Objetivos del temaEl alumno... Conoci-

miento

Compren-

sión

Aplica-

ción

IV. GENÉTICA

BACTERIANA

Comprenderá los mecanismos de la genética de virus,

bacterias y elementos genéticos móviles. Revisará los

mecanismos por los que se producen las mutaciones en

las bacterias y sus virus, conocerá su utilidad para el

mapeo génico en procariontes a partir de los

mecanismos de transferencia horizontal de material

genético y comprenderá la importancia de los elementos

genéticos móviles en la evolución de los genomas.

1. Tipos de

mutaciones en

bacterias

1.1. Conocerá la nomenclatura para referirse a los fenotipos y

genotipos de bacterias mutantes.X

1.2. Entenderá los métodos para la generación y selección de

bacterias mutantes.X

2. Bacteriófagos y

virus eucariontes

2.1. Describirá la composición química de los virus. X

2.2. Analizará los ciclos lítico y lisogénico de los bacteriófagos. X

2.3. Conocerá las características y ciclos de infección de algunos

virus de eucariontes mediante los ejemplos del virus VIH y el de

influenza.

X

3. Plásmidos 3.1. Definirá la estructura, propiedades y funciones del plásmido F

bacteriano.X

4. Mecanismos de

transferencia

horizontal del material

genético

4.1. Conocerá los procesos de transformación, transducción y

conjugación.X

4.2. Comparará los mecanismos de transferencia de información

genética en bacterias. X

4.3. Aplicará los procesos de transferencia horizontal de material

genético en la elaboración de mapas genéticos de virus y bacterias

basados en la recombinación sitio específico.

X

5. Elementos

genéticos móviles

5.1. Conocerá la estructura y función de las secuencias de

inserción y transposones.

X

5.2. Discutirá la función de los elementos genéticos móviles en la

producción de cambios en los genomas.

X

GENÉTICA BACTERIANA

¿Qué es un mutante?Un organismo que desciende directamente de un miembro

normal (silvestre) pero que es diferente

¿Qué es una mutación?

Un cambio heredable en la secuencia de nucleótidos

en el DNA

Una mutación no necesariamente es deletérea

En algunos casos puede ser ventajosa

En otros casos puede no producir ningún cambio observable

Un cambio que sea letal no puede

ser considerado una mutación pues

ésta debe ser heredable

Para la genética y la biología molecular, las mutantes

son útiles para estudiar cómo se regulan los genes, qué

codifican o cuál es la función de su producto génico.

Las mutaciones son preadaptativas, es

decir no se generan en respuesta a la

presencia del agente selectivo….

Lederberg y Lederberg, 1952

…se generan

espontáneamente

y el agente

selectivo solo las

selecciona.

Tipos de mutaciones• Cambios en una sola base

– Transición: cambia pur x pur o pyr x pyr

– Transversión: cambia pur x pyr

• Frameshift mutations (cambia la fase de

lectura del mensaje)

– Deleción de una sola base

– Inserción de una sola base

• Una secuencia de pares de bases

– Deleción

– Inserción

• Una larga región de DNA

– Duplicación

– Inversión

Frameshift(cambio del marco de lectura)

Al insertarse

o perderse un

nucleótido

ocurre un

cambio en el

marco de

lectura del

mensaje.

¿Cómo se genera una mutante?

De manera natural, por errores en la replicación

Por exposición a agentes mutagénicos como:

•Agentes físicos: luz UV, rayos X, rayos gamma

•Agentes químicos: anaranjado de acridina, otros...

¿Y en el lab....?

Existen métodos que permiten generar mutaciones que

luego se pueden mapear para saber cuál gen fue el que

se alteró. Uno de estos métodos es la mutagénesis por

transposición.

PROTOTROFÍA/AUXOTROFÍA

Las cepas silvestres son protótrofas (crecen en medio mínimo). Las cepas auxótrofas son mutantes incapaces de sintetizar algún metabolito esencial, por lo que éste debe ser añadido al medio (bio-, arg-, met-, ad-)

UTILIZACIÓN DE DIVERSAS FUENTES DE ENERGÍA

Capacidad de las bacterias para utilizar determinados sustratos como fuentes de energía, generalmente carbohidratos: galactosa (gal-/gal+); lactosa (lac-/lac+)

RESISTENCIA/SUSCEPTIBILIDAD A ANTIBIÓTICOS

Capacidad de crecer en presencia de inhibidores, como antibióticos (estreptomicina, ampicilina, kanamicina, etc.

strR/strS; ampR/ampS

Otras características como morfología de las colonias y pruebas bioquímicas también se emplean.

Tipos de mutantes bacterianas

Medio mínimo: medio sintético básico para el crecimiento bacteriano sin nutrientes adicionales

Suspensión celular bacteriana Suspensión plaqueada en

caja con agar

Incubación 1 – 2 días

Caja Petri con agar

Células individuales invisibles a simple vista

Colonias visibles procedentes de una célula individual (mismo genotipo y fenotipo)

Cultivos de bacterias

Aislamiento de mutantes

¿Qué ventajas presenta para uso

de laboratorio?

Escherichia coli

Descubridor: Theodore Escherich

Una de las bacterias más estudiadas

Vías de intercambio de genes entre bacterias

Transferencia horizontalTransferencia

parcial del genoma

por consumo de

DNA

Transferencia parcial del

genoma durante la

conjugación

Transferencia de

plásmidos durante la

conjugación

Transferencia como parte del genoma viral

Transformación

Conjugación Conjugación

Transducción

Plásmidos

Genoma

En la transformación, DNA exógeno es introducido a la célula e incorporado al DNA cromosomal por recombinación.

Una de las dos cadenas es hidrolizada y el DNA de cadena sencilla que queda es protegido por proteínas de unión a DNA de cadena sencilla (SSBP) y está disponible para recombinarse con el DNA cromosomal.

No todas las bacterias se transforman de manera natural

La transformación puede ser

inducida en el laboratorio por

métodos químicos

Se emplean plásmidos

como vectores para

introducir los genes

deseadosE. coli no se transforma de manera

normal debe hacerse “competente”

Plásmidos

Moléculas de DNA circulares extracromosomales que tienen su propio origen de replicación y se encuentran en la mayoría de las bacterias y en algunas células de eucariontes.

Usan la misma maquinaria de replicación del DNA cromosomal y contienen un origen de replicación.

Se clasifican en:

• de bajo número de copias (1-10 copias por célula)

• de alto número de copias (10-100 copias por célula)

Los plásmidos autoregulan su número de copias a través de un represor (proteína o RNA) que impide que se repliquen muchas copias del plásmido.

Estos represores también pueden actuar sobre otros plásmidos relacionados, excluyéndolos así de la célula.

Características de los plásmidos

Los plásmidos codifican diversas funciones que le permiten, a la bacteria que los contiene, sobrevivir

en distintos habitats Funciones de resistencia

• Antibióticos (aminoglicósidos, cloramfenicol, -lactamas)

• Metales pesados (Hg, Ni, Co, Pb, Cd, Bi)

• Aniones tóxicos (arsenato, arsenito, boratos, cromatos)

Funciones metabólicas

• Producción de bacteriocinas

• Metabolismo de carbohidratos

• Metabolismo de compuestos carbonados

Factores que intervienen en la interacción con el hospedero

• Enterotoxina y hemolisinas (Escherichia coli)

• - endotoxina (Bacillus thuringiensis)

• Neurotoxina (Clostridium tetani)

• Infección y nodulación de leguminosas (Bradirhizobium sp.)

Descubrimiento de la conjugación

Lederberg y Tatum, 1947

Experimento de Lederberg y Tatum

Se requiere contacto físico entre las bacterias para que ocurra este intercambio

Medio mínimo

Conjugación en Escherichia coli

Pili

F+

F+ (Factor de fertilidad)

F -

Plásmido F

*Plásmido F codifica alrededor de 100 genes

William Hayes, 1953

Participan dos tipos de células:

• donadoras/machos que tienen el plásmido F (plásmido sexual/ factor de Fertilidad) (F+)

• receptoras/hembras que no lo tienen el plásmido F (F-)

El plásmido F contiene unos 100 genes, algunos de ellos codifican proteínas involucradas en la replicación del DNA. Otros genes codifican proteínas tubulares que forman el pilus.

CONJUGACIÓN

Conjugación es el proceso de apareamiento de bacterias mediante el cual se transfiere información genética. Involucra el contacto físico entre bacterias (F+ y F-)

Conjugación. Apareamiento entre bacterias (F+ y F-)

La célula F+ inicia la conjugación al sintetizar y extender el pilus que se adhiere a la superficie de la célula F-

El pilus se retrae y acerca a las dos células.

Una de las cadenas del DNA F es cortada y se separa de la otra cadena. Se transfiere esa cadena a la otra célula, mientras que se comienza a replicar el DNA de la cadena que se quedó en la célula F+

La cadena de DNA recién transferida también se replica. Las dos células contienen un plásmido F íntegro, por lo que ambas son F+

¿Qué nos indica el evento de conjugación?

¿Es el plásmido F el responsable de fenotipo

silvestre después de la conjugación?

¡¡NO!!

Células Hfr (high frequency recombination). Otra propiedad que tiene el plásmido F es su capacidad de integrarse al cromosoma bacteriano, incrementando el tamaño de éste.

La célula Hfr mantiene su capacidad de conjugación, por lo que se puede aparear con una célula F-

Episoma. Fragmento de DNA que puede existir como plásmido y que se puede integrar al cromosoma.

Cuando el plásmido F se integra al

cromosoma, la célula ya no es F+ sino

es Hfr.

Al conjugarse una Hfr se lleva a cabo la transferencia de material genético, empezando por el DNA cromosomal. Generalemente, no se transfiere el cromosoma completo pues las células se separan, por lo que, la secuencia del plásmido F no se transfiere.

Como se transfirió un fragmento del DNA cromosomal, y si hay homología con el cromosoma de la célula receptora, ocurre recombinación con alta frecuencia (Hfr)

Una característica importante del apareamiento Hfr / F- es que la transferencia del cromosoma Hfr ocurre a una tasa constante a partir de un punto fijo determinado por el sitio donde está insertado el episoma F.

F integrado

Integración del plásmido F al cromosoma

O

O

Tanto el cromosoma bacteriano como F son circulares

Regiones

homólogas

donde el

apareamiento

entre bases

puede ocurrir

Dirección de la

transferencia

Después de 2 h

algunos exconjugantes

se convierten en Hfr

F d c b a O

La bacteria donadora contribuye con una fracción de

material genético a la bacteria receptora

El fragmento de DNA donado es llamado exogenota y

el genoma receptor el endogenota

Una bacteria que contiene ambos DNAs, el

exogenota y el endogenota es un merocigoto

a+ b+

a b

Exogenota

Endogenota

a+

a–

a+

+

a– No viable

Viable

No viable

Merocigoto

Recombinación entre exogenote y endogenote

¡ El entrecruzamiento debe ser Doble para que ocurra integración estable!

Recombinantes

recíprocos

Corolario

1. El cromosoma de E. coli es circular.

2. El plásmido F es circular.

3. La orientación en la que se integra F al

cromosoma determina la dirección de la

transferencia

4. Un extremo de F integrado es el Origen donde

comienza la transferencia y el otro extremo es el

término que generalmente NO se transfiere a

menos que antes se haya transferido TODO el

cromosoma Hfr.

Resumen de la Conjugación bacteriana

Una característica importante del apareamiento Hfr / F- es que la transferencia del cromosoma Hfr ocurre a una tasa constante a partir de un punto fijo determinado por el sitio donde está insertado el episoma F.

Esta propiedad permite controlar la cantidad de información genética transferida y mapear la posición de los genes transferidos con respecto a la secuencia F de

acuerdo al tiempo de conjugación.

Mapeo de genes en E. coli por conjugación

• El tiempo que se requiere para que los genes entren en la célula receptora está asociado con el ordenamiento en el cromosoma bacteriano.

• El cromosoma Hfr es transferido linealmente a la célula F -

receptora.

• Si se interrumpe la conjugación a distintos tiempos ocurrirán transferencias parciales de los genes.

• El orden de los genes a lo largo del cromosoma se puede deducir al determinar los genes transferidos durante apareamientos cortos y comparados con apareamientos largos.

Cepa Donadora Hfr: thr+; leu+; azis; tons; lac+; gal+; strs

Cepa receptora (F-): thr-; leu-; azir; tonr; lac-; gal-; strr

1. Poner en contacto a las dos cepas

2. Interrumpir por agitación la conjugación a distintos tiempos

3. Sembrar en medio con streptomicina (elimina a la cepa donadora)

4. Evaluar el fenotipo de las bacterias conjugantes

Experimento de Conjugación a tiempos controlados.

Tiempo de conjugación

(min)

% de colonias que sobreviven con los genotipos indicados

thr+leu+ azis tons lac+ gal+

Resultados del Experimento

Punto de inicio

Las unidades son minutos. Se refiere al tiempo que tardan los genes en entrar a una bacteria F- receptora durante el experimento de conjugación

Mapa genético del cromosoma de Escherichia coli

Mapeo por frecuencia de recombinantes

Si seleccionamos met como marcador:

100% met+

60% arg+

10% leu+

Estos porcentajes indican orden de transferencia pero NO distancia entre genes

Observando el orden en que los genes son transferidos

en una conjugación podemos saber el orden que tienen

en el cromosoma

En células Hfr, ocurre con baja frecuencia que, F se escinde del cromosoma y forma un plásmido circular nuevamente. Cuando esto ocurre, F acarrea consigo genes adyacentes del cromosoma que ahora se encuentran formando parte del plásmido F. Entonces, a éste se le llama plásmido F’.

CONJUGACIÓN F’

Con esta transferencia se pueden crear células diploides parciales (merocigotos parciales).

Los plásmidos F’ también pueden ser transferidos por conjugación

CONJUGACIÓN F’

A los factores F que tienen genes bacterianos se les

llama episomas (F’)

Genética de bacteriófagos

Generalidades de Virus

Virus de la influenza (200 nm)

• Tamaño 24 – 300 nm

• DNA o RNA, de cadena simple o doble

• Cubierta de proteínas con o sin lípidos

• Forma icosaédrica, de varilla, o cabeza y cola

Clasificación de fagos de acuerdo a su estructura

Icosahédricos sin cola ( X174) Icosahédricos con cola ( )

Filamentosos (M13)

Están formados por un ácido nucleico (DNA/RNA) y una cápside de proteína

El genoma de los fagos

RNA simple cadena (MS2, Qß)RNA doble cadena (phi 6)DNA simple cadena (phi X174, fd, M13)DNA doble cadena (T3, T7, lambda , T5, Mu, T2, T4)

Estos ácidos nucleicos pueden contener bases inusuales que son sintetizadas por proteínas del fago. En los fagos T-pares, el genoma no contiene citosina sino 5'- hidroximetilcitosina, mientras que en otros tipos de fago algunas de las bases estánparcialmente sustituidas.

Bacteriofago T4 virulento

Cabeza

Cuello y collar

Vaina

Centro

Placa Basal

Fibras

Fago libre

Fago infectando

Componentes del Fago

1. Adsorción del fago a receptores en la superficie de la bacteria (proteínas transportadoras de maltosa o de Fe2+)

2. Inyección del material genético viral

3. Transcripción del DNA del bacteriófago y producción de proteínas virales

4. Replicación del material genético viral

5. Empaquetamiento del DNA dentro de la envoltura proteica y ensamblaje de la envoltura

6. Lisis y liberación de las partículas virales

Ciclo LíticoCiclo de Replicación del Bacteriofago T4

Ciclo lítico

Halos o placas de lisis de los fagos

1. Una molécula de DNA del fago es inyectada a la bacteria.

2. Transcripción de genes necesarios para la integración.

3. El DNA del fago se inserta en el cromosoma bacteriano. (Integración)

4. La bacteria replica su DNA (y el del fago) y se divide normalmente.

5. El fago insertado se denomina profago y a la bacteria lisógeno.

6. La bacteria es ahora inmune a la infección de otros fagos.

Ciclo Lisogénico(Fagos temperados)

Integración del DNA del fago al cromosoma bacteriano

El cromosoma del bacteriófago lambda ( ) en estado libre es circular. El sitio de integración es una región del cromosoma que se alinea en un sitio del cromosoma bacteriano (entre los genes gal y bio).

Ocurre un entrecruzamiento recíproco entre el fago circular y el cromosoma bacteriano resultando en la integración. Esta integración es mediada por los genes del bacteriofago y no por el sistema de recombinación de la bacteria.

Al DNA del fago integrado al cromosoma se le llama profago.

Bacteria lisogénica

portadora de Profago

El DNA del

bacteriofago es

lineal con extremos

cohesivos, lo cual

permite que pueda

circularizarse

Integración de

al cromosoma

bacteriano

Bacteriófago lambda ( ) (fago temperado)

Ciclo lisogénico Ciclo lítico

TRANSDUCCIÓNTransferencia de material genético entre bacterias a través

de un bacteriófago

Transducción

Transferencia de material genético bacteriano por los virus de bacteria (fagos)

phe– trp– tyr– met–his–

WT

Requiere de contacto para que el fago pueda infectar

Inducción del ciclo lítico

La escición del DNA del fago acarrea DNA cromosomal

Replicación del fago

Lisis celular y

liberación del fago

El fago infecta a la

célula receptoraIntegración del DNA del fago al cromosoma

La célula receptora

adquiere nuevos

genes

Cromosoma bacteriano

Profago

Transducción

Transducción generalizada: es el mecanismo por el cual

potencialmente cualquier gene bacteriano de la donadora puede ser

transferido a la célula receptora.

Transducción especializada: La transducción especializada es la

transducción en la cual solo ciertos genes del donador pueden ser

transferidos al receptor.

Transducción generalizada

Fagos llevando

genes de la

célula donadora

Los fagos que median la transducción generalizada, normalmente cortan el

DNA de la célula huésped en pequeñas piezas y empacan ambos DNAs al

interior de la partícula fágica mediante un mecanismo llamado “head full” o

llenado de las cabezas del fago. Ocasionalmente una de las piezas del

DNA de la bacteria huésped resulta empacada al azar dentro de una

cubierta de fago. Por lo tanto cualquier gene de la bacteria donadora puede

ser potencialmente transferido, pero solamente se transferirá tanto DNA

como pueda caber en una sola cápside. Cuando la célula receptora se

infecta con un fago que contiene DNA de una donadora, el DNA de la

donadora puede entrar a la receptora. Ya dentro de la célula receptora

puede ocurrir el evento de la recombinación generalizada, en el cual se

substituye el DNA de la célula donadora por el de la receptora.

Transducción especializadaDiferentes fagos pueden transferir diferentes genes pero un fago individual

solamente puede transferir unos pocos genes. La transducción

especializada está mediada por fagos lisogénicos o fagos temperados y

los genes que se llegan a transferir dependerán del lugar donde el profago

queda insertado en el cromosoma.

Mapeo de genes empleando transducción

Células donadoras: arg+; met+, strs

Infección con el fago P1.

Ciclo lisogénico. Integración.

Ciclo lítico y cosecha de fagos.

Mezclar los fagos con la bacteria receptora: arg-; met-; strr

Ciclo lisogénico del bacteriofago

Selección fenotípica de las bacterias receptoras.

Transposones(Elementos genéticos móviles)

• La transposición es otro tipo de recombinación de DNA en el cual un elemento transponible o transposón se mueve de una molécula de DNA a otra (recombinación ilegítima).

Fueron descubiertos originalmente en maíz por Barbara Mc Clintock y su presencia se ha documentado también en otras especies, desde bacterias hasta humanos.

Descubrimiento de los transposones eucariontes

Barbara Mc Clintock, 1951

Elementos de Control

Tipos de transposonesSecuencia de Inserción o Elemento

de Inserción (IS): contiene una

secuencia central con el gen de la

transposasa y en los extremos una

secuencia repetida en orden inverso no

nesariamente idéntica, aunque muy

parecida. Cuando un transposón

simple se integra en un determinado

punto del DNA aparece una repetición

directa de la secuencia diana (5-12

pb).

Transposón Compuesto (Tn):

contiene un elemento de inserción

(IS) en cada extremo, en orden

directo o inverso y una región

central que además suele contener

información de otro tipo. Por

ejemplo, los Factores de

transferencia de resistencia (RTF)

poseen información para resistencia

a antibióticos (cloranfenicol,

kanamicina, tetraciclina, etc.).

http://www.ucm.es/info/genetica/grupod/Mutacion/mutacion.htm

Elemento Longitud

Repetición

terminal

invertida

Repetición directa

de la dianaSelección de la diana

IS1 786 pb 23 pb 9 pb Regional

IS2 1327 pb 41 pb 5 pb Zona caliente

IS4 1428 pb 18 pb 11-12 pb AAAX20 .........XTTT

IS5 1195 pb 16 pb 4 pb Zona caliente

Características de algunos elementos IS

Características de algunos Transposones compuestos (Tn)

Elemento LongitudMarcador genético

(resistencia)

MÓDULOS TERMINALES

IS Orientación Relación entre ambos

Tn 10 9300 pb Tetraciclina IS 10 Invertida Divergencia 2.5%

Tn 5 5700 pb Kanamicina IS 5 Invertida Difieren en 1 pb

Tn 903 3100 pb Kanamicina IS 903 Invertida Idénticos

Tn 9 2500 pb Cloranfenicol IS 9 Directa Idénticos (?)

http://www.ucm.es/info/genetica/grupod/Mutacion/mutacion.htm

Tanto los elementos IS como los transposones (Tn) tienen

que estar integrados en una molécula de DNA, que contenga

un origen de replicación, ya sea en el cromosoma principal

bacteriano o en un plásmido, nunca se encuentran libres.

Algunos elementos

pueden estar en

varias copias

Cromosoma

de E. coli

http://www.ucm.es/info/genetica/grupod/Mutacion/mutacion.htm

Transposones en procariontes

Secuencias de inserción (IS)

Frecuencia global de transposición: 10-3 – 10-4

Frecuencia individual de transposición: 10-5 – 10-7

Reversión de la transposición: 10-6 – 10-10

Transposones

El tamaño de los transposones varía entre 103 a 104 pb dependiendo del tipo de transposón.

La secuencia íntegra del transposón se puede insertar en un sitio particular del cromosoma.

La transposición involucra recombinación entre secuencias no relacionadas (recombinación ilegítima) que son los extremos flanqueantes del transposón y el sitio del cromosoma donde se insertó.

Dos formas de transposición

Replicativa

Conservativa

Transposasa. Enzima que corta al DNA blanco en sitios al azar y

une los extremos del transposón.

Secuencias repetidas invertidas. Funcionan como el sitio de reconocimiento de la transposasa. Como las secuencias son invertidas, son idénticas.

Marcador de selección. La inserción del transposón confiere una ventaja ecológica a la célula, que puede ser la resistencia a algún antibiótico. KanS

KanR

Tn5: 5,800 pb y regiones flanqueantes de 1,530 pb. Genes de resistencia a Kan, Bleo, Strp.

Tn7: 14,000 pb y regiones flanqueantes (secuencias repetidas invertidas de 30 pb). Resistencia a Strp, Spec.

Tn10: 9,300 pb y regiones flanqueantes de 1,300 pb. Genes de resistencia a Tet.

Mecanismo de transposición

(recombinación ilegítima)

Repetidos directos (5-9 pb)

Transposición conservativa

Unión de la transposasa a la región flanqueante

Formación del asa (complejo sináptico). Los extremos del transposón se acercan.

Corte del DNA y escición del transposón

Unión del transposón al DNA blanco

La transposasa cataliza la inserción del transposón al DNA blanco.

Transposición replicativa

Transposasa Resolvasa

Transposones de eucariontes

Retrotransposones Transposones de DNA

Los retrovirus se integran al DNA

provirus

Los transposones pueden causar reordenamientos y cambios en los genomas

Transposones

Transferencia de DNA

Evolución de genomas

Virus

Duplicación de DNA

Uso de los transposones para generar una colección de mutantes (mutagnénesis por transposición)

1. Para introducir inserciones de Tn5 al azar en el cromosoma de E. coli, se usa un vector de fago lambda:

Pam int-::Tn5

2. Cuando este fago infecta células KanS, el DNA del fago no se puede replicar ni integrar, así que la única manera de que E. coli se vuelva KanR es que el transposón Tn5 se inserte en algún sitio del cromosoma. Esto va a ocurrir en aprox. 1 de cada 100,000 células infectadas.

3. Si se infectan 2 x 109 células, se obtendrán aprox. 2 x 104 colonias KanR. Cada una tendrá una inserción de Tn5 en un sitio distinto del cromosoma. Si en el genoma de E. coli hay unos 5,000 genes, es probable que se tenga una colección con inserción de Tn5 en casi todos los genes.

Transferencia horizontal de genes entre distintas especies e incluso géneros de bacterias

Mecanismos de resistencia a antibióticos y su transmisión

1. Impermeabilidad y eflujo. Gram+ (peptidoglicano); Gram-

(capa de LPS). Proteínas de eflujo. Los genes responsables pueden estar en plásmido o en cromosoma.

2. Modificación e inactivación del antibiótico. -lactamasa,

enzimas modificadoras de aminoglicósidos, cloramfenicol acetiltransferasa.

3. Modificación del blanco. Dominios de transpeptidasa con

menor afinidad por las -lactamas.

4. Vías alternativas de síntesis. Síntesis de tetrahidrofolato

insensible a sulfonamidas.

1. Cuatro cepas Hfr de E. coli procedentes de la misma cepa F+ transfieren los siguientes marcadores en el orden:

Cepa 1: M Z X W CCepa 2: L A N C WCepa 3: A L B R UCepa 4: Z M U R B

¿Cuál es el orden de estos marcadores en la cepa F+ original?

2. Se realiza un cruzamiento entre una cepa Hfr arg+ bio+ leu+ y una cepa F– arg– bio–

leu–. Experimentos de conjugación interrumpida demuestran que arg+ entra en el receptor en último lugar, de modo que se seleccionan recombinantes arg+ para determinar la presencia de bio+ y leu+ encontrando los siguientes números:arg+ bio+ leu+ 320arg+ bio+ leu– 8arg+ bio– leu+ 0arg+ bio– leu– 48

¿Cuál es el orden de estos marcadores?¿Cuáles son las distancias en unidades de mapa?