METODOS DE ESTERILIZACION Y PREPARACION DE MEDIOS DE

CULTIVO

INTRODUCCION

La esterilización es un proceso a través del que se logra la destrucción total de los microorganismos viables presentes en un determinado material.Este procedimiento es de gran utilidad dentro del campo farmacéutico, ya que existen muchos procesos que requieren la utilización de materiales estériles.

OBJETIVOS

Conocer el material y equipo mas común para la esterilización y el trabajo en condiciones de esterilidad

Lavar , preparar y envolver correctamente el material que se someterá a esterilización

Seleccionar los métodos de esterilización adecuados pára las diversas necesidades del laboratorio de microbiología

Comprobar la efectividad del método de esterilización

FUNDAMENTO TEORICO

ESTERILIZACIONEs el proceso de destruir todas las formas de vida microbiana. Un objeto esterilizado en el sentido microbiológico, esta libre de los microorganismos vivos.

SANEAMIENTOConsiste en reducir la población microbiana a niveles no peligrosos por medio de un agente, según los requerimientos de salud publica, por lo regular es un agente química que mata 99.9 % de las bacterias en crecimiento.

DESINFECCCIONDestrucción de microorganismos potencialmente patógenos, como bacterias, hongos y protozoos. La desinfección puede lograrse por calor seco o húmedo, por radiación, por auto clavado (calor húmedo a presión) o tratamiento con agentes químicos. La cloración es un procedimiento de desinfección importante en la potabilización de aguas.

HIGIENIZACIONEs un desinfectante concentrado basado en un complejo de Amonios Cuaternarios de última generación, controla y elimina microorganismos patógenos. Presenta alta efectividad en el control de microorganismos asociados a enfermedades de alta incidencia, tales como: Bacterias: Staphilococus aureus, E coli, Salmonella typhi, Klebsiella pneumoniae.

AGENTES FISICOS DE ESTERILIZACION

CALOR HÚMEDOPor lo tanto, la inactivación por calor húmedo requiere menores temperaturas que la que se realiza en ausencia de agua. Algunos ejemplos de condiciones de inactivación total por calor húmedo:Microorganismo condicionesLa mayoría de células vegetativas, de bacterias, levaduras y hongos 80oC , 5-10 minBacilo tuberculoso 58oC , 30 minBacilo tuberculoso 59oC , 20 minBacilo tuberculoso 65oC , 2 minStaphylococcus aureus, Enterococcus faecalis 60oC , 60 minLa mayoría de esporas de bacterias patógenas 100oC , pocos minesporas del patógeno Clostridium botulinum 100oC , 5,5 horasesporas de Clostridium y Bacillus saprofitos 100oC , muchas horasesporas de Clostridium y Bacillus saprofitos 120oC , 15 minutos

Los métodos principales de lograr esterilización de materiales por calor húmedo:AutoclaveIntroducido por Chamberland en 1884. Es un aparato que permite calentar muestras por calor húmedo a temperaturas superiores a las de ebullición del agua (sin que ésta hierva), debido a que el tratamiento se efectúa en un compartimiento estanco saturado con vapor de agua y a presiones superiores a la atmosférica. Los parámetros de esterilización suelen ser: temperatura 121ºC y 10-15 min. Como se puede deducir, estos parámetros vienen fijados por la resistencia de las esporas de especies que son las formas de vida que más aguantan el calor sin perder viabilidad.La acción rápida del calor húmedo depende en buena parte del alto valor de calor latente del agua (540 cal•g-1); ello hace que los objetos más fríos se calienten rápidamente por condensación de agua en su superficie.TindalizaciónNombre en honor de John Tyndall Es un método de esterilización fraccionada para materiales que se inactivan o estropean a más de 100ºC. Consiste en someter el material a varios ciclos (normalmente 3 ó 4) de dos fases sucesivas cada uno:a) En la primera fase el material se calienta a una temperatura entre 50 y 100ºC, durante 1 ó 2 horas;b) En la segunda fase el material se incuba en una estufa, a 30-37ºC durante 24 horas.Durante las fases de tipo a) mueren todas las células vegetativas de la muestra, pero permanecen viables las esporas, que quedan activadas para germinar. Durante las fases de tipo b) se produce la germinación de las esporas activadas en la respectiva fase anterior. En la siguiente fase de tipo a) morirán las células vegetativas procedentes de la germinación en la fase anterior; y así sucesivamente, hasta que al cabo de unos cuantos ciclos no queda ningún microorganismo en la muestra.Aplicaciones principales del calor húmedo:

1. En la práctica cotidiana del laboratorio de microbiología, en la esterilización de medios de cultivo y soluciones.2. En la esterilización de material quirúrgico.3. En la esterilización o inactivación parcial, en las industrias alimentarías (conservas, leche y derivados).a) En la industria láctea se emplean como métodos de esterilización la llamada uperización. La uperización o tratamiento UHT consiste en un tratamiento de calor húmedo donde se emplean temperaturas muy altas durante unos pocos segundos (p. ej.: 135-150ºC durante 1-2 seg).b) Pero no siempre es imprescindible esterilizar la leche, sino que puede bastar eliminar los posibles microorganismos patógenos que pueden contaminarla, y que son más sensibles al calor que los saprofitos inofensivos. Con esta inactivación parcial de la población microbiana de la leche logramos que ésta se conserve durante unos días, sin alterar apenas sus cualidades organolépticas y nutricionales. He aquí los procedimientos más habituales para conseguir esto:i. La pasteurización (en honor a Pasteur, que la introdujo en los años 1860) consiste en tratar la leche a 63oC durante 30 min, tras los cuales se enfría y envasa rápidamente.ii. La pasteurización instantánea (también conocida por sus siglas en inglés HTST, de high temperature-short time) se logra calentando a 72ºC durante sólo 15 segundos, tras de lo cual la muestra se enfría rápidamente. Esta técnica es la más usada actualmente, ya que:mata más rápidamente;mata mejor organismos más resistentes;altera menos el sabor;actúa en flujos continuos (y permite procesar grandes volúmenes de leche).Tras la pasteurización, el número de bacterias viables desciende un 97-99%. Los potenciales patógenos que pueda llevar la leche (Brucella, Salmonella, bacilo tuberculoso, Streptococcus, etc) son eliminados fácilmente. La pasteurización también se emplea para la preparación de vacunas a base de microorganismos inactivados por el calor.

CALOR SECOLa esterilización por calor seco necesita recurrir a mayores temperaturas que la efectuada por el calor húmedo, ya que al no existir agua, la rotura de puentes de hidrógeno y la desnaturalización de proteínas, así como la fusión de membranas, se efectúan a mayores energías. Otros efectos del calor seco son los daños por oxidación y el provocar un aumento de la concentración de electrolitos.Aplicaciones del calor seco:1. El llamado horno de Pasteur, mediante calentamiento a 160-170ºC durante 2-3 horas permite esterilizar materiales inertes de laboratorio resistentes al calor: material de vidrio y metálico, aceites y jaleas, etc.2. Flameado a la llama (hasta el rojo) de asas metálicas de siembra, con las que se inoculan las bacterias.3. Incineración de materiales de desecho.

EBULLICION

Materiales contaminados u objetos expuestos a la ebullición no pueden ser esterilizados eficazmente. Es cierto que todas las células vegetativas se destruyen en minutos al ser expuestas a la ebullición, pero algunas esporas bacterianas resisten la ebullición durante muchas horas. Con la practica de exponer instrumental durante periodos cortos al agua hirviente se obtiene mas desinfección que esterilización; por tal razón no se puede usar en el laboratorio como método de esterilización.

INCINERACIÓNMata los microorganismos, este método se emplea para destruir esqueletos, animales de laboratorio infectados y otros materiales de desecho infectados. La destrucción de microorganismos por incineración también se practica rutinariamente en los laboratorios cuando se introduce a la llama de un mechero bunsen el asa de las siembras pero hay que tener cuidado de no producir chisporroteo pues de lo contrario se esparcirán gotitas que lleven microorganismos viables, el chisporroteo se reduce o elimina secando el asa de siembras fuera de la llama antes de meterla en esta.

FILTRACIONAlgunos materiales, particularmente los líquidos biológicos como el suero de los animales o las soluciones de sustancias como las enzimas y algunas vitaminas o antibióticos, son termolábiles, se destruyen por el calor. Asimismo otros agentes físicos como las radiaciones son perjudiciales para estos materiales e imprácticos para esterilizarlos, en consecuencia queda la opción de hacerlo por filtración.

FILTROS BACTERIOLÓGICOSDurante muchos años gran variedad de filtros bacteriológicos han estado a disposición de los microbiólogos. Estos filtros se hacen de distintos materiales: placas de asbesto en los filtros seitz, tierra de diatomeas en los Berkefeld, porcelana en los Chamberland – Pasteur, discos de fibra de vidrio en otros filtros.Los diámetros de los poros de los filtros bacteriológicos miden desde aproximadamente 1 µm hasta varios. Casi todos los filtros están basados en el promedio de abertura de sus poros, la porosidad sola no es el único factor que impide el paso de los microorganismos. Otros factores como la carga eléctrica del filtro, la carga eléctrica de los microorganismos y la naturaleza de los líquidos que se van a filtrar, tienen que ver con la eficacia de la filtración.En los últimos años se han desarrollado un nuevo tipo de filtros (de membrana o moleculares) en los cuales los poros son de tamaño uniforme y especifico y determinado. Los filtros de membrana o moleculares están compuestos por esteres biológicos inertes de celulosa. Se preparan como membranas circulares de aproximadamente 150 micras de grueso y contienen millones de poros microscópicos de diámetro muy uniforme. Los filtros de este tipo se pueden producir de porosidades que varían de aproximadamente 0.01 a 10 µm. También se han adaptado a procedimientos microbiológicos para identificar y enumerar microorganismos en muestras de agua y otros materiales.El desarrollo de filtros de aire particulado de gran eficiencia (HEPA) ha hecho posible obtener aire limpio en lugares cerrados o cuartos. Este tipo de filtración y

el sistema de flujo laminar, se usan mucho para obtener aire libre de polvo y bacterias.

EFECTO DE LAS RADIACIONES SOBRE LAS BACTERIAS

CONCEPTOS GENERALES SOBRE RADIACIONES Y BIOMOLÉCULASSe puede definir la radiación como la propagación de energía por el espacio. Los principales tipos de radiaciones que pueden tener efectos sobre los seres vivos son: radiación electromagnética l (longitudes de onda, en nm)radiación infrarroja (IR) 800-106radiación visible 380-800ultravioleta (UV) 13,6-380rayos X 0.14-13.6rayos g 0.001-0.14rayos cósmicos < 0.001

Los efectos derivados de la absorción de radiación dependen de:

la energía de la radiación absorbida;

La naturaleza del material.1) Si la energía es E>10 eV, hablamos de radiaciones ionizantes: son los rayos X y los rayos g (estos últimos se emiten como resultado de la desintegración de radioisótopos). Un fotón de gran energía incide sobre un átomo, provocando la expulsión de un electrón de gran energía (fotoelectrón), y quedando el átomo en forma ionizada (cargado positivamente). El electrón expulsado suele tener energía suficiente para originar una nueva ionización, de la cual surge otro electrón de alta energía, etc. produciéndose una cadena de ionizaciones, con transferencia linear de energía, hasta que ésta se disipa en el material: el último electrón de la cadena es captado por otro átomo o molécula, que queda cargado negativamente. El resultado final es que se forman pares de iones (uno positivo y otro negativo). A su vez, esos iones originados tienden a experimentar reorganizaciones electrónicas ulteriores, que dan pie a cambios químicos en el sistema que se había sometido a la irradiación.2) Si la energía es E<10 eV, no se producen ionizaciones: los electrones del átomo o molécula pasan transitoriamente (de 10-8 a 10-10 segundos) a un nivel energético superior (entonces se habla de que el átomo o molécula están excitados), pero enseguida dicho electrón vuelve al estado energético inicial. En su regreso a su nivel energético previo, el electrón puede dar origen a una variedad de fenómenos:Fluorescencia: emisión de energía a una longitud de onda mayor que la del fotón incidente;Fotosensibilización: la energía se transfiere a otra molécula;

Reacciones fotoquímicas: se origina un cambio químico;Emisión de calor: la energía simplemente se disipa en colisiones entre moléculas.La luz visible y UV pueden dar origen a reacciones fotoquímicas, aparte de calor. Pero la radiación infrarroja sólo conduce a disipación de calor, si bien ciertas bacterias fotosintéticas anoxigénicas pueden aprovechar el infrarrojo para la fotosíntesis.

EFECTOS DE LAS RADIACIONES IONIZANTES Y SUS APLICACIONESAunque la unidad de radiación emitida es el roentgen (R), a efectos biológicos se usan parámetros que miden la energía absorbida por el sistema: las unidades son el rad (100 erg/g) y el gigaray (1Gy = 100 rads).En general, los microorganismos son más resistentes a las radiaciones ionizantes que los seres superiores. Por ejemplo, la dosis de reducción decimal (D10) para las endosporas de ciertas especies de Clostridium es de 2000-3000 Gy. Las células vegetativas de la bacteria Deinococcus radiodurans es de 2.200 Gy. Otras especies más “normales” poseen una dosis de reducción decimal en torno a 200-600 Gy.Las fuentes de radiaciones ionizantes son los aparatos de rayos X, los rayos g y los radioisótopos, como el Co60 o el Cs137.Los efectos de las radiaciones ionizantes son letales, tanto directos como indirectos, así como mutagénicos. Los efectos letales directos se logran a altas dosis de radiación, mientras que los letales indirectos y mutagénicos se consiguen a menores dosis.1. Efecto letal directo: por impacto de cuantos de radiación ionizante sobre alguna molécula esencial para la vida, que es el ADN (ya que obviamente es absolutamente esencial y suministra una sola copia de la mayoría de los genes bacterianos). Los daños al ADN son, principalmente: roturas en ambas cadenas, y entrecruzamiento entre dichas cadenas, que no puedan repararse.2. Efecto mutagénico: deriva de la producción de daños menores al ADN que pueden repararse por mecanismos propensos a error.3. Efecto letal indirecto: este tipo de efecto es el más importante, y deriva de la radiolisis del agua, que genera hidrógeno naciente (H•) y radical hidroxilo (OH•). El radical hidroxilo reacciona fácilmente con macromoléculas, sobre todo con ADN, provocando roturas en ambas cadenas, lo cual se traduce en efectos de letalidad. Si, además, la bacteria está expuesta al oxígeno mientras se la está irradiando, el efecto es aún más intenso, debido a que el O2 reacciona con los radicales libres, originando cadenas de reacciones de auto oxidación, muy destructivas, y promoviendo la formación de peróxidos y epóxidos, asimismo letales.H• + O2 à•HO22 •HO2 à H2O2 + O2Las principales aplicaciones de las radiaciones ionizantes son la esterilización de:

Material farmacéutico (antibióticos, hormonas, etc);

Material médico-quirúrgico (guantes de cirujano, suturas de nylon, jeringas desechables, agujas, bisturís, catéteres, prótesis, etc);

Alimentos envasados (aunque en algunos países aún sigue abierta la polémica por parte de ciertos grupos sobre la seguridad de este tratamiento).

EFECTOS DE LAS RADIACIONES ULTRAVIOLETALa radiación UV tiene un efecto letal y mutagénico, que depende de su longitud de onda. Ello se debe a la absorción selectiva de longitudes de onda por parte de ciertas moléculas biológicas:

Las proteínas tienen dos picos (es decir, máximos) de absorción: uno a 280 nm, debido a los aminoácidos aromáticos (Trp, Tyr, Phe), y otro a 230 nm, debido a los peptídicos.

El ADN y el ARN absorben a 260 nm, debido al enlace doble entre las posiciones 4 y 5 de las bases púricas y pirimidínicas.Los rayos UV no tienen actividad ionizante, pero provocan cambios químicos en las moléculas absorbentes, de modo que aparecen moléculas alteradas denominadas genéricamente fotoproductos. Los fotoproductos originan la inactivación de macromoléculas, aunque, como veremos enseguida, el ADN dispone de mecanismos para paliar o eliminar estas modificaciones potencialmente lesivas.Las consecuencias de inactivar proteínas o ARN no se dejan sentir a efectos de letalidad, ya que existen muchas copias de cada uno de estos tipos de macromoléculas, y se pueden volver a sintetizar. En cambio, la inactivación del único cromosoma de la bacteria tiene efectos letales primarios y efectos mutagénicos secundarios. Por lo tanto, el espectro de acción biológica de la luz UV equivale al de absorción del UV por el ADN (260 nm).

CONTROL POR AGENTES QUÍMICOS.

Los factores que deben considerar en la selección de agentes químicos antimicrobianos son:1. Naturaleza del material que será tratado.2. Tipos de microorganismos.3. Condiciones ambientales.

PRINCIPALES GRUPOS DE AGENTES QUÍMICOS ANTIMICROBIANOS

FENOL

Tiene la doble distinción de haber sido usado por Lister durante la década de 1860 en su trabajo para desarrollar técnicas quirúrgicas asépticas y de ser el patrón de comparación con otros desinfectantes para evaluar su acción bacteriana.Desnaturalizando primero las proteínas de las células y dañando luego las

membranas celulares.Los compuestos fenolicos son bactericidas o bacteriostáticos dependiendo de la concentración a la que se usen. Las esporas bacterianas y los virus son más resistentes que las células vegetativas. Algunos compuestos fenolicos son altamente funguicidas. La actividad de estos compuestos se reduce a pH alcalino y por material orgánico. También disminuye la actividad antimicrobiana a baja temperatura y en presencia de jabón.

ALCOHOLESEl alcohol etílico a concentraciones entre 50% y 70% es efectivo contra células vegetativas y no productoras de esporas, al 70% es la concentración bacteriana mas eficaz.Las concentraciones que actúan contra las células vegetativas son prácticamente ineficaces contra las esporas bacterianas.El alcohol metilico es menos bactericida que el etílico y es además altamente toxico y no se emplea de manera general para le destrucción de microorganismos. Los alcoholes superiores (propílico, butílico, amílico y otros) son más germicidas que el etílico; hay un aumento en el poder germicida a medida que es mayor el peso molecular de los alcoholes.El alcohol propílico y el isopropilo en concentraciones entre 40% y 80% se han registrado como útiles para desinfectar la piel.La eficacia del alcohol para la desinfección de superficies debe ser atribuida a su acción limpiadora o detergente. El alcohol reduce la flora microbiana de la piel y sirve para la desinfección de los termómetros clínicos bucales.Concentraciones de alcohol superiores a 60% son eficaces contra los virus, esta acción esta influida considerablemente por la cantidad de material proteico extraño en la mezcla. Las proteínas extrañas reaccionan con el alcohol y así los virus quedan protegidos.

HALOGENOS

YODO 

Es uno de los agentes germicidas mas antiguos y eficaces. Reconocido por la farmacopea de Estados Unidos en 1830, el yodo puro es un elemento cristalino azul oscuro con brillo metálico. Es muy poco soluble en agua pero mucho en alcohol y soluciones acuosas de yoduro de sodio o potasio.Este elemento se usa tradicionalmente como agente germicida en la forma conocida como tintura de yodo. El yodo también se usa en las formas conocidas como yodoforas.Uno de los agentes es la polivinilpirrolidona (PVP); el complejo se expresa PVP-I, el yodo se libera lentamente de este compuesto. Las sustancias yodoforas poseen las características germicidas del yodo y las ventajas adicionales de producir muy poca irritación y no teñir.El yodo es un agente bactericida muy eficaz y el único que tiene efectos contra toda clase de bacterias, también tiene propiedades esporocidas.

Posee propiedades funguicidas y antivirales importantes, las soluciones de yodo se usan principalmente para desinfectar la piel. También sirve para otros propósitos, como la desinfección del agua, aire (vapores de yodo) y el saneamiento de los utensilios usados en alimentos.El yodo es un agente oxidante y esto cuenta en parte para su actividad antimicrobiana.

CLORO El cloro, los hipocloritos y las cloraminas son desinfectantes que actúan sobre proteínas y ácidos nucleicos de los microorganismos. Oxidan grupos -SH, y atacan grupos aminos, indoles y al hidroxifenol de la tirosina. El producto clorado más utilizado en desinfección es el hipoclorito de sodio (agua lavandina), que es activo sobre todas las bacterias, incluyendo esporas, y además es efectivo en un amplio rango de temperaturas. La actividad bactericida del hipoclorito de sodio se debe al ácido hipocloroso (HClO) y al Cl2 que se forman cuando el hipoclorito es diluido en agua. La actividad germicida del ion hipocloroso es muy reducida debido a que por su carga no puede penetrar fácilmente en la célula a través de la membrana citoplamática. En cambio, el ácido hipocloroso es neutro y penetra fácilmente en la célula, mientras que el Cl2 ingresa como gas. El hipoclorito de sodio se comercializa en soluciones concentradas (50-100 g/l de Cloro activo), a pH alcalino y en envases oscuros que favorecen su estabilidad, pero es inactivo como desinfectante. A causa de ésto, es que deben utilizarse soluciones diluidas en agua corriente (que tiene un pH ligeramente ácido), con el objeto de obtener ácido hipocloroso. Generalmente, se utilizan soluciones con una concentración del 0.1-0.5% de Cloro activo. 

Su actividad está influida por la presencia de materia orgánica, pues puede haber en el medio sustancias capaces de reaccionar con los compuestos clorados que disminuyan la concentración efectiva de éstos. 

Compuestos Mercuriales Estos tipos de compuestos se combinan con los grupos -SH de las proteínas, inactivando enzimas. Dentro de los mercuriales orgánicos se encuentran el metafen y el mertiolate. 

PERÓXIDO DE HIDRÓGENO Es un antiséptico débil, con capacidad oxidante y formadora de radicales libres. Actualmente, el peróxido de hidrógeno gaseoso se está utilizando como desinfectante de superficies o descontaminante de gabinetes biológicos debido a que no posee las propiedades tóxicas y cancerigenas del óxido de etileno y formaldehído. COLORANTES Interfieren en la síntesis de ácidos nucleicos y proteínas (acridina) o interfieren en la síntesis de la pared celular (derivados del trifenilmetano). La acridina se inserta entre dos bases sucesivas del DNA separándolas físicamente. Esto provoca errores en la duplicación del DNA. Los derivados del trifenilmetano (violeta de

genciana, verde de malaquita y verde brillante) bloquean la conversión del ácido UDP-acetilmurámico en UDP-acetilmuramil-péptido. 

R = HSO4- Verde BrillanteR = Cl- Verde de Malaquita 

Violeta de Genciana 

Agentes alquilantesSon agentes esterilizantes, activos tanto sobre células vegetativas como sobre esporas, que ejercen su efecto letal por su acción alquilante de proteínas y ácidos nucleicos.

Formaldehido (HCHO). La aniquilacion la produce reemplazando hidrógenos lábiles de ciertos grupos químicos (-NH2, -OH, -COOH y -SH), produciendo: 

Hidroximetilaciones

Condensaciones (entrecruzamientos).Usos comerciales: 

Como gas, en la descontaminación de habitaciones;

Como formalina (solución acuosa al 35%);

Como paraformaldehido (polímero sólido de 91-99% de pureza).La formalina se emplea para preservar tejidos, en líquidos de embalsamamiento, y al 0,2-0,4% en la preparación de vacunas de virus. 

Glutaraldehido. 

Es menos tóxico y más potente que el formaldehido, y no se afecta por materiales con proteínas.Cada vez se emplea más como esterilizante frío de instrumental quirúrgico. Es el único recomendado para esterilizar equipamiento de terapia respiratoria. 

Oxido de etileno. 

Tiene un efecto similar al del formaldehido: Sustituciones y entrecruzamientos irreversibles en grupos amino, sulfhidrilo, etc., de proteínas. También reacciona con grupos fosfato y anillos nitrogenados de los ácidos nucleicos. Es un agente empleado como esterilizante gaseoso, aunque es de acción lenta. Se emplea cuando no se puede recurrir a la esterilización por calor: esterilización de material de plástico, drogas, ciertos productos biológicos, equipamiento electrónico. La operación se realiza en cámaras parecidas al autoclave. Sin

embargo, es un método caro y exhibe ciertos riesgos: presenta acción vesicante y toxicidad para el hombre (mutágeno y carcinógeno).

ß-propionil-lactona. 

Es 25 veces más activa que el formaldehido. Actúa como gas en presencia de 80-90% de humedad relativa, aunque es poco penetrante.

SALES CUATERNARIAS DE AMONIO (DETERGENTES CATIÓNICOS)

Son los detergentes más potentes en cuanto a su actividad desinfectante, siendo activos contra bacterias Gram-positivas y Gram-negativas. Los principales son los llamados compuestos de amonio cuaternario: Sales de amonio cuaternario, sobre todo aquellas que van como cloruros o bromuros. Su fórmula general se puede representar así:Los cuatro sustituyentes (R1 a R4) del N son cadenas de hidrocarburos variados. Las sales de amonio cuaternario más activas son aquellas que tienen tres grupos alquílicos cortos y un grupo alquílico largo: cloruro de cetilpiridinio, cloruro de benzalconioMecanismo de acción: La porción hidrófoba penetra en las membranas, mientras que el grupo polar catiónico se asocia con los fosfatos de los fosfolípidos, provocando alteraciones en dichas membranas, reflejadas en la pérdida de su semipermeabilidad, con salida de metabolitos de N y P desde el citosol. Es entonces cuando el detergente puede entrar al interior celular, con un efecto secundario de desnaturalización de proteínas. Su actividad se mejora a pH alcalino.Son rápidamente bactericidas a concentraciones muy bajas (del orden de una parte por millón, 1 ppm), siempre que en el material a tratar no exista materia orgánica.Usos, ventajas e inconvenientes: Tienen baja toxicidad, por lo que se pueden emplear como desinfectantes y antisépticos de la piel. Se emplean igualmente en la desinfección de material de industrias alimentarias.Su actividad se ve neutralizada por jabones y fosfolípidos, precipitando en su presencia.

CLASIFICACIÓN DE LOS MÉTODOS DE ESTERILIZACIÓN

A continuación se presenta un esquema de los principales métodos de esterilización, clasificados de acuerdo al tipo de agente que actúa.

Agentes físicos

El calor se puede aplicar como agente esterilizante de dos formas: el calor húmedo el cual destruye a los microorganismos por desnaturalización de las proteínas y el calor seco que destruye a los microorganismos por oxidación de sus componentes celulares. El calor es considerado como el método de esterilización por excelencia siempre y cuando el material a esterilizar soporte altas temperaturas sin sufrir ningún tipo de daño. La radiación, o emisión y propagación de la energía a través de un medio, puede ser utilizada como agente para la eliminación de microorganismos. Así tenemos que las radiaciones ionizantes se pueden utilizar para la esterilización de materiales termolábiles, como por ejemplo materiales plásticos, y las radiaciones no ionizantes, como la luz ultravioleta, puede ser empleada en el control de áreas cerradas.

Agentes mecánicos

La filtración permite la remoción de todos los microorganismos presentes en un líquido o un gas reteniéndolos sobre la superficie de un material.

Agentes químicos

Algunas sustancias químicas pueden ser usadas como agentes esterilizantes porque tienen la capacidad de promover una o más reacciones químicas capaces de dañar los celulares de los microorganismos (proteínas, membranas, etc.)

CONTROL DEL PROCESO DE ESTERILIZACIÓN

Todos los procesos de esterilización se deben controlar para poder asegurar quehan sido efectivos. Para ello se pueden utilizar indicadores físicos, químicos y/o biológicos, los cuales deben ser colocados en cada carga de esterilización.

Indicadores físicos

Entre los principales indicadores físicos se encuentran los medidores de presión y los termómetros los cuales permiten constatar las condiciones físicas dentro de la cámara de esterilización. También existen los termógrafos los cuales, además de registrar la temperatura alcanzada en el proceso, permiten conocer durante cuánto tiempo ésta se mantuvo.

Indicadores químicos

La mayoría de estos indicadores son cintas adhesivas que se adhieren al material a esterilizar. Estas cintas están impregnadas con una sustancia química que cambia de color cuando el material ha sido sometido al proceso de esterilización. Este tipo de cintas no son completamente confiables debido a que muchas veces sólo indican que se llegó a la temperatura deseada, pero no indican por cuanto tiempo ésta se mantuvo. También existen cintas diseñadas de manera que el cambio de color es progresivo, estas cintas son un poco más seguras porque permiten estimar si el tiempo de esterilización fue el adecuado.

Indicadores biológicos

Son preparaciones de una población específica de esporas de microorganismos, las cuales son altamente resistentes a un proceso de esterilización en particular.

Estos indicadores se deben colocar junto con la carga de esterilización, en el sitio que se considera que es más difícil que llegue el vapor y después del proceso, se deben incubar durante 24 horas en condiciones adecuadas. Si después de este periodo hay evidencia de crecimiento microbiano (por ejemplo cambio de color del medio de cultivo), el proceso de esterilización no fue satisfactorio.

Cuando se utilizan indicadores biológicos se debe verificar:

• Tipo de microorganismo

• Tipo de proceso de esterilización

• Número de lote

• Fecha de expiración

• Medio de cultivo utilizado

• Condiciones de incubación del indicador después de aplicado el proceso de esterilización

• Métodos de descontaminación para evitar la diseminación de esporas en el medio ambiente Con este tipo de indicado

MATERIALES Y METODOS

Autoclave Papel craft Pipetas Tubo de ensayo Pavilo Algodón

Esterelizacion por autoclave

CONCLUSIONES

Durante esta práctica aprendimos que la esterilización es muy importanteen la microbiología, ya que el material con el que se trabaja debe estar libre decualquier forma de vida. Conocimos métodos tanto físicos como químicos deesterilización, aunque solo utilizamos en esta práctica métodos físicos deesterilización seca y húmeda.

BIBLIOGRAFIA

http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/10_M%C3%A9todos_de_esterilizaci%C3%B3n.pdf

http://www.monografias.com/trabajos24/esterilizacion-laboratorio/esterilizacion-laboratorio.shtml

http://medaflojera.blogspot.com/2007/01/metodos-de-esterilizacion.html