patrones de inmunotinción e interpretación de resultados en ihq
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Patrones de inmunotinción e interpretación de resultados en IHQ
Nombre alumna: Estefania ReyesProfesores Encargados: Mariolly Müller
Esteban ÓrdenesCristian Poblete
Fecha: 11/09/2015
Universidad de ChileFacultad de MedicinaDpto. Tecnología Médica
IntroducciónLas técnicas de inmunotinción son técnicas muy
útiles, ya que nos permiten diferenciar células y tejidos a nivel molecular según la identificación de diferentes antígenos, los que varían según sus características funcionales, así como según el estadio del desarrollo de cada célula y del tejido que conformen.
IntroducciónA su vez, son útiles en la identificación y
diferenciación de patologías según la alteración en el patrón de distribución intracelular y tisular de diferentes componentes moleculares (antígenos).
Es por ello que su uso, estandarización (mediante de controles y protocolos) y correcto análisis han ido ganado gran importancia en el diagnóstico de patologías y en las investigaciones médicas dentro de este último tiempo.
Patrones de inmunotinciónEs la forma de distribución de la imnunotinción utilizada,
depende de la localización del antígeno a detectar.Patrones celulares Estudian la distribución de un
antígeno dentro de las células. Ejemplos: Patrones nucleares, citoplasmáticos, de
membrana, golgi, mixtos, etc.
Patrones tisulares Permite analizar qué población celular es positiva para un determinado antígeno.
Ejemplos: Epitelios, células germinales, tejido conectivo, etc.
Patrones de inmunotinción celularNuclear: Núcleo con tinción positiva para IHQ. Intensidad de
tinción varía según tipo de antígeno y muestra analizada.Ejemplos: Receptor de estrógeno (RE), Receptor de
progesterona (RP), Ki67, P53, entre otros.
Leica Biosystem. Advanced Staining Catalog. USA Edition. 2014.
Patrones de inmunotinción celularNuclear:Ejemplos: Receptor de estrógeno (RE), Receptor de
progesterona (RP), Ki67, P53, entre otros.
Leica Biosystem. Advanced Staining Catalog. USA Edition. 2014.
Patrones de inmunotinción celularCitoplasmático: Tinción positiva en el citoplasma,
intensidad y distribución de tinción varía según tipo celular analizado.
Ejemplos: Filamentos intermedios, vimentina, microtúbulos, microfilamentos, entre otros.
Leica Biosystem. Advanced Staining Catalog. USA Edition. 2014.
Patrones de inmunotinción celularCitoplasmático:Ejemplos: Filamentos intermedios, vimentina,
microtúbulos, microfilamentos, entre otros.
Leica Biosystem. Advanced Staining Catalog. USA Edition. 2014.
Patrones de inmunotinción celularMembrana: IHQ positiva en membrana ya sea total o
parcialmente, dependiendo de distribución del antígeno según tipo celular analizado.
Ejemplos: CD4, CD8, CD20, HER-2, entre otros.
Leica Biosystem. Advanced Staining Catalog. USA Edition. 2014.
Patrones de inmunotinción celularMembrana:Ejemplos: CD4, CD8, CD20, HER-2, entre otros.
Her-2 en carcinoma de mama
Leica Biosystem. Advanced Staining Catalog. USA Edition. 2014.
Dabbs David MD. Diagnostic Immunohistochemistry Theranostic and Genomic Applications. 3° Edition. Saunders Elsevier. 2010.
Patrones de inmunotinción celularGolgi (Patrón puntiforme pan nuclear)Ejemplos: CD15 , CD30. En alguna clases de tumores se
pueden utilizar citoqueratinas (Ej: Ctk-20 para tumores neuroendocrinos de la piel)
Leica Biosystem. Advanced Staining Catalog. USA Edition. 2014.
Patrones de inmunotinción celularMixto: Distribución en diferentes zonas subcelulares
(núcleo/citoplasma; membrana/citoplasma; etc)Ejemplo: S-100 (Marcador de tejido de origen
neuroectodérmico. Se distribuye en núcleo y citoplasma)
S-100: De izquierda a derecha: Glioma humano, carcinoma de mama humana, carcinoma de piel humano.Extraído de: http://www.ptglab.com/PView/S100B-Antibody-15146-1-AP-PVIEW.htm
Patrones de inmunotinción tisularSe refiere a distribución de un antígeno determinado a nivel
de tejido, pudiendo ser en un tejido fisiológico (Ejemplo: epitelio intestinal, músculo, cerebro, etc) ya sea en estadio adulto o en etapas indiferenciadas.
O tejido patológico ( Ejemplo: diferentes tipos de cáncer en diferentes estadios de indiferenciación, hígado cirrótico, glomerulonefritis, corazón con infarto al miocardio, etc).
Patrones de inmunotinción tisularEjemplos: Tejidos fisiológicos
Leica Biosystem. Advanced Staining Catalog. USA Edition. 2014.
Patrones de inmunotinción tisularEjemplos: Tejidos patológicos
Leica Biosystem. Advanced Staining Catalog. USA Edition. 2014.
Controles en inmunotinciónControl positivo externo :-Muestra diferente a la muestra problema que produce reacción
positiva para el antígeno a detectar.-A su vez, la muestra produce reacción positiva para la técnica y el
sistema de detección utilizado-Se conoce el patrón e intensidad de tinción.-Objetivo: Validar la técnica. Permite comparar este control con la muestra problema y definir si el patrón e intensidad de tinción es correcto o no lo es.
Dabbs David MD. Diagnostic Immunohistochemistry Theranostic and
Genomic Applications. 3° Edition. Saunders Elsevier. 2010.
Controles en inmunotinciónControl positivo interno:-Zona del tejido problema en que se conoce que produce reacción
positiva para el antígeno a detectar.-A su vez, se conoce que hay reacción positiva para el sistema de
detección utilizado.-No necesariamente produce el mismo patrón e intensidad de
tinción que la zona del tejido a analizar.Objetivo: Evaluar la conservación del antígeno a estudiar y su inmunoreactividad, la que se relaciona con el procesamiento de la muestra.
Suvarna Kim , Layton Christopher, Bancroft John. Bancroft's Theory and Practice of Histological Techniques. Expert Consult Online and Print, 7° edition. Churchill Livingstone
Controles en inmunotinciónControl negativo externo: -Muestra de diferente origen a la muestra problema que se conoce
que su reacción es negativa para el antígeno de interés.-O bien, muestra del mismo origen de la muestra problema, sin
incorporación de algún reactivo clave en la detección (ej: Ab 1°, Ab2°, etc).
-Objetivo: Indica la especificidad de la técnica para detectar el antígeno de interés.
Dabbs David MD. Diagnostic Immunohistochemistry Theranostic and
Genomic Applications. 3° Edition. Saunders Elsevier. 2010.
Controles en inmunotinciónControl negativo interno:-Zona del tejido a analizar en que se conoce que no hay reacción
positiva para el antígeno a estudiar.
Objetivo: Evaluar especificidad del anticuerpos utilizados dentrodel tejido en estudio, evaluar posibles reacciones cruzadas.
Fotografía Tejido de amígdala. Inmunotinción anti-vimentina. Se observan células de origen epitelial (epitelio estratificado) sin reacción de inmunotinción.
Controles en inmunotinciónArtefactos en la inmunotinción: Fallas en la manipulación: Precipitados (soluciones mal preparadas, cromógenos antiguos) Background excesivo Mala distribución de Ab Error en orden de incubación de Ab, error en el protocolo de IHQ Mala fijación; uso de otros fijadores (cambio en la morfología del tejido)
Características del tejido: Tejido hemorrágico Peroxidasa endógena, biotina endógena Tejido necrótico Pigmento melanina, etc.
Interpretaciones específicas de patologías mediante Inmunotinción:
Sistema Allred.Sistema Hercep test
Sistema Allred Evalúa el estadio del cáncer mamario y su posible tratamiento con terapia
hormonal.Identifica expresión de receptores de estrógeno y progesterona.
Analiza porcentaje células teñidas positivamente: 0 = ninguna, 1< 1% , 2 = 1%-10% , 3 = 11% a 33%, 4= 34% a 66% , 5= 67% a
100%
Analiza nivel de intensidad de tinción: 1 = débil, 2=moderado , 3= fuerte.
En base a la suma de estos dos parámetros crea una escala de puntuación del 0 al 8. A partir de puntuación 3 se considera positivo para carcinoma ductal de mama.
Interpretación de inmunotinción de receptores hormonales según sistema de Allred
Dabbs David MD. Diagnostic Immunohistochemistry Theranostic and Genomic Applications. 3° Edition. Saunders Elsevier. 2010.
Hercep testEvalúa cáncer mamario según sobrexpresión del receptor HER-2 y
su posible tratamiento con anticuerpo Trastuzumab (Herceptina).Evalúa solo carcinoma invasor, no considera al carcinoma In Situ.
De acuerdo al grado de inmunotinción crea una escala de puntuación:
0 Sin tinción o tinción parcial leve (<10% del tumor) 1 Tinción de membrana débil en más del 10% de tumor. Células
se tiñen en solo una parte de la membrana. 2 Tinción débil a moderada completa de la membrana en más
del 10% de las células del tumor. 3 Tinción de membrana completa y fuerte en más del 30% de las
células del tumor.
Interpretación de inmunotinción de HER 2 según Hercep test
Para puntuación 2 se deriva a un segundo análisis con FISH, si resultados son positivos se considera el tratamiento con Trastuzumab. Puntuación 3 se considera directamente el tratamiento con Trastuzumab.
Suvarna Kim, Layton Christopher, Bancroft John. Bancroft's Theory and Practice of Histological Techniques. 7° edition. Churchill Livingstone. 2013.
ConclusiónLas técnicas de inmunotinción han ido asumiendo mayor
importancia en el análisis de células y tejidos ya sea dentro del diagnóstico patológico, así como en investigaciones médicas, debido a su alta especificidad y sensibilidad para detectar alteraciones a nivel molecular.
Esto explica la importancia de su implementación en la detección oportuna de enfermedades a nivel molecular, como el cáncer, en complemento con los métodos clásicos ya utilizados.
FIN
BibliografíaDabbs David. Diagnostic Immunohistochemistry Theranostic and Genomic
Applications. 3° Edition. Saunders Elsevier. 2010. Suvarna Kim, Layton Christopher, Bancroft John. Bancroft's Theory and
Practice of Histological Techniques. 7° edition. Churchill Livingstone. 2013. Leica Biosystem. Advanced Staining Catalog. USA Edition. 2014.Cárdenas Jesús, Erazo Aura, Maafs Eduardo, Poitevin Adela. Consenso
nacional sobre diagnóstico y tratamiento del cáncer mamario. Cuarta revisión. Elsevier. 2011.
García Raimundo. La inmunohistoquímica y el control de calidad en anatomía patológica. Disponible en: [http://apatologicaehistoria.ugr.es/pages/anatomia_patologica/pdf_cursos/3_ihq/!]. [Visitado el día: 10/09/2015]
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