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ESTUDIO DEL PROTEOMA DE Corynebacterium glutamicum INDUCIDO POR CALOR. APLICACIONES
TAXONÓMICAS EN LA CARACTERIZACIÓN DE CEPAS MICROBIANAS
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CARACTERÍSTICAS GENERALES
Genoma:C. diphtheriae 2.48 MbC. efficiens 3.14 MbC. glutamicum 3.30 Mb
Orden Actinomycetales
Microorganismo típico del suelo
Gram +, con ácidos micólicos en su pared
Bacilos irregulares, con división especial
G+C = 54-56 %
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CORINEBACTERIAS PATÓGENAS
Afecta: tracto respiratorio y piel.
Toxina: nervios y corazón
Tratamiento: antitoxina difterica, penicilina o eritromicina. Vacuna.
C. diphtheriae
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CORINEBACTERIAS PATÓGENAS
Afecta: patas y abdomen
Tratamiento: eliminación de nódulos, prolongados tratamientos con antibióticos.
C. pseudotuberculosis
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CORINEBACTERIAS PATÓGENAS
Afecta: hojas y frutos.
Tratamiento: control de semillas y de transplantes.
C. michiganense
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CORINEBACTERIAS: INTERÉS INDUSTRIAL
Sabor amargo:Phe TyrAsn LeuIle Val
Met His
Sabor dulce:Gly AlaThr ProSer Gln
Umami:GluAsp
Producción aminoácidos:-Farmaceúticos-Aditivos alimenticios:
· Humanos · Animales
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CORINEBACTERIAS: INTERÉS INDUSTRIAL
1957Kinoshita
Micrococcus glutamicus
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CORINEBACTERIAS: INTERÉS INDUSTRIAL
MSG
L-treoninaL-lisina
Otros 100
1990 1996 2000 2001
2000 90
1800 80
1600 70
Ton
elad
as/a
ño (x
1000
) Artículos/año
1400 60
1200 50
1000 40
800 30
600 20
400 10
0200
0
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ACTIVIDAD DE CHAPERONES Y CHAPERONINAS
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CRECIMIENTO C. glutamicum (diferentes temperaturas)
30ºC 37ºC 40ºC 50ºC
0
2
4
6
8
10
12
0 5 10 15 20 25Time (h)
O
D60
0 nm
2xTY +2% Glc
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EXTRACCIÓN DE MUESTRAS
0’ 20’ 40’
40
50
3-4 OD
T (ºC)
t (min)60’ 120’ -150’(30 30 )’ ºC
30
195’(45’ 40ºC)
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ANÁLISIS TRANSCRIPTIONAL (dnaK)dnaK dnaJgrpE hspR
0’ 20’
40’
60’
120’
150’
195’
4.7 kb
1.6 kb
0’ 20’
40’
60’
120’
150’
195’
16S rRNA probe
0’ 20’
40’
60’
120’
150’
195’
4.7 kb
2.8 kb
dnaK probe dnaJ-hspR probe
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ANÁLISIS TRANSCRIPTIONAL (groEL)groES groEL1 groEL2
0’ 20’
40’
60’
120’
150’
195’
0’ 20’
40’
60’
120’
150’
195’
2.3 kb
0’ 20’
40’
60’
120’
150’
195’
1.8 kb
groEL2 probe
16S rRNA probe
groES probe
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ANÁLISIS TRADUCCIONAL
20
30
45
66
97
kDa 0´ 20´ 40´ 60´ 120´ 150´ 195´
DnaKGroEL
DnaK
0´ 20´ 40´ 60´ 120´ 150´ 195´
GroEL
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ANÁLISIS BIDIMENSIONAL (pH 3’0-10’0)
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ANÁLISIS BIDIMENSIONAL (pH 4’0-7’0)
DnaK GrpEGroEL2-1 ClpB
NI
IPpiA
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ANÁLISIS BIDIMENSIONAL (pH 4’5-5’5)
DnaK GroEL2 GroEL1 ClpB PoxB
NI
IPpiA
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TRANSCRIPTOMA vs PROTEOMA
Muffler et al., 2002
50ºC, 7 minutos
Proteína DnaK GrpE GroEL2 GroEL1 DnaJ ClpB E ClpC ClpP1 ClpP2 M sulf red Tio red Glut red PoxB
Ratio 20’6 4’2-14’0 3’2-5’6 - 3’1-5’0 3’9-38’8 3’2 3’1-30’0 5’4 3’7-3’9 3’4-14’8 5’4-5’6 6’2-11’1 -
Proteoma + + + + - + - - - - - - - +
σ
Barreiro et al., 2004
40ºC, 60 minutos
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APLICACIÓN TAXONÓMICA
C. glutamicum 13032B INDUCIDO4’5 5’5
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APLICACIÓN TAXONÓMICA
groES ISCg1 groEL1
CG CA AA CCCG CA AA CC
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Instituto de Biotecnología de LeónINBIOTEC
Grupo de Corinebacterias:
Carlos BarreiroDra. Eva González-Lavado
Mónica BarriusoDr. Juan F. Martín
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ESTUDIO DEL PROTEOMA DE Corynebacterium glutamicum INDUCIDO POR CALOR. APLICACIONES
TAXONÓMICAS EN LA CARACTERIZACIÓN DE CEPAS MICROBIANAS