM

Preparacion para laObservacin


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Metodologa Trichoderma sp. Na


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Trichoderma Sp. Nativo

Los resultados que obtuvimos no fueron satisfactorios ya que no pudimos identificar tr

10 -3 - 1 ml 10-2


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Observacin del Trichoderma sp. Comercial en placas Petri.


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METODOLOGIA DE TRICHODERMA

COMERCIAL


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-5 -6-3 -4-1 -2


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OBSERVACIONES


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OBSERVACIONES

No se pudo aislar Trichoderma Sp. por diferentes factores:

- El suelo que obtuvimos era muy pobre en presencia deMateria Orgnica.

- Falta de asepsia al realizar la metodologa en el Laboratorio.- Contaminacin de las Placas por Hongos Ambientales.- Sobrexposicin de las muestras de Suelo


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