Proteínas 1

Objetivo:

• Extraer la caseína de la leche y reconocer su naturaleza proteica

Materiales y sustancias:

• Vaso de bohemia • Varilla de vidrio • Mechero • Soporte • Tela metálica • Gradilla • Tubos de ensayo • Termómetro

• Papel de filtro• Leche descremada • Ácido etanoico 2.0 M• Hidróxido de sodio al 10%• Sulfato cúprico al 1%• Ácido nítrico concentrado

Fundamento teórico:• La leche es:

• a) una emulsión de materia grasa (triglicéridos) en un medio acuoso.

• b) una suspensión de materia proteica (caseína, albúmina, globulina) en un medio acuoso.

• c) una solución acuosa de sales minerales y lactosa. Dentro contiene además lecitina, vitaminas, enzimas, nucleótidos y gases disueltos.

Componentes proteicos:

• Caseína: conjunto de proteínas fosforadas. Constituye el 80% de los compuestos nitrogenados.

• Proteínas del lactosuero: albúmina, globulina. Se insolubilizan por acción del calor antes de los 100ºC.

• Proteosas- peptonas: glicoproteínas poco abundantes en la leche.

Caseína • Es una proteína de carácter ácido debido a su

elevada proporción de aminoácidos ácidos (PI = 4.6). La caseína humana es mas rica en cistina y en glúcidos que en la vaca lo que la hace más apropiada para el bebé.

• Reacciona con las bases formando caseinatos utilizados en la industria para la fabricación de colas y adhesivos. Tambien se utilizan en la industria textil.

• Se precipita por acción de los ácidos. Esto puede ocurrir a través de la formación de acido láctico por acción bacteriana sobre la lactosa o mediante el agregado de un ácido hasta alcanzar el pH correspondiente a su punto isoeléctrico. La precipitación puede producirse por acción enzimática de la quimiotripsina.

Ensayos de Biuret y Xantoproteico

• Permiten determinar el carácter proteico de la caseína. El ensayo de Biuret muestra la presencia de enlaces peptídicos.

• El Xantoproteico identifica la presencia de restos aromáticos, en particular el grupo fenolico de la tirosina.

Procedimiento: 1ra parte Extracción

• 1) Coloque aproximadamente 25ml de leche descremada en un vaso de bohemia.

• 2) Caliente hasta aproximadamente 40ºC agitando con varilla de vidrio.

• 3) Adicione ácido etanoico 2.0M (gota a gota) agitando en forma continua hasta coagulación total.

• 4) Separe el coágulo de caseína del suero mediante filtración.

• 5) Seque cuidadosamente la caseína con la ayuda del papel de filtro.

• 6) Separe dos porciones del sólido obtenido de aproximadamente de 1 cm3 y colóquelas en dos tubos de ensayo.

2da parte: Caracterización

• a) Reacción de Biuret: Agregue sobre la caseína de uno de los tubos 20 gotas de NaOH al 10%. Luego agregue 2 gotas de solución de CuSO4 al 1%.

• b) Reacción Xantoproteica: Agregue sobre la caseína del segundo tubo 10 gotas de HNO3 concentrado.

TUBO ENSAYO OBSERVACIONES

1 Biuret Color Violeta

2 Xantoproteico Color Amarillo

Biuret Xantoproteico

Luego tomamos ciertas muestras y las hicimos reaccionar; estos fueron los

resultados obtenidos:

Muestra Biuret Xantoproteica

Caseína + +

Ovoalbúmina + +

Aspartamo - -

Gelatina + -

Glicina - -

Reacción de Biuret

1 2 3 4 5

Reacción de Biuret:

• 1- Caseína

• 2- Ovoalbúmina

• 3- Gelatina

• 4- Aspartamo

• 5- Glicina

Reacción Xantoproteica

1 2 3 4 5

Reacción Xantoproteica:

• 1- Glicina

• 2- Aspartamo

• 3- Gelatina

• 4- Ovoalbúmina

• 5- Caseína

Proteínas 2

Objetivos:

• Demostrar que mediante diálisis, las sales atraviesan la membrana y las proteínas quedan dentro.

Materiales:

• Dializador

• Gelatina + NaCl en solución acuosa

• Vaso de Bohemia

• NaOH al 10%

• CuSO4 al 1%

• AgNo3

PROTEÍNANaCl

Procedimiento:

• Coloque la solución acuosa de gelatina + NaCl dentro del dializador

• Luego de un tiempo, para comprobar que la dialización se realizó, tomar 2 muestras de la solución del interior del dializador y 2 muestras de la solución exterior.

• Hacer reaccionar una de las muestras del interior y una del exterior con Biuret; y, por consiguiente, las dos muestras restantes con AgNO3

Los resultados obtenidos son:

Muestra Biuret AgNO3

Interior + -

Exterior - +

EXTERIOR INTERIOR

CONCLUSIÓN:

• Si bien en la muestra del interior también dio positiva con nitrato de plata, la muestra del exterior dio negativa con Biuret; por lo tanto se demuestra que las proteínas quedaron contenidas dentro del dializador y que el cloruro de sodio sí atravesó la membrana.

6to M1

• Katerin Sinich

• Mariana Salaberry

• Douglas Arrillaga

• Viviana Bennasar