Biología de los Microorganismos

Ingeniería Civil

Autores:

○ Matías Bustos Andia

○ Julio Castro González

○ Ignacio F. Garcés

Agradecimientos:

Profesores Alejandra Medina Armijo y Felipe Scott Contador

2017

Ciencias para ingeniería - Microbiología

Informe

Laboratorio 2: Medios de cultivos y tipos de siembras

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RESUMEN

En esta experiencia de laboratorio se dispuso de dos muestras de microorganismos, las cuales

se procedieron a insertar en diferentes medios con distintas características cada uno,

aplicando una técnica de aislamiento, para luego estudiar su crecimiento en cada uno de los

medios.

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ÍNDICE

RESUMEN 1

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1. INTRODUCCIÓN 3

1.1 OBJETIVO PRINCIPAL 3

1.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS 3

2. REVISIÓN BIBLIOGRÁFICA 4

2.1 CONCEPTOS PREVIOS 4

2.2 MEDIOS DE CULTIVO UTILIZADOS 5

3. MATERIALES 7

4. METODOLOGÍA 8

5. RESULTADOS Y DISCUSIONES 9

5.1 MUESTRA PROBLEMA 9

5.2 MUESTRA PROPIA 11

6. CONCLUSIONES 12

7. BIBLIOGRAFÍA 13

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1. INTRODUCCIÓN

Como ya sabemos, la microbiología es la ciencia que estudia a los microorganismos, y para

poder estudiarlos de manera adecuada y eficiente, lo mejor que podemos hacer es aislarlos,

esto para ver cómo se comporta una o más colonias sin otros factores presentes.

Todo esto se consigue mediante distintas técnicas de desinfección y esterilización para dejar

el medio sin otro microorganismo presente, además de técnicas de cultivo para sembrar la

colonia en el medio.

A continuación, se da a conocer la experiencia de laboratorio, pero para empezar tenemos

que definir los objetivos propuestos:

1.1 OBJETIVO PRINCIPAL

➔ Conocer las distintas técnicas de aislamiento de medios de cultivos sólidos para la

obtención de colonias aisladas.

➔ Aplicar exitosamente la técnica de siembra por agotamiento en placas de Petri.

1.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS

➔ Aplicar conocimientos de siembra vistos en clases.

➔ Obtener un cultivo aislado a partir de una muestra de microbios preexistente.

➔ Aprender sobre los distintos medios de cultivo existentes.

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2. REVISIÓN BIBLIOGRÁFICA

2.1 CONCEPTOS PREVIOS

Para entender este informe es necesario definir algunos conceptos:

A. Siembra: procedimiento mediante el cual se inserta una pequeña cantidad de

microorganismos en un medio de cultivo estéril.

B. Cultivo: un cultivo de microorganismos es un método para favorecer la multiplicación de

microorganismos, para luego estudiarlos. Existen distintos tipos de cultivos:

● Cultivo axénico puro: contiene un solo tipo de microorganismo.

● Cultivo mixto: contiene más de un tipo de microorganismo.

C. Medio de cultivo: consta de un gel o solución (sólido, semisólido o líquido) que contiene

todas las condiciones necesarias, o que se deseen (acidez, temperatura, cantidad de

nutrientes, etc.), para que uno o más microorganismos vivan y crezcan, para su posterior

estudio. El gel que más se usa es el llamado agar, un medio sólido. Existen dos tipos de

medios de cultivo:

● Medio definido: se conocen exactamente todos los componentes que se

encuentran.

● Medio no definido o complejo: es un medio muy rico en nutrientes, cuyos

componentes exactos no se conocen. Este tipo de medio es útil si se estudian

microorganismos cuyas necesidades nutricionales son desconocidas.

D. Enriquecimiento: método por el cual se favorece el número de microorganismos de un

tipo, pudiendo afectar o no a los demás microorganismos en su medio, en caso de haber.

E. Colonia: corresponde a un grupo grande de microorganismos, generalmente visible a

simple vista, que se sabe que provienen de un único ancestro. Para lograr presenciar

colonias, normalmente se necesita aplicar alguna técnica de aislamiento microbiano. De

este modo, es posible separar físicamente a los microorganismos, para que luego se

multipliquen por separado, dando lugar a diferentes colonias. En el caso de esta

experiencia de laboratorio, se usó el método de aislamiento por estrías de placas, debido a

que todos los medios de cultivo estaban en agar (sólido).

F. Agar: es una sustancia sólida muy necesitada en los medios de cultivo, debido a que sirve

para retener físicamente a los microorganismos, permitiendo que se aislen y formen

colonias.

G. Esterilización: proceso de eliminación de todos los microorganismos presentes en un

objeto inanimado o sustancia, la cual se acondiciona de tal forma que no puede

contaminarse nuevamente con ellos. Un método usual de esterilización es calentar un

objeto hasta temperaturas intolerables para toda forma de vida.

H. Desinfección: proceso de todos los agentes patógenos deseados, pero no necesariamente

de todos los microorganismos presentes en un objeto inanimado o sustancia.

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I. Saneamiento: procedimiento que consiste en reducir la población microbiana o

concentración de sustancias químicas a niveles no peligrosos para la salud pública.

J. Microorganismos aerobios: requieren de oxígeno para vivir.

K. Microorganismos anaerobios: no requieren de oxígeno para vivir.

2.2 MEDIOS DE CULTIVO UTILIZADOS

A continuación, se definen las características de cada medio (agar) que se emplearon en el

laboratorio:

● McConkey:

Composición: sales biliares, colorante cristal violeta, indicador rojo neutro, lactosa,

peptona y cloruro sódico.

Características: tanto el cristal violeta como las sales biliares inhiben a las bacterias

gram+ lo que permite identificar bacterias gram-.

● Manitol Sal:

Composición: 5.0 g/L enzima digestiva de caseína, 5.0 g/L enzima digestiva de tejido

animal, 1.0 g/L extracto de carne de vaca, 10.0 g/L D-manitol, 75.0 g/L NaCl, 0.025

g/L rojo de fenol, 15.0 g/L agar.

Características: como tiene altas concentraciones de sodio, se inhibe el crecimiento de

ciertas bacterias gram- y además posee manitol, el cual inhibe otras bacterias gram-.

Su pH es de 7.4 ± 0.2 a 25 °C

● XLD:

Composición: xilosa 3.75 g, l-lisina 5.0 g, lactosa 7.5 g, sacarosa 7,5 g, cloruro de

sodio 5.0 g, extracto de levadura 3.0 g, rojo fenol 0.08 g, desoxicolato de sodio 2.5 g,

tiosulfato de sodio 6.8 g, citrato férrico de amonio 0.8 g, agar 15.0 g, agua destilada

c.s.p. 1000 ml.

Características: es utilizado para el aislamiento y diferenciación de organismos

patógenos entéricos Gram negativos, especialmente del género Shigella.

El pH de este medio es de 7.4 ± 0.2

● TSA:

Composición: polisorbato 80.5 g/L, histidina 1.0 g/L, peptona de soja 5.0 g/L, sodio

trisulfato 0.5 g/L, lecitina 0.7 g/L, peptona de caseína 15.0 g/L, sodio cloruro 5.0 g/L,

agar 15.0 g/L.

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Características: El agar TSA es un medio de uso general que permite el crecimiento

tanto de microorganismos exigentes como no exigentes, que incluyen bacterias

aerobias y anaerobias. Es un medio rico para el cultivo de microbios en general.

● Cetrimida:

Composición: peptona de gelatina 20.0 g/L, cloruro de magnesio 1.4 g/L, sulfato de

potasio 10.0 g/L, agar 13.6 g/L, cetrimida 0.3 g/L

Características: medio utilizado para el aislamiento selectivo de pseudomonas

aeruginosa (una bacteria gram negativa) y de otras especies del género. Este medio

inhibe a otros microorganismos distintos.

El pH es de 7.2 ± 0.2

● Caso:

Composición: agar 15.0 g/L, peptona de caseína 15.0 g/L, cloruro de sodio 5.0 g/L,

peptona de soya 5.0 g/L.

Características: medio de cultivo universal sin inhibidores ni indicadores.

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3. MATERIALES

➔ Asa bacteriológica redonda.

➔ Mechero.

➔ Torula estéril.

➔ Tubo de ensayo con la muestra problema (en agar Caso).

➔ Tubo de ensayo con la muestra propia (en agar Caso).

➔ Placa de Petri con agar McConkey.

➔ Placa de Petri con agar Manitol Sal.

➔ Placa de Petri con agar XLD.

➔ Placa de Petri con agar TSA.

➔ Placa de Petri con agar Cetrimida.

➔ Muestra problema de microbios.

➔ Muestra propia de microbios.

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4. METODOLOGÍA

1. Se disponen los materiales, y ambas muestras (la problema y la propia).

2. Se desinfectaron todos los materiales, la zona de trabajo y las manos, aplicando

alcohol.

3. Se procedió a encender el mechero, y se dispusieron todos los demás materiales a

utilizar cerca de él, ya que este previene la contaminación de las muestras con

microorganismos provenientes del aire.

4. Luego, y cuidando de mantener siempre todos los materiales cerca del mechero, se

procedió a colocar el asa sobre el fuego del mechero hasta que esté al rojo vivo, de

modo tal de quedar esterilizada.

5. Se enfrió el asa en el medio escogido.

6. Se untó la punta del asa en el tubo de ensayo con la muestra problema, cuidando de no

tomar una muestra muy grande, y cerrando el tubo rápidamente.

7. Se esparció el asa por el agar del medio escogido, en forma de zig-zag o S, cubriendo la

mitad del área de la placa de Petri, con cuidado de no aplicar demasiada presión, para

evitar romper el agar, y previniendo realizar el esparcimiento en el lugar donde se

enfrió el asa.

8. Se volvió a esterilizar el asa con el mechero, y se volvió a enfriar en el mismo agar.

9. La muestra antes esparcida, se volvió a esparcir, cubriendo ahora la mitad del área que

se había cubierto.

10. Nuevamente se esterilizó el asa con el mechero, y se enfrió en el agar.

11. Por última vez, se volvió a esparcir la muestra antes esparcida, cubriendo el área

restante de la placa de Petri.

12. Finalmente, se selló la placa de Petri.

13. Los pasos 4 a 12 se repitieron para los cuatro medios (agares) restantes.

14. Se repitieron los pasos 4 a 13, para la otra muestra.

15. Al ya tener las cinco placas sembradas, se procedió a dejarlas a 35°C durante 48 horas.

16. Una vez transcurrido el tiempo, se realizaron las observaciones correspondientes de

cada uno de los cultivos.

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5. RESULTADOS Y DISCUSIONES

5.1 MUESTRA PROBLEMA

Medio 1: Agar McConkey

Se observó que claramente hubo crecimiento de microorganismos, y que se lograron aislar

varias colonias, que se identifican como pequeñas manchas en la placa de Petri.

Medio 2: Agar Manitol Sal

Aunque casi pasa desapercibido en la foto, hubo crecimiento de microbios, y se lograron aislar

unas cuantas colonias. Esta poca cantidad se puede deber a que no se tomó suficiente

muestra con el asa.

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Medio 3: Agar XLD

Este agar, inicialmente rojizo, luego del crecimiento de los microorganismos, se tornó de color

amarillo en su mayoría. Esto indica la presencia de la bacteria escherichia coli, la cual es

capaz de sintetizar el compuesto llamado β-glucoronidasa, el que causa dicha pigmentación

amarilla.

Medio 4: Agar Tripticasa soya o TSA

No se observó crecimiento de microbios en este agar. A pesar de ser un medio rico para el

cultivo de microorganismos en general, esta ausencia de vida se pudo deber a que este medio

no era apto para ninguno de los microorganismos presentes en la muestra problema.

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Medio 5: Agar Cetrimida

No se desarrolló ningún microorganismo en este medio de cultivo. Esto indica que

pseudomonas aeruginosa no se encontraba en la muestra problema, única bacteria que no es

inhibida en este medio y que puede prosperar en él.

5.2 MUESTRA PROPIA

Hubo un problema de coordinación dentro del grupo y no se pudo asistir el primer día para

poder tomar una muestra propia; por consiguiente, no fue incubada ni pudo ser analizada en

esta experiencia de laboratorio.

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6. CONCLUSIONES

Habiendo ya terminado nuestra primera experiencia de laboratorio e informe, podemos decir

que, luego de realizar una reflexión pertinente frente al trabajo realizado, los objetivos que

nos planteamos fueron cumplidos de manera generalmente exitosa, pero que sin embargo

existieron pequeños errores y confusiones durante la experiencia, que a pesar de todo, no la

llevaron al desastre, ya que se llevó a cabo el método de siembra por agotamiento, aunque no

de manera perfecta. Cabe recalcar que sólo se estudió la muestra problema, y no la muestra

propia, ya que no hubo una coordinación óptima en el grupo para tomar e incubar la muestra

propia el día anterior a la experiencia de laboratorio descrita en este informe.

A pesar de todo, gracias a esta experiencia pudimos aplicar los conocimientos adquiridos en

las cátedras del curso “Biología de los microorganismos” y además ahondar más en estos

mismos de manera mucho más dinámica y didáctica. Se conoció de forma más práctica cómo

se llevan a cabo las normas y procedimientos para el aislamiento de microbios y la formación

de colonias

También podemos concluir a partir de los conocimientos adquiridos en esta experiencia que

los procesos de esterilización, desinfección y demás son importantísimos en la microbiología,

ya que son la puerta para la siembra y el aislamiento de colonias de microorganismos, y por

ende al estudio serio de estos para el avance de la ciencia.

Con esto podemos decir que las bases para el estudio de los microorganismos se encuentran

en el aislamiento de estos mismos mediante el uso de técnicas de: esterilización,

desinfección, aislamiento de medios de cultivos y siembra. Todo esto para poder ser

manipulados y estudiados de mejor manera.

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7. BIBLIOGRAFÍA

❏ http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioMedios.htm (Definición y

características de medios de cultivo)

❏ https://microdonto.files.wordpress.com/2009/03/morfologia-de-las-colonias-

bacterianas.pdf (Definición y características de las colonias)

❏ http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/Seminarioesterilizacion.htm (Definición de

esterilización)

❏ http://www.higiene.edu.uy/cefa/Libro2002/Cap%2027.pdf (Definición de esterilización

y desinfección)

❏ https://www.scribd.com/doc/56208322/Guia4SIEMBRA-DE-MICROORGANISMOS

(Definición de siembra)

❏ https://es.wikipedia.org/wiki/Agar_manitol_salado (Definición del medio Manitol Sal)

❏ http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/cetagarbase.htm (Algunas

características del agar Cetrimida)

❏ http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/10_Agar_XL

D.pdf (Definición del medio XLD)

❏ http://www.laanunciataikerketa.com/trabajos/fregasuelos/medios.pdf (Definición de los

medios TSA, McConkey y Cetrimida)

❏ Libro Brock Biología de los Microorganismos 10a edición, por Michael T. Madigan,

editorial Pearson, año 2003.

↳ Página 108-109 (Tipos de cultivo y de medios de cultivo)

❏ Foto de portada de este informe: © Possible, editada.