INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL CENTRO DE DESARROLLO DE PRODUCTOS BIÓTICOS

PROPIEDADES PLAGUICIDAS DE CINCO ESPECIES DEL GÉNERO Tagetes

TESIS

QUE PARA OBTENER EL GRADO DE MAESTRO EN CIENCIAS

EN

MANEJO AGROECOLÓGICO DE PLAGAS Y ENFERMEDADES

PRESENTA

JUAN SAÚL BARAJAS PÉREZ

YAUTEPEC, MORELOS, NOVIEMBRE DE 2009

El presente trabajo se realizó en los laboratorios de Fitopatología y

Ecología Química del departamento de Interacciones Planta-

Insecto del Centro de Desarrollo de Productos Bióticos del Instituto

Politécnico Nacional bajo la dirección del Dr. Roberto Montes

Belmont y el Dr. Federico Castrejón Ayala. Para la realización de los

estudios se contó con el apoyo económico de la beca CONACYT

(215855), beca del programa institucional de investigadores (PIFI) y

beca por parte del programa de becas institucionales. La

investigación fue realizada con el financiamiento económico del

proyecto de la Secretaria de Investigación y Posgrado SIP

(20090968).

CONTENIDO

Pág.

ÍNDICE DE FIGURAS I

ÍNDICE DE CUADROS II

RESUMEN IV

ABSTRACT V

1. INTRODUCCIÓN 1

2. ANTECEDENTES 3

2.1.Distribución del género Tagetes 3

2.2 Clasificación taxonómica y descripción del genero Tagetes 5

2.3.Caracteristicas biológicas de cada una de las especies 6

2.3.1. Tagetes filifolia Lag. 6

2.3.2. Tagetes foetidissima Hort. 7

2.3.3. Tagetes lucida Cav. 8

2.3.4. Tagetes coronopifolia Willd. 10

2.3.5. Tagetes erecta Linn. 11

2.4. Composición química del genero Tagetes 12

2.5. Actividad biológica 16

2.6. Gusano del corazón de la col (Copitarsia decolora Guenée) 20

2.7. Tizón sureño de las hortalizas (Sclerotium rolfsii Sacc.) 21

2.8. Moniliasis (Monilia fructicola Wint) 25

3. JUSTIFICACIÓN 27

4. OBJETIVOS 28

4.1. Objetivo general 28

4.2. Objetivos particulares 28

5. MATERIALES Y MÉTODOS 29

5.1. Material biológico vegetal 29

5.1.1 Origen y obtención del material vegetal 29

5.1.2. Obtención de los aceites esenciales y polvos 30

5.2. Organismos utilizados en los bioensayos 31

5.2.1. Copitarsia decolora 31

5.2.2. Sclerotium rolfsii 31

5.2.3. Monilia fructicola 32

5.3. Bioensayos 33

5.3.1. Copitarsia decolora 33

5.3.2. Sclerotium rolfsii 34

5.3.3 Monilia fructicola 35

5.4. Evaluación de la actividad biológica 37

5.4.1 Copitarsia decolora 37

5.4.1.1 Peso, mortalidad y duración de etapa larval 37

5.4.1.2 Peso mortalidad y duración de etapa pupal 37

5.4.1.3.Fecundidad y fertilidad de adultos 37

5.4.2. Sclerotium rolfsii 38

5.4.2.1. Crecimiento micelial 38

5.4.2.2. Producción de esclerocios 38

5.4.2.3. Viabilidad de esclerocios 38

5.4.3. Monilia fructicola 39

5.4.3.1 Crecimiento micelial 39

5.4.3.2 Esporulación 39

5.4.3.3 Germinación 39

5.5 Análisis estadístico 40

6. RESULTADOS 41

6.1. Copitarsia decolora 41

6.1.1. Peso, mortalidad y duración de etapa larval 41

6.1.2. Peso, mortalidad y duración de etapa pupal 43

6.1.3. Fecundidad y fertilidad de adultos 47

6.2. Sclerotium rolfsii 49

6.2.1. Crecimiento micelial 49

6.2.2. Producción de esclerocios 52

6.2.3. Viabilidad de esclerocios 54

6.3. Monilia fructicola 56

6.3.1. Crecimiento micelial 56

6.3.2. Esporulación 57

6.3.3. Germinación 58

7. DISCUSIÓN 60

7.1. Copitarsia decolora 60

7.2. Sclerotium rolfsii 62

7.3. Monilia fructicola 65

8. CONCLUSIONES 66

9. LITERATURA CITADA 68

I

ÍNDICE DE FIGURAS

Pág. Figura 1. Planta de anisillo (Tagetes filifolia). 6 Figura 2. Planta de cinco llagas (Tagetes foetidissima). 7 Figura 3. Planta de pericón (Tagetes lucida). 8

Figura 4. Planta de Santa María (Tagetes coronopifolia). 10

Figura 5. Planta de cempoalxóchitl (Tagetes erecta). 11

Figura 6. Esquema de un sistema de destilación por arrastre de vapor. 30

Figura 7. Curvas de ssupervivencia de larvas y pupas de C. decolora con los

tratamientos de aceites esenciales de Tagetes al 0.1%. 45

Figura 8. Curvas de ssupervivencia de larvas y pupas de C. decolora con los

tratamientos de aceites esenciales de Tagetes al 0.01%. 46

Figura 9. Supervivencia media de larvas de C. decolora con los tratamientos de aceites esenciales de Tagetes.

47

II

ÍNDICE DE CUADROS

Pág.

Cuadro 1. Distribución de especies de Tagetes en México. 4

Cuadro 2. Compuestos químicos con actividad fungicida, fungistática y nematicida en especies de Tagetes.

14

Cuadro 3. Origen del germoplasma de las especies de Tagetes.

29

Cuadro 4. Orígenes de los aislamientos de S. rolfsii. 32

Cuadro 5. Tratamientos con aceites esenciales incorporados a la dieta de C. decolora.

34

Cuadro 6. Tratamientos con aceites esenciales y extractos acuosos de Tagetes evaluados contra S. rolfsii.

35

Cuadro 7. Tratamientos con aceites esenciales y extractos acuosos de Tagetes

evaluados contra M. fructicola. 36

Cuadro 8. Efecto de los aceites esenciales (AE) de Tagetes a dos concentraciones, incorporados a la dieta, en el peso en la etapa larval de C. decolora.

41

Cuadro 9. Efecto de los aceites esenciales (AE) de Tagetes a dos concentraciones, incorporados a la dieta, en la duración de la etapa larval de C. decolora.

42

Cuadro 10. Efecto de los aceites esenciales (AE) de Tagetes a dos concentraciones,

incorporados a la dieta, en el peso en la etapa pupal de C. decolora.

43

Cuadro 11. Efecto de los aceites esenciales (AE) de Tagetes a dos concentraciones,

incorporados a la dieta, en la mortalidad en la etapa pupal de C. decolora 44

Cuadro 12. Efecto de los aceites esenciales (AE) de Tagetes a dos concentraciones, incorporados a la dieta, en la duración de la etapa pupal de C. decolora.

44

Cuadro 13. Efecto de los aceites esenciales de Tagetes incorporados a la dieta, en la fecundidad y fertilidad de adultos de C. decolora

48

Cuadro 14. Efecto de los aceites esenciales (AE) de Tagetes al 0.1%, sobre la tasa de crecimiento micelial (cm2/día) de S. rolfsii.

50

III

Cuadro 15. Porcentaje de reducción (RRT) de la tasa de crecimiento micelial de S.

rolfsii en los tratamientos con aceites esenciales de Tagetes respecto al tratamiento testigo.

50

Cuadro 16. Efecto de los extractos acuosos (EA) de Tagetes al 2 % sobre la tasa de crecimiento micelial (cm2/día) de S. rolfsii.

51

Cuadro 17. Porcentaje de reducción (RRT) de la tasa de crecimiento micelial de S. rolfsii en los tratamientos con extractos acuosos de Tagetes respecto al tratamiento testigo.

52

Cuadro 18. Efecto de los aceites esenciales (AE) de Tagetes al 0.1 % sobre la producción de esclerocios de S. rolfsii.

53

Cuadro 19. Efecto de los extractos acuosos (EA) de Tagetes al 2 % sobre la producción de esclerocios de S. rolfsii.

54

Cuadro 20. Efecto de los aceites esenciales (AE) de Tagetes al 0.1 % sobre el porcentaje de viabilidad de esclerocios de S. rolfsii.

55

Cuadro 21. Efecto de los aceites esenciales (AE) de Tagetes al 0.1 % sobre la tasa

de crecimiento micelial (cm2/día) de M. fructicola.

56

Cuadro 22. Efecto de los extractos acuosos de Tagetes al 2 % sobre la tasa de crecimiento micelial (cm2/día) de M. fructicola.

57

Cuadro 23. Efecto de los extractos acuosos de Tagetes al 2 % sobre la esporulación (esporas/ml) de M. fructicola.

57

Cuadro 24. Efecto de los extractos acuosos de Tagetes al 2 % sobre el porcentaje

de germinación de M. fructicola.

58

Cuadro 25. Resumen de los efectos observados de los aceites esenciales y

extractos acuosos de las especies de Tagetes sobre los organismos modelo.

59

IV

Resumen

México es centro de diversidad en especies de Tagetes, género de amplio espectro de

acción biológica, sobre bacterias, hongos, nemátodos e insectos, pero con información

limitada. El objetivo de este trabajo fue evaluar la actividad biológica de aceites esenciales

(AE) y extractos acuosos (EA) de cinco especies de Tagetes, sobre el insecto Copitarsia

decolora y los hongos Sclerotium rolfsii y Monilia fructicola. Para esto se incorporaron a la

dieta de C. decolora, concentraciones de 0.1 % y 0.01 % de los AE, se evalúo el peso,

duración y mortalidad del periodo larval y pupal, fecundidad y fertilidad de adultos, con T.

filifolia hubo efecto insecticida; con los demás AE, reducción del periodo pupal, y una

mortalidad del 50 % en etapa larval y pupal, efecto dependiente de la dosis., T. filifolia al

0.01 % presentó la menor fecundidad con 19.3 huevos por pareja y T. coronopifolia al 0.1

% registró la menor fertilidad con 78 % de eclosión. En M. fructicola y 10 aislamientos de

S. rolfsii se evaluaron AE al 0.1 % y EA al 2 %, incorporados al medio PDA. En S. rolfsii se

inhibió el crecimiento micelial en todos los aislamientos con AE de T. filifolia y EA de T.

lucida. Con AE de T. filifolia, T. foetidissima, T. coronopifolia, y T. erecta no se produjeron

esclerocios en cinco aislamientos. El EA de T. lucida inhibió la producción de esclerocios en

todos los aislamientos. EA de T. erecta estimuló la producción de esclerocios en cuatro

aislamientos. Se redujo la viabilidad de los esclerocios en seis aislamientos con los AE, los

EA no afectaron la viabilidad de esclerocios. En M. fructicola, el tratamiento con EA de T.

lucida inhibió el crecimiento micelial, con AE el efecto fue fungistático. Los AE de todas las

especies de Tagetes y los EA de T. foetidissima, T. lucida y T. erecta inhibieron la

esporulación (LSD, P≤ 0.05). EA de T. filifolia y T. coronopifolia estimularon la esporulación

y germinación de M. fructicola. Las especies más efectivas fueron T. filifolia que mostró

actividad insecticida y fungistática y T. lucida con actividad fungicida. La variabilidad en las

respuestas probablemente es debida a la diversidad en composición química entre los AE

y EA de las especies de Tagetes y a la diversidad genética y susceptibilidad de C. decolora,

S. rolfsii y M. fructicola.

V

Abstract

Mexico is center of diversity in species of Tagetes, genus of broad spectrum of biological

action on bacteria, fungi, nematodes and insects, but with limited information. The aim of

this study was to evaluate the biological activity of essential oils (EO) and aqueous extracts

(AE) of five species of Tagetes, on the insect Copitarsia decolora and fungus Sclerotium

rolfsii and Monilia fructicola. For this purpose, concentrations of 0.1% and 0.01% of the

EO were incorporated into diet of C. decolora, the weight was evaluate, duration and

mortality of larval and pupal period, fecundity and fertility of adult, whit the EO T. filifolia

at 0.1%, insecticidal effect caused were other EO it was recorded a reducing the pupal

period and a 50% mortality in larval and pupal stage, dose-dependent effect., T. filifolia

0.01% showed the lowest fertility with 19.3 eggs per couple and T. coronopifolia 0.1% had

the lowest fertility, with 78% hatching. In the fungus M. fructicola and 10 isolates of S.

rolfsii EO and AE were evaluated at 0.1% and 2% respectively, incorporated into PDA

medium, in S. rolfsii mycelial growth was inhibited in all isolates with EO of T. filifolia and

T. lucida AEs. With EO T. filifolia, T. foetidissima, T. coronopifolia, and T. erecta five isolates

not produced sclerotia. Treatment with T. lucida AEs inhibited the production of sclerotia

in all isolates; AE T. erecta stimulated the production of sclerotia of four isolates. It

reduced the viability of sclerotia in six isolates with EO treatments ; the AE treatments not

affect the viability of sclerotia. In M. fructicola, treatment with T. lucida AE inhibited

mycelial growth; with EO was fungistatic effect. The EO of all species of Tagetes and AE T.

foetidissima, T. lucida and T. erecta inhibited sporulation. AE T. filifolia and T. coronopifolia

stimulated sporulation and germination of M. fructicola. The five species of Tagetes the

most effective were T. filifolia showed insecticidal activity and fungistatic effect and T.

lucida with antifungal activity. The variability in responses is probably due to the diversity

in chemical composition between the EO and AE of Tagetes species and genetic diversity

and susceptibility of C. decolora, S. rolfsii and M. fructicola.

1

1. INTRODUCCIÓN

La investigación sobre métodos alternativos en el manejo de plagas y enfermedades se

incrementó en los últimos años, debido a los continuos problemas asociados con el uso de

productos convencionales (Choi et al. 2003) que incluyen el desarrollo de resistencia en los

organismos objetivo de control, generación de plagas secundarias, resurgencia de plagas

(Ortega, 2001), eliminación de fauna benéfica, y contaminación ambiental (Millán, 2008).

Esta problemática impulsa la generación de estrategias alternativas, como es el uso de plantas

con actividad biológica, que permiten proteger el cultivo y por ende obtener mayor

rendimiento y calidad en la producción sin poner en riesgo la salud del hombre y su entorno

(Rodríguez, 2000).

Las plantas resisten al ataque de patógenos mediante diferentes estrategias de defensa, que

pueden ser constitutivas (histológicas o químicas) o defensas inducidas por factores externos

(Verpoorte, 2000).

En general las propiedades biológicas de los metabolitos de defensa de las plantas no se

conocen en forma amplia y algunos pueden actuar de manera individual contra una o varias

especies de hongos y otros, como la alicina del ajo, pueden tener un amplio espectro de acción,

no sólo contra hongos fitopatógenos, zoopatógenos y patógenos de humanos sino también

contra bacterias, nemátodos e insectos (Isman, 2000).

La familia Asteraceae se encuentra ampliamente distribuida en el continente americano, y está

conformada por 18 tribus; en la tribu Tageteae se encuentra Tagetes, que es uno de los ocho

géneros que la integran (Heywood et al., 1977). El número de especies de Tagetes es de 55

2

(Turner, 1996) y México es un importante centro de diversidad, contando con 26 especies

nativas (Neher, 1966; Turner y Nesom, 1993; Turner, 1996).

La mayor parte de las especies son silvestres o crecen en ambientes ruderales, algunas se

cultivan y se usan como ornamentales, con fines ceremoniales y religiosos, para condimentar

bebidas, pan, licores, como forraje para ganado (Turner, 1996) y como insecticida (Cubillo et al.,

1999).

Sin embargo se cuenta con poca información sobre las especies de Tagetes abundantes en

México. Hacen falta estudios sistemáticos e integradores para conformar bancos de

germoplasma de estas especies, realizar la caracterización química, toxicológica y condición de

manejo agronómico, para su potencial producción en campo e industrialización que permita el

aprovechamiento de este recurso genético mexicano.

En este trabajo se evaluó la actividad biológica de cinco especies del género Tagetes usando

como modelos biológicos a Copitarsia decolora, un insecto generalista, a Sclerotium rolfsii

patógeno con amplio rango de hospederos y causante de enfermedades con origen en el suelo

y Monilia fructicola un hongo que principalmente ocasiona enfermedades postcosecha.

3

2. ANTECEDENTES

2.1. Distribución del género Tagetes

La aparición de la Familia Asteraceae (Compositae) en el Continente Americano hace 65

millones de años (Turner, 1977). México es considerado como centro de origen de numerosas

especies, géneros, subtribus y tribus (Turner y Nesom, 1993). El género Tagetes, de la subtribu

Tageteae, cuenta con cerca de 55 especies (Soule, 1993), en México está representado por 26

de ellas (Turner, 1996) constituyendo un importante centro de diversidad de dicho género.

Abarcan desde el paralelo 16 hasta el 32 N con la siguiente distribución (Cuadro 1). Las especies

mexicanas, de acuerdo con Turner (1996) son: T. eppaposa B. L. Turner, T. lacera Brandegee, T.

nelsonii Greenm, T. mulleri Blake, T. moorei H. Rob., T. micrantha Cav., T. filifolia Lag., T.

oaxacana B. L. Turner, T. foetidissima Hort., T. erecta Linn., T. lucida Cav., T. coronopifolia

Willd., T. subulata Cerv., T. lunulata Ortega, T. tenuifolia Cav., T. parryi A. Gray, T. pringlei S.

Wats., T. minuta Linn., T. triradiata Greenm., T. hartwegii Greenm., T. palmeri A. Gray, T.

stenophylla B. L. Rob., T. linifolia Seaton, T. terniflora H. B. & K., T. lemmonii A. Gray y T.

persicaefolius Benth.

4

Cuadro 1. Distribución de especies de Tagetes en México.

Región/Estados Especies

Norte Baja California T. filifolia (a), T. micrantha (a), T. subulata (a), T. lacera (p), T. lunulata (a) Sonora T. filifolia, T. lucida (p), T. micrantha, T. palmeri (p), T. lemmonii (p), T. subulata, T. erecta (a), T.

minuta (a) Chihuahua T. filifolia, T. lucida, T. micrantha, T. palmeri, T. pringlei (a), T. subulata Coahuila T. coronopifolia (a), T. lucida , T. micrantha Nuevo León T. lucida, T. mulleri (p), T. micrantha

Tamaulipas T. filifolia, T. lucida, T. foetidissima, T. erecta Sinaloa T. filifolia, T. lucida, T. palmeri, T. subulata, T. erecta Durango T. fil ifolia, T. micrantha, T. subulata, T. lucida, T. pringlei, T. lunulata, T. epapposa (a), T.

foetidissima (a), T. elongata (a), T. remotiflora (a), T. erecta

Zacatecas T. filifolia, T. micrantha, T. subulata, T. lucida Centro Sur San Luis Potosí T. erecta, T. lucida, T. micrantha, T. parryi, T. tenuifolia

Aguascalientes T. lucida, T. micrantha, T. lunulata, T. pringlei Guanajuato T. filifolia, T. lucida, T. lunulata, T. micrantha, T. tenuifolia, T. pringlei, T. remotiflora, T. subulata Nayarit T. erecta, T. fil ifolia, T. hartwegii, T. lucida, T. micrantha, T. subulata Jalisco T. erecta, T. filifolia, T. foetidissima, T. hartwegii, T. lucida, T. lunulata, T. micrantha, T.

persicaefolius, T. pringlei, T. stenophylla, T. subulata Colima T. filifolia, T. lucida, T. subulata, T. tenuifolia Michoacán T. erecta, T. filifolia, T. foetidissima, T. lucida, T. lunulata, T. micrantha, T. persicaefolius, T. pringlei,

T. stenophylla, T. subulata, T. tenuifolia, T. remotiflora, T. triradiata

Guerrero T. erecta, T. fil ifolia, T. foetidissima, T. lucida, T. stenophylla, T. subulata, Oaxaca T. erecta, T. fil ifolia, T. foetidissima, T. lucida, T. oaxacana, T. subulata, T. tenuifolia Veracruz T. coronopifolia, T. erecta, T. filifolia, T. foetidissima, T. lucida, T. micrantha, T. tenuifolia

Puebla T. coronopifolia, T. erecta, T. foetidissima. T. linifolia, T. lucida, T. micrantha, T. triradiata, T.

tenuifolia Tlaxcala T. coronopifolia, T. foetidissima, T. linifolia , T. lucida, T. micrantha, T. tenuifolia México T. coronopifolia, T. erecta, T. filifolia, T. foetidissima, T. lucida, T. lunulata, T. micrantha, T.

persicaefolius, T. pringlei, T. stenophylla, T. subulata, T. triradiata, T. tenuifolia Morelos T. coronopifolia, T. erecta, T. filifolia, T. foetidissima, T. lucida, T. micrantha, T. stenophylla, T.

subulata, T. triradiata, T. tenuifolia Hidalgo T. erecta, T. fil ifolia, T. foetidissima, T. lucida, T. lunulata, T. persicaefolius, T. tenuifolia

Querétaro T. erecta, T. filifolia, T. lucida, T. lunulata, T. micrantha, T. moorei (a-sp-p), T. tenuifolia, T. foetidissima, T pringlei, T. remotiflora

Sur-Sureste

Chiapas T. erecta, T. fil ifolia, T. foetidissima, T. lucida. T. nelsonii, T. subulata, T. tenuifolia, T. terniflora Yucatán T. erecta, T. tenuifolia Tabasco T. lucida

Fuente: Turner (1996), complementado por Villarreal (2003). (a) anuales, (sp) semiperenes, (p) perenes.

5

2.2 . Clasificación taxonómica y descripción del género Tagetes

Reino: Plantae

División: Magnoliophyta

Clase: Magnoliopsida

Orden: Asterales

Familia: Asteraceae

Tribu: Tageteae

Género: Tagetes

Plantas herbáceas anuales o perennes, aromáticas al estrujarse; con hojas todas opuestas por

lo común pinnadas, con numerosas glándulas oleíferas translúcidas; cabezuelas solitarias o más

o menos cimoso-corimbosas, involucro cilíndrico, fusiforme o angostamente campanulado, sus

brácteas de tamaño subigual, unidas entre sí hasta cerca del ápice y provistas de dos hilera s de

glándulas oleíferas; receptáculo plano o convexo, desnudo; flores liguladas generalmente

presentes, fértiles, sus corolas amarillas, anaranjadas, rojizas o blancas; flores hermafroditas,

corola con garganta infundibuliforme, anteras con las bases obtusas, ramas del estilo truncadas

y peniciliadas en el ápice con apéndices cónicos cortos; aquenios lineares o claviformes, vilano

de tres a 10 escamas desiguales lineares, a veces más o menos unidas entre sí (Calderón y

Rzedowski, 2001).

6

2.3. Características biológicas de cada una de las especies

2.3.1. Tagetes filifolia Lag.

Figura 1. Planta de anisillo (Tagetes filifolia).

Es una planta ruderal de lugares abiertos y perturbados en pastizales, bosque de pino encino y

bosque tropical caducifolio; prospera entre los 600 a 2400 msnm y desarrolla en los meses de

agosto a enero; su altura varía desde 10 hasta 40 cm (Turner, 1996; Villarreal, 2003). Los

nombres comunes con los que se conoce a esta especie son anisillo (Figura 1), hierba anís, anís

de campo, anís ujts, curucumin, flor de Santa María, limoncillo, putsuti (purépecha), putzuti, ita

kua mishi (mixteco) (SEMARNAT, 2000). Esta especie tiene aroma de anís y se utiliza para

disminuir el dolor de estómago y cólicos menstruales (Neher, 1966; Villareal, 2003), como

7

forraje para ganado (Turner, 1996) y como insecticida (Cubillo et al., 1999); saborizante

anisado para atole y de cañas de maíz para masticar, preparación de curados de pulque y

elaboración de mezcal y de licor (con alcohol de caña) de anís, y como esencia de anís para

saborizar bebidas (Serrato y Barajas, 2006); da sabor a elotes y calabazas cocidas y a tamales, y

cuando se quema la planta en fresco, el humo ahuyenta moscos (Serrato et al., 2007).

2.3.2 Tagetes foetidissima Hort.

Figura 2. Planta de cinco llagas (Tagetes foetidissima).

Planta herbácea anual, erecta, sin pelos, de hasta 1 m de alto (Figura 2), muy aromática y con

un olor desagradable al estrujarse, creciendo como vegetación secundaria en bosque de pino,

8

pino-encino, pino-oyamel; se le encuentra a 1800-2800 msnm (Turner, 1996), 2000-2900 msnm

(Villarreal, 2003), 1500-3100 msnm (Neher, 1966). Se le conoce como tiringuin, cinco real,

cempoasúchil, cinco llagas (Villarreal, 2003). En algunos estados del norte se usa para lavar las

cobijas y sábanas como medida para eliminar pulgas y piojos, además de aromatizar la tela (en

Zacatecas) y como té (Altos de Jalisco). Se reporta como maleza en maíz (Villaseñor y Espinosa,

1998), como medicinal y forrajero.

2.3.3. Tagetes lucida Cav.

Figura 3. Planta de pericón (Tagetes lucida)

Planta ruderal en áreas de montaña (Figura 3) y en terrenos agrícolas, crece como vegetación

secundaria en bosques de pino, pino-encino y tropicales caducifolios (Neher, 1966; Turner,

9

1996; Villarreal, 2003); es erecta, herbácea perenne, altura de 30 hasta 100 cm, hojas simples y

sésiles, cabezuelas en corimbos, flores liguladas con corolas de amarillo claro o amarillo

anaranjado, olor dulce de aroma anisado al estrujarse (Neher, 1966; Turner, 1996; Villarreal,

2003; SEMARNAT, 2006). Prospera en altitudes de 800 a 2700 msnm (Turner, 1996; Villarreal,

2003), aunque Neher (1966) señala el intervalo de 1500 hasta 4100 msnm, considerando desde

México hasta Centro América. Se le conoce como pericón, aunque tiene otros nombres: flor de

Santa María, yerbanís, anisillo, coronilla, hierba de las nubes, falso hipericon, hierba añil,

periquilla, yita pericoó, cuchrucumin, curucumis, curucumin, tzitziqui, naná uarhi (purépecha),

guia laga-zaa (zapoteco), baschigóko (tarahumara), cuauhiyautli-zacayahucti-yiauhtli (náhuatl)

(Villarreal, 2003; SEMARNAT, 2006). Es pigmentante amarillo para teñir telas; saborizante

anisado en bebidas y licores; condimento de elotes y chayotes hervidos; té; sahumar en casos

de sustos y espanto; ramillete ceremonial y alimento forrajero para ganado y aves de traspatio.

Como medicinal se emplea en alrededor de 25 padecimientos, utilizado como humo,

cataplasma y té (SEMARNAT, 2006); la medicina científica ha validado la efectividad de T. lucida

en la cura de diarrea y otras enfermedades gastrointestinales y verificado su actividad

antifúngica y antibacteriana (Céspedes et al., 2006). También se ha demostrado efecto

nematicida (Siddiqui y Alam, 1988).

10

2.3.4. Tagetes coronopifolia Willd.

Figura 4. Planta de santa maría (Tagetes coronopifolia)

Planta herbácea anual, erecta, glabra, muy aromática al estrujarse (Figura 4), de hasta 50 cm

de altura (Neher, 1966; Turner, 1996), crece en condiciones de disturbio (Villaseñor y Espinoza

1998), fuerte aroma al estrujar casi repugnante. Se le ubica a 2300-2800 msnm (Turner, 1996),

2400-3100 m (Neher, 1966); principalmente en la laderas altas de los picos volcánicos de centro

sur de México, bosques de Quercus, Juniperus y pastizales (Turner, 1996). Se utiliza en infusión

contra la tos y el dolor de pecho (Rzedowski y Rzedowski, 2001).

11

2.3.5. Tagetes erecta Linn.

Figura 5. Planta de cempoalxóchitl (Tagetes erecta).

Planta erecta anual de hasta 1.8 m de alto, muy aromática al estrujarse (Figura 5). Se le

conoce como flor de muerto, apátsicua (lengua tarasca), cempoalxóchitl (lengua náhuatl),

guie'biguá, guie'coba, picoa, quiepi-goa (lengua zapoteca), kalhpu'xa'm (lengua totonaca),

ita-cuaan (lengua mixteca), jondri (lengua otomí), musá, musajoyó (lengua zoque), tiringuini

(lengua tarasca), cempaxúchil y xumpatsnchitl (Martínez, 1979). Distribuida en vegetación

perturbada, ruderal y arvense, se registra como maleza en maíz (Villaseñor y Espinosa,

1998). Se cultiva ampliamente para fines ornamentales (especialmente en ceremonias

religiosas), como medicinal y como complemento del alimento de aves de corral o como

12

tintórea (Rzedowski y Rzedowski, 2001), no solo en México, sino a nivel mundial. Vasudevan

et al. (1997), la reportan con propiedades nematicidas, con actividad antifúngica, mientras

que Hilje y Mora (2007), mencionan un efecto insecticida e insectistático.

2.4. Composición química del género Tagetes

La composición química del género Tagetes varía entre las especies, Marotti et al. (2004),

mencionan que la diversidad química está determinada genéticamente y estrictamente

relacionada a las especies.

El contenido y cantidad de compuestos es afectado por factores como el hábitat de la planta

(Karousou et al., 2005), la etapa fenológica, las diferentes partes de las que se extrae, la

composición del suelo y la fertilización mineral (Macias y Galindo, 2001), por lo que es común

encontrar diferencias en el contenido de compuestos, aún entre plantas de la misma especie.

Hay algunas especies de Tagetes que comparten compuestos químicos, mientras que otros

compuestos solo se encuentran en una sola especie (Cuadro 2).

Algunos de los compuestos encontrados en las especies de Tagetes pertenecen a los grupos de

alcoholes, éteres, aldehídos, acetonas, ésteres, carotenoides, flavonoides, tiofenos, terpenos y

cumarinas (Zygadlo et al., 1993; Marotti et al., 2004; Kaul et al., 2005; Krishna et al., 2004). Las

propiedades biológicas de estas plantas afectan a diversos organismos, desde bacterias, virus,

hongos, nematodos, ácaros e insectos e inclusive otras especies de plantas (Serrato y Quijano,

1993).

Rai y Mares (2003), estudiando la presencia de aceites esenciales en 295 familias de plantas

reportaron que las lactonas sesquiterpénicas son características de la familia Asteraceae.

13

En la literatura se reportan que hay diferencias en la composición del aceite esencial de T.

filifolia: 1) el número de compuestos varía de 33 (Vila et al., 2000) a 57 (Feo et al., 1998); 2) se

reportan cis-anetol (Feo et al., 1998) y trans-anetol (Zygadlo et al., 1993; Vila et al., 2000); 3) la

abundancia de los compuestos mayoritarios alilanisol y anetol es variable, por ejemplo, Vila et

al. (2000) reportan 61.2 % de alilanisol y 33.1 % de trans-anetol, mientras que Serrato y Barajas

(2005), registran 21 % de alilanisol y 79 % de trans-anetol y por su parte, Feo et al. (1998)

refieren 13.7 % de alilanisol y 68.3 % de cis-anetol. Al parecer, la variabilidad ambiental tiene

que ver con la composición del aceite; al respecto, Serrato et al. (2008) encontraron que de 78

colectas provenientes de la Región Centro Sur de México: 2.5 % de esas colectas contenían

anetol, 10.2 % con alilanisol y 87.3 % de colectas con mezcla de esos compuestos . En el Cuadro

2 se enlistan algunos compuestos presentes en especies del género Tagetes y su actividad

biológica.

14

Cuadro 2. Compuestos químicos con actividad fungicida, fungistática y nematicida en especies

de Tagetes.

Fuente: Duke (2009).

Actividad /

especie

T. lucida T. erecta T. filifolia T. minuta T. patula

Efecto fungicida

1,8-Cineol Anetol Anisaldehído Cariofileno Chavicol Herniarin

Linalol Metil-eugenol

Mirceno Tiofeno

1,8-Cineol α-Tertienilo Kaempferol

α-Tertienil Anetol Anisaldehido Citral

1,8-Cineol Ácido acético α-Tertienil β-Felandreno Bornéol Cariofileno

Ocimeno Citral

Geraniol Cimeno

Quercetina 4-Terpinenol Terpinoleno Tiofeno Timol

Ácido cafeico Kaempferol Ácido Cumárico Quercetin

Efecto

fungistático

Limoneno

Metil-eugenol

Limoneno

Carvon

Acido fórmico Limoneno

Efecto

nematicida

1,8-Cineol

Chavicol Limoneno

Linalol Metil-eugenol

Metil-isoeugenol Tiofeno

1,8-Cineol

5-3-1 Butenil

2-2 Bitienil α-Tertienilo

α-Tertienil

Citral Limoneno

1,8-Cineol

5-3-1 Butenil 2-2`Bitienil

α-Terpineol α-Tertienilo

Borneol Carvon Citral

Geraniol Limoneno

Acido palmítico

4-Terpinenol Tiofeno

Timol

15

Los principales compuestos del aceite esencial de T. foetidissima son: citronelol y alcohol

bencílico. Estos constituyentes varían según el color púrpura o verde que presentan estas

plantas: citronelol 8 y 15 %, y alcohol benzílico 11 y 15 %, respectivamente (Pérez-Amador et

al., 1994).

Con respecto a la composición química de T. lucida, se ha registrado la presencia de cumarinas

(Céspedes et al., 2006), flavonoides (Abdala, 1999; Céspedes et al., 2006) y aceites esenciales

(Anónimo, 1938; Guzmán y Manjarréz, 1962). El contenido del aceite esencial suele presentar

metil chavicol en alta concentración (Anónimo, 1938; Cicció, 2004), aunque otros compuestos

pueden aparecer como metil eugenol y anetol (Guzmán y Manjarréz, 1962; Bichi et al., 1997). El

origen geográfico de T. lucida parece relacionarse con la variabilidad del contenido del aceite

esencial. Por ejemplo, materiales de Costa Rica contienen 30 componentes químicos con alto

porcentaje de metil chavicol (95 – 97 %); material de Guatemala presenta 53 compuestos, los

abundantes son metil chavicol (38.9 %), metil eugenol (24.3 %) y anetol (23.8 %); en materiales

mexicanos, metil eugenol (80%) y metil chavicol (12 %) son los compuestos mayoritarios. La

variabilidad del contenido del aceite esencial de poblaciones mexicanas de T. lucida no se ha

estudiado por completo. Con estos antecedentes Serrato et al. (2007) presentan resultados en

germoplasma colectado en Oaxaca, en la Región Centro Sur de México, encontrando que la

presencia y proporción de moléculas en el aceite esencial de T. lucida es variable en

compuestos principales.

De T. coronopifolia se conoce su contenido de flavonoides (quercetagetina 7-glucósido,

isorhamnetina, quercetina, quercetina 3-glucósido, quercetina 3-diglucósido y miricetina 7-

glucósido) tomando en cuenta extracto de planta completa en fresco (Abdala, 1999).

16

Singh et al. (2003), de T. erecta reportan la presencia de 26 componentes mayoritarios en el

aceite esencial, donde la mayor proporción la ocupa el (Z)-β-ocimeno (42.2 %) y

dihidrotagetona (14%), también mencionan que el aceite esencial mostró actividad antifúngica

e insecticida y que el efecto se incrementa al aumentar la concentración evaluada.

Hethelyi et al. (1998), reportan limoneno, α-terpinoleno, piperitona y cariofileno en el aceite

esencial de T. erecta y Fengshou et al. (1999) encontraron trans-cariofileno, β -cubebeno,

limoneno, y α-terpinoleno con actividad larvicida contra Anopheles stephensi, Culex

quinquefasciatus y Aedes aegypti.

Marles et al. (1992), reportan que T. erecta posee en la raíz, compuestos sulfurosos

denominados tiofenos y mencionan que el α-tertienil es el compuesto con mayor actividad

biológica, primordialmente contra nemátodos.

2.5. Actividad biológica

Cubillo et al., (1999), reportan que con extracto etanólico obtenido de la raíz de T. filifolia,

aplicado a una concentración de 100 ppm contra mosquita blanca (Bemisia tabaci) en el cultivo

de jitomate bajo invernadero, inhibe la oviposición al 60 %, es repelente (55 %) y es tóxica (49

%) contra adultos. Serrato y Quijano (2003) observaron repelencia del aceite esencial de T.

filifolia, obtenido por arrastre de vapor, contra B. tabaci y Trialeurodes vaporariorum,

registrando una concentración de 7.18 mg/mL, se obtiene una repelencia al 50 % (CR 50).

Camarillo et al. (2007) señalan que el anetol sintético, el aceite esencial de T. filifolia, la fracción

turbia de la destilación y extractos acuosos de la planta utilizados al 1 y 10 % causan toxicidad

diferencial en los adultos de mosca blanca; los extractos acuosos y turbio fueron menos tóxicos

17

que el aceite o el anetol. Entre el anetol y aceites extraídos de diferentes partes de la planta no

hay diferencias al aplicarlos al 10 %, pero al 1 % es mejor anetol que los aceites esenciales. En

cuanto a oviposición, el aceite obtenido de hoja y de flores, aplicado al 10 % tiene el mejor

efecto, pero al 1 % de la fracción turbia floral es más activo. Los aceites fueron más efectivos al

inhibir casi en su totalidad la oviposición. Serrato et al. (2004) refieren que en general

concentraciones menores de 5000 ppm, no causan fitotoxicidad.

Por otra parte Zygadlo et al. (1994), reportan inhibición en el crecimiento de Sclerotium

cepivorum, Colletotrichum coccodes y Alternaria solani a concentraciones de 0.2, 0.3 y 0.5 %, de

aceite esencial de T. filifolia.

Grainge y Ahmed (1988), reportan que los extractos acuosos y polvos de hojas , flores y raíz de

T. erecta asperjados tienen efecto insecticida contra Aphis craccivora, Dysdercus singulatus,

Musca domestica, Nephotettix virescens, Ostrinia furnacalis y Plutella xylostella.

Tagetes patula tiene efectos sobre Aphis creacivora, Epilachna varivestis, Musca domestica,

Nephotettix virescens, Nilaparvata lugens, Ostrinia furnacalis, Pieris rapae y Plutella xylostella.

Extractos etanólicos, acuosos y de acetato de etilo, polvos y aceites de tallos, hojas y flores de

T. minuta actúan sobre Aedes aegypti, Ceratitis capitata, Dacus cucurbitae, Dacus dorsalis,

Musca domestica, Oncopeltus fasciatus y Tribolium castaneum.

Perich et al. (1994), evaluaron extractos de diferentes partes y especies de Tagetes patula en

larvas y adultos de Anopheles stephensi, los autores observaron que los adultos mostraron

síntomas típicos de envenenamiento en el sistema nervioso, ya que el mosquito expuesto

evidencía excitación inicial, seguida por parálisis y finalmente la muerte. Mencionan que los

síntomas son similares a los efectos provocados por las piretrinas, pero se sabe que los aceites

18

esenciales de Tagetes no contienen moléculas de piretrinas, aunque sí moléculas semejantes

como los ésteres monoterpenoides (tiofenos), que posiblemente fueron los causantes de este

efecto.

En cuanto a T. lucida, al aplicar aceite esencial a plantas de crisantemo infestadas de araña roja

(Tetranychus urticae) causó un 70 % de mortalidad a una concentración de 0.1 %, con una CL50

de 0.016 mg/ml (Camarillo et al. 2008).

Céspedes et al. (2006), reportan que T. lucida presenta actividad antibacterial contra

Escherichia coli, Enterobacter aerogenes, E. agglomerans, Proteus mirabilis, Klebsiella

pneumoniae, Salmonella typhi, Salmonella spp., Shigella spp., S. boydii, Yersinia enterocholitica,

Vibrio cholerae, Bacillus subtilis, Sarcina lutea, Staphylococcus aureus y S. epidermidis y

actividad antifúngica sobre Aspergillus niger, Fusarium moniliforme, F. sporotrichum,

Rhizoctonia solani, Trichophyton mentagrophytes, A. niger, y Penicillium notatum.

Abad et al. (1999), así como Siddiqui y Alam (1988), reportan actividad antibacteriana,

antifúngica, antiinflamatoria, antiviral, antioxidante y nematicida de T. lucida.

Grainge y Ahmed (1988), reportan que los extractos acuosos y polvos de hojas, flores y raíz de

T. erecta asperjados tienen efecto fungicida contra Drechslera oryzae, Pyricularia oryzae y

Uromyces phaseoli.

Rai y Mares (2003), reportan que el aceite esencial de las hojas de T. erecta inhibió el

crecimiento micelial de Pythium aphynidermatatum y A. niger; además, extractos de la planta

entera, hojas y flores presentaron 48, 48 y 52 % de inhibición del crecimiento de F. oxysporum y

de 37, 31 y 42 % de inhibición para Trichophytom mentagrophytes con planta entera, hojas y

flores, respectivamente.

19

En otro trabajo, Pawar y Thaker (2007), evaluaron la actividad antifúngica de 75 aceites

esenciales, entre ellos el de T. erecta, a una concentración de 0.5 µl/ml sobre el crecimiento de

F. oxysporum f. sp. cicer y A. porri, el aceite esencial no tuvo efecto en la inhibición del

crecimiento sobre A. porri, mientras que para F. oxysporum el efecto fue muy pobre con solo el

12 % de inhibición.

Zavaleta-Mejía y Gómez, 1995., reportan que T. erecta cultivada de manera intercalada con

jitomate, reduce las poblaciones de algunas plagas como áfidos, mosca blanca, nemátodos

agalladores y enfermedades foliares como A. solani, al respecto, Zavaleta-Mejía et al., 2003

mencionan que el efecto sobre A. solani fue alelopático ya que reduce la germinación,

desarrollo y diseminación de conidios.

Especies del género Tagetes pueden suprimir el desarrollo de hasta 14 géneros de nemátodos

fitoparásitos. T. erecta var ‘Cracker Jack y T. patula var. Single Gold suprimen el desarrollo de

los nematodos noduladores Meloidogyne arenaria, M. incognita, M. javanica, y M. hapla.,

mientras que T. patula var Boy-O-Boy inhibe a Rotylenchulus renifformis, Pratylenchus

penetrans y P. pratensis. T. erecta disminuye las poblaciones del nemátodo barrenador del

platano Radopholus similis, y de Helicotylenchus multicinctus y Hoplolaimus indicus (Koon-Hui

et al. 2007).

Marles et al. (1992), reportan actividad nematicida, insecticida y fungicida de T. erecta y

atribuyen esta actividad biológica a la presencia de tiofenos en los tejidos de la planta.

Respecto a las especies T. foetidissima y T. coronopifolia no hay registros en la literatura sobre

sus propiedades biológicas.

20

2.6. Gusano del corazón de la col (Copitarsia decolora Guenée)

Es un insecto que pertenece a la familia Noctuidae, polífago que está presente desde México

hasta la Patagonia y es una plaga importante de diversas plantas cultivadas como col (Brassica

oleracea) y otras cruciferas, huauzontle (Chenopodium nuttalliae), cilantro (Coriandrum

sativum), papa (Solanum tuberosum), alfalfa (Medicago sativa), chícharo (Pisum sativum), vid

(Vitis vinifer) y plantas ornamentales (Angulo y Weigert, 1975; Gutiérrez y MacGregor, 1983;

Bautista, 1992). Esta especie también es relevante por las barreras fitosanitarias ligadas a ella ,

debido a que uno de los principales mercados de los productos agrícolas mexicanos es el de

Estados Unidos de Norteamérica, donde no está presente, y se mantiene cuarentenada, por lo

que hay obstáculos para la comercialización de plantas hospederas de dicha especie (USDA,

2007).

Es de hábito nocturno, se alimenta y copula por la noche, el daño de mayor importancia es

provocado por la larva. Al alimentarse, una sola larva puede destruir una planta (Acatitla et al.

2003).

El manejo de esta plaga se realiza mediante la aplicación de químicos generalmente en la etapa

larval, es decir cuando la plaga ya está presente en el cultivo, principalmente, con productos

organofosforados, piretroides y carbamatos, solos o en mezclas (Pérez et al. 2009).

En cuanto al control biológico se tienen registros del uso de parasitoides del género

Trichogramma, de entomopatógenos como Beauveria y Metarhizium y el efecto de Bacillus

thuringiensis (Fuentes y Gómez 2003); así como el uso de semioquímicos como las feromonas

sexuales para el monitoreo y control de esta plaga (Castrejón et al. 2000).

21

2.7. Tizón sureño de las hortalizas (Sclerotium rolfsii Sacc)

Es esencialmente un patógeno del suelo; omnívoro que causa enfermedad en un amplio

intervalo de hospederos, incluyendo cultivos básicos, hortalizas, frutales, malezas y plantas

forestales. Esta distribuido en todo el mundo principalmente en regiones tropicales y

subtropicales, desde el sur de Estados Unidos hasta Sudamérica, en África, Asia, Australia y

parte de Europa (Aycock, 1996), en Estados Unidos se han reportado alrededor de 500

hospederos, entre ellas a T. erecta (Farr et al., 1989), en Nueva Zelanda solo 44 plantas

hospederas (Broadhurst 1995), en México se ha reportado como patógeno en arroz, papaya,

cacahuate, chile, alfalfa, cebolla y jitomate ( García-Álvarez, 1976; Saldaña et al. 1985, López y

Fucikovsky 1990; Hernández-Hernández et al., 1991; López-Salinas et al. 2002, Montes-Belmont

et al., 2003)

En suelo se desarrolla cerca o sobre la superficie del mismo y usualmente ataca el cuello de la

raíz de la planta. En la zona afectada se produce un micelio blanco algodonoso sobre el que se

forman numerosos esclerocios, al principio blancos y luego de color marrón claro, de 1-2 mm

de diámetro, que son signos de diagnósticos de la enfermedad (Larez et al., 1996).

Las infecciones primarias de S. rolfsii ocurren en la superficie del suelo donde germinan los

esclerocios y el crecimiento micelial es mayor donde los esclerocios se alimentan de materia

orgánica de raíces infectadas, tiene habilidad para colonizar y crecimiento eficaz en sustratos

orgánicos y producción de esclerocios que pueden persistir en los suelos por varios años (Punja,

1996).

22

El hongo es diseminado a través de prácticas culturales como son el arado, barbecho de s uelo

contaminado, trasplante de plántulas contaminadas, agua de irrigación, el viento y por semillas

vegetativas (Jenkins y Averre, 1986).

Dentro de las prácticas culturales que se recomiendan para el manejo de S. rolfsii está el arado

profundo, en los cultivos anuales la rotación de cultivos ayuda a disminuir los daños por la

enfermedad. Otro método que se recomienda es la adición de cal al suelo para subir el pH a 6.5

y así evitar el rápido desarrollo del hongo (Jenkins y Averre, 1986).

Existen enemigos naturales los cuales tienen un papel importante en el control biológico bajo

condiciones naturales o en forma inducida, entre los microorganismos se encuentran

Trichoderma harzianum, T. viridae, Bacillus subtilis, Penicillium spp. y Gliocladium virens. Estos

microorganismos colonizan las hifas de S. rolfsii y las va destruyendo hasta matar el hongo

(Morton y Stroube, 1985).

Hoynes et al. (1999), reportan un control efectivo de S. rolfsii en el cultivo de frijol ejotero al

combinar la fertilización nitrogenada, con la aplicación del fungicida metam sodio (isotiocianato

de metilo), Trichoderma hamatum y T. viride.

Se reporta una reducción en la infestación de suelos por sobre S. rolfsii a los que se les aplicó

una combinación del fungicida difenoconazol con T. harzianum (Cilliers et al. 2003). Los

fungicidas del suelo han sido usados por largo tiempo en el control de S. rolfsii. Hagan y Olive,

(1999) mencionan que en el cultivo de cacahuate se ha logrado buen control de S. rolfsii con

cloratalonil, tebuconazole y azoxystrobin.

23

Grainge y Ahmed (1988) reportan plantas con propiedades antifúngicas en el control de S.

rolfsii las cuales son Azadirachta indica, Curcuma domestica, C. zeodoaria, Cymbopogon sp,

Erigeron linifolius y Lepidium virginicum.

Saxena y Mathela (1995), detectaron 2 compuestos con actividad antifúngica acetato de

iridodial-β-monoenol y actidina, los cuales fueron aislados de Nepeta leucophyla y N. clarkey

mostrando actividad fungistática contra S. rolfsii.

Una alternativa de control para el tizón sureño ha sido la aplicación de extractos de origen

natural. Se conocen algunas propiedades antifúngicas que tienen ciertas plantas como son

Parthenium hysterophorus, Lepidium virginicum (L.), Cymbopogon sp., Azadirachta indica

(Neem) y Zingiber officinale contra S. rolfsii aislado de cacahuate (Grainge y Ahmed, 1988).

Extractos acuosos de alfalfa, pimienta y epazote así como combinaciones entre ellas, suprimen

la germinación de esclerocios de S. rolfsii en suelo en cultivo de cebolla (González, 2004).

Las investigaciones del efecto de extractos vegetales en el control de S. rolfsii muestran que el

efecto biológico sobre el hongo es fungistático como lo reportan Gurrola et al, (1996) evaluaron

la actividad biológica de extractos metanólicos de Quercus grises (encino), Aretostaphylos

pungens (pingüica) y Pelargonium sp. (geranio), resultados que concuerdan con Vázquez et al,

(1996) que realizaron estudios sobre extractos metanólicos y hexánicos de Malus silvestris

(perón) y de semilla de Luffa operculata (estropajo).

Flores-Moctezuma et al., (2006), reportan a la especie T. erecta como resistente al ataque de S.

rolfsii en pruebas de patogenicidad con 18 aislamientos de S. rolfsii provenientes de distintos

lugares de México. Al respecto Montes-Belmont et al., (2006 a), evaluaron el efecto de 15

extractos vegetales, entre ellos T. erecta, sobre el crecimiento micelial y producción de

24

esclerocios de S. rolfsii mencionan que T. erecta inhibió parcialmente el crecimiento micelial y

estimuló la producción de esclerocios de S. rolfsii.

En otro trabajo Montes-Belmont et al., (2006 b), evaluaron el efecto de los metabolitos

eugenol, timol y citroneol sobre el crecimiento micelial y germinación de esclerocios en 20

aislamientos de S. rolfsii, mencionan que con eugenol se presentó una mayor variabilidad en las

respuestas desde aislamientos altamente resistentes a altamente susceptibles.

Montes-Belmont y Flores-Moctezuma (2007 a), evaluaron el efecto de 11 metabolitos sobre el

crecimiento de 20 aislamientos de S. rolfsii, seis de esos metabolitos se han reportado como

constituyentes de especies de Tagetes (Cuadro 2), con actividad fungicida, encontraron que

geraniol, eugenol y timol son eficientes a concentraciones de 0.05 %, mientras que borneol y

linalol lo fueron a 0.1 % y 5 % respectivamente. Montes-Belmont y Flores-Moctezuma (2007 b),

al evaluar la combinación de 10 metabolitos sobre el crecimiento de 10 aislamientos de S.

rolfsii, encontraron que la mejor combinación fue la de geraniol-eugenol, ya que inhibió

completamente el crecimiento micelial. Esta misma combinación de metabolitos geraniol-

eugenol, en un trabajo posterior de Montes-Belmont y Flores-Moctezuma (2008), donde

evaluaron el efecto sobre la producción de esclerocios y el desarrollo plántulas de jitomate

resultó la más destacada, al registrar el menor porcentaje de plantas muertas, mayor peso seco

de las plantas y mayor altura de la planta, y menor cantidad de esclerocios.

25

2.8. Moniliasis (Monilia fructicola Wint).

La moniliasis o momificado de los frutos producida por M. fructicola que también se le conoce

como Sclerotinia fructicola y Monilinia fructicola, ocasiona importantes pérdidas de producción

en especies de rosáceas Prunus spp., manzano (Pyrus malus) y peral (Pyrus communis). Las

esporas (conidias) se producen bajo condiciones húmedas en la primavera, que infectan frutos

que usualmente se momifican y se convierten en fuente de inóculo para posteriores

infecciones, así como ramas, yemas florales y cancros sobre ramas, si la infección ocurre

próxima a la cosecha la enfermedad se puede desarrollar en post-cosecha (CESAVEP, 2006).

El inóculo puede ser transportado en material de siembra, especialmente en plantas con raíces,

en plantas vivas, frutos frescos; afecta la etapa vegetativa del cultivo, fructificación y post-

cosecha, dañando tallos, flores y frutos. Los frutos presentan una pudrición suave y color café

con esporas color plomo, las flores se vuelven color café y se marchitan, en el tallo se forman

zonas de color café llamados cancros, frecuentemente con goma sobre la superficie de éstos

(CESAVEP, 2006).

Para el manejo de la enfermedad de han utilizado métodos químicos, biológicos y culturales. En

el caso de los químicos el benomil, metil- tiofanato, vinclozolin, iprodione, triforine y bitertanol

son eficaces en el manejo de moniliasis. Sin embargo las constantes aplicaciones han inducido

resistencia al fungicida. Se han reportado cepas resistentes a benzimidazoles y dicarboximidas

(CESAVEP, 2006).

En muchos países, para los frutos de hueso, los fungicidas son autorizados para aplicarse antes

de la cosecha, y en postcosecha preferiblemente con otro fungicida, los métodos alternativos

incluyen el uso de Bacillus subtilis, que ha demostrado ser tan eficaz como benomil, en el

26

manejo post-cosecha de M. fructicola. Otros métodos son la irradiación con luz ultravioleta,

tratamientos con agua caliente y fumigación con ácidos como el acético y propiónico (CESAVEP,

2006).

Teodorescu et al. (2009), reportan el efecto fungistático de extractos de hojas y flores de T.

patula sobre Monilia spp.

El extracto crudo de Calia secundiflora tiene actividad fungicida y el efecto es atribuido a los

alcaloides presentes en la semilla, que contiene grandes cantidades de lupanina y espartaina

(Pérez-Laínez et al. 2008).

Munain et al. (2008), reportan la actividad antifúngica contra Monilia spp., de compuestos

triterpénicos aislados de Psolus patagonicus conocido como pepino de mar.

Bengtsson et al. (2007), mencionan que el tratamiento con extractos de las especies de Yucca

schidigera y Y filamentosa son efectivos para la prevención y tratamiento de las enfermedades

causadas por M. fructigena y M. laxa en especies de rosaseas.

Lara-Cambil y García-Pareja (2006), reportan que extractos de plantas del género Allium inhiben

el crecimiento de Monilia spp y atribuyen el efecto antifúngico a los tiosulfanatos, sustancias

que se encuentran en las especies de Allium.

Lamery, (2005), evaluó el efecto del aceite de soya y menciona que es efectivo en el

tratamiento y prevención de enfermedades causadas por especies de Monilia.

27

3. JUSTIFICACIÓN

La demanda de la sociedad para consumir alimentos vegetales sin residuos, que principalmente

provienen de la aplicación de insecticidas y fungicidas sintéticos, justifica la búsqueda de

fuentes naturales de plaguicidas que sean estables y altamente biodegradables con efectos

biológicos en contra de insectos, hongos, nemátodos, virus y bacterias. La enorme riqueza de

los recursos genéticos de Tagetes en México, tanto silvestres como domesticados, y las

posibilidades para su aprovechamiento es un estímulo para la real ización de investigaciones

encaminadas a buscar alternativas al uso de productos sintéticos, por lo que en este trabajo se

evaluó la actividad biológica de cinco especies del género Tagetes en tres modelos biológicos

un insecto generalista, Copitarsia decolora, un patógeno con amplio rango de hospederos

Sclerotium rolfsii y causante de enfermedades con origen en el suelo y Monilia fructicola

patógeno que principalmente ocasiona enfermedades en postcosecha.

28

4. OBJETIVOS

4.3. Objetivo general

Evaluar la actividad biológica de aceites esenciales y extractos acuosos de las especies Tagetes

filifolia, T. foetidissima, T. lucida, T. coronopifolia y T. erecta en los modelos de estudio,

Copitarsia decolora, Sclerotium rolfsii y Monilia fructicola.

4.4. Objetivos particulares

a) Evaluar la actividad biológica de los aceites esenciales de las cinco especies de Tagetes,

sobre el desarrollo, fecundidad y fertilidad de C. decolora.

b) Evaluar la actividad biológica de aceites esenciales y extractos acuosos de cinco espec ies

de Tagetes sobre el crecimiento micelial, producción y viabilidad de esclerocios de S.

rolfsii.

c) Evaluar la actividad biológica de aceites esenciales y extractos acuosos de cinco especies

de Tagetes sobre el crecimiento micelial, esporulación y germinación de M. fructicola.

29

5. MATERIALES Y MÉTODOS

La investigación se realizó en el Departamento de Interacciones Planta-Insecto del Centro de

Desarrollo de Productos Bióticos del Instituto Politécnico Nacional (CeProBi -IPN), que se

encuentra ubicado en carretera Yautepec-Jojutla Km. 8.5, San Isidro, Yautepec, Morelos,

México.

5.1. Material biológico vegetal

5.1.1. Origen y obtención del material vegetal

Las plantas de las cinco especies de Tagetes se cultivaron en el campo agrícola experimental de

la Universidad Autónoma Chapingo (UACh), en Texcoco Estado de México y fueron sometidas a

manejo agronómico, sin aplicación de herbicidas, insecticidas y fungicidas, ni fertilización

mineral. En el Cuadro 3 se presentan los orígenes de las colectas, los materiales provienen del

banco de germoplasma de la UACh.

Cuadro 3. Origen del germoplasma de las especies de Tagetes.

Nombre científico Nombre común Origen

Tagetes filifolia Anisillo Ozumba, México

Tagetes foetidissima Cinco llagas Texcoco, México

Tagetes lucida Pericón Ocuituco, Morelos

Tagetes coronopifolia Santa María Texcoco, México

Tagetes erecta Cempoalxóchitl Texcoco, México

30

5.1.2. Obtención de aceites esenciales y polvos

Las plantas se cosecharon en la etapa fenológica de floración, se utilizó la parte aérea. Los

aceites se obtuvieron mediante destilación por arrastre de vapor según el procedimiento

descrito por Vázquez et al. (2002), y en el cual se utilizó agua como solvente (Figura 6).

Figura 6. Esquema de un sistema de destilación por arrastre de vapor.

Para el caso de los polvos, las plantas se cosecharon en la misma etapa fenológica y se secaron

en una estufa a 50 °C por 72 horas y se pulverizaron en un procesador de alimentos Moulinex

(picadora) y se tamizó en una malla del número 40 para obtener una muestra homogénea y

partículas pequeñas.

31

5.2 Organismos utilizados en los bioensayos

5.2.1. Copitarsia decolora

En el Laboratorio de Ecología Química del Departamento de Interacciones Planta-Insecto de

CeProBi se cuenta para experimentación con una cría de C. decolora para disponer de insectos

en diferentes estadios (instares) todo el año, bajo las condiciones de 12 horas luz y 12 horas

oscuridad, una temperatura promedio de 25 ± 3 °C y una humedad relativa del 60 ± 5 %.

En la etapa larval se alimenta a los insectos con una dieta general para lepidópteros (Acatitla et

al., 2003) que contiene los siguientes ingredientes para un kilogramo de dieta: harina de maíz

(165 g), germen de trigo (42 g), levadura de cerveza (44 g) metilparaben (2 g), ácido sórbico (1.6

g), ácido ascórbico (6 g) ruviotic (6 g) agar, (15 g) y agua (1 L), para la preparación de la dieta

todos estos ingredientes se mezclan y se someten a un proceso de cocción a 40 °C; en la etapa

adulta de los insectos se les proporciona como alimento una mezcla de agua y miel 9:1 (v:v).

5.2.2. Sclerotium rolfsii

Se utilizaron 10 aislamientos de S. rolfsii de la colección de cepas del Laboratorio de

Fitopatología del CeProBi, provenientes de diferentes plantas hospederas colectadas en los

estados de Morelos, Puebla, Veracruz, Sinaloa, Guanajuato y Estados Unidos en Georgia y

Carolina del Norte (Cuadro 4).

32

Cuadro 4. Orígenes de los aislamientos de Sclerotium rolfsii.

Aislamiento Hospedero Origen

1 Perejil (Petroselinum crispum) Yautepec, Morelos

4 Tabaco (Nicotiana tabacum) Yautepec, Morelos

5 Flor de pajarito (Parthenium hysterophorus) Yautepec, Morelos

12 Frijol (Phaseolus vulgaris) Yautepec, Morelos

16 Chile (Capsicum annuum) Cotaxtla, Veracruz

17 Soya (Glycine max) Mochis, Sinaloa

18 Cebolla (Allium cepa) León, Guanajuato

20 Cebolla (Allium cepa) Izucar de Matamoros, Puebla

25 Pasto (Eleusine indica) Carolina del Norte, EE.UU.

27 Cebolla (Allium cepa) Georgia, EE.UU.

5.2.3. Monilia fructicola

Para la obtención de M. fructicola se tomó un fruto de durazno con la sintomatología de

moniliasis y se desinfestó en una solución de hipoclorito de sodio con agua destilada 3:1 (v:v)

durante 1 minuto y se enjuagó en agua destilada estéril (tres veces), se secó en papel filtro

estéril (en la campana de flujo laminar), posteriormente se raspó la cáscara con una aguja de

disección y se sembró en medio Papa Dextrosa Agar (PDA); a continuación se tomaron discos de

5 mm de diámetro y se resembraron en medio PDA para purificar el aislamiento. Una vez que

se aisló la cepa se mantuvo en incubación a 28 °C, hasta la utilización en el bioensayo.

33

5.3. Bioensayos

5.3.1. Copitarsia decolora

Se utilizaron 40 larvas por cada tratamiento (Cuadro 5) con un máximo de edad de 24 horas,

cada una se tomó como una repetición, se individualizaron en recipientes de plástico de 30 mL

con tapa y se alimentaron con la dieta, a la dieta se adicionó una concentración de 0.01 y 0.1 %

el aceite esencial de T. filifolia, T. foetidissima, T. lucida, T. coronopifolia y T. erecta

emulsificados con Tween 20 al 0.02 %, antes de solidificar.

A partir del día 10 de alimentación y después, cada tercer día, se registró el peso de cada larva,

la mortalidad y duración del estadio larval, así como el peso de las pupas, mortalidad y duración

del estadio pupal. Las pupas se separaron por sexo, y se colocaron en jaulas de acrílico de 30 x

30 x 30 cm.

Cuando emergieron los adultos, se formaron parejas individuales de cada uno de los

tratamientos y se colocaron en recipientes de plástico de 1 L con tapa; la cual se perforó

dejando únicamente la orilla para cerrar el recipiente. En la tapa se colocó una servilleta de

papel, donde en experimentos previos se observó que las hembras muestran preferencia para

ovipositar, a partir del tercer día de haber formado las parejas, se cambió diariamente la

servilleta durante 10 días y se contó el número de huevos puestos sobre ella (fecundidad) y el

número de larvas emergidas por tratamiento por pareja (fertilidad).

Solo fueron considerados los huevos puestos sobre la servilleta de papel, por lo que la

fecundidad corresponde a un dato relativo.

34

Cuadro 5. Tratamientos con aceites esenciales (AE) incorporados a la dieta de Copitarsia

decolora. Tratamientos

Testigo (sin AE)

Testigo con Tween 20 (0.02 %)

T. filifolia 0.1 %

T. filifolia 0.01 %

T. foetidissima 0.1 %

T. foetidissima 0.01 %

T. lucida 0.1 %

T. lucida 0.01 %

T. coronopifolia 0.1 %

T. coronopifolia 0.01 %

T. erecta 0.1 %

T. erecta 0.01 %

5.3.2. Sclerotium rolfsii

Los 10 aislamientos de S. rolfsii se sembraron en el medio de cultivo PDA, en cajas de Petri de

15x100 milímetros. Para preparar el medio de cultivo se pesaron 39 gramos de PDA por litro de

agua destilada, se esterilizó en autoclave a 120 libras de presión por 15 minutos. El medio

estéril se vació en las cajas Petri en una campana de flujo laminar, se dejó enfriar. Cada

aislamiento se sembró, colocando un disco de micelio de 5 mm en el centro de cada caja Petri y

se incubó a 27 °C. Para cada aislamiento (10) y tratamiento (12) se utilizaron 6 repeticiones. El

crecimiento micelial, la producción de esclerocios y la viabilidad de los esclerocios fueron

evaluados en cada tratamiento (Cuadro 6). Los aceites esenciales (0.1%) se incorporaron

después del proceso de esterilización, cuando el medio de cultivo tenía una temperatura

aproximada de 45 °C. Los polvos (2%) de cada una de las especies de Tagetes en se

35

incorporaron a un matráz con agua destilada, y se pusieron en agitación a 150 revoluciones por

minuto durante 12 horas. Posteriormente se tamizaron en malla del número 100, al extracto

acuoso se adicionó el medio de cultivo PDA y se esterilizó.

Cuadro 6. Tratamientos con aceites esenciales (AE) al 0.1 % y extracto acuoso (EA) al 2 % de Tagetes evaluados contra S. rolfsii

Tratamientos

Testigo (sin AE o EA)

Testigo con Tween 20 (0.02 %)

T. filifolia (AE)

T. foetidissima (AE)

T. lucida (AE)

T. coronopifolia (AE)

T. erecta (AE)

T. filifolia (EA)

T. foetidissima (EA)

T. lucida (EA)

T. coronopifolia (EA)

T. erecta (EA)

5.3.3. Monilia fructicola

Se sembró en medio de cultivo de PDA, en cajas de Petri de 15x100 milímetros, colocándose un

disco de micelio de 5 mm en el centro de cada caja Petri y se incubaron a 27 °C. Para cada

tratamiento (Cuadro 7) se utilizaron 6 repeticiones. Se evaluó el crecimiento micelial, la

esporulación y la germinación de esporas en cada tratamiento. Los aceites esenciales al 0.1 %

fueron incorporados después del proceso de esterilización, cuando el medio de cultivo

presentaba una temperatura promedio de 45 °C. Los polvos al 2 % de cada una de las especies

36

de Tagetes se incorporaron en un matráz con agua destilada, se pusieron en agitación a 150

revoluciones por minuto durante 12 horas, se tamizaron en malla del número 100, se adicionó

el medio de cultivo PDA y se esterilizó.

Cuadro 7. Tratamientos con aceites esenciales (AE al 0.1 % y extracto acuoso (EA) al 2 % de Tagetes evaluados contra M. fructicola.

Tratamientos

Testigo (sin AE o EA)

Testigo con Tween 20 (0.02 %)

T. filifolia (AE)

T. foetidissima (AE)

T. lucida (AE)

T. coronopifolia (AE)

T. erecta (AE)

T. filifolia (EA)

T. foetidissima (EA)

T. lucida (EA)

T. coronopifolia (EA)

T. erecta (EA)

En los modelos S. rolfsii y M. fructicola para la variable de crecimiento micelial, con los datos de

la tasa de crecimiento se calculó el porcentaje de reducción del crecimiento con respecto al

tratamiento testigo (RRT) mediante la fórmula:

𝑅𝑅𝑇 % =𝑇𝐶𝑇−𝑇𝐶𝑡

𝑇𝐶𝑇𝑋 100

Donde:

TCT= tasa de crecimiento en el testigo.

TCt= tasa de crecimiento en el tratamiento.

37

5.4. Evaluación de la actividad biológica

5.4.1. Copitarsia decolora

5.4.1.1. Peso, mortalidad y duración de etapa larval

Las larvas de cada tratamiento se pesaron en una balanza analítica a partir del día 10 de

alimentación y después, cada tercer día, también se registró la mortalidad y la duración del

estadio larval.

5.4.1.2. Peso, mortalidad y duración de etapa pupal

Se registró el peso de las pupas de cada tratamiento, posteriormente se separaron las hembras

de los machos, se registró la mortalidad y duración de la etapa pupal.

5.4.1.3. Fecundidad y fertilidad de adultos

La fecundidad se evaluó al contabilizar el número de huevos puestos por pareja sobre la

servilleta colocada en la tapa de la jaula, para lo cual, se tomaron fotografías digitales a la

servilleta y con ayuda el programa UTHSCSA ImageTool Versión 3.0 se contabilizó el total de

huevos puestos por pareja. El registro de la fertilidad se realizó dos veces por día, se contabilizó

el número de larvas eclosionadas, y las larvas emergidas fueron retiradas con un pincel para

evitar que se alimentaran de los huevos.

38

5.4.2. Sclerotium rolfsii

5.4.2.1. Crecimiento micelial

El área de crecimiento micelial de S. rolfsii se evaluó hasta que el testigo llenó la caja Petri. Sé

tomaron fotografías digitales diariamente, y con ayuda del programa ImageJ®(versión 1.4),

software, para análisis de imágenes, desarrollado por el Instituto Nacional de la Salud Mental

de Estados Unidos. El área de crecimiento se calculó en centímetros cuadrados. Con el

programa Sigma Stat V. 3.5 se realizaron regresiones lineales para calcular la tasa de

crecimiento.

5.4.2.2. Producción de esclerocios

Después de evaluar el crecimiento micelial de S. rolfsii todos los tratamientos se mantuvieron

en una incubadora Binder de 25 a 27 °C por 30 días, posteriormente se cuantificaron el total de

esclerocios por cada caja Petri en los diferentes tratamientos.

5.4.2.3. Viabilidad de los esclerocios

Se tomaron 10 esclerocios de cada uno de los tratamientos para sembrarse en medio PDA, se

evaluó la germinación (viabilidad) de los esclerocios y se expresó como el porcentaje de

germinación.

39

5.4.3. Monilia fructicola

5.4.3.1. Crecimiento micelial

El área de crecimiento micelial de M. fructicola se evaluó hasta que el testigo llenó la caja Petri.

Se realizó el mismo procedimiento que para S. rolfsii.

5.4.3.2. Esporulación

Para evaluar la esporulación de M. fructicola, una vez que el testigo, el hongo presentó el

máximo crecimiento, se le adicionaron 2 ml de agua destilada estéril y se raspó el micelio, se

obtuvo una suspensión de la que se tomaron 10 µL que se depositaron en un hematocímetro y

con el objetivo 40x del microscopio óptico, se realizó el conteo celular. Se efectuaron 4

mediciones en cada tratamiento.

5.4.3.3. Germinación

Para el caso de la germinación, se tomaron 20 µL de la suspensión de esporas y se depositaron

en discos de PDA de 5 mm (tres discos por tratamiento) que se observaron con el objetivo 40x

del microscopio óptico, en 4 campos por cada disco. Se tomó como espora germinada la que

presentara tubo germinativo del doble de largo del diámetro de la espora. El porcentaje de las

esporas germinadas fue evaluado y registrado, a las 2, 4, 6 y 8 horas, para fijar la germinación

en cada hora de evaluación se adicionó lactofenol a cada disco de PDA.

40

5.5. Análisis estadístico

En el bioensayo con C. decolora se utilizó un diseño experimental completamente al azar, con

los aceites esenciales de las cinco especies de Tagetes a dos concentraciones. Se tomó una larva

como unidad experimental, con 40 repeticiones. Las variables de respuesta fueron peso,

mortalidad y duración de los estadios larval y pupal, fecundidad y fertilidad de adultos.

El análisis de varianza (ANOVA) se realizó con ayuda de SAS versión 8.0 en la que se aplicó el

procedimiento PROC GLM, y comparación de medias por la diferencia mínima significativa DMS,

para las variables duración y peso de los estadíos larval y pupal. Para analizar la mortalidad en

la etapa larval, se aplicó el procedimiento Kaplan-Meier Survival Analysis: Log-Rank con ayuda

de Sigma Stat versión 3.5.

Para el caso de los bioensayos con los fitopatógenos S. rolfsii y M. fructicola, el diseño fue

completamente al azar, en que se empleó una caja Petri como unidad experimental. Las

variables de respuesta fueron el crecimiento micelial (cm2/día) para ambos organismos. La

producción y viabilidad de esclerocios, para S. rolfsii, y para M. fructicola esporulación y

germinación.

Se calcularon regresiones lineares para determinar la tasa de crecimiento micelial, y ANOVA

para crecimiento y producción de esclerocios; esporulación y germinación.

41

6. RESULTADOS

6.1. Copitarsia decolora

6.1.1. Peso, mortalidad y duración de la etapa larval

El tratamiento con el aceite esencial de T. filifolia al 0.1 %, causó el 100 % de mortalidad

inmediatamente después de la exposición de las larvas a la dieta. Por lo que se redujo la

concentración del aceite a 0.025 % únicamente, en este tratamiento. En los demás

tratamientos las larvas se alimentaron y no se presentó la mortalidad de la misma forma.

Cuadro 8. Efecto de los aceites esenciales (AE) de Tagetes a dos concentraciones, incorporados

a la dieta, en el peso en la etapa larval de Copitarsia decolora.

Tratamientos Peso (g) n

Testigo (sin AE) 0.339 ał 40

T. erecta 0.1 % 0.321 ab 39

T. coronopifolia 0.1 % 0.305 abc 38

Testigo con Tween 20 (0.02 %) 0.305 abc 39

T. erecta 0.01 % 0.302 abc 40

T. filifolia 0.01 % 0.301 abc 40

T. coronopifolia 0.01 % 0.296 bc 37

T. filifolia 0.025 % 0.295 bc 34

T. foetidissima 0.1 % 0.276 cd 27

T. foetidissima 0.01 % 0.239 de 31

T. lucida 0.1 % 0.205 ef 31

T. lucida 0.01 % 0.188 f 38

DMS 0.0417 łValores seguidos de la misma letra en la columna no difieren estadísticamente.

(F= 26.8, gl=71, p <0.0001).

En la etapa larval en los tratamientos con aceites esenciales de T. lucida y T. foetidissima se

registraron pesos menores con respecto a los tratamientos testigo y Tween 20. Esto se observó

con ambas concentraciones (0.1 y 0.01 %) evaluadas. En el caso de T. lucida se registró el menor

42

peso con valores de 0.205 g y 0.188 g para cada concentración, mientras que en el testigo fue

de 0.339 g, (Cuadro 8).

Para las dos concentraciones evaluadas, la duración del estadio larval se redujo en promedio 3

días. En los tratamientos con aceites esenciales fue de 21 días y en el tratamiento testigo y

Tween fue de 24 y 23.2 días respectivamente, (Cuadro 9).

Cuadro 9. Efecto de los aceites esenciales (AE) de Tagetes a dos concentraciones, incorporados

a la dieta, en la duración de la etapa larval de Copitarsia decolora.

Tratamientos Duración (d) n

Testigo (sin AE) 24.0 ał 38

Testigo con Tween 20 (0.02 %) 23.2 a 38

T. foetidissima 0.1 % 21.6 b 19

T. filifolia 0.025% 21.4 b 17

T. coronopifolia 0.01 % 21.3 b 34

T. coronopifolia 0.1 % 21.0 b 35

T. lucida 0.1 % 21.0 b 23

T. filifolia 0.01 % 21.0 b 22

T. foetidissima 0.01 % 21.0 b 26

T. lucida 0.01 % 21.0 b 25

T. erecta 0.1 % 21.0 b 38

T. erecta 0.01 % 21.0 b 39

DMS 0.8244 łValores seguidos de la misma letra en la columna no difieren estadísticamente.

(F= 54.77, gl=71, p <0.0001).

43

6.1.2. Peso, mortalidad y duración de la etapa pupal

El tratamiento con aceite esencial de T. foetidissima al 0.1 %, presentó un peso mayor

estadísticamente significativo (Cuadro 10), y a los tratamientos testigo, T. erecta a ambas

concentraciones, T. filifolia y T. lucida al 0.01 % pero sin deferencias respecto al tratamiento

con Tween.

Cuadro 10. Efecto de los aceites esenciales (AE) de Tagetes a dos concentraciones,

incorporados a la dieta, en el peso de pupa de Copitarsia decolora.

Tratamientos Peso (g) n

T. foetidissima 0.1 % 0.423 ał 19

T. foetidissima 0.01 % 0.404 ab 26

T. lucida 0.1 % 0.401 ab 23

Testigo con Tween 20 (0.02 %) 0.400 ab 38

T. filifolia 0.025 % 0.399 ab 17

T. coronopifolia 0.01 % 0.397 ab 34

T. coronopifolia 0.1 % 0.395 ab 35

T. lucida 0.01 % 0.386 b 25

T. erecta 0.01 % 0.380 b 39

Testigo (sin AE) 0.379 b 38

T. erecta 0.1 % 0.376 b 38

T. filifolia 0.01 % 0.376 b 22

DMS 0.0359 łValores seguidos de la misma letra en la columna no difieren estadísticamente.

(F= 3.23, gl=71, p= 0.0003).

En la mortalidad en la etapa pupal (Cuadro 11) se observó que, todos los tratamientos incluido

el testigo con Tween 20 presentaron una mortalidad superior al 20 %, mientras que en el

tratamiento testigo la mortalidad fue del 8 %.

44

Cuadro 11. Efecto de los aceites esenciales (AE) de Tagetes a dos concentraciones,

incorporados a la dieta, en la mortalidad pupal de Copitarsia decolora.

Tratamientos Mortalidad (%)

T. foetidissima 0.1 % 58

T. erecta 0.1 % 39

T. coronopifolia 0.01 % 38

T. filifolia 0.01 % 36

T. filifolia 0.025 % 35

T. coronopifolia 0.1 % 34

T. lucida 0.1 % 26

T. foetidissima 0.01 % 24

T. erecta 0.01 % 23

T. lucida 0.01 % 21

Testigo con Tween 20 (0.02 %) 21

Testigo (sin AE) 8

Cuadro 12. Efecto de los aceites esenciales (AE) de Tagetes a dos concentraciones,

incorporados a la dieta, en la duración de la etapa pupal de Copitarsia decolora.

Tratamientos Media N

Testigo (sin AE) 20.2 ał 35

Testigo con Tween 20 (0.02 %) 19.9 a 30

T. erecta 0.01 % 16.1 b 30

T. erecta 0.1 % 15.6 b 23

T. foetidissima 0.1 % 15.3 c 8

T. filifolia 0.01 % 15.2 c 14

T. lucida 0.1 % 15.1 c 17

T. filifolia 0.025 % 14.9 c 11

T. foetidissima 0.01 % 14.8 c 20

T. coronopifolia 0.1 % 14.2 d 23

T. coronopifolia 0.01 % 14.1 d 21

T. lucida 0.01 % 14.1 d 20

DMS 0.501 łValores seguidos de la misma letra en la columna no difieren estadísticamente.

(F= 591.4, gl=71, p <0.0001).

En el Cuadro 12 se observa que la duración del estadio pupal se redujo en promedio en 5 días

con relación al tratamiento testigo y al Tween 20, en los tratamientos con aceites esenciales de

45

Tagetes tuvo una duración de 14 a 16 días, mientras que en el tratamiento testigo y Tween 20

fue de 20.2 y 19.9 días para cada uno.

Para efecto de claridad los resultados se presentan en dos Figuras (7 y 8), sin embargo el

análisis estadístico se realizó para todos los tratamientos a ambas concentraciones, se observa

que con los tratamientos con aceites esenciales de T. filifolia, T. foetidissima y T. lucida, se

produce una reducción en la supervivencia de las larvas, de hasta un 50 % entre los días 13 y 17

(Figuras 7 y 8).

Figura 7. Curvas de supervivencia de larvas de Copitarsia decolora con los tratamientos de

aceites esenciales de Tagetes al 0.1 %.

0

20

40

60

80

100

9 11 13 15 17 19 21 23

Etapa larval

Supe

rviv

enci

a (%

)

Duración (días)

Testigo (sin AE)

Testigo con Tween 20 (0.02 %)

T. filifolia

T. foetidissima

T. lucida

T. coronopifolia

T. erecta

46

Figura 8. Curvas de supervivencia de larvas de Copitarsia decolora con los tratamientos de

aceites esenciales de Tagetes al 0.01 %.

A partir de las curvas de supervivencia se calculó la supervivencia media de las larvas (Figura 9).

Como se puede observar la Figura 9, la supervivencia media menor en la etapa larval se

encontró con los tratamientos con aceites esenciales de T. filifolia, T. foetidissima y T. lucida.

Para estas especies, con aceites esenciales al 0.1 % (excepto en T. filifolia que fue de 0.025 %)

se encontraron valores de 16.9, 17.4 y 18.8 días de supervivencia media larval, resultados

similares, se observaron en cuanto al efecto de estas especies sobre la mortalidad en la

concentración de 0.01 %.

0

20

40

60

80

100

9 11 13 15 17 19 21 23

Etapa larval

Supe

rviv

envi

a (%

)

Duración (días)

Testigo (sin AE)

Testigo con Tween 20 (0.02 %)

T. filifolia

T. foetidissima

T. lucida

T. coronopifolia

T. erecta

47

Figura 9. Supervivencia media de larvas de Copitarsia decolora con los tratamientos de aceites esenciales de Tagetes.

*(T1), Testigo sin AE, (T2), Testigo Tween 20 al 0.02 %, (T3), AE de T. filifolia 0.025% (T4), AE de T. filifolia 0.01%, (T5) AE de T. foetidissima 0.1% (T6), AE de T. foetidissima 0.01%, (T7), AE de T. lucida 0.1%, (T8), AE de T. lucida

0.01%, (T9), AE de T. coronopifolia 0.1 %., (T10), AE de T. coronopifolia 0.01 %. (T11) AE de T. erecta 0.1 %., (T12), AE de T. erecta 0.01 %. (F=105.45, gl= 39, p <0 .001).

6.1.3. Fecundidad y fertilidad de adultos

Con el aceite esencial de T. lucida al 0.1 % se registró la mayor fecundidad, con 362 huevos

puestos en promedio por pareja con respecto a los demás aceites es enciales de Tagetes y en el

testigo y con Tween, (Cuadro 13). Sin embargo, en este mismo tratamiento se presentó la

menor fertilidad, con el 47.7 % de larvas eclosionadas.

En el tratamiento con el aceite esencial de T. foetidissima al 0.1 %, solo se formaron dos

parejas, en las que no se registró oviposición (fecundidad) por lo tanto, tampoco fertilidad. Con

el aceite esencial de T. foetidissima al 0.01 % se formaron ocho parejas, con un promedio de

159. 4 huevos por pareja y una fertilidad de 79.6 % (Cuadro 13).

0

5

10

15

20

25

30

T12 T1 T2 T11 T9 T10 T8 T4 T6 T7 T3 T5

día

s

Tratamiento

a a ab ab

c c bc bc

bc bc

ab ab

48

Cuadro 13. Efecto de los aceites esenciales de Tagetes incorporados a la dieta, en la fecundidad

y fertilidad de adultos de Copitarsia decolora.

Tratamiento Concentración (%) Parejas Fecundidad (Nh) Fertilidad (%)

Testigo 15 246.2 bł 95.6

Tween 20 0.02 12 121.6 c 93.3

T. filifolia 0.025 5 108.9 c 83.8 0.01 4 19.3 d 84.5

T. foetidissima 0.1 2 * - 0.01 8 159.4 c 79.6

T. lucida 0.1 5 362 a 47.7 0.01 10 205.7 b 71.8

T. coronopifolia 0.1 9 49.9 d 78.5

0.01 9 33.9 d 79.4 T. erecta 0.1 5 55.4 d 88.3

0.01 15 29.4 d 86.8

DMS 51.4 łValores seguidos de la misma letra en la columna no difieren estadísticamente. (F=12.34, gl=11, p <0.0001).

* No ovipositó, Nh, número de huevos .

Con T. coronopifolia y T. erecta a ambas concentraciones evaluadas y T. filifolia al 0.01 % se

registró menor fecundidad, que en el testigo y el Tween. En general, todos los tratamientos con

aceites esenciales presentaron una menor fertilidad que en el testigo y con Tween.

49

6.2. Sclerotium rolfsii

6.2.1. Crecimiento micelial

Durante la evaluación del efecto de los aceites esenciales sobre el crecimiento micelial de S.

rolfsii, se encontró que el tratamiento con T. filifolia al 0.1 %, inhibió completamente el

crecimiento, por lo que no se incluyó en el análisis estadístico. En los demás tratamientos con

aceites esenciales se encontró que la tasa de crecimiento varió entre aislamientos de S. rolfsii y

entre tratamientos con aceites esenciales de Tagetes (Cuadro 14). El comportamiento fue

selectivo, en la mayoría de los casos fue menor con respecto al testigo (Cuadro 14). El

porcentaje de reducción en la tasa de crecimiento con respecto al testigo (Cuadro 15), también

varió. Con T. coronopifolia se presentó en ocho aislamientos una inhibición mayor al 50 %. En

siete aislamientos con T. lucida hubo una inhibición mayor al 50 %. Con T. foetidissima sólo en

cuatro aislamientos se mostró una inhibición mayor al 50 %. T. erecta hubo una inhibición

mayor al 50 % en cinco de los 10 aislamientos.

Los aislamientos más sensibles fueron el 4, 5 y el 27 que tuvieron inhibiciones mayores al 50 %

con los aceites de las cuatro especies de Tagetes. Los aislamientos menos sensibles fueron el 1

y 12 que tuvieron inhibiciones menores al 50 %, en tres de las cuatro especies de Tagetes en el

aislamiento 1 y en todas las especies en el aislamiento 12.

50

Cuadro 14. Efecto de los aceites esenciales (AE) de Tagetes al 0.1%, sobre la tasa de crecimiento

micelial (cm2/día) de diferentes aislamientos de Sclerotium rolfsii.

A T1 T2 T4 T5 T6 T7 F gl P DMS

1 16.4 ał 15.1 a 11.1 b 6.2 c 9.2 bc 10.3 b 7.7 35 <0.0001 3.9

4 11.7 a 12.1 a 2.9 bc 5.3 b 1.9 c 3.7 bc 29.4 35 <0.0001 2.5 5 15.2 a 11.1 b 4.3 d 4.2 d 5.3 dc 6.1 c 60.4 35 <0.0001 1.7 12 14.3 a 15.1 a 13.5 a 8.5 b 13.2 a 9.7 b 5.95 35 0.0006 3.2 16 12.5 a 8.5 b 1.6 d 0.1 e 0.1 e 3.0 c 109.1 35 <0.0001 1.4 17 14.0 ab 15.9 a 13.7 ab 4.7 c 6.2 c 11.2 b 13.1 35 <0.0001 3.6 18 14.9 a 16.0 a 9.5 b 7.4 b 6.4 c 5.7 c 26.4 35 <0.0001 2.5 20 15.2 a 14.0 ab 8.0 de 11.5 bc 4.9 e 10.0 dc 10.9 35 <0.0001 3.4 25 15.1 a 15.7 a 8.7 b 0.1 d 2.8 c 10.3 b 109.4 35 <0.0001 1.7 27 15.4 a 11.9 b 3.2 c 3.5 c 0.8 c 3.5 c 37.5 35 <0.0001 2.7

łValores seguidos de la misma letra en cada línea no difieren estadísticamente.

(A), aislamiento de S. rolfsii; (T1), Testigo sin AE, (T2), Testigo Tween 20 al 0.02 %, (T4), T. foetidissima , (T5), T.

lucida, (T6), T. coronopifolia, (T7), T. erecta.

Cuadro 15. Porcentaje de reducción (RRT) de la tasa de crecimiento micelial de diferentes aislamientos de Sclerotium rolfsii en los tratamientos con aceites esenciales de Tagetes respecto al tratamiento testigo.

(A), aislamiento de S. rolfsii; (T2), Testigo Tween 20 al 0.02 %, (T4), T. foetidissima , (T5), T. lucida, (T6), T.

coronopifolia, (T7), T. erecta.

*Resultado con signo negativo, significa efecto estimulatorio en la tasa de crecimiento .

A T2 T4 T5 T6 T7

1 7.9 32.3 62.2 43.9 37.2

4 -3.4* 75.2 54.7 83.8 68.4

5 27.0 71.7 72.4 65.1 59.9

12 -5.6 5.6 40.6 7.7 32.2

16 32.0 87.2 99.2 99.2 76.0

17 -13.6 2.1 66.4 55.7 20.0

18 -7.4 36.2 50.3 57.0 61.7

20 7.9 47.4 24.3 67.8 34.2

25 -4.0 42.4 99.3 81.5 31.8

27 22.7 79.2 77.3 94.8 77.3

51

El tratamiento con extracto acuoso de T. lucida (T5) inhibió completamente el crecimiento

micelial de los diez aislamientos de S. rolfsii por lo que no se incluyó en el análisis estadístico ni

en el Cuadro 17. Todos los tratamientos con extractos acuosos presentaron tasas de

crecimiento significativamente menores respecto al testigo (Cuadro 16). El tratamiento con T.

filifolia en dos aislamientos inhibió el crecimiento en más del 50 %, T. foetidissima en cuatro

aislamientos tuvo inhibición mayor al 50 %, T. coronopifolia también en cinco aislamientos tuvo

efecto inhibitorio mayor al 50 % y T. erecta en cuatro aislamientos tuvo inhibición mayor al 50

% (Cuadro 17).

Los aislamientos más susceptibles a todas las especies de Tagetes fueron el 18 que fue inhibido

entre un 47 y 99.9 % y el aislamiento 25 que fue inhibido entre un 30 y 82.8 %, mientras que el

aislamiento menos susceptible fue el 17 con inhibiciones entre 19.3 y 29.3 % (Cuadro 17).

Cuadro 16. Efecto de los extractos acuosos (EA) de Tagetes al 2 % sobre la tasa de crecimiento

micelial (cm2/día) de Sclerotium rolfsii.

A T1 T3 T4 T6 T7 F gl P DMS

1 16.4 ał 10.4 b 9.9 c 7.7 d 9.8 c 96.7 29 <0.0001 0.3

4 11.7 a 10.3 a 2.0 c 7.4 b 7.0 b 21.9 29 <0.0001 2.3 5 15.2 a 10.2 b 8.6 c 7.0 d 7.2 d 220.8 29 <0.0001 0.7

12 14.3 a 12.0 b 10.9 c 11.0 c 10.9 c 52.2 29 <0.0001 0.2 16 12.5 a 5.6 c 2.6 d 5.0 c 6.7 b 93.6 29 <0.0001 1.1

17 14.0 a 10.4 b 10.9 b 11.3 b 9.9 b 35.0 29 0.0211 2.5 18 14.9 a 0.6 d 1.9 c 7.8 b 0.01 e 20.5 29 <0.0001 0.1

20 15.2 a 9.2 d 9.2 d 9.8 c 10.6 b 20.3 29 <0.0001 0.3

25 15.1 a 8.8 c 10.5 b 2.6 e 4.5 d 15.9 29 <0.0001 0.2 27 15.4 a 8.1 b 1.6 e 5.8 d 7.4 c 98.9 29 <0.0001 0.5

łValores seguidos de la misma letra en cada línea no difieren estadísticamente.

(A), aislamiento de S. rolfsii ; (T1), Testigo sin EE, (T3), T. filifolia (T4), T. foetidissima, (T6), T. coronopifolia, (T7), T. erecta .

52

Cuadro 17. Porcentaje de reducción (RRT) de la tasa de crecimiento micelial de Sclerotium rolfsii

en los tratamientos con extractos acuosos de Tagetes respecto al tratamiento testigo.

A T3 T4 T6 T7

1 36.6 39.6 53.0 40.2

4 12.0 82.9 36.8 40.2

5 32.9 43.4 53.9 52.6

12 16.1 23.8 23.1 23.8

16 55.2 79.2 60.0 46.4

17 25.7 22.1 19.3 29.3

18 96.0 87.2 47.7 99.9

20 39.5 39.5 35.5 30.3

25 41.7 30.5 82.8 70.2

27 47.4 89.6 62.3 51.9

(A), aislamiento de S. rolfsii ; (T3), T. fil ifolia, (T4), T. foetidissima, (T6), T. coronopifolia, (T7), T. erecta .

6.2.2. Producción de esclerocios

En el tratamiento con aceite esencial de T. filifolia, aunque inhibió a los ocho días el crecimiento

micelial, al incubarse por 30 días se presentó crecimiento micelial y producción de esclerocios,

por lo que el efecto fue fungistático.

En general la producción de esclerocios fue menor con los tratamientos con aceites esenciales

que en el testigo y Tween (Cuadro 18). A excepción del aislamiento 5 que con el tratamiento de

T. erecta produjo una mayor cantidad de esclerocios con respecto al tratamiento con Tween. En

algunos de ellos, aunque se registra crecimiento micelial no se producen esclerocios como

ocurrió con el tratamiento con aceite esencial de T. erecta que inhibe la producción de

esclerocios en tres aislamientos y el aceite esencial de T. lucida que inhibió la producción de

esclerocios en los aislamientos 16 y 20. En el caso del tratamiento con aceite de T. foetidissima

en el aislamiento 20 no hubo formación de esclerocios.

53

Cuadro 18. Efecto de los aceites esenciales (AE) de Tagetes al 0.1 % sobre la producción de

esclerocios de Sclerotium rolfsii.

A T1 T2 T3 T4 T5 T6 T7 F gl P DMS

1 124 ał 117 a 45 c 10e 33 d 6 e 49 c 36.5 41 <0.0001 9

4 22 b 36 a 24 b 26 b 16 b 16 b * 33.0 35 <0.0001 12 5 430 a 103 c 37 e 66 d 35 e 23 f 120 b 12.27 41 <0.0001 12 12 903 a 720 b 28 f 119 d 70 e 254 c 127 d 72.9 41 <0.0001 35 16 76 a 60 b 9 d 7 d * 28 c 14 d 50.7 35 <0.0001 7 17 468 a 316 b 36 f 47 f 97 e 119 d 194 c 15.3 41 <0.0001 23 18 273 a 225 b 57 e 72 d 90 c 45 f * 56.3 35 <0.0001 5 20 25 b 18 bc 10 c * * 63 a 15 bc 27.1 29 <0.0001 9 25 26 a 19 ab 11 b 9 bc 13 b 18 bc 2 c 36.9 41 <0.0001 7 27 51 a 40 ab 38 b 51 a 31 b 35 b * 41.5 35 <0.0001 11

łValores seguidos de la misma letra en cada línea no difieren estadísticamente.

(A), aislamiento de S. rolfsii; (T1), Testigo sin AE, (T2), Testigo con Tween 20 al 0.02 %, (T3), T. filifolia (T4), T.

foetidissima, (T5), T. lucida, (T6), T. coronopifolia, (T7), T. erecta . (*), no produjo esclerocios.

En los tratamientos con extractos acuosos de las especies de Tagetes, el más sobresaliente fue

el de T. lucida ya que se registró una inhibición completa del crecimiento, y se registró

producción de esclerocios. Este tratamiento no se incluye en el análisis estadístico por lo que no

aparece en el Cuadro 19. Los aislamientos 4 y 18 fueron susceptibles a los extractos acuosos de

las cinco especies ya que no se produjeron esclerocios. Los tratamientos extractos acuosos de

T. filifolia y T. coronopifolia inhibieron la producción de esclerocios en los aislamientos 25 y 16,

respectivamente. En algunos aislamientos se registra un efecto estimulatorio en la producción

de esclerocios respecto al tratamiento testigo, como en el caso del tratamiento de T. erecta y T.

filifolia en tres aislamientos, T. coronopifolia y T. foetidissima en dos aislamientos donde la

producción de esclerocios es mayor que en el tratamiento testigo.

54

Cuadro 19. Efecto de los extractos acuosos (EA) de Tagetes al 2 % sobre la producción de

esclerocios de Sclerotium rolfsii.

A T1 T3 T4 T6 T7 F gl P DMS

1 124 cł 175 b 227 a 77 d 73 d 26.0 29 <0.0001 25

4 22 * * * * * 5 430 a 164 c 117 d 114 d 242 b 40.2 29 <0.0001 19 12 903 b 523 c 565 c 886 b 1177 a 43.7 29 <0.0001 115 16 76 a 4 b 4 b * 1 b 80.1 23 <0.0001 12 17 468 c 307 d 624 b 276 e 799 a 28.9 29 <0.0001 36 18 273 * * * * * 20 25 c 54 b 27 c 31 c 89 a 44.0 29 <0.0001 14 25 26 b * 4 c 31 a 2 c 13.2 23 <0.0001 3 27 51 c 90 a 14 d 66 b 7 d 73.5 29 <0.0001 7

łValores seguidos de la misma letra en cada línea no difieren estadísticamente.

(A), aislamiento de S. rolfsii; (T1), Testigo sin EA, (T3), T. filifolia (T4), T. foetidissima, (T6), T. coronopifolia, (T7), T.

erecta . (*), no produjo esclerocios.

6.2.3. Viabilidad de esclerocios

Los tratamientos testigo, Tween y aceite esencial de T. erecta, así como los tratamientos con

extractos acuosos de las especies T. filifolia, T. foetidissima, T. coronopifolia y T. erecta no

afectaron la viabilidad de los esclerocios de los 10 aislamientos de S. rolfsii. En los aislamientos

1 y 12, los tratamientos con aceites esenciales de las cinco especies de Tagetes no afectaron la

viabilidad de los esclerocios (Cuadro 20), dado que el 100 % de los esclerocios germinó. El

tratamiento con aceite esencial de T. filifolia redujo la viabilidad en cinco de los diez

aislamientos evaluados de S. rolfsii; con registros en los aislamientos 5, 18, 25, 16 y 20 de 20,

40, 50, 80 y 90 % de reducción en la viabilidad de los esclerocios respectivamente.

55

Cuadro 20. Efecto de los aceites esenciales (AE) de Tagetes al 0.1 % sobre el porcentaje de

viabilidad de esclerocios de Sclerotium rolfsii.

A T3 T4 T5 T6

1 100 100 100 100

4 100 90 100 55

5 80 80 90 100 12 100 100 100 100

16 20 30 * 75 17 100 100 95 100

18 60 100 100 100 20 10 * * 25

25 50 100 100 100

27 100 100 100 75 (A), Aislamientos de S. rolfsii, (T3), T. filifolia (T4), T. foetidissima, (T5), T. lucida, (T6), T. coronopifolia. (*), no produjo esclerocios, por lo que no se eval uó.

El aceite esencial de T. coronopifolia redujo la viabilidad en los aislamientos 4, 16, 20 y 27. T.

foetidissima afectó a los aislamientos 4, 5 y 16; mientras que el aceite esencial de T. lucida

redujo la viabilidad de los asilamientos 5 y 17.

Los aislamientos más susceptibles a los tratamientos con aceites esenciales de Tagetes fueron

el 5, 16 y 20.

56

6.3. Monilia fructicola

6.3.1. Crecimiento micelial

En la evaluación de los aceites esenciales (Cuadro 21) sobre el crecimiento micelial de M.

fructicola, las cinco especies de Tagetes, presentaron tasas de crecimiento significativamente

menores que en los tratamientos testigo y Tween. Los aceites esenciales al 0.1 % inhiben el

crecimiento con valores RRT superiores al 95 % en las especies T. foetidissima, T. lucida, T.

coronopifolia y T. erecta. El tratamiento con el aceite esencial de T. filifolia registró una

reducción del 28 % en la tasa de crecimiento con respecto al testigo.

Cuadro 21. Efecto de los aceites esenciales (AE) de Tagetes al 0.1 % sobre la tasa de crecimiento

micelial (cm2/día) de Monilia fructicola.

Tratamiento Tasa de crecimiento (cm2/día) RRT (%)

Testigo (sin AE) 8.8 ał

Testigo con Tween 20 (0.02 %) 8.4 a 4.5

T. filifolia 6.3 b 28.4 T. foetidissima 0.4 c 95.5

T. lucida 0.2 c 97.7 T. coronopifolia 0.07 c 99.2

T. erecta 0.06 c 99.3 DMS 0.8

łValores seguidos de la misma letra en la columna no difieren estadísticamente.

(RRT), porcentaje de reducción de la tasa de crecimiento respecto al testigo. (F=578.2, gl=41, p <0.0001).

En los tratamientos con extractos acuosos de Tagetes el tratamiento de T. lucida inhibió por

completo el crecimiento (efecto fungicida), por lo que no se incluyó en el análisis estadístico

(Cuadro 22). Solo el tratamiento con extractos acuosos de T. coronopifolia presentó diferencias

estadísticamente significativas con respecto al testigo, con una reducción del 44 % en la tasa de

crecimiento.

57

Cuadro 22. Efecto de los extractos acuosos de Tagetes al 2 % sobre la tasa de crecimiento

micelial (cm2/día) de Monilia fructicola.

Tratamiento Tasa de crecimiento (cm2/día) RRT (%)

T. erecta 8.8 ał -4.8*

T. foetidissima 8.5 a -1.2 Testigo (sin EA) 8.4 a T. filifolia 8.1 a 3.6 T. coronopifolia 4.7 b 44.0 DMS 0.9

łValores seguidos de la misma letra en la columna no difieren estadísticamente.

(F=61.1, gl=29, p <0.0001).

(RRT), porcentaje de reducción de la tasa de crecimiento respecto al testigo. * Resultado con signo negativo, significa efecto estimulatorio en la tasa de crecimiento .

6.3.2. Esporulación

Los tratamientos con aceites esenciales al 0.1 % de las cinco especies de Tagetes inhibieron

completamente la esporulación de M. fructicola, así como con los tratamientos con extractos

acuosos al 2 % de las especies de T. foetidissima, T. lucida y T. erecta. Por lo que, no se

incluyeron en el análisis estadístico ni en el Cuadro 23.

Cuadro 23. Efecto de los extractos acuosos de Tagetes al 2 % sobre la esporulación (esporas/mL) de Monilia fructicola.

Tratamiento Esporas/mL n

T. filifolia 2.34 X106 ał 4

T. coronopifolia 3.50 X105 b 4 Testigo (sin EA) 1.55 X105 c 4 Testigo con Tween 20 (0.02 %) 1.48 X105 c 4 DMS 1.94x 105

łValores seguidos de la misma letra en la columna no difieren estadísticamente. (F=6.18, gl=35, p <0.0001).

58

Por el contrario, en los tratamientos con extractos acuosos al 2 % de T. filifolia y T. coronopifolia

presentó una mayor esporulación respecto al tratamiento testigo, es decir hubo un efecto

estimulatorio (Cuadro 23).

6.3.3. Germinación

En el Cuadro 24, no se incluyeron las especies donde hubo inhibición total de la esporulación.

La germinación desde las primeras horas evaluadas, con el tratamiento con extractos acuosos

de T. coronopifolia, fue significativamente mayor con respecto al testigo, pero sin diferencias

respecto al testigo con Tween. A las cuatro horas, se registró un 100 % de germinación con el

tratamiento con extractos acuosos de T. coronopifolia, y en un 87 % en T. filifolia; mientras que

en el testigo y con el tratamiento con Tween, la germinación fue alrededor del 40 y 60 %, a

partir de las 6 horas de evaluación, la germinación en todos los tratamientos es

aproximadamente del 90 %.

Cuadro 24. Efecto de los extractos acuosos de Tagetes al 2 % sobre el porcentaje de

germinación de Monilia fructicola.

Tratamiento Germinación (%) n

2 hrs 4 hrs 6 hrs 8 hrs

T. coronopifolia 60 ał 100 a 100 a 100 a 4

T. filifolia 41 b 87 a 90 b 100 a 4 Testigo con Tween 20 (0.02 %) 36 ab 64 ab 86 b 100 a 4 Testigo (sin EA) 30 b 36 b 92 ab 97 b 4 DMS 4.2 4.2 4.2 1.04

łValores seguidos de la misma letra en la columna no difieren estadísticamente.

Dos horas (F=4.7, gl=15, p= 0.0212). Cuatro horas (F=7.7, gl=15, p= 0.0039). Seis horas (F=8.5, gl=15, p= 0.0027). Ocho horas (F=49, gl=15, p <0.0001).

59

Cuadro 25. Resumen de los efectos observados de los aceites esenciales y extractos acuosos de

las especies de Tagetes sobre los organismos modelo.

Modelo Efecto sobre: T. filifolia

T. foetidissima

T. lucida

T. coronopifolia

T. erecta

AE EA AE EA AE EA AE EA AE EA

Copitarsia

decolora

Larvas

Peso -- * X * X * -- * -- *

Mortalidad X * X * X * -- * -- *

Duración X * X * X * X * X *

Pupas

Peso -- * -- * -- * -- * -- *

Mortalidad

(>30%)

X * X * -- * X * X *

Duración X * X * X * X * X *

Adultos

Fecundidad (menor)

X * -- * -- * X * X *

Fertilidad

(<50%)

-- * X * -- * -- * -- *

Sclerotium rolfsii

Crecimiento

micelial

X X X X X X X X X X

Esclerocios X X X X X X X X X X

Viabilidad X -- X -- X X X -- -- --

Monilia fructicola

Crecimiento micelial

X -- X -- X X X X X --

Esporulación X X X X X X X X X X

Germinación * -- * X * X * -- * X

AE Aceite esencial, EA Extracto acuoso. (X) con efecto significativo, (--) sin efecto, (*) No se evaluó.

En el Cuadro 25 se sintetizan todos los resultados obtenidos, la especie T. filifolia tuvo efecto

insecticida en forma de aceite esencial y efecto fungistático, como extracto acuoso y aceite

esencial. La especie T. lucida, presentó efecto fungicida en forma de aceite esencial y extracto

acuoso, las especies T. foetidissima, T. coronopifolia y T. erecta presentaron efectos

insectistáticos y fungicidas en forma de extractos acuosos y aceites esenciales.

60

7. DISCUSIÓN

7.1. Copitarsia decolora

La supervivencia de las larvas de C. decolora fue afectada por los tratamientos con aceites

esenciales de las especies de Tagetes y se redujo la duración de las etapas larval y pupal. Esto

pudo ser el resultado de la exposición prolongada a los metabolitos presentes en los aceites

esenciales, que pudieron haber causado un efecto toxico crónico. Como lo menciona Pavela et

al. (2008), el tiempo de desarrollo de los insectos puede acortarse o alargarse, dependiendo de

la naturaleza química de la sustancia involucrada y de la cantidad ingerida cuando se realizan

bioensayos que involucran la ingestión de las sustancias.

Sun et al. (2000) sugieren que algunos compuestos de origen vegetal actúan como reguladores

de crecimiento en los insectos, interfieren en procesos fisiológicos, y por lo tanto en el

desarrollo ya sea acortándolo o retardándolo y puede que la madurez y funcionalidad se vea

afectada. Al respecto, Foster y Howard (1999), mencionan que un desarrollo limitado en los

insectos puede influir negativamente en sus etapas posteriores de vida, como en la etapa

reproductiva, atracción de la pareja, copula, fecundidad y fertilidad.

Los principales componentes químicos en los aceites esenciales de Tagetes son terpenos

(Bakkali et al. 2008), por lo que probablemente los efectos en el desarrollo de C. decolora se

deban a estos compuestos actúen bloqueando los receptores de ecdisona (hormona de la

muda), la cual tiene una estructura parecida al terpeno (Rodríguez, 2003). Sin embargo, aunque

no se observaron deformaciones en larvas o pupas de C. decolora no se descarta que hubiera

otros efectos nocivos no apreciados.

61

La duración del estadio larval y pupal registrados en los tratamientos incluidos el control y el

Tween coinciden con los reportados por Moreno y Serna (2006), quienes registran una duración

del estadio larval entre 17 y 31 días, mientras que la etapa pupal es entre 15 y 21 días. Sin

embargo con los tratamientos de Tagetes se registraron diferencias estadísticamente

significativas respecto a los tratamientos testigo y testigo con Tween, fueron más cortos los

estadíos larval y pupal en los tratamientos con aceites esenciales de Tagetes.

La reducción en la fecundidad y fertilidad pudiera estar relacionada a un desarrollo anormal del

sistema reproductivo en los insectos tratados, al estar en contacto e ingiriendo los metabolitos

presentes en los aceites esenciales durante todo su desarrollo. Como lo mencionan Smagghe et

al. (1996), el tebufenozido, un regulador sintético de crecimiento afectó en he mbras de

lepidópteros, la ovulación y la oviposición a través de la reabsorción de las ovariolas. La

estructura química del tebufenozido tiene dos anillos aromáticos y en las sustancias de

naturaleza terpénica cuentan solo con un anillo aromático, por lo que puede que no actúen de

manera similar.

El efecto de reducción o alargamiento en el tiempo de desarrollo de un insecto por parte de las

sustancias vegetales, es un efecto biológico deseable, ya que impediría por ejemplo que los

insectos alcancen la madurez reproductiva al mismo tiempo y por consiguiente se afectaría su

éxito reproductivo; por ejemplo, teniendo una menor cantidad de hembras por macho en edad

reproductiva. Una sustancia vegetal con este tipo de efecto biológico podría incorporarse en un

programa de manejo integrado de plagas, por las características de los productos naturales que

son bioracionales, altamente selectivos y generalmente menos tóxicos que los insecticidas

convencionales (Sun et al., 2000).

62

Por otra parte los resultados aquí obtenidos indican la potencialidad de T. filifolia como

insecticida vegetal, quedando pendiente de realizar ensayos de campo para el control de C.

decolora.

7.2. Sclerotium rolfsii

El efecto fungicida de los tratamientos con aceite esencial de T. filifolia y el extracto acuoso de

T. lucida sobre los diez aislamientos de S. rolfsii coinciden con los reportados por Montes-

Belmont et al (2006 b), quienes reportan actividad fungicida de otras especies vegetales, tales

como epazote, clavo y canela, pero ellos probaron la concentración de 5 % sobre S. rolfsii.

También mencionan actividad fungistática de T. erecta en el crecimiento micelial, y

estimulatoria en la producción de esclerocios, resultados que concuerdan con este trabajo.

Aunque el origen de los materiales de Tagetes utilizados en este trabajo es distinto al de los

autores mencionados, por lo que se puede inferir que también la composición química es

distinta y pudiera explicar cómo plantas de la misma especie presentan variedad en las

respuestas en la interacción con el patógeno.

En el trabajo de Montes y Prados, (2006), mencionan que el polvo de la inflorescencia de T.

erecta a una concentración de 5 %, presenta efecto de inhibición en el crecimiento de S.

cepivorum.

Zygadlo et al. (1994), reportan inhibición en el crecimiento micelial de S. cepivorum,

Colletotrichum coccodes y Alternaria solani a concentraciones de 0.2, 0.3 y 0.5 %, de aceite

esencial de T. filifolia.

63

Montes-Belmont et al., (2006 a) reportan que metabolitos como el carvacrol y eugenol, tienen

actividad fungicida a bajas concentraciones; por lo que, el efecto fungicida de T. lucida

observado en el presente trabajo pudiera estar dado por el contenido de metil eugenol. Montes

y Prados (2006) mencionan que en Pimienta dioica y Syzgium aromaticum el eugenol es

responsable de la inhibición del crecimiento micelial de S. cepivorum, sustancia que

previamente ha sido reportada como inhibidora de procesos enzimáticos (Pepeljnjak et al.

2003).

Aunque se ha demostrado ya la actividad antifúngica de los aceites esenciales, el mecanismo de

acción no está bien documentado, Romagnoli et al. (2005), revisaron en el microscopio

electrónico de barrido estructuras de B. cinerea tratadas con aceite esencial de T. patula, y

observaron alteraciones en la membrana, degeneración mitocondrial, degeneración y

rompimiento de la pared celular, disolución parcial del núcleo y retículo endoplásmico.

La naturaleza lipofílica de los compuestos volátiles presentes en las especies de Tagetes sugiere

que estos compuestos pudieron ser absorbidos por las hifas de S. rolfsii, penetraron en la

membrana plasmática del patógeno y modificaron la síntesis de enzimas requeridas en sus

procesos de desarrollo del patógeno como sugieren Rasooli et al. (2006).

La reducción en la producción de esclerocios fue reportada previamente por Montes y Prados

en 2006, en donde mencionan que polvos de Bougainvillea spectabilis redujeron la producción

de esclerocios de S. cepivorum. Sin embargo, también mencionan un efecto contrario con los

tratamientos de polvos de Medicago sativa, Petroselinium crispum, Piper nigrum y Origanum

vulgare, reportan un incremento en la producción de esclerocios con respecto al tratamiento

testigo.

64

La reducción o inhibición de la producción de esclerocios con los tratamientos con Tagetes es

una característica relevante, ya que previamente se ha reportado por Soylu et al. (2007), que

una reducción en la producción de esclerocios disminuye significativamente la fuente de

inóculo del patógeno para el desarrollo de la enfermedad.

Con respecto al efecto de la reducción en la viabilidad de los esclerocios tratados con los aceites

esenciales Dorman et al. (2000) e Inouye et al. (2000), mencionan que los efectos biológicos

diferentes se deben a la naturaleza de los extractos (aceites esenciales y extractos acuosos). Los

aceites esenciales además de terpenos contienen compuestos fenólicos y aldehídos, que

presentan efectos inhibitorios, mientras que compuestos como alcohol, cetona y éter

presentan una menor actividad biológica. Los autores siguieren que dicha actividad biológica

puede ser el resultados de las propiedades físicas y químicas (solubilidad y volatilidad) de las

sustancia y de la susceptibilidad del patógeno.

La variabilidad genética y de origen de los aislamientos de S. rolfsii (Flores-Moctezuma et al.

2006) y en la composición de los aceites esenciales y extractos acuosos de las diferentes

especies de Tagetes son las principales causas de la variedad de respuestas a los tratamientos,

con diferencias entre los tratamientos, entre aislamientos y en la interacción tratamientos –

aislamientos.

El tratamiento más destacado fue el extracto acuoso de T. lucida que inhibió al 100 % el

crecimiento micelial y esto puede estar relacionado con un mayor número de metabolitos con

acción fungicida (10) en comparación a las otras especies de Tagetes en las que se conocen este

tipo de compuestos (Cuadro 2).

65

7.3. Monilia fructicola

El efecto fungicida del extracto acuoso de T. lucida sobre M. fructicola, puede estar relacionado

con el contenido de metil eugenol que esta reportado como inhibidor de procesos enzimáticos

que interfieren en el desarrollo del patógeno como ha sido reportado por Pepeljnjak et al.

2003.

En los demás tratamientos con aceites esenciales se registró crecimiento micelial, pero no hubo

producción de esporas, al igual que con los tratamientos con extractos acuosos de T.

foetidissima y T. erecta. Al respecto Bravo et al. (1998) y Montes, (1997), mencionan que la

interacción de las sustancias y el patógeno genera una gran variedad de respuestas. Algunos

extractos pueden ser inhibidores para un hongo y estimulantes para otro, o en un mismo

patógeno, inhibir en una etapa de crecimiento y en otra puede ser estimulatorio, como ocurrió

con los tratamientos con extractos acuosos de T. filifolia y T. coronopifolia, en donde se

produjeron más esporas que en el tratamiento testigo y hubo una germinación más rápida.

Compuestos como el geraniol, eugenol, timol, borneol, linalol, anetol, citronelol y citral han sido

reportados con efectos fungicidas y fungistáticos (Cuadro 2), algunos de estos compuestos

están presentes en especies de Tagetes, principalmente T. minuta, T. filifolia, T. foetidissima y

T. lucida (Cuadro 2) de ahí que T. filifolia y T. lucida presentaron la mayor actividad biológica en

los dos patógenos utilizados como modelos de estudio en el presente trabajo.

Las concentraciones de aceites esenciales y extractos acuosos evaluadas permiten pensar en

experimentar en trabajos posteriores con combinaciones de los mejores tratamientos , ya que

para extractos acuosos con otras especies vegetales y de Tagetes reportan concentraciones

superiores al 5 %.

66

8. CONCLUSIONES

Los aceites esenciales de Tagetes reducen el desarrollo de C. decolora y disminuyen su

fecundidad y fertilidad, el aceite esencial de T. filifolia al 0.1 % fue tóxico de C. decolora al

causar el 100 % de mortalidad de la población tratada.

El efecto de los aceites esenciales en el crecimiento micelial de S. rolfsii fue fungistático. El

tratamiento con extractos acuosos de T. lucida que presentó efecto fungicida, no se produjo

crecimiento micelial ni formación de esclerocios en los aislamientos de S. rolfsii evaluados.

Los extractos acuosos de las cinco especies de Tagetes inhibieron completamente la producción

de esclerocios de manera selectiva en los dos aislamientos de S. rolfsii. Los extractos acuosos

de T. filifolia y T. coronopifolia además inhibieron la producción de esclerocios en dos

aislamientos de S. rolfsii, respectivamente. Los extractos acuosos de T. erecta estimularon la

producción de esclerocios en tres aislamientos de S. rolfsii.

En la viabilidad de los esclerocios de S. rolfsii, también hubo un efecto selectivo, el aceite

esencial de T. filifolia redujo la viabilidad en cinco aislamientos; el aceite esencial de T.

coronopifolia redujo la viabilidad en cuatro aislamientos; el aceite esencial de T. foetidissima

redujo la viabilidad en tres asilamientos, mientras que el aceite esencial de T. lucida redujo la

viabilidad de los esclerocios en dos aislamientos.

Los extractos acuosos de las cinco especies de Tagetes no tuvieron efecto en la viabilidad de los

esclerocios de S. rolfsii, tampoco el tratamiento con aceite esencial de T. erecta.

El extracto acuoso de T. lucida presento efecto fungicida en M. fructicola.

67

Los aceites esenciales de las cinco especies de Tagetes tuvieron efecto fungistático en el

crecimiento de M. fructicola e inhibieron la esporulación.

Los extractos acuosos de T. foetidissima y T. erecta no tuvieron efecto en la inhibición del

crecimiento micelial de M. fructicola, pero inhibieron su esporulación.

El extracto acuoso de T. filifolia no tuvo efecto en la inhibición del crecimiento micelial de M.

fructicola, pero estimuló la esporulación y germinación.

El extracto acuoso de T. coronopifolia tuvo efecto en la inhibición del crecimiento micelial de

M. fructicola, pero estimuló la esporulación y germinación.

68

9. LITERATURA CITADA

Abad, M. J., Bermejo, P., Palomino, S. S., Chiriboga, X. y Carrasco, L. 1999. Antiviral activity of

some South American medicinal plants. Phytotherapy Research. 13: 142-146.

Abdala, L. 1999. Flavonoids in Tagetes coronopifolia Wild (Asteraceae). Acta Horticulturae

(ISHS) 501: 219-222.

Acatitla, T. C., Bautista M. N., Carrillo S. J. L., Cibrián, T. J., Del Rio G. S. L., Osorio C. J., Sánchez

A. H., Suarez V. A. D. y Torres N. R. A. 2003. El gusano del corazón de la col, Copitarsia

decolora. Biología, Taxonomía y Ecología. Colegio de Postgraduados. Montecillos. 30 pp.

Angulo. A. O., y T. Weigert G. 1975. Estados inmaduros de lepidópteros noctuidos de

importancia económica en Chile y claves para su determinación (Lepidóptera:

Noctuidae). Sociedad de Biología de Concepción, publicación especial No. 2. Chile. 153

p.

Anónimo. 1938. Oil of Tagetes lucida Cav. Perfums France 16: 28 (From NAPRALERT Database).

Aycock, R. 1966. Stem rot and other diseases caused by Sclerotium rolfsii. North Caroline

Agricultural Experimental Station Technical Bulletin No. 174. 202 p.

Bakkali F., Averbeck, S., Averbeck, D. y Idaoma. M. 2008. Biological effects of essential oils. Food

and Chemical Toxicology. 46: 446–475.

Bautista M., N. 1992. Principales especies nocivas del orden Lepidóptera. In: Manejo

Fitosanitario de las Hortalizas en México. Anaya R., S; N. Bautista M. y B. Domínguez R.

(eds). Centro de Entomología y Acarología. Colegio de Posgraduados. Montecillo,

México. p. 124-125.

69

Bengtsson, M. V., Heijne, B., Hockenhull, J., DeJong, P. F., Paske, K., Pedersen, H. L. y Wulff

Ednar, G. 2007. New composition for control of foliar diseases. International application

published under the patent cooperation treaty. International Publication Number WO

2007/139382 AZ, 58 p.

Bicchi, C., Fresia M., Rubiolo P., Monti D., Franz C., y Goehler I. 1997. Constituents of Tagetes

lucida Cav. ssp. lucida essential oil. Flavour and Fragrance Journal 12 (1): 47-52.

Bravo, L. L., Bermúdez, T. K. y Montes B. R. 1998. Inhibición del crecimiento micelial y

esporulación de Fusarium moniliforme Sheld., mediante aceites esenciales vegetales y

algunos de sus componentes químicos. Revista Mexicana de Fitopatología. 16:18-23.

Broadhurst, P. G. 1995. Seasonal activity, host range and distribution of Sclerotium rolfsii in

New Zealand. http://www.hornet.co.nz/nzpps/proceedings/95/95.

Calderón y Rzedowski, 2001. Flora fanerogámica del Valle de México. 2a. ed. Instituto de

Ecología, A. C. y Comisión Nacional para el Conocimiento y Uso de la Biodiversidad,

Pátzcuaro (Michoacán). p 1406.

Camarillo D. R. G., Serrato C. M. A., y Barajas P. J. S. 2008 Efecto del aceite esencial de Tagetes

lucida Cav. contra araña roja (Tetranychus sp). XI Congreso Internacional en Ciencias

Agrícolas. Mexicali, Baja California, 23 y 24 de Octubre.

Camarillo D. R., G.; Ortega-Arenas, L. D.; Serrato-Cruz, M. A.; Rodríguez-Hernández, C. y Barajas-

Pérez, J. S. 2007. Toxicidad del anisillo (Tagetes filifolia Lag.) en moscas blancas

(Trialeurodes vaporariorum West.) en invernadero. Folia Entomología Mexicana Vol. 6

(2): 1038-1043.

70

Castrejón-Gómez. V. R., Cibrián T. J., Romero N, J. y Camino L. M. 2000. Mating frequency in

wild females of Copitarsia consueta (Lepidoptera: Noctuidae). Florida Entomologist. 83:

374-376.

CESAVEP. 2006. Manejo integrado del cultivo de durazno (Prunus persiceae). Comité Estatal de

Sanidad Vegetal de Puebla. 1:1-33 p.

Céspedes C. l., J. G. Ávila, A. Martínez, B. Serrato, J. C. Calderón-Mujica, y R. Salgado-Garciglia.

2006. Antifungal and antibacterial activities of mexican tarragon (Tagetes lucida).

Journal of Agricultural and Food Chemistry 54: 3521-3527.

Choi, W. I., E. H. Lee, B. R. Choi, H. M. Park y Ahn Y. J. 2003. Toxicity of plant essential oils to

Trialeurodes vaporariorum (Homoptera: Aleyrodidae). Journal of Economic Entomology.

96 (5): 1479-1484.

Cicció J. F. 2004. A source of almost pure methyl chavicol: volatile oil from the aerial parts of

Tagetes lucida (Asteraceae) cultivated in Costa Rica. Revista de Biología Tropical 52 (4):

853-857.

Cilliers, A. J., Pretorius Z. A. y Van Wyk P. S. 2003. Integrated Control of Sclerotium rolfsii on

Groundnut in South Africa. Journal of Phytopathology. 151: 249–258.

Cubillo, D., G. Sanabria y L. Hilje. 1999. Evaluación de repelencia y mortalidad causada por

insecticidas comerciales y extractos vegetales sobre Bemisia tabaci. Manejo Integrado

de Plagas, 53: 65-72.

Dorman, H.J.D., Figueiredo, A.C., Barroso, J.G. y Deans, S.G. 2000. In vitro evaluation of

antioxidant activity of essential oils and their components. Flavour and Fragrance

Journal. 15: 12–16.

71

Duke, J. 2009. USDA Phytochemical and Ethnobotanical databases. http://www.ars-

grin.gov/duke/Plants.html. (Octubre de 2009).

Farr, D. F., Bills G. F., Chamurris G. P. y Rossman, A. Y. 1989. Fungi on plants and plant products

in the United States. American. Phytopathological Society. St. Paul. M. N.

Fengshou L., Sihong W., Dacheng J., Qifan Y., Xifeng L., y Jingxi N. 1999. Analysis of composition

of volatile flower oil of yellow Tagetes erecta in Yanbian region by GC/MS. Yanbian

University Journal of Natural Sciences. 25(4): 262–265.

Feo V., Porta G., Soria E. U., Soria R. U., Senatore F., De Feo V., 1998. Composition of the

essential oil of Tagetes filifolia Lag. Flavour and Fragrance Journal 13 (3): 145-147.

Flores-Moctezuma H. E., Montes-Belmont R., Jiménez-Pérez A., Nava-Juárez R. 2006.

Pathogenic diversity of Sclerotium rolfsii isolates from Mexico, and potential control of

southern blight through solarization and organic amendments. Crop Protection. 25: 108-

118.

Flores-Moctezuma, H. E., Montes-Belmont, R., Jiménez-Pérez A., y Nava-Juárez, R. 2006.

Pathogenic diversity of Sclerotium rolfsii isolates from México, and potential control of

southern blight though solarization and organic amendments. Crop Protection. 25: 195-

201.

Foster, S. P., y Howard, A. J. 1999. The effects of mating, age at mating, and plant stimuli, on the

lifetime fecundity and fertility of the generalist herbivore Epiphyas postvittana.

Entomologia Experimentalis et Applicata. 91: 287–295.

72

Fuentes Q. L. S. y Gómez, S. 2003. Biología y manejo de plagas en hortalizas. En Producción

ecológica certificada de hortalizas de clima frio. Colombia. 1: 73-88 p.

García-Álvarez, M. 1976. Primer catalogo de enfermedades de plantas mexicanas. Fotófilo. 71:

169.

González, V. E. 2004. Efecto de Fitoextractos vegetales en el control de Sclerotium rolfsii en

cebolla (Allium cepa L.). Tesis de Licenciatura. 69 págs. Universidad Veracruzana,

México.

Grainge, M. y Ahmed, S 1988a. Handbook of plants with pest control properties. John Willey

and Sons. New York. 470 p.

Gurrola H. L. E, L. Macias C. h; Vázquez M. y Rodríguez G. R. 1996 Acción de extractos

metanólicos de Plantas en el desarrollo de Sclerotium rolfsii y Phythium sp en el

laboratorio. Memorias del XXIII Congreso Nacional de la sociedad Mexicana de

Fitopatología. Guadalajara, Jalisco, México 24-27 de Septiembre.

Gutiérrez, O., y R. MacGregor. 1983. Guía de insectos nocivos para la agricultura en México.

Editorial Alambra Mexicana, S. A. México, D.F. 29 p.

Guzmán, A. y Manjarréz A. 1962. Estudio del aceite esencial de Tagetes florida. Instituto de

Química de la Universidad Nacional Autónoma de México. 14: 48-54.

Hagan, A.K. y Olive M. 1999 Assessment of new fungicides for the control of southern blight on

aucaba. Journal Environmental Horticulture. 17: 73-75.

Hernández-Hernández, J., Becerra-Leor, N. y Arcos-Cavazos, G. 1991. Identificación de daños

causados por fitopatógenos en el cultivo de chile jalapeño. Resumen 25. Memorias,

Congreso Nacional de Fitopatología. Puebla, Puebla, México.

73

Hethelyi E., Tetenyi P., Danos B., y Koczka I. 1998. GC/MS Investigation of Essential Oils. ISHS

Acta Horticulturae. 306 p.

Heywood V. H., Harborne J. B., y Turner B. L. 1977. The Biology and Chemistry of the

Compositae. Academic Press, London. 1188 p.

Hilje, L., y Mora G. A. 2007. Promissory botanical repellents/deterrents for managing two key

tropical insect pests, the whitefly Bemisia tabaci and the mahogany shootborer

Hypsipyla grandella. Advances in Phytomedicine. 3: 379-403.

Hoynes C. D., Lewis J. A., Lumsden R. D. y Bean G. A. 1999. Biological control agents in

combination with fertilization or fumigation to reduce sclerotial viability of Sclerotium

rolfsii and disease of snap beans in the Greenhouse. Journal of Phytopathology. 147:

175-182.

Inouye, S., Tsuruoka, T., Watanabe, M., Takeo, K., Akao, M., Nishiyama, Y. y Yamaguchi, H.

2000. Inhibitory effect of essential oils on apical growth of Aspergillus fumigates by

vapour contact. Mycoses. 43: 17–23.

Isman, M. B. 2000. Plant essential oils for pest and disease management. Crop Protection 19:

603-608.

Jenkins, S.F. y Averre, C. W. 1986. Problems and progress in integrated control of southern

blight of vegetables. Plant Disease 70: 614-619.

Karousou, D., Koureas, D. N. y Kokkini, S. 2005. Essential oil composition is related to the

naturals habitats: Coridothymus capitatus and Satureja thymbra in natura 2000 sites of

Crete. Phytochemistry 66: 2668 – 2673.

74

Kaul, P. N., A. K. Bhattacharya, B. R. Rajeswara, K. V. Syamasundar y S. Ramesh. 2005. Essential

oil composition of Tagetes minuta L. fruits. Journal Essential Oil Research. 17:184-185.

Koon-Hui W, Cerruti R. H, y Ploeg, A. 2007. Protecting crops from nematode pests: using

marigold as an alternative to chemical nematicides. Plant Disease. 35: 6.

Krishna A., S. Kumar, G. R. Mallavarapu y S. Ramesh. 2004. Composition of the essential oils of

the leaves and flowers of Tagetes erecta L. Journal Essential Oil Research. 16:520-522.

Lamery, P. 2005. Use of vegetable oil as an adjuvant for substances having a fungicide,

bactericide, insecticide and herbicide activity. International application published by the

World Intellectual Property Organization under number: WO03/086073.

Lara-cambil A., y García-Pareja P. 2006. Use of extracts and compounds of allium-genus plants

as preservatives in the food and agri-food industries. esp@cenetdatabase. Worldwide.

A1:11-15.

Larez, C. R. Laynez A. J y Marín de C. N. 1996. La mancha zonada de la pimienta (Pipper nigrum)

causada por Sclerotium rolfsii, en Caripito, Estado Monogas, Venezuela. Revista de

Fitopatología vol. 9 pp.10 –12.

López, G. L. y Fucikovsky, L. 1990. Interacción de hongos fitopatógenos en cacahuate y

caracterización de una bacteria antagónica. Resumen 21. Memorias. Congreso Nacional

de Fitopatología. Culiacán Sinaloa, México.

López-Salinas, E. Becerra-Leor, N., Cano-Reyes, O y López-Galván V. 2002. Detección de líneas y

variedades de frijol (Phaseolus vulgaris L.) con resistencia múltiple a enfermedades en el

trópico mexicano. Revista Mexicana de Fitopatología. 20: 193-199.

75

Macias, A. F. y Galindo C. G. J. 2001. Terpenoides alelopáticos: estructura, actividad y

aplicaciones. En: Anaya A. L., Espinoza G. F. J. y Cruz O. R. (Coordinadores). Relaciones

químicas entre Organismos. Aspectos básicos y perspectivas. Instituto de Ecología. Plaza

Valdés S. A. de C. V. México D.F. 137-161.

Marles, R.J., Hudson J. B., Graham E. A., Soucy-Breau C., Morand P., Compadre R. L., Compadre

C. M., Towers G. H. N., y Arnason J. T. 1992. Structure-activity studies of photoactivated

antiviral and cytotoxic tricyclic thiophenes. Photochemistry and Photobiology. 56:479–

487.

Marotti, M., Piccaglia R., Biavati B. , y Marotti I. 2004. Characterization and yield evaluation of

essential oils from different Tagetes species. Journal Essential Oil Research. 16:440-444.

Martínez, M., 1979. Catálogo de nombres vulgares y científicos de plantas mexicanas. Fondo de

Cultura Económica. México, D.F. 137 p.

Millan C. 2008. Las Plantas: una opción saludable para el control de plagas. Global Greengrants

Fund. Motevideo, Uruguay. 93 pp.

Montes B. R. 1997. Extractos sólidos, acuosos y hexánicos de plantas para el combate de

Aspergillus flavus Link., en maíz. Revista Mexicana de Fitopatología. 15: 26-30.

Montes, B. R., y Prados L. A. M. 2006. Influence of plants extracts on Sclerotium cepivorum

development. Plant Pathology Journal. 5 (3): 373-377.

Montes-Belmont, R. y Flores Moctezuma, H. E. 2007 a. Efecto de metabolitos antifúngicos de

origen vegetal sobre aislamientos de sclerotium rolfsii.. IX Congreso Internacional/XXXIV

Congreso Nacional de la Sociedad Mexicana de Fitopatología, A. C. XIV Congreso de la

Asociación Latinoamericana de Fitopatología. XLVII Annual Meeting of the American

76

Phytopathgological Society-Caribbean Division. Cancún, Quintana Roo, México.

Montes-Belmont, R. y Flores Moctezuma, H. E. 2007 b. Efecto de la combinación de metabolitos

vegetales antifúngicos sobre aislamientos de sclerotium rolfsii. IX Congreso

Internacional/XXXIV Congreso Nacional de la Sociedad Mexicana de Fitopatología, A. C.

XIV Congreso de la Asociación Latinoamericana de Fitopatología. XLVII Annual Meeting

of the American Phytopathgological Society-Caribbean Division. Cancún, Quintana Roo,

México.

Montes-Belmont, R. y Flores Moctezuma, H. E. 2008. Efecto de la aplicación a suelo de

Metabolitos Vegetales Secundarios para el manejo de Sclerotium rolfsii en jitomate. X

Congreso Internacional y XXXV Congreso Nacional de la Sociedad Mexicana de

Fitopatología, A. C. Monterrey, Nuevo León, México.

Montes-Belmont, R., Flores Moctezuma, H. E., y Bravo-Luna L. 2006 b. Respuesta de

Aislamientos de Sclerotium rolfsii a Metabolitos Vegetales Antifúngicos. VIII Congreso

Internacional de Fitopatología, XX XXXIII Congreso Nacional De Fitopatología.

Manzanillo, Colima, México.

Montes-Belmont, R., Nava-Juárez, R., Flores-Moctezuma, H. E. y Mundo-Ocampo, M. 2003.

Hongos y nemátodos en raíces y bulbos de cebolla (Allium cepa L.) en el estado de

Morelos. México. Revista Mexicana de Fitopatología. 21-3.

Montes-Belmont, R., Prados-Ligero A. M. y Melero-Vara J. M. 2006 a. Efecto de extractos

vegetales en el desarrollo micelial y producción de esclerocios de Sclerotium rolfsii. VIII

Congreso Internacional de Fitopatología, XXXIII Congreso Nacional De Fitopatología.

Manzanillo, Colima, México.

77

Moreno, F. O. L., y Serna C. F. J. 2006. Biología de Copitarsia decolora (Lepidóptera: Noctuidae:

Cuculliinae) en flores cultivadas del hibrido comercial de Aistroemaria spp. Revista

Facultad Nacional de Agronomía. Medellín, Colombia. 59 (1): 3257-3270.

Morton, D.J. y Stroube, W.H. 1985. Antagonistic and Stimulatory affects of soil microorganism

upon Sclerotium rolfsii. Phytopathology. 417-420.

Muniain, C., Centurion, R., Careaga, V. P. y Marer, M. S. 2008. Chemical ecology and bioactivity

of triterpene glycosides from the sea cucumber Psolus patagonicus (Dendrochirotida:

Psolidae). Journal of the Marine Biological Association of the United Kingdom. 88 (4):

817-823.

Neher R. T. (1966) Monograph of the genus Tagetes (Compositae). Ph. D. Thesis. Indiana

University. Bloomingtan, Indiana, USA. 306 p.

Ortega, L. D. 2001. Control alternativo de mosca blanca. Folleto técnico. COLPOS, CONACYT y

RAPAM. México. 16 p.

Pawar V. C., y Thaker V. S. 2007. Evaluation of the anti-Fusarium oxysporum f. sp. Cicer and anti-

Alternaria porri effects of some essential oils. World Journal Microbiology and

Biotechnology. 23: 1099-1106.

Pepeljnjak, S., Kosalec I., Kalodera Z., y Kustrac D. 2003. Natural antimycotics from Cratian

Plants. In: Plant Derived Antimycotics. Current trends ant future prespects. Rai and

Mares (eds). Haworth press. Binghamtom. N. Y. USA. Pp 49-79.

Pérez M. A.; Segura A.; García R.; Colinas T.; Pérez M.; Vázquez A. y Navarro H. 2009. Residuos

de plaguicidas organofosforados en cabezuela de brócoli (Brassica oleracea)

determinados por cromatografía de gases. Contaminación Ambiental. 25 (2): 103-110.

78

Pérez-Amador M. C., García J. F., Herrera P J., González L., Márquez C. L. 1994. Essential oils,

anthocyanins and phototoxic compounds in two species of Tagetes (Asteraceae). Phyton

Buenos Aires. 56: 143-146.

Pérez-Laínez, D., García-Mateos, R., San Miguel-Chávez, R., Soto-Hernández, M., Rodríguez-

Pérez, E. y Kike, G. 2008. Bactericidal and fungicidal activities of Calia secundiflora (Ort.)

Yakovler. Zeitschrift fur Naturforschung - Section C Journal of Biosciences . 63 (10):653-

657.

Perich, M. J., Wells, C. W., Bertsch y Tredway K. E. 1994. Toxicity of extracts from three Tagetes

against adults and larvae of yellowfever mosquito and Anopheles stephensi (Diptera:

Culicidae). Journal of Medical Entomology. 31(6):833-837.

Punja, Z.K. 1996 Influence of nitrogen and calcium compounds on development of disease due

to Sclerotium rolfsii in Engelhard, A. W (ed) Management of diseases with macro and

microelements. American Phytopatological Society. St. Paul, Minnesota.

Rai M. y Mares D. 2003. Plant Derived Antimycotics. Current trends ant future prospects.

Haworth press. Binghamtom. N. Y. USA. Pp 587.

Rasooli, I., Rezaei, M.B. y Allameh, A. 2006. Growth inhibition and morphological alterations of

Aspergillus niger by essential oils from Thymus eriocalyx and Thymus x-porlock. Food

Control. 17: 359–364.

Rodríguez, H. C. 2000. Plantas contra Plagas: Potencial práctico del ajo, anona, nim, chile y

tabaco. RAPAM. México. p 133.

Rodríguez, H. C. 2003. Cuantificación de la inhibición de crecimiento en insectos, provocada por

sustancias naturales. En: Tornero, C. M., López, O. J. F. y Aragón G. A. (Eds.). Agricultura,

79

ambiente y desarrollo sustentable. Benemérita Universidad Autónoma de Puebla,

México. p 223-242.

Romagnoli, C., Bruni, R., Andreotti, E., Rai, M.K., Vicentini, C.B. y Mares, D. 2005. Chemical

characterization and antifungal activity of essential oil of capitula from wild Indian

Tagetes patula L. Protoplasma 225: 57–65.

Roman P., R., Vrchotová, N., y Será B. 2008. Growth inhibitory effect of extracts from

Reynoutria sp. Plants against Spodoptera littoralis larvae. Agrociencia 42: 573-584.

Rzedowski, G. C. y Rzedowski J. 2001. Flora fanerogámica del Valle de México. 2a ed. Instituto

de Ecología y Comisión Nacional para el Conocimiento y Uso de la Biodiversidad,

Pátzcuaro, Michoacán, México.

Saldaña, H. M. I., Márquez, M. M., y Ruíz B. P. 1985. Identificación de enfermedades fungosas

del cultivo de papaya (Carica papaya L.) en el estado de Tabasco. Revista Mexicana de

Fitopatología. 3: 14-17.

Saxena, J. y Mathela S. C. 1995. Antifungal activity of new compounds from Nepeta leucophylla

and Nepeta clarkei. App1. Environmental Microbiology. 62: 702-704.

SEMARNAT. 2006. Tagetes lucida. www. semarnat.gob.mx/pfnm/TagetesLucida.html (octubre

2006).

Serrato C. M. A. 2003. Aspectos del cultivo de dos especies de Tagetes productoras de aceites

esenciales. Naturaleza y Desarrollo. 1(1):351-352.

Serrato C. M. A. y Barajas P., J. S. 2006. Poblaciones silvestres de Tagetes filifolia Lag. en el

centro sur de México. Revista Fitotecnia Mexicana. Número Especial. 2: 7-12.

80

Serrato C. M. A., Barajas P., J. S. y Díaz C. 2007. Tagetes filifolia Lag. y T. lucida Cav. de Oaxaca. II

Simposio sobre Biodiversidad de Oaxaca.

Serrato C. M. A., Barajas P., J. S. y Díaz C. F. 2008. Composición del aceite esencial en

germoplasma de Tagetes filifolia Lag. de la región centro-sur de México. Agrociencia. 42:

277-285.

Serrato C. M. A., Barajas P., J. S.; Tena, A. A. y Fernández O., O. L. 2004. Distribución de aceites

esenciales y morfología de una población silvestre de Tagetes foetidissima. En: VII

Congreso Nacional Agronómico 27 y 28 de Abril. Chapingo, México. p 23-27.

Serrato C., M. A. y Barajas P., J. S. 2005. Experiencias sobre el aprovechamiento de dos plantas

mexicanas de Tagetes en el testigo ámplio de diversas plagas en hortalizas. III Encuentro

Mesoamericano y del Caribe de Productores Experimentadores e Investigadores en

Producción Orgánica, 3 al 5 de octubre, Universidad Autónoma Chapingo. Chapingo,

México. p 72.

Serrato, C. M. A., y Quijano M. L. 2003. Usos de algunas especies de Tagetes: Revisión

bibliográfica (1984-1992). Memorias I Simposio Internacional y II Reunión Nacional sobre

Agricultura Sostenibles: Importancia y contribución de la agricultura tradicional. Comisión

de Estudios Ambientales y Centro de Enseñanza, Investigación y Capacitación para el

desarrollo Agrícola Regional (CEICADAR, Puebla), del Colegio de Postgraduados. México. p

228-238.

Siddiqui, M. A., y Alam, M. M. 1988. Toxicity of different plant parts of Tagetes lucida to plant

parasitic nematodes. Indian Journal of Nematology 18 (2): 181-185.

81

Singh, V., B. Singh y Kaul V. K. 2003. Domestication of wild Marigold (Tagetes minuta L.) as a

potential economic crop in Western Himalaya and North Indian plains. Economic Botany

57 (4): 535-544.

Smagghe, G., Salem, H., Tirry, L., y Degheele, D. 1996. Action of a novel ins.ect growth regulator

tebufenozide against different developmental stages of four stored product insects.

Parasitica 52: 61–69.

Soule, J. 1993. Systematics of Tagetes (Asteraceae-Tageteae). Doctoral Thesis. University of

Texas, Austin. 683 p.

Soylu, S., Yigitbas, H., Soylu E.M. y Kurt, S. 2007. Antifungal effects of essential oils from

oregano and fennel on Sclerotinia sclerotiorum. Journal of Applied Microbiology. 103:

1021–1030.

Sun, X., Barrett, B. A. y Biddinger, D. J. 2000. Fecundity and fertility reductions in adult

leafrollers exposed to surfaces treated with the ecdysteroid agonists tebufenozide and

methoxyfenozide. Entomologia Experimentalis et Applicata. 94: 75–83.

Teodorescu, G., Sumedrea, M., Marin, F.C., y Murariu, F. 2009. Use of vegetal extracts in control

of Monilia spp. Acta Horticultura. International Society for Horticultural Science. 825:

363-370. http://www.actahort.org/books/825/825_57.htm. (Octubre de 2009).

Turner B. L., y Nesom G. L. 1993. Biogeography, diversity and endangered or threatened status

of Mexican Asteraceae. In: Biological Diversity of Mexico: Origins and Distribution. T P

Ramamoorty, R Bye, A Lot, J Fa (eds). Oxford University Press, New York, USA. 290-299

p.

82

Turner, B. L. 1977. Fossil history and geography. Pp. 21-40. In: V. Heywood, J. B. Harborne and

B. L. Turner (eds.). Biology and Chemistry of the Compositae. Academic Press. London.

Turner, B. L., 1996. The Comps of Mexico: A systematic account of the family Asteraceae, vol. 6.

Tageteae and Athemideae. Phytologia Memoirs 10.

USDA. 2007. Memorandum of understanding between the United States Department of

Agriculture and the Office of the United States Trade Representative, and the Secretariat

of Agriculture, Livestock, Rural Development, Fisheries and Food and the Secretariat of

Economy of the United Mexican States regarding areas of food and agricultural trade

[web en línea]. Disponible desde Internet: http://www.usda.gov/news/releases/2007/

moumexico.htm [con acceso el 6 de septiembre de 2008].

Vasudevan, P., Kashyap, S., y Sharma S. 1997. Tagetes: a multipurpose plant. Bioresource

Technology. 62(1, 2): 29-35

Vázquez Ma. Del S., Rodríguez. R. G. J. y Silva G. E. 1996. Efecto de extractos de plantas sobre el

crecimiento de hongos fitopatógenos de la raíz. Congreso Nacional de la Sociedad

Mexicana de Fitopatología, Guadalajara, Jalisco, México septiembre 24-27.

Vázquez M., S. T.; Carrillo G., E.; Reyes T., B.; Serrato C., M. A.; Sixtos A.., C.; Nathan J. 2002.

Aceites esenciales de Tagetes filifolia y su efecto larvicida. XIX Congreso Nacional de

Fitogenética. 1 al 5 de Septiembre, Saltillo, Coahuila, México. p 386.

Verpoorte, R. 2000. Secondary metabolism. In: Verpoorte, R. and Alfermann, A. W. (eds.).

Metabolic engineering of plant secondary metabolism. Kluwer Academic Publishers.

Dredrecht, the Netherlands. 1-29.

83

Vila, R., J. Iglesias, S. Canigueral, and J. F. Ciccio. 2000. Essential oil of Tagetes filifolia from

Costa Rica. Ingeniería y Ciencia Química. 19 (1): 13-14.

Villarreal Q., J. A. 2003. Familia Compositae. Tribu Tageteae. Flora del Bajío y de Regiones

Adyacentes. Fascículo 113. Instituto de Ecología A. C. Pátzcuaro, Michoacán. México. 85

p.

Villaseñor Ríos, J. L. y Espinosa García F. J. 1998. Catálogo de malezas de México. Universidad

Nacional Autónoma de México, Consejo Nacional Consultivo Fitosanitario y Fondo de

Cultura Económica, México, D.F.

Zavaleta-Mejía, E., Gómez-Rodríguez, O. 1995. Effect of Tagetes erecta L.-Tomato (Lycopersicon

esculemtun Mill.) intercropping on some tomato pest. Fitopatología. 30:35-45.

Zavaleta-Mejía, E., Gómez-Rodríguez, O., González-Hernández, V. A., Livera-Muñoz, M. y

Cárdenas-Soriano, E. 2003. Allelopathy and microclimatic modification of intercropping

with marigold on tomato early blight disease development. Field Crops Research. 83

(1):27-34.

Zygadlo J., A., Lamarque, A. L., Maestri, D. M., Guzmán, C. A., y Grosso, N. R. 1993.

Composition of the inflorescence oils of some Tagetes species from Argentina. Journal

Essential Oil Research. 5 (6): 679-682.