COMITÉ INSTITUCIONAL DE CUIDADO Y USO DE ANIMALES DE LABORATORIO

Formulario para la evaluación de actividades que involucren el manejo de animales de laboratorio – Versión vigente 2019

Para consultas con el llenado de este formulario dirigirse a cicual.ibyme@dna.uba.ar

En la elaboración del siguiente formulario se tuvieron en cuenta las recomendaciones de la Directiva 2010/63/UE (ANEXO I) y “Guide for the Care and Use of Laboratory Animals”, 8th Ed., 2010, NRC, USA (ANEXO II).El presente formulario reviste carácter de declaración jurada. Los datos consignados en este formulario son confidenciales.

CICUAL Nº_ _ _ /2019Modificación: ___________

Nombre del Laboratorio:

Área de trabajo (Marque con una X):

CÁNCERINMUNOLOGÍAREPRODUCCIÓNNEUROCIENCIASENDOCRINOLOGÍAOTRA (especifique)

Título del proyecto:

Datos del investigador responsable:

Nombre y Apellido: Título: Teléfono/interno: Celular: Correo electrónico:

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Integrantes que participan del proyecto propuesto:Personas implicadas en el proyecto incluido el investigador responsable, indicando el grado de responsabilidad (profesional, técnico), a ser contactadas en caso de ser necesario. Agregue tantas líneas como sean necesarias.

Nombre y Apellido Cargo/Función Categoría1 Capacitación2 Correo electrónico/

tel. interno

1: Indique la categoría según reglamento CICUAL (ANEXO III).2: Indique si realizó la capacitación del Bioterio/CICUAL del IBYME.

¿Cuenta en su laboratorio con técnico veterinario o técnico calificado para realizar los procedimientos con animales que se describen en este proyecto?

Objetivo/s específico/s de los experimentos que incluyen el trabajo con animales:

Fecha estimada de inicio:Fecha estimada de finalización:

Datos de los animales

Especie/Cepa1 Bioterio de Origen2 Cantidad estimada por proyecto Edad (rango) Sexo

1: Si utiliza animales genéticamente modificados describa el fenotipo asociado a la modificación que incida en el bienestar animal.2: Especifique el método de transporte, cuidados y duración del viaje. En el caso de que el origen sea distinto al Bioterio IBYME o La Plata, adjunte certificado de condición microbiológica.

Alojamiento de los animales (marque con una X e indique):Versión 2019

2

Alojamiento

Bioterio  

Vivario  

Tipo de JaulaNro. de animales por jaula

Allentown

Allentown XJ

Tecniplast chica

Tecniplast grande  

Thorem    

Truncada    

Reja    

Complete la siguiente tabla solo en caso de que las condiciones de alojamiento sean diferentes a las estándar del Bioterio del IBYME o específicas de su diseño experimental.

Comparte la sala con otras especies?

Tipo de dieta

Tipo de agua de bebida

Cama o lecho (Marlo/viruta, etc…)

Ventilación

Temperatura

Humedad

Iluminación

Rutina de limpieza

Procedimientos: Para el diseño de estos experimentos tenga en cuenta el Principio de las 3Rs (Reducción del número de animales, Refinamiento de la técnica y Reemplazo de animales por otras técnicas, Ver Anexo IV).

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Manifiesto haber leído y aplicado el Principio de las 3 R en el diseño experimental

Para el diseño de estos experimentos tuvimos en cuenta el principio de las 3 Rs. Reducción: Refinamiento: Reemplazo:

Justifique el tamaño de la muestra (estadísticamente, trabajos previos del grupo, publicaciones de otros autores o por otros criterios):

Indique el motivo por el cual no se plantea aplicar métodos alternativos al uso de animales.

Marque (con una X) cuáles de los procedimientos detallados abajo se emplearán en este proyecto:

Restricción de agua y alimentos (acceso solo a tiempo controlado o restricción de volumen / peso consumido.

Cateterización, extracción de sangre, intubación. Modificación de conducta Procedimientos quirúrgicos con recuperación. Procedimientos quirúrgicos sin recuperación. Estudios LD50. Restricción prolongada en animales no anestesiados (equipo utilizado, tamaño,

diseño y operación para disminuir disconfort, dolor, diestres y potenciales lastimaduras).

Producción de anticuerpos monoclonales. Producción de anticuerpos policlonales. Toma de muestra para identificación o genotipificación. Apareo y crianza. Estudios de ritmos circadianos (inversión ciclos luz/oscuridad). Tratamientos con drogas o sustancias químicas. Estudios reproductivos (fertilidad, ciclicidad, etc.). Inoculación de células tumorales. Otros (especificar):

Enumere y describa con detalle los procedimientos experimentales que serán realizados en los animales. No olvide detallar el número de grupos experimentales y el número de animales

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por grupo. Indique además siglas, definiciones, abreviaturas y palabras de significado dudoso o infrecuente. En lo posible, indique si existen publicaciones de los últimos 5 años, con referato internacional, en donde los procedimientos experimentales ya hayan sido aprobados por algún Comité de Ética o CICUAL.

Detalle los grupos experimentales en la siguiente tabla modelo. La misma puede ser modificada de acuerdo a su protocolo:

Cepa Grupo experimental

Tratamiento Animales/grupo Animales totales (considerando las réplicas biológicas)

Agente/s utilizados en el proyecto (marque con una X):

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AgenteInfecciososRadioisótopos*CarcinógenosQuímicosBiológicosOtros (especifique)

*: Deberá contar con la autorización de la Comisión de Radioactivo del IBYME.

Indique la siguiente información del/los agentes utilizados:

Agente Vía de administración1

Vehículo Volumen final/ animal

Calibre de aguja

Frecuencia deadministración

Dosis (mg/kg)

1: Indique: Subcutáneo (sc), endovenoso (ev), intramuscular (im), intraperitoneal (ip), intracardiaco (ic), retroorbital (ro), intradérmico (id).Agregue las filas que sean necesarias.Adjunte la/s hoja/s de seguridad de los agentes poco frecuentes.

Indique los agentes que utilizará para minimizar el dolor o sufrimiento en los animales (analgésicos, anestésicos, sedantes)

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Agente Vía de administración1

Calibre de aguja

Frecuencia deadministración

Dosis (mg/kg)

1: Indique: Subcutáneo (sc), endovenoso (ev), intramuscular (im), intraperitoneal (ip), intracardiaco (ic), retroorbital (ro), intradérmico (id).Agregue las filas que sean necesarias.Adjunte la/s hoja/s de seguridad de los agentes poco frecuentes.

Indique qué parámetros medirá para conocer si el resultado de la anestesia es el correcto:

Relajación muscular

Perdida de sensibilidad a la torsión de un pliegue de piel

Ausencia del reflejo de retirada al momentode realizar presión en las almohadillas plantares

Perdida del reflejo de deglución

Otros (especifique)

En caso de no utilizar ningún tratamiento paliativo al sufrimiento del animal, justifique detalladamente su decisión.

Conducción de los procedimientos quirúrgicosDescriba cuidados pre- y post-operatorios (incluye asepsia o esterilidad, mantenimiento de la temperatura corporal, reposición de fluidos, analgésicos, sedantes, antibióticos, etc)

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Cuidados pre-operatorios:

Cuidados quirúrgicos y post-quirúrgicos:

Finalización del procedimiento

Explique y justifique los criterios de punto final experimental y humanitario teniendo en cuenta las siguientes definiciones. Punto final experimental: Punto final del uso de los animales, que precede a la eutanasia, cuando se considere que los objetivos y propósitos del protocolo experimental, estudio piloto, capacitación y práctica de laboratorio han sido alcanzados (Guide for the Care and Use of Laboratory Animals, 2011).

Punto final humanitario: Punto final del uso de los animales, que precede a la eutanasia, cuando se considere que el dolor, la angustia y el malestar de los animales debe ser prevenido, aliviado o finalizado (Guide for the Care and Use of Laboratory Animals, 2011).

Indiquea) Método eutanásico (marque con una X):

Decapitación

Dislocación cervical

Inhalación de CO2

Perfusión intracardíaca

Exsanguinación

Otros (especifique)

b) Justificación del método utilizado:

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c) Persona/s a cargo de la maniobra:

Clasifique según su opinión la SEVERIDAD del proyecto en base a la severidad máxima de los procedimientos (Ver Anexo V para orientación)

Sin recuperación Leve Moderado Severo

Indique si existe riesgo potencial para:

Si NoEl personal del BioterioEl resto de los animalesEl ambiente

Medidas para disminuir el riesgo:

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Personas a contactar en caso de emergencia fuera de horario:

Nombre: Celular: Nombre: Celular:

Compromiso para el Cuidado y uso ético de los animales de laboratorio.

Manifiesto en carácter de declaración jurada haber leído y completado el presente formulario, y me comprometo a cumplir y hacer cumplir este protocolo de investigación de acuerdo con los principios éticos aprobados por el Consejo Directivo del Instituto de Biología y Medicina Experimental. Además me comprometo a informar cualquier modificación de este protocolo a esta Comisión.

Asimismo me comprometo a educar al personal a mi cargo y exigirles el respeto de estos principios y de los aspectos relacionados con el cuidado y uso de animales de laboratorio detallados en los documentos: “Guide for the Care and Use of Laboratory Animals”, 8th Edition, National Research Council, The National Academies Press, Washington DC, 2010 y Directiva 2010/63/UE del Parlamento Europeo relativa a la protección de los animales utilizados para fines científicos.

Nombre del investigador principal:

Titulo académico:

Fecha:

Firma:

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Para el Uso del Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio

El Comité Institucional para el Cuidado y Uso de los Animales de Laboratorio, en reunión efectuada el…..….de……..………………de………… y luego de analizar la presentación y el formulario de este protocolo, manifiesta lo siguiente:Aprobado para su realización: Remitir para su corrección:

Miembros del CICUAL Firmas

……………………… ……………………..

……………………… ……………………..

……………………… ……………………..

……………………… ……………………..

……………………… ……………………..

……………………… ……………………..

……………………… ……………………..

……………………… ……………………..

Comentarios:

Firma y sello responsable CICUAL

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ANEXO I: Información que debe contener el protocolo para su apreciación por el CICUAL (Directiva 2010/63/UE, Anexo VI)

1- Pertinencia y justificación de lo siguiente: a) utilización de animales, incluso por lo que se refiere a su orígen, número estimado, especies y etapas de su vida.b) procedimientos2- Aplicación de métodos para reemplazar, reducir y refinar la utilización de animales en procedimientos.3- Uso previsto de anestésicos, analgésicos y otros medios para calmar el dolor4- Medidas adoptadas para reducir, evitar y aliviar cualquier forma de sufrimiento de los animales a lo largo de toda su vida, cuando así proceda5- Uso de puntos finales incruentos6- Estrategia experimental o de observación y modelo estadístico utilizado para reducir al mínimo el número de animales utilizados, el dolor , sufrimiento, angustia y el impacto medioambiental cuando proceda7- Reutilización de animales y su efecto acumulativo sobre el animal 8- Clasificación propuesta de la severidad de los procedimientos9- Medidas adoptadas para evitar la repetición injustificada de procedimientos cuando sea conveniente10- Condiciones de alojamiento zootécnicas y de cuidado para los animales11- Métodos de sacrificio12- Competencia de las personas que participan en el proyecto

ANEXO II: Guide for the Care and Use of Laboratory Animals, 8th Ed. 2010, NRC, USA, (Pag. 25-26)

El protocolo de utilización de animales es una descripción detallada del uso propuesto de los animales de laboratorio. Los siguientes temas deben ser considerados en la preparación del protocolo por parte del investigador y su revisión por parte del CICUAL:

1- justificación y la finalidad de la utilización de animales2- una descripción secuencial clara y concisa de los procedimientos que impliquen el uso de animales que sea fácilmente comprensible por todos los miembros del comité3- disponibilidad y pertinencia de la utilización de procedimientos menos invasivos, con otras especies, con preparaciones de órganos aislados, con cultivo de células o tejido, o con simulación por computadora4- justificación de la especie y número de animales propuestos; siempre que sea posible, el número de animales y tamaño de los grupos experimentales se debe justificar estadísticamente 5- duplicación innecesaria de experimentos6- condiciones de alojamiento y cuidado para los animales y sus crías7- impacto de los procedimientos propuestos en el bienestar de los animales8- adecuada sedación, analgesia y anestesia (los índices de dolor o invasividad podrían ayudar en la preparación y revisión de los protocolos)9- realización de procedimientos quirúrgicos, incluyendo múltiples procedimientos quirúrgicos, y los cuidado y observación posquirúrgico10- descripción y justificación de los puntos finales 11- criterios y procedimientos para la intervención oportuna del procedimiento, ya sea la eliminación de los animales del estudio, o la eutanasia si se prevé la ocurrencia de dolor o estrés12- método de eutanasia o disposición de los animales, incluida la planificación para el cuidado de las especies de larga vida después de la finalización del estudio

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13- formación y experiencia asi como funciones y responsabilidades del personal involucrado en los procedimientos14- uso de materiales peligrosos y la promoción de un ambiente de trabajo seguro

Mientras que la responsabilidad de la revisión del mérito científico del proyecto normalmente se encuentra fuera del CICUAL, los miembros del CICUAL deben evaluar los elementos del proyecto que se relacionan con el bienestar y el uso de los animales. Por ejemplo, la hipótesis, tamaño de la muestra, los números de grupo, y la adecuación de los controles pueden estar directamente relacionados con la prevención del uso innecesario de los animales o la duplicación de experimentos. Para algunas cuestiones, el aporte de expertos por fuera del CICUAL es aconsejable o necesario. Los miembros del CICUAL que sean nombrados en los proyectos o que tienen otros conflictos deben abstenerse de participar en las decisiones relativas a estos protocolos.

ANEXO III: Categorización

Se definen cuatro categorías de personas que requieren educación y entrenamiento apropiados: Categoría A: Personas que cuidan a los animales Categoría B: Personas que realizan Procedimientos en los animales Categoría C: Personas responsables de dirigir o diseñar Procedimientos Categoría D: Personas especializadas en Ciencia y Tecnología de Animales de Laboratorio

ANEXO IV:

Principio de las 3RsEn 1959 Russell y Burch introdujeron unas normas alternativas conocidas como “las 3Rs”: reducir el número de animales empleados, reemplazar el material animal vivo por técnicas experimentales alternas; refinar las técnicas para minimizar el sufrimiento animal; con la finalidad de generarle al animal de experimentación el menor sufrimiento o daño posible. En la tabla 1 se definen estos principios y sus estrategias o alternativas de intervención.

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Tabla 1. Definición y estrategia de las 3Rs

Principio Definición Estrategias o alternativas

ReemplazarReemplazo de animales conscientes por animales no conscientes o materiales no sensibles: agrupan aquellos métodos que permiten realizar experimentos sin el uso de modelos animales.

Sistemas in vitro, ayudas audiovisuales, animales muertos, material de mataderos, software.

Reducir

Reducción del número de animales sin disminución de la precisión: describen métodos para obtener niveles comparables de información, a partir del uso de pocos animales en los procedimientos experimentales.

Selección del modelo animal; calidad sanitaria, genética y ambiental; criopreservación; métodos estadísticos avanzados; banco de datos: publicación de resultados negativos para no repetir; acceso a literatura especializada.

Refinar

Refinamiento de las técnicas para reducir el dolor y el malestar: agrupan aquellos métodos que alivian o minimizan el dolor y la angustia para asegurar el bienestar animal.

Cuidado y bienestar animal; destrezas y capacitación del personal; perfeccionamiento de métodos para detectar el dolor; uso de anestésicos, analgésicos y tranquilizantes; o uso de técnicas no invasivas; uso de radiografías para detectar tumores y deterioro orgánico; aplicar eutanasia anticipada.

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ANEXO V: Clasificación de la severidad de los procedimientos (Directiva 2010/63/UE)

La severidad de un procedimiento irá determinada por el grado de dolor, sufrimiento, angustia o daño duradero que se prevé que experimente un animal individual durante el procedimiento.

Sección I: Categorías de severidad

No recuperación: Los procedimientos que se realizan enteramente bajo anestesia general tras la cual el animal no recuperará la conciencia deben clasificarse como de no recuperación.

Leve: Los procedimientos en animales a consecuencia de los cuales es probable que experimenten dolor, sufrimiento o angustia leves de corta duración, así como los procedimientos sin alteración significativa del bienestar o del estado general de los animales deben clasificarse como leves.

Moderado: Los procedimientos en animales a consecuencia de los cuales es probable que experimenten dolor, sufrimiento o angustia moderados de corta duración, o leves pero duraderos, así como los procedimientos que pudieran causar una alteración moderada del bienestar o el estado general de los animales deben clasificarse como moderados. Severo: Los procedimientos en animales a consecuencia de los cuales es probable que experimenten dolor, sufrimiento o angustia intensos, o moderados pero duraderos, así como los procedimientos que pudieran causar una alteración grave del bienestar o del estado general de los animales deben clasificarse como severos.

Sección II: Criterios de atribución La atribución de la categoría de severidad tendrá en cuenta cualquier intervención o manipulación de un animal en un procedimiento determinado. Se basará en los efectos más severos que pueda experimentar un animal después de aplicar todas las técnicas apropiadas de refinamiento. Al atribuir un procedimiento a una categoría particular, el tipo de procedimiento y demás factores se tendrán en cuenta. Todos estos factores deben considerarse caso por caso. Los factores relativos al procedimiento deben incluir: — el tipo de manipulación, el tratamiento, — la naturaleza del dolor, sufrimiento, angustia o daño duradero causados por (todos los elementos de) el procedimiento, y su intensidad, duración y frecuencia y la multiplicidad de técnicas empleadas, — el sufrimiento acumulativo en un procedimiento, — la prevención de la expresión del comportamiento natural incluidas las restricciones en las normas de alojamiento, zootécnicas y de cuidado de los animales.

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En la sección III se facilitan ejemplos de procedimientos atribuidos a cada categoría de severidad sobre la base de los factores relativos al tipo de procedimiento de que se trate. Facilitarán la primera indicación sobre la clasificación que sería la más adecuada para un determinado tipo de procedimiento. Sin embargo, a efectos de la clasificación final de severidad del procedimiento, se tendrán en cuenta los siguientes factores adicionales, evaluados caso por caso: — tipo de especie y genotipo, — madurez, edad y sexo del animal, — experiencia de formación del animal en el procedimiento, — si se reutiliza el animal, la severidad real de los procedimientos anteriores, — los métodos utilizados para reducir o suprimir el dolor, el sufrimiento y la angustia, incluidos refinamiento de condiciones de alojamiento, zootécnicas y de cuidado de los animales, — uso de puntos finales incruentos. Sección III: Ejemplos de diversos tipos de procedimiento atribuidos a cada categoría de severidad sobre la base de los factores relativos al tipo de procedimiento 1. Leve: a) Administración de anestesia, salvo para el único propósito de sacrificar; b) Estudio farmacocinético donde se administra una única dosis y se recoge un número limitado de muestras de sangre (totalizando < 10 % del volumen circulante) y no se prevé que la sustancia cause ningún efecto nocivo perceptible; c) Técnicas no invasivas de diagnóstico por imagen en animales (por ejemplo resonancia magnética) con la sedación o la anestesia apropiadas; d) Procedimientos superficiales, por ejemplo biopsias de oreja y rabo, implantación subcutánea no quirúrgica de minibombas y transpondedores; e) Aplicación de dispositivos exteriores de telemetría que únicamente causan al animal un debilitamiento menor o una interferencia menor con la actividad y el comportamiento normales; f) Administración de sustancias por vía subcutánea, intramuscular, intraperitoneal, por sonda gástrica e intravenosa a través de los vasos sanguíneos superficiales, donde la sustancia solo tiene un efecto leve en el animal, y los volúmenes se encuentran dentro de límites apropiados para el tamaño y la especie del animal; g) Inducción de tumores, o tumores espontáneos, que no causan ningún efecto nocivo clínico perceptible (por ejemplo, nódulos pequeños, subcutáneos, no invasivos); h) Cría de animales genéticamente modificados que se prevé que dé lugar a un fenotipo con efectos leves; i) Alimentación con dietas modificadas, que no cubren las necesidades nutricionales de todos los animales y se prevé que causen una anomalía clínica leve en el período de estudio; j) Confinamiento a corto plazo (< 24 h) en jaulas metabólicas; k) Estudios que implican la privación a corto plazo de interlocutores sociales, enjaulado solitario a corto plazo de ratas o ratones adultos de cepas gregarias;l) Modelos que exponen al animal a estímulos nocivos que se asocian brevemente con dolor, sufrimiento o angustia leve, y que el animal puede evitar; m) Una combinación o una acumulación de los siguientes ejemplos puede dar lugar a una clasificación leve:

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i) Evaluación de la composición corporal a través de mediciones no invasivas y restricción mínima, ii) Supervisión ECG con técnicas no invasivas con una restricción mínima o nula de animales habituados, iii) Aplicación de dispositivos exteriores de telemetría que no se prevé que causen ningún impedimento a animales socialmente adaptados y que no interfieren con la actividad y el comportamiento normales, iv) Cría de animales genéticamente modificados que no se espera que tengan ningún fenotipo adverso clínicamente perceptible, v) Adición a la dieta de marcadores inertes para seguir el paso de la digesta, vi) Retirada de la alimentación durante un período inferior a 24h en ratas adultas, vii) Ensayos en campo abierto.

2. Moderado: a) Aplicación frecuente de sustancias de prueba que producen efectos clínicos moderados, y extracción de muestras de sangre (> 10 % de volumen circulante) en un animal consciente en el plazo de algunos días sin reemplazo del volumen; b) Estudios de determinación de la gama de dosis causante de toxicidad aguda, pruebas de toxicidad crónica/carcinogenicidad, con puntos finales no letales; c) Cirugía bajo anestesia general y analgesia apropiada, asociada con dolor o sufrimiento posquirúrgicos o alteración posquirúrgica de la condición general. Los ejemplos incluyen: toracotomía, craneotomía, laparotomía, orquidectomía, linfodenectomía, tiroidectomía, cirugía ortopédica con estabilización efectiva y cuidado de heridas, trasplante de órganos con tratamiento efectivo del rechazo, implantación quirúrgica de catéteres, o dispositivos biomédicos (por ejemplo, transmisores de telemetría, minibombas, etc.); d) Modelos de inducción de tumores, o tumores espontáneos, que se prevé que causen dolor o angustia moderados o interferencia moderada con el comportamiento normal; e) Irradiación o quimioterapia con una dosis subletal, o con una dosis que de otro modo sería letal, pero con reconstitución del sistema inmunitario. Cabría esperar que los efectos nocivos fueran leves o moderados y que fueran efímeros (< 5 días); f) Cría de animales genéticamente modificados que se espera den lugar a un fenotipo con efectos moderados; g) Producción de animales genéticamente modificados mediante procedimientos quirúrgicos; h) Uso de jaulas metabólicas que impliquen una restricción moderada de movimientos durante un período prolongado (hasta 5 días); i) Estudios con dietas modificadas que no cubren las necesidades nutricionales de todos los animales y que se espera que causen una anomalía clínica moderada en el período de estudio; j) Retirada de la alimentación durante 48 horas en ratas adultas; k) Provocar reacciones de escape y evitación en las que el animal no pueda escapar o evitar el estímulo, y que se espera que den lugar a una angustia moderada.

3. Severo: a) Ensayos de toxicidad en los que la muerte sea el punto final o se prevean muertes y se provoquen situaciones fisiopatológicas intensas. Por ejemplo, ensayo de toxicidad aguda con una única dosis (véanse las directrices de la OCDE sobre ensayos); b) Ensayos de dispositivos en los que el fracaso pueda causar dolor o angustia severos o la muerte del animal (por ejemplo, dispositivos de reanimación cardiaca);

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c) Ensayo de potencia de una vacuna caracterizada por la alteración persistente del estado del animal, enfermedad progresiva que causa la muerte, asociada con dolor, angustia o sufrimiento moderados duraderos; d) Irradiación o quimioterapia con una dosis letal sin reconstitución del sistema inmunitario, o reconstitución con la producción de enfermedad de injerto contra huésped; e) Modelos con inducción de tumores, o con tumores espontáneos, que se espera causen enfermedad mortal progresiva asociada con dolor, angustia o sufrimiento moderados duraderos. Por ejemplo, tumores que causan caquexia, tumores óseos invasivos, tumores que dan lugar a diseminación metastástica, y tumores que se permite que se ulceren; f) Intervenciones quirúrgicas y de otro tipo en animales bajo anestesia general que se espera den lugar a dolor, sufrimiento o angustia postoperatorios severos, o moderados pero persistentes, o a una alteración severa y persistente de la condición general del animal. Producción de fracturas inestables, toracotomía sin analgesia adecuada, o traumatismo para producir el fallo multiorgánico; g) Trasplante de órgano donde es probable que el rechazo del órgano origine angustia o la alteración severa del estado general del animal (por ejemplo, xenotransplante); h) Reproducción de animales con trastornos genéticos que se espera experimenten una alteración severa y persistente de su estado general, por ejemplo la enfermedad de Huntington, distrofia muscular, modelos de neuritis crónicas recurrentes; i) Uso de jaulas metabólicas que impliquen una restricción severa de los movimientos durante un período prolongado; j) Choque eléctrico ineludible (por ejemplo para producir invalidez inducida); k) Aislamiento completo durante períodos prolongados de especies gregarias, por ejemplo perros y primates no humanos; l) Inmovilización de ratas para inducirles úlceras gástricas o fallo cardiaco por estrés; m) Natación forzada o pruebas de ejercicio con el agotamiento como punto final.

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