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8/16/2019 Practica 6 Recolección de Ovocitos e.e.pdf
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Prácticas de Biotecnologı́a Animal, XIX Semestre, Práctica 6, 2015
RECUPERACIÓN DE ÓVULOS DE OVARIOS DE
VACUNOS
Carlos Francisco Muñoz Salas
ResumenLa recolección de óvulos es una de las técnicas básicas en la biotecnologı́a reproductiva. La capacidad degenerar embriones in vitro nace a partir de poder obtener los ovulos y los espermatozoides en buen estado.Para obtener los óvulos se debieron utilizar ovarios recolectados en el camal y dos técnicas diferentes: aspirado
y disección. Luego también se evaluó el estado de los ovocitos mediante su observación al microscopio. Sinembargo no se pudo obtener los ovarios frescos y se utiliz ó un ovario conservado en formol de hace unassemanas. No se pudieron observar ovocitos despues de la extracción debido al tiempo que llevaba el ovario.AbstractThe egg collection is one of the basic techniques in reproductive biotechnology. The ability to generate embryosin vitro comes from to get the eggs and sperm in good condition. For the eggs we should have used ovariescollected at the slaughterhouse and two different techniques: aspirated and dissection. Then the state of theoocytes was also evaluated by microscope observation. But we could not get the fresh ovaries and ovarian
preserved in formaldehyde a few weeks ago was used. No oocytes were observed after extraction due to thetime the ovary had.
1Programa Profesional de Ingenierı́a Biotecnol ́ ogica, Universidad Cat ́ olica de Santa Marı́a, Arequipa, Per´ u
Índice
Introducción 1
1 Marco Teórico 1
2 Materiales y Métodos 2
2.1 Materiales . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2
2.2 Métodos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2Extracción por aspirado • Extracción por corte
3 Resultados y Discusión 2
3.1 Resultados . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2Extracción por aspirado • Extracción por corte
4 Discusión 2
5 Conclusiones 2
6 Recomendaciones 2
Referencias 2
Introducción
La recuperación de ovocitos a partir de ovarios ya sea
de animales sacrificados o vivos, es una de las técnicas que
más auge y aplicación esta teniendo en la actualidad. Se ne-
cesitan los ovocitos paradiferentes técnicas de reproducción
como la fecundación in vitro, la transferencia de embriones,
la clonación, etc.
Esta técnica nos permitirá obtener ovocitos que posterior-
mente seran embriones, para mejorar la eficiencia reproducti-
va. El recolectar ovocitos ayuda a no perder esos potenciales
terneros, sino que aunque la madre ya halla sido sacrificada
aún puede generar descendencia. Tambien nos ayuda en la clo-
nación como fuente de ovocitos,a los cuales se les retirará el
nucleo y se les implantará un nucleo de una célula somática
del animal que se desea clonar.Se debe recordar que los ovocitos son células delicadas y
que se requiere que esten en buen estado para su fertilización,
por lo tanto se debe dominar tanto la extracción como la eva-
luación de los ovocitos para garantizar el éxito en el programa
de reproducción. Los métodos de extracción convencionales
para la extracción de ovocitos son el aspirado y la disección
de los folı́culos; mientras que los indicadores para la calidad
de los ovocitos son: la esfericidad, estado de la zona pelúcida
y tamaño
Los objetivos de esta práctica fueron : preparar y capacitar
en la obtención de ovocitos de ovarios de vacunos y determinar
la calidad de los ovocitos.
1. Marco Teórico
Para poder aplicar la técnica de recuperación de ovocitos
se necesita un amplio conocimiento de la anatomı́a y fisiologı́a
de los ovarios, ya que son los órganos responsables de la la
gametogénesis y la maduración de los ovocitos.
Los Ovarios son los órganos principales del aparato re-
productor femenino. Tienen dos funciones: la producción de
óvulos y la producción de hormonas, principalmente estróge-
nos y progesterona, durante los distintos estadı́os del ciclo
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estral. En la superficie del ovario se pueden encontrar dos
estructuras diferentes: Folı́culos y Cuerpo Luteo.
Los folı́culos son estructuras llenos de fluidos, que contie-
nen los óvulos en desarrollo. Usualmente se pueden encontrar
varios folı́culos en cada ovario, que varı́an en tamaño desde
apenas visibles, hasta 20 mm en diámetro. El folı́culo más
grande sobre el ovario es considerado el dominante, y es el
que probablemente ovule cuando el animal entre en celo. Conel tiempo, mas del 95% de los otros folı́culos entran en regre-
sión y mueren sin ovular, siendo reemplazados por una nueva
generación de folı́culos en crecimiento.
La otra estructura que se encuentra en la superficie del
ovario es el cuerpo luteo (CL). El CL crece sobre el sitio de la
ovulación del celo anterior. A menos que haya habido más de
una ovalación, se debe hallar solo un CL en uno de los Ovarios.
El CL normalmente tendrá una corona sobre su estructura, lo
cual facilita su identificación durante la palpación rectal. El
CL tambien puede tener una cavidad llena de fluidos, pero una
pared mas gruesa, por lo tanto tendrá una textura mas tosca
al tacto. El CL en latı́n significa çuerpo amarillo..
A
unque ensu superficie, esta estructura tiene apariencia oscura, un corte
transversal revela un amarillo rojizo en su interior. [1]
La aplicación de los procedimientos de fertilización in
vitro(FTV) en la reproducción bovina se ha incrementado en
los últimos años y en un futuro puede llegar a ser utilizada
en programas de gran escala en la producción comercial de
embriones in vitro. Dentro de este concepto, la recolección de
ovocitos es un paso necesario para poder llegar a establecer
estos programas de FIV.
Los ovarios contienen un elevado número de folı́culos que
se encuentran en diferentes estados de desarrollo (primordia-
les, en crecimiento, atrésicos), de los cuales solamente una
pequeña proporción va a ser utilizada durante la vida reproduc-tiva del animal. La recolección de ovocitos permite recuperar
y aprovechar folı́culos no ovulatorios, que bajo condiciones
fisiológicas se tornarı́an en folı́culos atrésicos.
La obtención de ovarios provenientes de vacas sacrificadas
en el matadero suministra una fuente abundante de ovocitos
obtenidos a bajo costo, provenientes de animales en diferentes
estados del ciclo estral, que pueden ser madurados, fertilizados
y cultivados in vitro hasta estados avanzados del desarrollo
embrionario. [2]
Los ovarios, colectados de hembras faenadas son transpor-
tados en termos que contienen suero isotónico a 35-37 C. La
aspiración de los COCs, se realiza aproximadamente dentro
de 4 a 6 horas después de faenados los animales. Todos los
foĺıculos que no presentan indicios de atresia folicular, entre
2 y 8 mm de diámetro, son aspirados. La recuperación es mo-
derada y la calidad (capacidad de los ovocitos de completar
la meiosis) es buena, en comparación con la técnica de des-
menuzamiento (con una hoja de afeitar, se corta la superficie
del ovario) en la cual la recuperación es alta, pero la calidad
de los ovocitos es baja. Esto se debe más que nada a que se
recuperan ovocitos de folı́culos muy pequeños no antrales que
no han alcanzado el tamaño adecuado para ser madurados in
vitro. [3]
2. Materiales y Métodos
2.1 Materiales
1. Ovarios de vaca recolectados del camal
2. Suero fisiologico
3. Placas de Petri
4. Jeringas hipodérmicas
5. Bisturı́
6. Pinzas
7. Guantes
8. Microscopio
2.2 Métodos
Primero se colocó el ovario en el suero fisiológico dentro
de una placa Petri y se procedió con los métodos de extracción.
2.2.1 Extracción por aspirado
Se aseguró el ovario con las pinzas y se procedió a ubi-
car uno de los folı́culos, luego se aspiró el liquido folicular
utilizando una jeringa hipodérmica y se depositó el aspira-
do en una placa de Petri con suero fisiologico. Se realiz ó su
evaluación a traves del microscopio.
2.2.2 Extracción por corte
Nuevamente se aseguró el ovario con las pinzas y se
ubicó uno de los folı́culos, luego se realizó un corte trans-
versal y un corte longitudinal en el folı́culo con el bisturı́ y se
recolectó el liquido folicular en una placa de petri con suero
fisiológico. Se evaluó el estado de los ovulos en el microsco-
pio.
3. Resultados y Discusión
3.1 Resultados
3.1.1 Extracción por aspirado
Se consiguió aspirar buena parte del liquido folicular, sin
embargo, al realizar la evaluación microscópica de los ovulos
y del liquido folicular no se encontraron ovulos
3.1.2 Extracción por corte
Realizados los cortes, el liquido folicular cayó a la placa
con suero fisiológico, sin mebargo al igual que en la extracción
por aspirado no se encontraron óvulos.
4. Discusión
El hecho de haber utilizado un ovario que llevaba más de
una semana siendo conservado en formol puede ser el respon-
sable directo de la no presencia de óvulos. Sabemos por la
literatura que los ovulos son extraidos de ovarios recolectados
del matadero en un tiempo máximo de 8 horas, desde la muer-
te del animal. Por lo tanto despues de una semana es muy poco
probable poder encontrar algún óvulo vivo. El mal olor del
ovario indicaba que ya habı́a cierto grado de descomposición.
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El método de extracción que ha parecido más efectivo ha
sido el de corte, ya que es mucho más rápido que el método
por aspirado y requiere menos intervención. También se ha
reportado que es más eficiente.
5. Conclusiones
Debido al tiempo transcurrido entre la recolección delovario y la extracción de los ovocitos, no se pudo en-
contrar ovocitos en el liquido folicular.
El método por corte es más eficiente que el método por
aspirado.
6. Recomendaciones
Como una autocrı́tica: el no poder conseguir los ovarios
del matadero nos significó el no poder obtener los ovocitos,
por lo tanto es mejor prevenir e informarse mejor acerca de
como obtener y en que horarios se debe ir a obtener los ova-
rios.
Referencias[1] Dr. Ray Nebel Mel DeJarnett. Anatomı́a y fisiologı́a de la
reproducción bovina.
[2] Nicolás Velarde Choque. Recuperación de ovocitos reco-
lectados de vacas criollas post mórtem del sur del perú.
Ciencia y desarrollo, 2005.
[3] MsC Dras. Yael Filipiak y Clara Larocca. BIOTECNO-
LOG´ IA EN REPRODUCCI ´ ONBOVINAMANUALTE ´ ORI-
CO - PR ´ ACTICO. Universidad de la República, 2012.