Otros Mtodos de Estudios de la Clula

CULTIVO DE CLULAS ANIMALES

Cultivo de Tejidos Podemos dividir el cultivo de tejidos en dos grupos de tcnicas : el cultivo de rganos y el cultivo de clulas. El cultivo de rganos se puede definir como el mantenimiento de pequeos fragmentos de tejido o rganos completos in vitro. El cultivo celular es la propagacin de clulas dispersas tanto en suspensin como en monocapas sobre cristal o

Soporte Lquido: Clulas en suspensin

Soporte Slido: Clulas adheridas a vidrio o distintos tipos de POLICUBETAS materiales sintticos.

Superficies cubiertas con sustancias que favorecen el crecimiento celular

Soporte

CLULAS FBHE CRECIDAS DURANTE 5 DAS SOBRE SOPORTE PLSTICO DESNUDO

CLULAS FBHE CRECIDAS DURANTE 5 DAS SOBRE SOPORTE PLSTICO CON COBERTURA DE COLGENO I

Orden Limpieza Higiene personal Vigilancia microscpica Estudio adecuado de los problemas Anlisis de problemas potenciales Trazabilidad de los cultivos

Factores crticos no biolgicos

Fraccionamiento Celular

Fraccionamiento Celular El fraccionamiento subcelular es un conjunto de mtodos y tcnicas que tienen como objetivo obtener fracciones puras o enriquecidas en un determinado componente celular, ya sea ste un orgnulo (mitocondrias, ncleos, peroxisomas, ..) una fraccin de membrana (membrana total, plasmtica, nuclear) complejos multiproteicos (citoesqueleto de actina, microtbulos, poros nucleares, etc..), etc... Para su estudio

Fraccionamiento Celular Existen dos mtodos de separacin en centrifugacin preparativa: A.- Centrifugacin diferencial. B.- Centrifugacin en gradiente de densidad.

Centrifugacin Diferencial Es el mtodo ms comn de separacin, . En este mtodo, el tubo de centrfuga se llena con una mezcla uniforme problema. Tras la centrifugacin se obtienen dos fracciones: un pellet que contiene el material sedimentado y un sobrenadante con el material no sedimentado, es una tcnica muy til, sobre todo para aislamiento de clulas y orgnulos subcelulares.

Centrifugacin por Gradiente de Densidad . La tcnica no solo permite la separacin de varios,(o de todos), los componentes de la muestra, sino que tambin permite realizar medidas analticas. El mtodo de gradiente de densidad implica la utilizacin de un soporte fluido, cuya densidad aumenta desde la zona superior a la inferior.

Centrifugacin por Gradiente de Densidad La separacin de los componentes de la muestra se presenta como diferentes bandas o zonas.

Gradiente de Densidad

Hibridacin Es un mtodo para localizar DNA o RNA Describe la capacidad de la molcula monocatenarias de DNA o RNA de Sonda para cromosomas 21 (rojo interaccionar con Y 13 (verde) secuencias complementarias llamada sonda de nucletidos

Tcnicas basadas en hibridacin se usan habitualmente en el diagnstico de enfermedades, la identificacin de microorganismos patgenos, el estudio de perfiles de expresin gnica, la localizacin de genes en cromosomas o de RNAm en tejidos, o en la comparacin de especies hibridando su ADN

Inmunohistoqumica Es una tcnica que se utiliza para localizar la distribucin de un Ag dentro de la clula o tejido, puede ser: IHQ Directa IHQ Indirecta

IHQ Directa e Indirecta

Histoqumica Se utiliza para localizar enzimas en los cortes histolgicos, en este procedimiento se detecta el producto de la reaccin y no la enzima propiamente dicha.

Localizacin de ATPasa (regiones oscuras)

Tcnicas Histoqumicas Por medio de las tecnicas histoqumicas se pueden demostrar cidos nucleicos, polisacridos, lpidos y protenas, usando agentes cromognicos (que dan color), los que se unen selectivamente a ciertos grupos atmicos especficos de esas sustancias. Estos mtodos con frecuencia proveen datos acerca de la funcin de las clulas y de los componentes extracelulares de los