Métodos analíticos para la determinación de bisfenol A en los alimentosAna Ballesteros Gómez, Soledad Rubio∗, Dolores Pérez-BenditoDepartamento de química analítica, Facultad de Ciencias, Campus de Rabanales, Edificio Anexo Marie Curie, 14171 Córdoba, España

abtracto

Alimentos constituyen la ruta principal para la exposición humana a bisfenol A (BPA), uno de mayor volumen productos químicos producen en todo el mundo. Las propiedades estrogénicas de BPA, su utilización amplia dispersión y el reciente extensa literatura que describe los efectos BPA de dosis bajas en animales, han expresado su preocupación acerca de su posibles efectos adversos sobre la salud humana. Una evaluación de riesgo de salud confiable de BPA se basa fundamentalmente en su identificación inequívoca y cuantificación precisa en los alimentos y el objetivo de la presente revisión esdan una descripción de los métodos analíticos divulgado hasta ahora para la determinación de BPA en estas matrices.Se pone énfasis en las estrategias principales para el tratamiento de la muestra, que consiste en generalmente de varios pasos laboriosos y lentos para alcanzar la necesaria sensibilidad y selectividad. Separación, identificación y cuantificación de BPA es hoy confiablemente hecha con masa espectrometría métodos, es decir, líquido chromatography–mass espectrometría (LC–MS) y chromatography–mass de gas espectrometría (GC–MS) y, por tanto, la atención principal se dedica a estas técnicas, pero otros métodos LC juntada a la fluorescencia o detección electroquímica, métodos así como inmunoquímicos son también cubierto. Se discuten los desarrollos futuros esperados y recientes

© 2008 Elsevier B. V. Todos los derechos reservados.

IntroducciónBisfenol A (BPA), propano 2,2-bis(4-hydroxyphenyl), es uno delos químicos de volumen más altos en el mundo [1,2]. Demanda global deBPA se prevé un crecimiento de 3,9 millones de toneladas en 2006 a sobre5 millones de toneladas en 2010 [3].Muchos países en todo el mundotienen una capacidad de producción grande de BPA, especialmente Alemania, laPaíses Bajos, Estados Unidos y Japón. Capacidad BPA en Europa occidental fueEstimado en 830 millones de toneladas en el año 2000 [4], grewby 4%/year de2000-2006 y se ha previsto crecer por 2%/year en elperíodo 2006 – 2010 [3]. El principal mercado de BPA es la producciónde policarbonato con la segunda salida ser resinas epoxi.Otros usos incluyen ignífugos, resinas de poliéster insaturadoy resinas de poliacrilato, polieterimida y polisulfona [5,6]. Agran variedad de alimentos en contacto con materiales destacan entre sus usos,deriva principalmente de policarbonatos (bebé biberones, vajilla,

fuentes de horno de microondas, contenedores, agua retornabley tubos de agua y botellas de leche) y resinas (protección interna epoxiforro para las latas de alimentos y bebidas, capa en las tapas de metalespara frascos de vidrio y botellas y revestimiento de agua potabledepósitos y cubas de vinos) [7]. La estructura química y algunospropiedades fisicoquímicas de BPA se muestran en la tabla 1.

El amplio uso de BPA de polímeros, con ester bonos Sin perjuicio de la hidrólisis y no de monómero pilimizado residuos, Ha llevado a una amplia contaminación ambiental. BPA concentraciones En el rango 5-320 ng L-1, en las aguas del río [ 8- 10], 20-700 ng L-1, en las aguas residuales [ 9- 11], 2-208 ngm-3 en el aire [ 12- 14], 0,2 -199 ng g-1 en polvo [ 12- 14] y 0,1 -384 ng g-1, en los productos alimenticios [ 15- 17] han sido reportados. Su presencia en los alimentos es de especial Preocupación, ya que constituye la principal vía de exposición humana [6,7,14]. El grupo científico sobre aditivos alimentarios, aromas, transformación Sida y materiales en contacto con los alimentos de la Unión Europea (UE) ha informado estimaciones del potencial exposición en la dieta de 13, 5,3 Y 1,5 g/kg de peso corporal/día en 6 a 12 meses de edad amamantados Los bebés, niños pequeños y adultos, respectivamente [ 7]. La generalizada La exposición al BPA se ha puesto de relieve por las mediciones En los fluidos y tejidos humanos (revisado en [ 18] ). Las concentraciones En la sangre y la orina fueron en promedio en los 0,3 -4,4 gL-1 y 0.47-9.5 gl 1 oscila con una tasa de detección por encima del 90% en la mayoría de Los estudios.

La actividad antiestrogénica de BPA se reportó por primera vez en 1993 [ 19]. La afinidad de BPA en los receptores de estrógeno es de 10.000 - a 100.000 - Veces más débil que la de estradiol, por lo que se ha considerado un muy Débil ambiental estrógenos. Sin embargo, un gran número de recientes Los estudios in vitro han demostrado que los efectos de BPA son mediadas por Tanto la genómica y la no-genómico de estrã³geno mecanismos de respuesta, Con la interrupción de la función de la célula que ocurren con dosis tan bajas Como 1 pm (0,23 ng L- 1) (revisado en [ 20] ). Los informes recientes también indican El potencial de BPA para trastornar hormona tiroidea acción [ 21], a Provocan la proliferación de las células del cáncer de la próstata humana [ 22] y para bloquear Síntesis de la testosterona [ 23] a muy baja parte por billón de dosis. Este Una amplia literatura sobre nuevos efectos a bajas dosis de BPA ha Dado lugar a una controversia acerca de la BPA los valores límite establecidos por la reglamentación Los organismos de protección de la salud de los consumidores y un nuevo riesgo Evaluación ha sido muy recomendable [ 20]. Actualmente, el Ingesta diaria tolerable (IDT) establecido por la Comisión de la UE [ 7] y el Dosis de referencia (RfD) establecido por la EPA [ 24] BPA es de 0,05 mg/kg Peso corporal/día. Este valor se obtuvo aplicando un 100 veces Factor de incertidumbre a la que se acepta en general Versión -

Fija determinando (NOAEL) de 5mg/kg. Por otro lado, un Límite de migración específica (LME) de BPA de plástico contacto con alimentos Materiales de 600 ng g de 1 fue establecido por la Comisión de la UE en 2004 [ 25]. Debido al alto volumen, amplia dispersión utilice y endocrino Interrumpiendo y propiedades tóxicas de BPA, es un claro candidato a ser Incluido en la lista de sustancias que están sujetas a autorización en el Nueva política de productos químicos autorizados por la Unión Europea, REACH (Registro, Evaluación, Autorización y Restricción de Sustancias Químicas, que figura en el Anexo XIV) [ 26]. Por lo tanto, hay necesidad de investigación(newmethods) y de la revisión

2. Fuentes y la eliminación de contaminación de fondoBPA es inherentemente ubicuo en el medio ambiente. Fondocontaminación de BPA se produce a niveles de L−1 ng y surge principalmente desolventes, columnas SPE, cristalería, artículos de plástico y otros reactivosy herramientas de laboratorio. En general, tratados térmicamente cristalería (4 h en400 ◦C) y se utilizan materiales de lavado con solvente como una precauciónmedida para evitar la contaminación de fondo [28].Se han encontrado concentraciones de BPA en 0.02gL−1 enAgua Milli-Q usando métodos altamente sensibles (cuantificación instrumentallímite de 5 pg) [29]. La contaminación se presentó desde elplásticos usados en el sistema de purificación y fue quitado por filtradoel agua a través de una membrana hidrofóbica (disco Empore).Otros autores, sin embargo, no encontró contaminación BPA cuando seanalizados calidad ultra-alta diferente aguas, como agua Pestanalde Riedel de Haën o los obtenidos de un Elgastasty un sistema de Millipore Milli-Q, aunque en estos experimentos loslímite de cuantificación instrumental fue de alrededor de 10 ng [32].Cartuchos SPE (e.g. Oasis HLB de aguas y Bond Elut certificarde Varian) se ha sabido para causar contaminación de BPA enconcentraciones de alrededor de 0.04gL−1 [31]. La contaminación fueefectivamente removido por prelavado los cartuchos que por lo menos15mL de metanol y probablemente se deriva no de la absorbentematerial, sino al proceso de fabricación. Carga de la muestraSPE puede introducir la fuerte contaminación de BPA cuando jeringas de vidriose utilizan, causada principalmente por el adhesivo utilizado para fijar la aguja[30,32]. Utilizando una bomba peristáltica con tubos de vinilo, la contaminación de BPAllegó a ser insignificante aunque la contaminación fueimportante para los dos derivados BPA (es decir, 4-terc-butylbenzoic ácido,BBA y 4-tert-butilfenol, t-BP). Contaminación de la muestra de la SPEcarga puede eliminarse casi totalmente mediante la sustitución de latubos de vinilo con Viton de DuPont [32].

3. Tratamiento de muestraHay una amplia variedad de alimentos que contienen BPA incluyendo frescoy conservas muestras sólidas y líquidas (Fig. 1). Determinación de

BPA en estas matrices a menudo requiere la preparación de la muestra ampliaantes del análisis instrumental. Los pasos habituales en alimentospreparación de la muestra incluyen pretratamiento, extracción, clean-up,concentración y a veces derivatización y constituyen elcuello de botella en el actual análisis de alimentos (Fig. 1). Las muestras sólidasson generalmente primero homogeneizada mientras que los líquidos que se filtrano centrifugado. Tratamientos especiales pueden ser requeridos dependiendo desobre la composición de la matriz; por ejemplo las bebidas carbonatadas son desgasificada [16,33], muestras con alto contenido en proteínas pueden requerirsu eliminación por los tejidos de peces y precipitación son triturados yliofilizado antes de homogeneización. Conservas que contienen ambosporciones de líquidos y sólidas son generalmente filtradas y tratadas por separado.Extracción por solventes y SPE son las técnicas más usadaspara el aislamiento de BPA de sólidos y líquidos muestras, respectivamente,principalmente debido a su simplicidad y amplia aplicabilidad. Otrostécnicas (p. ej., MAE, PLE, MSPDE, SPME, SBSE, CF. Fig. 1), aunqueapenas usados hasta ahora, puede mejorar la extracción de BPA en términosde tamaños de muestra, automatización y consumo de disolventes. Los extractosque contienen BPA suelen ser sometidos a extensa clean-up y enEsta extracción líquido-líquido de respeto y SPE son preferidas. Concentraciónde BPA por evaporación del solvente del extracto final esun paso inevitable debido a su baja concentración en alimentos (cf.Tabla 2). En general, suele ser la combinación de diferentes técnicasinevitable y métodos se convierten en dependientes de frequentlymatrix.Sólo los métodos para estudiar la migración de BPA deunusedcommercial latas por extracción con simulación de alimentos líquidosson más simples [37]. Cuadro 3 da algunos ejemplos representativosde los procedimientos de tratamiento de muestra para el análisis de que contienen BPAalimentos. A continuación, las principales técnicas utilizadas para la extracción y limpiezase discuten detalladamente.

generalmente preferido para la extracción de alimentos sólidos [16,17,39,40,42,44,46]Aunque otros como acetona [41], [39,47] de metanol y etanol[43] también puede extraer BPAefficiently. Alimentos líquidos son extraídos conacetato de etilo [45], [48] de cloroformo o diclorometano [33]. Como unla regla general, extracciones repetidas son generalmente necesarias parael aislamiento total de BPA. Típico consumo de disolventes en general,incluyendo extracciones repetidas y lavado, es entre 40y 300mL. Extracción veces oscilan de 10min a 120min utilizandoagitación o sonicación para favorecer la partición de equilibrio. Sodio anhidrosulfato con frecuencia se agrega a la muestra antes de [40,41] odespués de la extracción [16,17] para separar trazas de aguaen la capa orgánica. La importancia de controlar la enzimáticadegradación de BPA durante la extracción de muestras como fruta frescay verduras se ha destacado puesto que conduce a las recuperaciones pobres

[41]. Degradación puede prevenirse mediante la adición de 0.1N ácido clorhídrico parael solvente de extracción solvente [41].

Debido a la selectividad limitada de extracciones de base solventehay una necesidad de limpiar extensa antes de análisis instrumental.Eliminación de lípidos del extracto es esencial para las muestras deorigen animal (pescado, carne, etc.) dado que pueden reducir significativamenteel rendimiento analítico de LC y GC. Afecta material lipídicola superficie activa de la inmóvil fase en LC y degrada elpoder de resolución de la columna. En GC/MS, los lípidos se acumulan en elfuente de puerto, la columna y el ion de inyección. Eliminación de grasa se hace principalmentepor extracción líquido-líquido con n-heptano [16], 2,2,4-trimetilpentano[17] y [39,40,46] n-hexano o congelando los lípidos en el extractoen −24 ◦C durante 40 minutos, seguido de filtración [38]. El uso de SPE paraClean-up de los extractos que contienen BPA es inevitable en la mayoríaprocedimientos de tratamiento de ofsample [38, 40–44, 46].Después de eso, la evaporaciónde elutes, reconstitución con disolvente orgánico y filtración(0.20–0.5 m) completa el tratamiento de la muestra. Aunque generallas recuperaciones de estos procedimientos son generalmente muy por encima de 75%, bajorecuperaciones ((<50%)debido a interactionswere de matrix–analyte registradopor Thomson et para una variedad de alimentos [17]. Kuo et al también obtuvobajas recuperaciones (18%) y alta desviación estándar relativa (RSD)(24%) en un tipo específico de polvos de fórmulas infantiles, es decir, hipoalergénicosmarca, este hecho se relaciona con la presencia de hidrolizadoenzymesinfluencing el SPE [49]. Table3compares solvente variosmétodos de extracción en términos de consumo de disolventes en general,factores de concentración y recuperaciones, entre otras características.

3.1.2. Extracción asistida por microondas (MAE)Aplicación de basedonthe de MAEis de energía de microondas para la muestradurante la extracción, que en consecuencia se agitó y se calientarápidamente. Constituye una buena alternativa a la extracción por solventes demuestras de alimentos sólidos y semisólidos porque las eficiencias de extracción buenapuede lograrse utilizando menos veces extracción solvente y más cortos.La aplicación de MAE a la extracción de alimentos que contienen BPAha sido un pez bastante limitado y restringido a [50,51]. Muestra bajatamaños (normalmente entre 0,2 y 1 g de tejido descongelado y triturado)fueron tema toMAEwith 20mLof dichloromethane:methanol (2:1,v/v) [50] o 10 mL (20% de humedad) de Tetrametilamoniohidróxido (TMOH) y 1mL n-Nonano [51] durante 15-20 minutos SPE (Sep-Pak NH2) [49] y Oasis-HLB [50] fueron utilizados para la limpieza de laextractos con la consiguiente evaporación de disolventes y reconstituciónantes de la LC/MS [50] o GC/MS [51]. Recuperaciones promedio fueron en los márgenes de

47–49% y 78–79% para el tejido del hígado o músculo con picosde trucha arco iris (RSD 4.1–4.7% [50]) y el 92–111% (RSD 3 a 8 %[51]) para una variedad de pescados y mariscos como gambas, cangrejos, conchas, blancoalmejas, calamares y peces.3.1.3. A presión extracción líquida (PLE)PLE, también producción acelerada de extracción por solvente (ASE), implicael uso de disolventes líquidos a temperaturas elevadas (40–200 ◦C) ypresiones (1000–2500 psi). En estas condiciones, los solventes tienenmayor poder de solvatación y han aumentado las tasas de extracción.La aplicación de PLE en análisis de alimentos ha sido recientemente revisada[52,53]. Aunque apenas se utiliza para la extracción de contener BPAalimentos, la conveniencia de PLE para la extracción de muestras de animales [28,54]y origen vegetal [32] antes de LC/MS ha sido demostrado. Los solventesutilizados han sido formeat de diclorometano (carne de cerdo, carne, conejo, patoy pollo) [28], acetone–n-hexano (1:1, v/v) de hígado de pescado [54] ymetanol para cereales [32]. Sulfato de sodio [54] y diatomeas[32] de la tierra se han utilizado como agentes dispersantes. La optimizaciónde la extracción de las condiciones de PLE incluye el estudio de latipo solvente, temperatura, presión, tiempo de extracción y númerode ciclos y esto puede realizarse mediante estadística experimentalprocedimientos de diseño para minimizar el número de experimentos [32].Frommeat de eliminación de lípidos se lleva a cabo mediante la mezcla de las muestras conCelite y poner activaron alúmina neutra en la parte inferior de laCélulas PLE [28], mientras que su eliminación fromfish hígado ismade por extraccióncon n-hexano después PLE [54]. Para limpiar de extractos de PLE porSPE (Oasis HLB [32], Florisil 60 [54] y aminopropil sorbentes [28])siempre es necesaria para lograr selectividad. Las recuperaciones obtenidas enel applicationswere anterior del 81% al 104% (RSD 9%) de los cereales[32], 53% (RSD 20%) de hígado de pescado [54] y del 91% al 100% paracarne [28].

3.2. Extracción en fase sólida (SPE)Son en gran medida la técnica más utilizada para la extracción de ambosde alimentos líquidos que contienen BPA y la limpieza de los extractos crudosdespués de la extracción solvente. La base de SPE [55] y su aplicaciónen análisis de alimentos [56–58] han sido revisados exhaustivamente.La selección de un adecuado absorbente para BPA principalmente se regirápor sus propiedades (carácter moderado polar y presenciade grupos de donantes/aceptador de hidrógeno, véase tabla 1) y el tipo dematriz de alimentos. Sorbentes tanto, no selectivos y selectivos han demostradoexcelente rendimiento para aislamiento y limpiar de BPA fromfood(véase tabla 3).3.2.1. No selectivo sorbentesEl copolímero de divinilbenceno/N-vinilpirrolidona (OASIS HLBfromWaters, 30–200mg) ha sido el más utilizado absorbente hasta la fecha.

El polímero hidrofílico de N-vinilpirrolidona ofrece buena mojabilidadde los sorbentes y actúa como un aceptor de hidrógeno, mientras queel polímero hidrofóbico divinilbenceno proporciona fase inversaretención de BPA. Ofrece ventajas sobre la clásica silicona Sorbentes,es decir, alta área específica (800m 2/g), la posibilidad de secar durante elprocedimiento de extracción sin reducir su capacidad para retener el BPA ycomo otras resinas poliméricas, estabilidad en el rango de pH todo [59].Entre otros alimentos líquidos, OASIS HLB se ha aplicado para el aislamientode BPA de la porción acuosa de conservas de frutas y verduras[40], el lixiviado es originario el tratamiento de vacío alimentos para mascotaslatas con agua destilada a 121 ◦C por 30 min [44], el agua potabley bebidas de soda [60], [61] el calostro humano y altamente viscosomuestras, como la miel [62]. La extracción de proteínas y lípidos fuenecesaria para las muestras de calostro humano antes de SPE. Para ello,las muestras se diluyeron con agua destilada, tratada conacetonitrilo o 2-propanol, centrifugado y filtrado [61]. El tamañode las muestras fue en las gamas 1–50mL [40,44,61] y 10 g [62]

Aunque el volumen de la brecha aumentó hasta 2 L para beberagua [60].Por otra parte, como OASIS HLB elimina eficientemente hidrofílicoy lipofílicos interferencias [63] y se ha aplicado a laClean-up de una variedad de alimentos después de la extracción solvente, es decir, pescado(para eliminar los lípidos polares co-extracted) [38], frutas y hortalizas(porción total de contenido o sólido) [40,41] y una variedad deConservas [46]. Un segundo paso de limpiar con una fase normalSPE absorbente (Florisil, un silicato de magnesio sintético) era necesarioen algunas aplicaciones, es decir, en el tratamiento de pescado, fruta ymuestras vegetales [38,40,41]. Retención de Florisil ocurre principalmentea través de la adsorción, y limpieza debe ser realizada de muestraextractos previamente se evaporaron y se redisuelve en un no-polardisolventes orgánicos como el n-hexano. Recuperaciones generales en todo el citadoaplicaciones eran superiores al 80%.Se ha propuesto químicamente servidumbre de fase inversa de sílice (C18)como una absorbente para el aislamiento de BPA de mineral de la SPEagua y vinos [64] y lata de leche condensada y en polvo[65]. Las muestras de leche se diluyeron con water–methanol (8:1, v/v)con el fin de obtener extractos tan limpio como sea posible. La adición deagua reduce la viscosidad de la muestra, lo que resulta en un mejorcaudal durante SPE, mientras que la adición de metanol encaminadasla desestabilización de la emulsión de la leche. Se argumentó que eso si lechelas membranas del glóbulo de grasa no se interrumpen, BPA podría no ser eficazy reproducible extraído. Muestras de leche con un contenido de grasapor encima del 3,5% previamente diluido con agua. Recuperaciones de la SPE paraBPA oscilado entre 57 y 85% y el estándar interno [2H 16]

bisfenol A, BPA-d16 fue utilizado para la cuantificación [65]. El uso depoliestireno-divinilbenceno (PS-DVB, Isolute y PSDVB hidroxilado,Sorbentes Isolute ENV) en esta aplicación no mejorólas recuperaciones a pesar de ofrecen hidrofóbico y – interacciones pararetención de BPA. Por el contrario, fueron superiores al 85% de las recuperacionesobtenidos por el PS-DVB adsorbentes para el aislamiento de BPA deaguamiel diluida y acidificado [62], diluido, centrifugado y filtrado de aguainfantil fórmula y conservado vegetales y zumos de fruta [15,66]y bebidas enlatadas no tratadas [67]. Recuperaciones siempre fueron más altasdel 85%.

Por último, multimodo fases (Isolute multimodos cartuchos)también se han propuesto para el aislamiento de BPA de café instantáneo[68].Phaseswere multimodo para explotar de modo múltipleinteracciones andwere originalmente diseñado para la detección de drogasy metabolitos [69,70]. Además de explotar las interacciones múltiplespara conservar las mezclas de analitos con diferentes propiedades,Estos sorbentes han utilizado últimamente para obtener extractos limpios paraun compuesto que puede ser retenido por múltiples interacciones. Isolutecartuchos multimodos combinan catiónicos, aniónicos y no polarfuncionalidades. Recuperaciones en café entre 85% y 89% (RSD:4-7%).En general, el uso de SPE para aislamiento de BPA de líquidoalimentos ofrece dos ventajas en comparación con LLE, es decir, mayorselectividad y menor consumo de disolventes. Por otra parte, las concentracionesfactores, enhancedby evaporación de disolventes, son similares paraSPE y LLE. El SPE de alimentos líquidos generalmente requiere más limpiezay debe tener mucho cuidado con respecto a las pequeñas partículaspresentes en los extractos de muestra que pueden producir lowrecoveries yirreproducible por adsorción de analitos o estorbar. Un detalladocomparación entre diferente SPE y métodos de extracción por solventese da en la tabla 3.

3.2.2. Selectivo sorbentesUna variedad de materiales absorbentes de SPE altamente selectivos han sidodesarrollados que son especialmente adecuados para la determinación de trazascontaminantes en tales muestras complejas como alimentos, por lo tanto realizarextracción y limpiar en un solo paso. Por otro lado, ladesarrollo de estos smartmaterials es largo, complejoy caro, como es el caso de immunosorbents y molecularmentepolímeros impresos. Su aplicación en el análisis de alimentos y específicamentea la determinación de BPA, está surgiendo pero un bien escaso

hasta el momento.3.2.2.1. Acceso materiales (RAMs). El término "restringidoacceder a materiales"(RAMs) fue introducido por Desilets et en 1991[71]. Estos sorbentes fueron desarrollados especialmente para el on-lineClean-up/extracción de muestras biológicas (como plasma ysuero) con el fin de realizar un análisis de alto rendimiento. Cosechadora de carnerostamaño de la exclusión de las proteínas y otras macromoléculas con lasimultáneo enriquecimiento de analitos de masivos moleculares bajos en elsuperficie interior del poro, que son retenidos por conventionalmechanisms(hidrofóbico, iónico o interacciones de afinidad) [72]. La exclusión de tamañoes alcanzada por una barrera de difusión física (diámetro de poro) o por unbarrera química creada por un polímero en la superficie externa de lapartículas.Se ha utilizado un RAM (LiChrosphere RP-18 anuncios de Merck)para el análisis simultáneo de la SPE-LC–MS/MS on-line de BPA, otroscompuestos fenólicos y triclocarban en la leche materna [73]. La memoria RAMconsta de una fase inversa servidumbre cubriendo el poro interno (C4,C8 o C18) y una superficie modifiedwith grupos hidrofílicos (glycerylpropyl,es decir, diol moieties), que actúa como una barrera física (tamaño de los poros6 nm) que excluye las macromoléculas. El método consiste en laAdemás del estándar interno (100 L, 13 C 12-BPA) a la muestra,la hidrólisis enzimática de la BPA conjugado, proteína yextracción de lípidos mediante la adición de 2-propanol y centrifugación aExtraiga el sobrenadante limpio (200L), que está sujeta a on-lineSPE-LC–MS/MS. También puede ser usado medida la libre de BPA omitiendoel tratamiento enzimático. Recuperaciones de BPA fueron entre 94y 106% y la precisión del método en el rango 5–19%.

3.2.2.2. Immunosorbents (ISs). Columnas de inmunoafinidad (IAC) olos immunosorbents supuestos (ISs) son hechos por unión covalenteanticuerpos en un soporte adecuado. Ofrecen únicaselectividad sobre la base de reconocimiento molecular, que es particularmenteadecuado a las matrices de alimentos complejos. ISs pueden diseñarsepara apuntar un único analito o explotando reactividad cruzada aExtracto de toda una clase de compuestos estructuralmente relacionados. Aunquemayoría de las aplicaciones es para muestras biológicas y ambientales(revisado en [74]), ISs también han sido explotados para la extracciónde alimentos y son comercialmente disponible para el análisis de naturaltoxinas [75,76]. Los principales inconvenientes de esta técnica es el costo deproducen los anticuerpos y la corta vida de columnas.Se han reportado varios métodos que utilizan sol–gelcromatografía de inmunoafinidad para limpiar alimentos líquidos oextractos crudos previo a la determinación de BPAby LC–fluorescencedetección. Precolumns de sol–gel que contiene el anticuerpo no estaban en líneajunto con las columnas de inmunoafinidad para prevenir

desde la obstrucción causada por las pequeñas partículas presentes enExtracto de la muestra. El enfoque es aplicable a una variedad deConservas de alimentos incluyendo bebidas, frutas, verduras [77.78], fatcontaininglos productos alimenticios (por ejemplo sopa de patata de atún, crema,) [78] y vino[79]. El ISs producida por la inmovilización de los anticuerpos enlos poros de una matriz de sílice generado sol–gel son más simples, más baratoy más versátil que los preparados por el acoplamiento covalentede anticuerpos policlonales de CNBr activado Sepharose 4B [80]. Elcapacidad máxima de las columnas IAC de encuadernado para BPA era 280 ng y bienreproducibilitywas lotes encontrados, siendo reutilizable por lo menos 15veces. Sustancias que muestran alta reactividad cruzada (> 1%) no afectóla determinación de BPA desde eficientemente fueron separados porel sistema LC.En general, las muestras de alimentos deben tratarse en cierta medidacon el fin de hacerlos compatibles con cromatografía de inmunoafinidad.Withwater de dilución es esencial desde solventes orgánicos

Fig.2. Cromatogramas obtenidos para solución a BPA (10 ngmL−1), (b)vino muestra sujeta a limpiar por extracción en fase sólida (C18 cartucho) y (c)la misma muestra de vino limpiado-para arriba por cromatografía de inmunoafinidad [79].causar desnaturalización irreversible de anticuerpos. Alimentos líquidos comobebidas y vinos son desgasificados y diluyeron 1:1 con phosphatebufferedsalino (PBS) (pH 7) para permitir la Unión de BPAimmunosorbent. Alimentos sólidos como frutas, verduras, estofado,sopa y pescado se extrae con acetonitrilo, extraido hacia atrás conn-hexano para eliminar los lípidos en matrices grasos, filtrado y diluido(1:10) withwater antes de limpiar con ISs.Compared C18-basadoSPE, IAC fue superior en la eliminación de interferencias de matriz de alimentos quese muestra en la figura 2 para muestras de vino limpiado-para arriba con C18 y IAC.Recuperaciones de BPA con IAC fuertemente dependen de la matriz alimentaria.Así, algunos de los valores obtainedwere: 53% en guisantes, 75% en duraznos[77], 27% en goulash, 103% en un refresco de limón [78] y de 74%

al 81% en vinos [79]. Valores RSD para estas muestras fueron entre1 y el 21%. Las recuperaciones de variables y bajas obtenidas para IAC fueronexplicó sobre la base de la naturaleza dependiente de la matriz de la anteriordisolventes de extracción de BPA y la influencia de coextraencomponentes de la matriz de las interacciones BPA–antibody.3.2.2.3. Molecularmente impresos polímeros (MIPs). Molecularmentepolímeros impresos (MIPs) son polímeros sintéticos que molecular

capacidad de reconocimiento para un parámetro de destino [81]. MIPs ofrecen algunosventajas sobre la ISs como estabilidad frente a los solventes orgánicos,ácidos fuertes y bases y calefacción. Además, permitenmayores volúmenes de muestra y reutilización y su síntesis es más fácilpuesto que no son dependientes en la producción de anticuerpos. En la actualidad unnúmero de enfoques se han utilizado para preparar BPA impresopolímeros, que han sido aplicados a la determinación [82–85]y eliminación [86] de BPA y otros contaminantes de estrógeno fenólicos enaguas ambientales. Nuevas arquitecturas para desarrollar BPA-MIPs,como híbrido molecularmente impresos membranas [86], molecularmenteimpreso de microesferas Poliétersulfona (PES) [87] o unhíbrido RAM-MIP [88] se han descrito en la literatura.En menor medida se han propuesto aplicaciones alimentarias de MIPs(revisado en [89]) aunque es una zona emergente con prometedordesarrollos. A lo mejor de nuestro conocimiento, sólo una aplicaciónha sido desarrollado para la extracción basadas en MIP de BPA dealimentos [90]. Un acercamiento combinatorio fue utilizado para simplificar la optimizaciónprocedimiento. Ácido metacrílico (MAA) y 4-vinylpyridine(4-VP) fueron evaluados como monómeros funcionales, glicol de etilenoDimetacrilato (EDMA) y trimethylolpropane trimethacrylate(TRIM) como cross-linkers y metanol, acetonitrilo y toluenocomo solventes. El iniciador utilizado fue 2,2-azobis methylbutyronitrile(AIMN) y la plantilla era de BPA. Isótopos estables etiquetadoscompuestos como el BPA-d16 [88] y análogos de la estructura como p-tertbutylphenol[84], también han sido utilizados como plantillas en otroenfoques para evitar indeseables plantilla salida fromMIP y laconsiguiente llevar sobre efectos. Los componentes óptimos seleccionadosfueron 4-VP (4 mmol) y recorte (12 mmol), que proporcionan una mayorgrado de reticulación, AIMN (0.88 mmol) y tolueno (150 mL),que proporciona menor fijación no específica. La limpieza basadas en MIP /método de extracción/concentración permitida la determinaciónde BPA (recuperación del 78%; RSD 10%, n = 3), libre de co-extractives, en elfase acuosa filtrada de conservas.

3.3. Menos comunes técnicas de extracciónTécnicas de extracción por sorción sobre miniaturizada como fase sólidaMicroextracción en (SPME) y revuelva la barra extracción por sorción sobre (SBSE) hanla capacidad de mejorar el aislamiento y la limpieza de contaminantesde los alimentos en términos de consumo de disolventes, automatizacióny muestra manejo reducción, sin embargo su aplicación a laextracción de BPA fromfood es todavía limitada hasta la fecha. Asimismo, la matrizdispersión de la fase sólida (MSPD), que tiene el potencial de simplificarla extracción de muestras sólidas, se ha aplicado también apenaspara la extracción de BPA de alimentos. A continuación, estas aplicaciones son

comentó destacando sus principales ventajas e inconvenientes.3.3.1. Microextracción en fase sólida (SPME)El dispositivo SPME consiste en una fibra de sílice fundido recubierta con unfase estacionaria apropiada conectada a una microjeringa modificado.La extracción puede realizarse mediante la suspensión de la fibra en lala fase de vapor sobre la muestra líquida (headspace (HS)-SPME) o pordirigir la inmersión en la muestra, (DI)-SPME, siendo la desorciónllevado a cabo térmicamente, exponiendo la fibra en el puerto de inyección deun cromatógrafo de gases, o químicamente, cuando acompañada de LC [91].HS-SPME seguido por GC–MS es ideal para la extracciónde compuestos volátiles de los alimentos (revisados en [92]) desde el analito

las determinaciones son prácticamente libres de interferencias, pero ninguna aplicaciónrelaciona con BPA en los alimentos se han desarrollado hasta ahora. DI-SPMEseguido por GC–MS se ha aplicado a la determinación de BPAen simulantes de alimentos acuosa [93] y agua de los envases plásticosy vajilla [94]. DI-SPME también se ha propuesto antesLC–FL para la investigación rápida de BPA en conservas, sólo analizarla fase acuosa de la can [95]. Diferentes fases estacionariascon la capacidad para soportar temperaturas altas del inyector (polidimetilsiloxano,PDMS; carboxen/PDMS; PDMS/divinilbenceno,DVB; Carbowax CW/DVB y polyacrylate, PA) evaluaron lala extracción de BPA por DI-SPME–GC [93,94]. La capa PA diolas mejores recuperaciones en base a su polaridad similar al BPA. Entrelos materiales de revestimiento probados para extracción de BPA por DI-SPME–LC,las fibras más polares dieron los mejores resultados. Recuperaciones fueron 6% paraPDMS-DVB, 7% para PA, 58% de PDMS y 90% para CW, así que el últimofue seleccionado como óptima. El efecto de la fuerza iónica enLas recuperaciones BPA fue significativa y los tres métodos incluyen eladición de sal, es decir, 7,5% (w/w) [93,95] y 15,4% (w/w) [94].Absorción máxima se produjo en pH neutro [93,95] y la absorciónproceso se llevó a cabo a temperatura ambiente [95] o en SSP.schintzii ◦C[93,94].

Los tres métodos fueron lo suficientemente sensibles para la detección oevaluación de la migración de BPA (límites de cuantificación fueron 3.8mgL−1[95] y 0.01–0.02mgL−1 [93,94]), pero también presentaron gravesinconvenientes. Así, la automatización de SPME con LC–FL a través de lainterfaz de Supelcowas no da resultado, siendo el off-linemodo más eficiente que el uno automatizado en términos de sensibilidady resolución de pico [95]. Este hecho fue explicado sobre la baseel mayor factor de concentración en el modo off-line (∼67) yla introducción más lenta de los analitos en el sistema de la LC en elmodo dinámico, resultando en picos más amplios [95]. De hecho, Eiserty Pawliszyn [96] más tarde desarrolló la técnica SPME en tubo,que utiliza un capilar revestido de la pared interna como la extractionmedium

y es más conveniente para la automatización de la LC. Tubo SPE ha sido con éxitoaplicado a la extracción de BPA y otros estrógenos deaguas ambientales [97,98], pero no en alimentos muestras todavía. Otrosel punto débil del método SPME–LC–FL fue la reproducibilidad(RSD fue 22% para 100mgL−1 de BPA). Con respecto a la determinaciónde BPA por SPME–GC–MS, la variabilidad fue alta entreserie (promedio RSD∼10–13%) y en consecuencia una calibración para cada unoserie de análisis se recomienda [93,94]. Por otro ladoa pesar de sólo simulantes acuosos o agua potable fueron analizados,las recuperaciones bajas resultante del efecto de los componentes de la matriz(7–65%) [94,95], hizo aconsejable el uso de la adición estándarmétodo para la cuantificación de BPA. Se relacionaron con las recuperaciones bajascompetitividad entre BPAand el matrixcomponents para el enlacea la limitada cantidad de fase estacionaria, que condujo al analitodesplazamiento [94]. A nuestro conocimiento ningún estudio relacionado con el uso deSPME para extracción de BPA de matrices más complejas de alimentos hase ha divulgado hasta ahora. De hecho, el uso de DI-SPME en matrices de alimentosSi necesita limpiar exhaustiva para garantizar la reproducibilidad yla robustez de las fibras, que pueden ser afectados por adsorción deproteínas u obstruida por las partículas, del mismo modo que puede ocurrir en elAnálisis de BPA en otras matrices complejas como plasma humano

3.3.2. Extracción absorbentes (SBSE) barra agitadoraSBSE utiliza una barra de agitación en un tubo de vidrio sellado que está cubierto conpolidimetilsiloxano (PDMS) para extraer solutos [100]. En comparaciónpara SPME, una mayor cantidad de fase estacionaria (50–250 vecessuperior) es usadas y por lo tanto mejores recuperaciones, sensibilidades andsamplecapacidad se consiguen. Como en SPME, puede estar inmerso la barra agitadoraen el líquido de la muestra o puede realizarse en el espacio anterior ellíquido o el sólido muestra para determinar volátiles y semi-volatiles(extracción por sorción sobre headspace, HSSE). Extracción de los analitos dela barra se logra mediante desorción térmica de GC o elución con unaSolvente de la LC. La técnica se desarrolló inicialmente para la extracción decompuestos orgánicos de muestras acuosas, pero hoy una variedad deaplicaciones en el medio ambiente, alimentación y áreas biomédicas hanse ha divulgado (ha comentado el en [101]).PDMS es disponible en el mercado único de la capa, laaplicación de SBSE para compuestos polares y semipolar requiereDerivatización. Por lo tanto, la extracción de BPA de agua [102–104]se ha llevado a por derivatización de BPA con anhídrido acético,inmersión de la barra en la desorción de solución y termal-Análisis GC–MS. De esta manera, las LODs para BPA fueron en lagama 0.6–2 ng L−1. A pesar de SBSE nuevo recubrimientos son necesarios paraampliar el alcance de SBSE, sólo unos cuantos se han divulgado

hasta el momento. Cabe destacar los twisters de la doble fase (cortoTubos PDMS cerrados en ambos extremos con imanes, con un interiorcavidad que está repleto de adsorbente de carbón activado), quese propusieron mejorar las recuperaciones de compuestos polares [105]y dos materiales selectivos, es decir, un polímero molecularmente impreso(MIP) para la extracción de monocrotofos [106] y una restringidaacceso a medios (RAM) para la extracción de cafeína y relacionadas conmetabolitos [107]. En este sentido, basada en una novela capa SBSEen polidimetilsiloxano ha sido /-ciclodextrina (PDMS /-CD)recientemente desarrollado y aplicado a la extracción de BPA (y otroscompuestos estrogénicos) de agua ambiental, agua potabley lixiviados de vajilla de una sola vez, antes de la determinación porLC–FL [108]. La capa de PDMS/CD fue preparada por un sol–geltécnica, whichprovideddirect químico de la papeleríafase al substrato de cristal y dio lugar a una mayor estabilidad en comparación cona la técnica de deposición física empleada con frecuencia paracapa. La introducción de la ciclodextrina permitió aumentarla recuperación de compuestos polares debido al alto número de funcionalgrupos hidroxilo de la molécula -CD y la selectividadproporcionados por su capacidad de reconocimiento molecular. La extracción fuerealizado por inmersión de la barra de agitación en la muestra (5 mL)40 min (condiciones de no equilibrio) a temperatura ambiente. Desorciónde BPA se realizó con 100 litros de metanol durante 2 min bajoagitación ultrasónica (cociente del volumen de la muestra sobre el volumen del extractode 50). PDMS /-CD revestido revolver bar proporcionada mejor selectividady sensibilidad para compuestos polares que una barra de agitación recubiertas de PDMSy un CD de PDMS– recubierto de fibra. El menor rendimiento de métodopara SPME fue atribuida al menor volumen de fase estacionariay la introducción de una etapa tercero competitiva en la agitaciónpaso, es decir, el teflón recubierto barra magnética. El LDD de BPA fue8ngL−1, con recuperaciones entre 86 y 116% y RSD en lagama 0.7–10.7%.

3.3.3. Dispersión de fase sólida matriz (MSPD)MSPDwas reportada por primera vez en 1989 [109] y iswell adecuado para elextracción de alimentos sólidas, semisólidas o altamente viscosos y biológicasmatrices (revisados en [110.111]). La muestra se mezcla conun absorbente como C18 enlazada sílice, sulfato de sodio o diatomeastierra, seguida de lavado con un pequeño volumen de disolventeo embalaje el dispersante material absorbente en una mini-column SPEantes de elución. MSPD es simple y versátil y ofrece la posibilidad dede realizar la extracción y la limpieza en un solo paso [112.113]esta dando como resultado un acortamiento drástico de tiempos de análisis y solventeconsumo.MSDP se ha divulgado recientemente para la extracción simultánea

de BPA, nonilfenol y Octilfenol de huevos y la leche [114]antes de la determinación de la LC/MS/MS. Se mezclaron las muestras (1 g)con 1 g de polvo de C18 sólo durante 5 minutos, embalado y eluido con 10mLde etanol. Este agente dispersante dio mejores recuperaciones de BPAque el negro de carbón grafito (GCB) debido a la fuerte adsorciónde BPA GCB. El eluyente se evaporó a sequedad y laresiduewas se redisuelve en diclorometano/hexano y sujeto a

 

Tabla 4Análisis basado en la LC para la determinación de BPA en los alimentos

muestra

Otros analitos que BPA

ls preparación de la muestra(pasos principales)

Columna de LC

LC parámetros

Detector parámetros gama lineal,

métodoLOD o LOQrecuperaciones(R)

Referencia

Cereales

4-n-Nonylphenol

- – PLE–SPE

XTerra MS C18,100 mm × 2. 1mm, 3,5 m(Sistema de aguas).

Fase móvil:Amonio de 0,0025 Mtampón de formiato (pH 3.1,ajustado con fórmicoácido) / metanol congradiente elución,0.2mLmin−1, Inj: 50 L

(-) De ESI-MS: capilarVoltaje: 3.0 kV, conoVoltaje: 40 V, fuentetemperatura: 120 ◦C,desolvationtemperatura: 250 ◦C,desolvation de gas (N2):410Lh−1, gas de cono(N2): 50 L h−1

LR: 0.08–0.8gg−1(adición estándar),LOD: 43 ng g−1; R:81–104% (PLErecuperaciones)

Carabias-Martínezet al [32]

4-tert-butilfenol

además postcolumnade una base fuerte[1, 8 -

2, 4-Diclorofenol2,4,5 TriclorofenolPentaclorofenolácido 4-terc-Butylbenzoic

Diazabiciclo -(5,4,0) undec-7-es],10Lmin−1

Frutas y verduras

- - SE–SPE

simetría escudo RP18,150 mm × 4. 6mm I.D.,3,5 m con un protectorcolumna, 10 mm × 2. 1mmIdentificación, 3,5 m (Millipore)

Fase móvil:agua/acetonitrilo(60: 40, v/v);1.2mLmin−1; INJ:50L.

FL: 275/300 nm

LR: 10–1000 ngmL−1;LOD: 1.3ngg−1; R:82–101 %

Kang et al [41]

Conservas para mascotas 

- - E–SPE (totalcontenido)

Simetría escudo RP18150 mm × 4. 6mm I.D.,3,5 m (MilliporeCorporación, Milford, MA,ESTADOS UNIDOS).

Fase móvil:agua/acetonitrilo(60: 40, v/v), 40 ◦C,1mLmin−1, Inj: 50L.

FL: 275/300 nm 

LR: 50–1000 ngmL−1;LOD: 2ngmL−1(agua), 3 ng g−1 (petalimentos); R: 95 %

Kang y Kondo

Conservas de grasa, acuosa de medios ácidos.

Señal

BADGE-H2OBADGE-2H2O

- SPE (lixiviación delatas vacías) SE–SPE

 Nucleosil C18,250 mm x 4 mm de diámetro interior, 5m(Hichrom Limited,

Fase móvil:agua/acetonitrilo congradiente elución, 25 ◦C,0.4mLmin−1, Inj:

FL: 235/317nm

LR: 200–2000 ngmL−1;LOD: 4.5–7.9 ng g−1; R:87–105% (alimento

Sol et al [46]

BADGE-H2O-HClBADGE-HClBADGE-2HCl

Berkshire, Reino Unido).

10μL. ssimulador)

Agua mineral 

p-Butylphenol

- LLE  Inertsil ODS-2,150 mm × 4. 6mm I.D.,5m (GL Ciencias, Tokio).

Fase móvil:agua/acetonitrilo(40: 60) que contiene 0.2 %H3PO4; 40◦C;1mLmin−1; INJ: 10μL.

ED, culombiométricodetección con una doblecélula analítica de electrodo

LOD: 5.7gL−1;R(Mean): 63 %

Toko'oya et al.

p-tert-butilfenol

p-Hexylphenol

p-tert-Octilfenol p-Nonylphenolp-HeptylphenolNonilfenol

E1: 400mV (vs Pd)

E2: 650mV (vs Pd)protector celular: 700mV (vsPD))

Pescado

4-Terc-Octilfenol

 BPA-d16 

MAE-SPE

150Mm × 2,1 mm D. I. 

Fase móvil:agua/metanol congradiente elución,0.4mLmin−1, Inj: noespecificado.

APCI (-)-MS: capilarvoltaje 3 kV, coronacorriente: 40A,voltaje de fragmentor:100V, secado de flujo de gas5Lmin−1, nebulización60 psi, presión de gasvapourisingtemperatura 280

ORY20.7–10044 ngmL−1,LOD: 0.1 ngmL−1(agua), 50 ng g−1(pez); R: 49–79 %(recuperación absoluta,pescado)

Peder

sen y

Lindho

lst [50]

 

◦CCarne Octilfeno

l 4-n-Nonylphenol

PLE-SPE 

C18 de simetría,150 mm × 2. 1mm de diámetro interno3, 5.μ m

Fase móvil: agua(0.1 %amoníaco) / metanolcon gradiente elución,0.2mLmin−1, Inj:10μ L.

-) De ESI-MS/MS: capilarVoltaje: 3.5 kV, conoVoltaje: 70 V, fuentetemperatura: 100 ◦C

LR: 1–500 ngmL−1;LOD: 0.3 ng g−1; R:92–97 %

Shao et al [28]

Agua y soda bebidas 

NonilfenolOctilfenol

Nonilfenol

4-n-Nonylphenol

SPE  simetría C18,150 mm × 2. 1mm de diámetro interno3, 5 μ m.

Fase móvil: agua(0.1 %amoníaco) / metanolcon gradiente elución,40 ◦C, 0.2mLmin−1, Inj:10 μ L.

(-) De ESI-MS/MS capilarVoltaje: 3.5 kV;desolvationtemperatura: 350 ◦C

LR: 1–500 ngmL−1;LOD: 0,01 ng L−1(agua potable),0,6 ng L−1 (sodabebida); R: 82–97 %

Shao et al [60]

Miel Bisfeno F l

– cuantificación de SPE: CAPCELL PAKC18, 150 mm × 4.6 diámetro interno5 m) (Tokio Shiseido Co.,Japón).

Fase móvil:agua/acetonitrilo(70: 30, v/v);1.2mLmin−1; INJ:10L.FL: 275/300 nm LR: 25–500; LOD:2ngg−1; R:93.9–116.4 %Inoue et al [62]Confirmación: CAPCELLPAK MG C18(250 mm × 2 m m, 5m(Shiseido Co.

(-) De ESI-MS: capilarVoltaje: 3.5 kV;voltaje de fragmentor:140V, 220 V;

FL: 275/300 nm 

LR: 25–500; LOD:2ngg−1; R:93.9–116.4 %

noue et al [62]

Tokio, Japón)Fase móvil: agua(0.01 acéticoácido) / acetonitrilo congradiente elución;0.3mLmin−1; INJ: 5μL.

Leche  -  BPA-d16

SPE SPE LiChrospher 100 RP-18,250 mm x 4 mm de diámetro interior, 5μm

Fase móvil:agua/metanol(30: 70, v/v)0.9mLmin−1, Inj: 10μ L

(-) De ESI-MS: capilarVoltaje: 3.5 kV, conoVoltaje: 70 V, fuentetemperatura: 500 ◦C

LR: 5–700 ngmL−1;LOD: 0,7 ngmL−1; R:52% (absolutarecuperación), 101%(recuperación relativa)

Maragou et al [65]

Porción acuosa de conservasalimentos

Abreviaturas: PLE, extracción con líquido a presión; SPE, extracción en fase sólida; Inyección, volumen de inyección, ESI, extracción por solvente SE, de ionización electrospray; FL, detección de fluorescencia; DIVISA, bisfenol A diglicidil éter; LLE,extracción líquido-líquido; ED, detección electroquímica; MAE, extracción asistida por microondas; APCI, presión atmosférica ionización química; BFDGE, bisfenol F diglicidil éter; SPME, solid-phase microextracción en, RAM,materia de acceso restringido

Inicio

SPE con aminopropil para eliminar la fracción lipídica de las muestras.Significa recuperaciones de BPA se extendieron de 82% a 91% y el RSD medialos valores de los huevos y la leche fueron 6% y 4%, respectivamente.4. Separación y detecciónLa determinación de BPA en los productos alimenticios exige el uso de altatécnicas sensibles y selectivas debido a los niveles de seguimiento en el cuales frecuentemente encontrado (véase tabla 2) y la complejidad de matrices de alimentos.Aunque el SML establecidas por la Comisión Europea es relativamente alta(600ngg−1), los efectos informados de dosis bajas de BPA ha dado lugarpara el desarrollo de métodos analíticos con LODs bajo bastante

para evaluar la exposición humana a estos niveles. La determinaciónde BPA en los alimentos es principalmente realizado por LC/FL, LC/MS y GC/MS.Cromatografía líquida ofrece la ventaja de la simplicidad sobre GCpara que derivatización paso es necesario, mientras que proporciona el últimoresolución máxima más alta. Otras técnicas como LC–electrochemicaldetección (LC–ED) e inmunoensayos han sido utilizados en menormedida. Información detallada sobre cromatografía y deteccióncondiciones para la determinación de BPA se resume en los cuadros 4 y 5.4.1. Liquid chromatographyLC de BPA se realiza generalmente en columnas de fase inversa C18.Fases móviles varían según el detector juntado a LC.Aguay acetonitrilo son los solventes más comunes del binarios cuando fluorescenciala detección es whilewater usado y metanol se prefieren paraESI-MS y APCI-Sra. elución condiciones dependen altamente de los analitosdeterminar junto con matrices de BPA y de alimentos. Por lo tanto, esfrecuentes para determinar BPA con otros fenoles, disruptores endocrinosy empaquetado de fromfood de los migrantes (véase tabla 4) y en este casogradiente elución se realiza siempre. Tiempos de funcionamiento oscilan entre15 (por ejemplo [32]) y 40 minutos (e.g. [60]) dependiendo del número dedeterminado de contaminantes y la composición de la matriz. Suele ser LCrealizado a temperatura ambiente pero temperaturas hasta 40 ◦C sona veces se recomienda [por ejemplo, 32 y 60] para reducir el tiempo de análisisy aumentar la reproducibilidad.

4.1.1. Detección de fluorescenciaBPA muestra fluorescencia nativa con emisión y excitaciónlongitudes de onda en 275 y 305 nm, respectivamente, que mantener constanteen los solventes utilizados con más frecuencia en fases móviles de LC,es decir, agua, acetonitrilo y metanol. La intensidad de fluorescenciade BPA es, sin embargo, mucho mayor en los medios orgánicos (véase Fig. 3) yasí la sensibilidad en LC será dependiente de la fase móvilcomposición. Límites de cuantificación instrumental típica para BPA porDetección de LC–Fluorescence están en la gama 5–50 ngmL−1.La técnica es adecuada para la determinación de BPA enmatrices de muy diferentes alimentos como bebidas, vinos, alimentos para mascotas,miel, frutas, verduras, goulash y pescado. Preparación de muestras normalmenteincluye limpiar usando SPE basadas en solvente no selectivo[41,44,46,62], columnas de inmunoafinidad [77–79] o extracción de SPME[95] seguido de evaporación de solvente. Límites de detección típicode BPA en los alimentos usando la detección de fluorescencia están en la gama0.1–2 g−1 ng ngmL−1 y 1-5.La identificación de BPA en la muestra se basa sólo en retenciónveces, así que la posibilidad de interferencias de otros fluorescentesmigrantes de alimentos de recubrimientos puede, por ejemplo bisfenol A diglicidil éter(Insignia), bisfenol F diglicidil éter (BFDGE) o novolacs Glicidiléteres (NOGE) [115.116], se debe considerar siempre puesto quepuede producir falsos positivos. De hecho, la confirmación mediante LC/MS después dea veces ha sido la cuantificación por la detección de LC–fluorescenceempleado [62].

Figura 3. Espectros de fluorescencia (nm de longitud de onda 275 de excitación, paso de banda espectral de Raja20 nm) de bisfenol A (1) agua, acetonitrilo (2) y metanol (3). Concentraciones de BPA:(1) 25mgL−1 y (2 y 3) (1mgL−1).

4.1.2. Detección electroquímicaDetección electroquímica (ED) de BPA se basa en el pozoconocido electroactivity de los grupos fenólicos presentes en elmolécula (véase tabla 1). LC–ED se ha utilizado para la determinaciónde BPA en fluidos biológicos [31, 116–119] y agua [29, 45]. Inoueet al [31] en comparación con los límites de detección instrumental obtenidospara BPA con LC acoplados a electroquímicos, FL, detectores de UV[31]. El detector electroquímico (Coul matriz modelo 6210, ESA,USA) consistió en cuatro células, trabajando en los siguientes potenciales;350, 430, 570 y 650mV y proporciona un método LOD de 0,5 pg,quefue 3000 y 200 veces más bajos que los obtenidos withUVy detectores de FL utilizando el mismo volumen de inyección (50L). Similaressensibilidad de masa (por ejemplo LOD de 57 g para un volumen de muestra inyectado de10 L [45]) ha sido obtenido por diferentes autores [29,30]. El pHy contenido de electrolito de la fase móvil influyen en la electrontransferconstantes de velocidad, por lo que deben optimizarse parasensibilidad getMaximum. Elución isocrática recomienda [31,45],de lo contrario veces equilibrio bastante grande será requeridos para las mediciones,Esto es una desventaja principal de la disfunción eréctil.LC–ed también se ha utilizado para el análisis de BPA en los alimentossimuladores (agua, agua acidulada y agua: etanol) usando undetector electroquímico caseros [36]. Un químicamente modificadoelectrodo (CME) fue preparado por un electrodo de carbón vidrioso de la capacon una película de éster dimetílico Ni protoporfirina IX según laprocedurepreviously describedby thesameauthors [120]. TheCMEfue diseñado especialmente para evitar el aumento en el fondocorriente causada por el alto potencial requerido para la oxidaciónde los compuestos fenólicos en carbón vidrioso, que en el caso deBPA conduce a una sensibilidad disminuida. La fase móvil consistió ende metanol: agua (60: 40) que contiene 10 KNO3 y 0,25 mM

H2SO4 como electrolitos y el método LOD era pg 4después de un paso de la concentración. A pesar de la probada idoneidad de ED parala determinación de BPA en agua potable y alimentos a base de aguasimuladores, LC–ED no ha sido aplicado a los alimentos comunes de complejomatrices todavía.4.1.3. LC–MSEl uso de espectrometría de masas puede reducir el tratamiento de la muestra yincluso puede permitir la "extracción" de un analito en la detecciónetapa de un método de selección de iones específicos o transiciones. Sin embargo,preparación de la muestra buena sigue siendo necesario en los métodos de LC–MS(véase el cuadro 4) puesto que determina la presencia de componentes de la matriz

Tabla 5Análisis de GC para la determinación de BPA en los alimentos

Muestra Otros analitos queBPA

I.S. Preparación de la muestra(pasos principales)

Derivatization

Columna GC

temperaturaprograma yinyección

Parámetros de MS

Rango lineal, LOD oLOQ, recuperaciones (R)

Referencia

Verduras frutas, pescadosopas y salsas,Conservas de carnes,espagueti y al hornohabas, alimentos infantiles,bebidas

--- BPA-d14

SE o LLE

Anhídrido acético

DB-5MS,30m×0.25mm

Destinados a 120 ◦C2min, rampa en10 ◦C minuto−1 a280 ◦C. INJ: splitless

BPA diacetyl: m/z228, m/z 213.

LOQ: 10 ng g−1(muestras 1% de materia grasa); R: 42–112%.

Thomson etal. [17

pescado 4-tercbutilfenol4-n-butilfenol4-Pentylphenol4-n-hexilfenol4-terc-octilfenol4-n-heptilfenolnonilfenol4-octilfenol

BPA-d16

SE–SPE MTBSTFA, 100 L ael eluyente SPE seco(75 ◦C, 30min)

I.D., 0.25_m (J&W,Folsom, CA, USA).DB-5MS,30m×0.25mmI.D., 0.25_m (J&W,Folsom, CA, USA)

Destinados a 100 ◦C1min, rampa en◦C 3 minuto−1 a 200 ◦C,durante 1 minuto,rampa en◦Cmin−1 20 a280 ◦C, destinados a5 minutos Inj: Divisiónrelación 1:10

I.S.: m/z 224TBDMS derivateBPA: m/z 441, m/z470I.S.: m/z 452, m/z 470

LR: 0.5–50 ng g−1;LOD: 0.41 ng g−1; R:105–120%.

Gyong et al.[38]

bebidas -- BPA-d14

LLE Ácido trifluoroacéticoanhídrido, 200Lañadido a la SPEeluyente (30 min,a temperatura ambiente)(60 ◦C, 5 minutosquitarDerivatizaciónreactivo en exceso)

HP-5 Trace Analysis,25m×0.2mm I.D.,0.33um

Destinados a 100 ◦C1min, rampa en25 ◦C minuto−1 a150 ◦C, rampa en5 ◦C minuto−1 a 210 ◦C,rampa en25 ◦C minuto−1 a280 ◦C, destinados amín. 2,5 Inj: splitless

(O-BIStrifluoroacetyl)derivados de BPA: m/z405, m/z 420

LR:0.01–50_gmL−1;LOD: 1ngg−1; R:18–97%

Varelis andBalafas [33]

Infant formula

DaidzeinGenisteinLa genisteína

Criseno-d1

SE–SPE BSTFA:TMCS: DTE(1000:10:2, v/v/w),100L ha añadido a laeluyente SPE seco(80 ◦C, 30min)

DB-5MS,30m×0.25mm

Destinados a 100 ◦C2min, rampa en10 ◦C minuto−1 a◦C 250, se apresuró a5 ◦C minuto−1 a 300 ◦C,Mantenga pulsado durante 5 minutos Inj:1L, splitless

I.S.: m/z 416, m/z 434

O-bis(Trimethylsilyl)derivados de BPA: m/z372 y m/z 357

LR: 0.01–50_gmL−1; LOD: 1ngg−1;R: 18–97%

Kuo andDing [43]

Agua de mar y mariscos

4-terc-butilfenol4-n-Butylpheno4-Pentylphenol4-n-hexilfenol4-terc-octilfenol4-n-heptilfenol4-nonilfeno

BPA-d14

LLE–SPE (agua de mar)MAE-SPE (marisc

os)

BSTFA, 100L, aSPE evaporadaefluente (60 ◦C,30 min)

I.D., 0.25_m (J&W,Folsom, CA, USA)DB-5MS,30m×0.25mmI.D., 0.5_m (J&W,Folsom, CA, USA)

Inyección: 1L

I.S.: m/z 284 and m/z269O-bis(Trimethylsilyl)derivados de BPA: m/z357I.S.: m/z 416

R: 74–97% (sweater),92–111% (seafood)LOD: 6.30 ng L−1

(water), 1.35 ng g−1

(seafood)

Basheer etal. [51]

l2,4-diclorofenolpentaclorofenol

Simulador de alimentos

BADGE -- SPME -- HP-5 MS,30m×0.25mm,0.25_m

200 ◦C held for2min, ramped at10 ◦Cmin−1

to270 ◦C, hold 15 min

BPA: m/z 213, m/z228

LR: 0.01–8gg−1(agua destilada),0.02–10gg−1(agua con el 3 %ácido acético),0.02–3GG−1 (aguacon 10% de etanol)LOD: 0.1 ng g−1(agua destilada),1ngg−1 (agua conácido acético al 3%),2ngg−1 (agua con10% de etanol)R

Salafrancaet al. [93]

Simulador de alimentos

--- -- SPME BSTFA:TMCS (99:1,v/v), 7 L (usando elvapor de laDerivatizaciónreactivos en elespacio libre en elfibra) (65 ◦C, 30 s)

DB-5MS,30m×0.25mm

I.D., 0.5_m (J&W,Folsom, CA, USA)

80 ◦C held for 2 min,ramped at20 ◦Cmin−1

to280 ◦C, hold 1 min

O-bis(trimethylsilyl)derivate of BPA: m/z372, m/z 357

LR:0.001–100_gL−1

LOD:0.4 ng L−1

R: 13.8%

Chang et al.[94]

Abreviaturas: SE, extracción por solventes; LLE, extracción líquido-líquido; MTBSTFA, N, N-methyl-(tert-butyldimethylsilyl) Bistrimetilsililtrifluoroacetamida; TBDMS, tert-Butildimetilsililo; BSTFA, N-O-bis(trimethylsilyl) Bistrimetilsililtrifluoroacetamida; TMCS,trimetilclorosilano, DTE, 1, 4-dithioerythritol; MAE, extracción asistida por microondas; SPME; Microextracción en fase sólida; INSIGNIA, bisfenol A diglicidil éter.

que afectan la eficiencia de ionización y el ruido de fondo y en consecuencialímites de detección y cuantificación. Además, limpioextractos son las preferidas para extender la vida de la columna y pasar menos tiempoen el mantenimiento del instrumento. De todos modos, LC–MS BPA métodos basados enofrecer mayor confianza en la identificación de LC–FL y LC–EC.En comparación con GC–MS, el paso de derivatización desperdiciadora de tiempo deBPA no es necesaria.El análisis LC–MS de BPA se realiza exclusivamente mediantepresión atmosférica ionización interfaces, es decir, electrospray

ionización (ESI) y presión atmosférica ionización química(APCI), ambos en negativo modo. ESI es más frecuente queAPCI porque generalmente proporciona mayor sensibilidad (véase cuadro 4).Así, los límites de cuantificación instrumental para BPA de 5 [65] yngmL−1 20.7 [53] se han divulgado con ESI(-) y APCI(-),respectivamente. En ambos estudios, un tetrapolar del masa analyzerwas usadoy el volumen de muestra inyectado fue 10 L. usando ESI(-) y untriple cuadrupolo analizador de masa que disminuyó el LOQ instrumentalhasta 1ngmL−1 (inyección de volumen de muestra: 10 L) [28,60,73]. A nuestroconocimiento, instrumentos de trampa de iones no han sido utilizados para el análisisde BPA en alimentos muestras sin embargo, aunque el análisis de BPA enmuestras ambientales utilizando MS de trampa de iones ESI(-) tenía por lo menos seistimesmore sensible que APCI [121], desde la fragmentación de lamolécula deprotonated (ion de cuantificación) por pérdida de CH3• se produjoen APCI incluso bajo condiciones de temperatura suave.La respuesta en ESI-MS para BPA es fuertemente dependiente de lacomposición de la fase móvil [60,65]. Así, se ha compuesto por fases móvilesde methanol–water dio mayor respuesta para soluciones estándar de BPAque consisten en acetonitrile–water debido a la bajapunto de ebullición de los primeros, que favorecieron la desolvation delas gotitas de electrospray [65]. La respuesta en acetonitrile–wateraumentó en 3-4 bajo la adición de modificadores como0.5% [122] y 0.01% de amoníaco o 0.01% ácido acético [65]. Contrarioa estos estudios, la presencia de aditivos inmethanol–waterfases móviles se ha sabido para disminuir la respuesta de BPA.Así, aditivos básicos, que fueron agregadas para promover deprotonationde BPA, dio lugar a la supresión de la fuerte ionización [121.123], yla adición de amoníaco (0,01% en agua) o ácido acético (0,01% enagua) disminuyó la señal por 1.5 - y tres veces para soluciones de BPAstandardy con leche, respectivamente [65].Sin embargo, en algunos casos laefecto contrario se ha divulgado, por ejemplo la adición de amoníaco 0.1%metanol: agua aumentaron la respuesta para BPA [60]. http://www.spanishdict.com/

Mayoría de MS los métodos para BPA incluye la adición de un internoestándar (I.S.) para superar las pérdidas de preparación de muestra y matrizefectos (supresión o mejora de la señal), que conducen arecuperaciones absoluta del método baja. Las normas internas más usadashan sido 4-nonylphenol (cuando también se determinaron los alquilfenoles),BPA-d16 deuterados e isótopo etiquetados 13C 12-BPA. Else destacó la importancia de utilizar un I.S. por Maragou et al [65],que superó las pérdidas ocasionadas por la supresión de la señal (alrededor de20%) y los generados durante la preparación de la muestra (Estimadoque sería alrededor del 28%), usando el estándar interno BPA-d16. En estocierto, la recuperación relativa media del método fue 101% (mediarecuperación absoluta del 52%) [65].Independientemente del tipo de fuente de ionización y analizador, elión más abundante en el BPA espectro de masas y por lo tanto utilizapara efectos de cuantificación, era [M−H] − m/z 227. El espectro de masasobtenidos con instrumentos de cuadrupolo también contenidos el

fragmento ionsm/z 211 y 212, formado por la pérdida adicional de oxígeno,− [M−H−O] y amethyl radical, [M−H−CH3] •−, respectivamente.Con fases móviles de acetonitrile–0.01%NH3 en elagua, un ión conm/z 113was detectado en el espectro de BPAmass, quefue relacionadasa la pérdida de dos protones ácidos [M−2H] 2−. El [M−H−CH3] •− m/z212 fue el más prominente ion de producto obtenido por LC–MS/MS,así que fue utilizada para la confirmación y/o cuantificación de BPA en todaslos métodos citados (véase el cuadro 4). Otros fragmentos de relativa menor

espectro de trampa de iones de reportedintheMS2 de abundancewere, a saber, laIon [M−H−C6H5OH] − m/z 133, resultante de la ruptura de laGrupo hydroxybenzyl y el ion [M−H−C9H10O] − m/z 93, formadopor la pérdida de hidroxifenil propilo.Por otra parte, los iones más abundantes en el espectro de masasdel estándar interno más comunes, BPA-d16 (244 masa molecular),fue [(M−D2 H2) −H] − m/z 241 en vez de [M−D] − m/z 242, debidoel intercambio de hidrógeno deuterio en el hidroxilo grupos cuandoBPA-d16 fue disuelta en un medio protiques, que condujo a su inmediatatransformación en BPA-d14 (peso molecular 242) [124]. ElEspectro MS/MS de BPA-d16 demostró como base máxima el ion del fragmentoATM/z 223, quefue atribuida a la pérdida de la radical CD3 y unsegundo fragmento atm/z 142 relacionados con la pérdida de un grupo fenol-d4junto con un átomo de deuterio derivado de un grupo de CD3 [125].Aplicaciones de LC–ESI (-)-MS a la determinación de BPAincluyen cereales [32] y leche [65], mientras que ha sido LC–MS/MSutilizados para el análisis de agua y bebidas de soda [60], [28] de la carney leche y huevos [114], después de la extracción con PLE [32,28], SPE[60] y MSDP [114]. Límites de detección del método fueron en las gamas0.7–43 ng g−1 y 0.001–0.3 ng g−1 para la detección de MS y MS/MS,respectivamente. Por otra parte, tienen dos métodos usando APCI(-)ha desarrollado para la determinación de BPA. La primera de ellas utilizaMAE para extracción de BPA de pescado, seguido por el análisis LC–MS[50]. El segundo determina BPA en la leche materna basada en unsistema on-line de –tandem MS SPE (RAM) [73]. LODswere en la gama0.1–50 ng g−1.4.2. GC–MSGC–MS proporciona mayor resolución y detección inferior límitesque LC–MS para la determinación de BPA en los alimentos, aunque lala necesidad de un paso de derivatización hace el trabajo de GC-basedmethodsintensivo e introduce nuevas fuentes de errores, principalmente debido a la contaminación.Por otro lado, ya que la presencia de lípidos puedereducir considerablemente el rendimiento analítico de GC [126.127]clean-up extenso es necesario para los alimentos grasos, como los peces [39]. ComoMétodos de la LC/MS, el uso de un patrón interno es común, siendodeuterados BPA-d16 y BPA-d14 los sustitutos más usadas.

GC–MS con ionización del electrón impacto (IE) ha sido ampliamenteutilizado para la confirmación de BPA en análisis de alimentos [15,36,39,66,128].No derivatización de BPA se requiere para esta aplicación. La IEespectro de masas y la vía normal de la fragmentación de BPArepresentado en las figuras 4a y 5. El pico de la base de este espectro correspondea la pérdida de un grupo metilo ([C14H13O2], m/z 213) deel ión molecular ([C15H16O2] •, m/z 228). Esto puede ser racionalizado

en cuanto a la estabilización de la resonancia de la resultante tert-bencílicaCarbocatión (cf. fragmento 3, Fig. 5). Una alternativa menor fragmentaciónvía implica la pérdida de uno de los grupos de aril de laión molecular para dar un Carbocatión tert-bencílica ([C9H8O], m/z135, fragmento 4, Fig. 5) y la consiguiente pérdida de metano para darun ion de fragmento en m/z 119 (fragmento 5, Fig. 5).Cuantificación de BPA por GC–MS requiere la derivatización deanalito con el fin de mejorar su separación y detección. Elinserción de un paso de derivatización conduce a picos más agudos para BPAen consecuencia, mejor separación de otros analitos y coextractedcomponentes de la matriz, además de una mayor sensibilidad (subnivel de g−1 ng) [37]. Silanización y acetilación han sido en gran medida laprocedimientos más utilizados de derivatización, que generalmente se llevan a caboagregando 100–200L del reactivo correspondiente al secadoExtracto y permitiendo la mezcla reposar durante 30 a 60 minutos con eltemperatura ambiente o en 65–80 ◦C.Silanización de los hidrógenos activos de BPA se realiza principalmente medianteN-O-bis(trimethylsilyl) bistrimetilsililtrifluoroacetamida (BSTFA) containing1% detrimetilclorosilano (TMCS) [37,43,51,94]. La adición de TMCSfavorece la formación de un derivado de la única, puesto que la reacción 

A. Ballesteros Gómez et al. / J. Chromatogr. UN 1216 (2009) 449–469

Fig.4. Espectrométricos de impacto electrónico (a) bisfenol A, derivado de O-bis(trifluoroacetyl) (b) BPA, derivado de O-bis(trimethylsilyl) (c) BPA [33] y [47].

de BSTFA con analitos contar con grupos hidroxilo diferentes, tales comoBPA, puede generar varios derivados, reduciendo así la sensibilidady selectividad del análisis [43,128,129]. El espectro de masas de IEy el patrón de fragmentación del derivado BPA formado [(Obis)trimetilsilil)] fue similar a los de BPA (cf. Fig. 4C). La basePico correspondió a la pérdida de un grupo metilo ([C20H29Si2O2],357 m/z) de ión molecular ([C21H32Si2O2], m/z 372), quetambién estuvo presente en el espectro [43,94]. Cuantificación de BPA es

figura 5

Fig.5. Vías de fragmentación de impacto electrónico de bisfenol A y sus derivados O-bis(trimethylsilyl) y O-bis(trifluoroacetyl) [33]

habitualmente se lleva a cabo en uno (m/z 357) [94] o dos (m/z 357 y372) [43] las masas de este derivado.Silanización de BPA también se lleva a cabo utilizando N, N-methyl -(trimetilsilil) bistrimetilsililtrifluoroacetamida (MSTFA) y N, N-methyl -(tert-Butildimetilsililo) bistrimetilsililtrifluoroacetamida (MTBSTFA) [38]. AmbosReactivos suministrados derivados BPA con iones de diagnósticos para elCaracterización de sus identidades en los espectros de masas. La característicaiones para el trimetilsilil (TMS) y tert-Butildimetilsililo(BDMS) Derivados BPA fueron [M−15], en m/z 357 y 441, respectivamente.Estos iones, whichappearedas base picos en los espectros de masas,puede utilizarse como iones de cuantificación de BPA en el modo de GC–MS SIM.Los iones moleculares para TMS (m/z 372) y derivados BDMS (m/z 456)se utilizaron para la confirmación de BPA. Ninguna diferencia en la reacciónrendimientos y respuestas se encontró entre ellos, pero dio TBDMSmayor estabilidad de almacenamiento (era estable después de 8 días mientras el TMSderivado redujo a 60% debido a la hidrólisis en este momento). Ademásfue más largo que el tiempo de retención para derivado TBDMSpara TMS (min 41 y 37, respectivamente, bajo las condiciones experimentalesse refiere en [38]), que dio lugar a la mejor separación deel anterior eluidos interferencias.Acetilación de los grupos hidroxilo de BPA con anhídrido acético[16,17] o anhídrido de ácido trifluoroacético [33] es otro procedimiento frecuentepara obtener derivados BPA para GC–MS. Fig. 4b incluye el espectro de masasel derivado de la O-bis(trifluoroacetyl) y la fragmentaciónpatrón. Como de costumbre, el pico de base en el espectro correspondió ael ion del fragmento [M−15] (m/z 405) formado por el ion molecular(m/z 420) por la pérdida de un grupo metilo. Se comprobó que elO-bis(trifluoroacetyl) derivado del BPAwas más sensible que laderivado de trimetilsilil correspondiente, que era una consecuencia

de la masa molecular mayor de la antigua y la monoisotopicnaturaleza del flúor [33]. La mayor masa molecular condujo a másfavorable relación señal a ruido y la naturaleza de monoisotopic deflúor impidió la reducción en la intensidad del ion que resulta dela distribución de la corriente entre los iones de isotopomeric, como élse produce para el silicio.

Derivatización del estándar interno (p. ej. BPA-d14) ha sidoencontrado esencial para mantener su pureza isotópico durante cromatográficoseparación en una columna capilar de Sílice fundida [33], puesto quese degrada debido al intercambio de deuteron–proton (2H–H) en elporción aromática de la molécula. Este fenómeno ocurre tambiénen otros fenoles monodeuterated [130] y se ha atribuidoel intercambio electrófila aromática de átomos de deuterio conátomos de hidrógeno activo situado en la superficie interna de lacolumna [131]. En este sentido, aunque el derivado TMS de BPAdeuteratedderivados reduce la pérdida de pureza isotópica, el usode O-bis(trifluoroacetyl) derivado es preferido para evitar 2H–Hintercambio en la columna, ya que su estabilidad es mayor [33] y enAdemás, como se ha citado para BPA, su masa molecular superiory la naturaleza monoisotopic de flúor hace este derivado mássensible.GC–MS es la técnica más sensible para la determinación deBPA en los alimentos. Stuart et al [132] en comparación con los instrumentales LODs paraBPA obtenidos por diferentes técnicas, los valores que 0.8 ng paraGC–MS sin derivatización, 0,004 ng para GC–MS con metilderivados (0.5Mmethanolic solución de phenyltrimethylammoniumhidróxido), 1.6 ng para LC–UV (275 nm) y 1.0 ng para LC/ESI (-)-MS.Un menor LOD instrumental (0.51 pg) ha divulgado mediante el uso de unacetilo derivados [133]. Por otra parte, límites de detección del métodoestaban generalmente en la gamas 0.4–2 ng g−1 y 0.4–6.3 ng L−1.4.3. Inmunoquímicos métodosMétodos inmunoquímicos han sido ampliamente utilizados en los alimentosAnálisis para la detección y cuantificación de proteínas, enzimas,vitaminas y otras sustancias que ocurren naturalmente (revisados en

134]). Se han utilizado para la determinación de contaminantes de los alimentoscomo microorganismos, toxinas bacterianas, micotoxinas,pesticidas, hormonas anabólicas y medicamentos veterinarios (revisados en[134.135]). Inmunoensayos son fáciles de realizar, dar buena sensibilidady especificidad y requieren ni personal calificado niequipo costoso.La aplicación de técnicas inmunoquímicas para la determinaciónde BPA en los alimentos es bastante reciente [136–140]. Hasta ahora, lalas determinaciones se han centrado en el análisis de alimentos líquidos, principalmentesimuladores de leche, agua y alimentos, utilizando policlonal mamíferos [136]y los anticuerpos [137] pollo en enzima ligado del inmunosorbenteensayos (ELISA). Los límites de detección oscilan entre 0,05 ngmL−1 a500ngmL−1, principalmente según el inmunógeno y el tipode anticuerpos producen. Como una pequeña molécula, BPA no es capaz de iniciaruna respuesta inmune, sí mismo y debe ser conjugado con un

proteína para formar un antígeno completo. En consecuencia, la producciónde anticuerpos para BPA ha involucrado el accesorio de la proteínaalbúmina sérica bovina (BSA) para el analito derivatizado o aun análogo estructural (por ejemplo [ácido valeriánico de 4, 4-bis(4-hydroxyphenyl),BHPVA]) con el fin de evitar la pérdida de parte de las características estructuralesde BPA [138.139]. Kuruto et al. propuso el uso de unkit de ELISA disponible comercialmente (kit EcoAssay BPA suministrado porOtsuka Pharmaceutical Co., Ltd., Tokio, Japón) para la determinaciónde BPA en el calostro humano [140]. Este kit fue capaz de detectarConjugado glucurónido BPA, así como libre de BPA. La preparación dela muestra (1 mL) implicó la incorporación de acetonitrilo (3 mL) yla centrifugación posterior para el retiro de la proteína. El sobrenadantese evaporó a sequedad, reconstituido con 1mL de fosfatoy sujeto a SPE (Oasis HLB). La recuperación media de muestras inoculadasfue 102±19.0% y el límite de detección del métodongmL−1 0,3. Se aplicó la misma metodología para la determinaciónde BPA en suero materno y líquido amniótico [141]. 

5. ConclusionesLa determinación de BPA en los alimentos es un requisito para apoyarcumplimiento de la legislación y evaluar el riesgo de exposición humanaa dosis bajas BPA. En la actualidad, la detección de LC–fluorescence esaún con frecuencia utiliza y da resultados cuantitativos satisfactorios,pero LC–MS y GC–MS son cada vez más atractivo porqueofrecen más selectivo y, por tanto, métodos más confiables.Identificación adecuada de BPA es hecho generalmente por GC–MS o LC-tripleinstrumentos de cuadrupolo.Preparación de la muestra todavía constituye el llave de paso para la determinaciónde BPA en los alimentos y es el origen de los principales inconvenientesen las metodologías disponibles, independientemente de su aplicabilidadal BPA como único analito o a una gran cantidad de contaminantes(p. ej. BPA junto con otros fenoles, endocrinos omigrantes de acondicionamiento de los alimentos). Extracción por solventes y SPE son porahora la mayoría utiliza técnicas de extracción para ambos aislamiento de BPAy la limpieza de los componentes de la matriz. Técnicas como la SPME ySBSE, que ofrece ventajas en términos de consumo de disolventes,tamaño de la muestra y la facilidad de automatización tienen que superar algunos gravesinconvenientes antes de ser adecuado para la determinación deBPA en los alimentos. Otras alternativas como MSPD, excelente en específicoaspectos, no han alcanzado la utilización extensa todavía.Hay dos aspectos fundamentales en los procedimientos de preparación de la muestradesarrollado, que son más bien general en contaminantes de los alimentosAnálisis, a saber, la baja selectividad de disolventes y la exhaustivapurificación necesaria para aislar el analito de componentes de la matriz.Como regla general, se requiere que repetidas extracciones de solventesaislar completamente BPAfromfood matrices que involucra el uso degrandes volúmenes de disolvente orgánico que posteriormente tiene que ser evaporadapara la concentración más tratamiento o analito. Por ello los tratamientos respectivos muestra laboriosos y lentos.En este sentido, las estrategias alternativas que proporcionan alta extraccióneficiencia para BPA debe simplificar el tratamiento de la muestra.

Purificación de las muestras se torna esencial porque componentes de la matrizconstituyen la principal fuente de errores en la determinaciónde BPA en los alimentos. Los efectos observados son dependientes de la muestra yreducir considerablemente la precisión de la cuantificación en todas las técnicas.Por otro lado, la purificación de las muestras también se requiere para satisfactoriasystemperformance de termchromatographic de largo durante elAnálisis de una serie de muestras. Son en gran medida la técnica más utilizadapara la purificación de las muestras, aunque las proteínas y los lípidos deben ser previamenteeliminar para evitar la obstrucción de la absorbente. El uso de selectivaSorbentes como carneros, immunosorbents y MIPs deben aumentarrendimiento de muestra y precisión ya que tienen el potencial dehacer aislamiento de analito y limpiar en un solo paso y para proporcionarlimpiador extractos, pero su uso es un bien escaso y emergentes todavía.En nuestra opinión, fluorimétrico y métodos de espectrometría de masaseguirá desempeñando un papel predominante en el futuro para el análisisde BPA en los alimentos, aunque más adecuado tratamiento de la muestraestrategias debe ser desarrollado tomake estas metodologías másconfiable y ampliamente aplicables. La investigación debe centrarse también en baratoy los métodos de cribado rápido que son consistentes y robustos. En estorespeto, métodos de ELISA, aunque todavía un área emergente en BPAcontainingAnálisis de alimentos, debe ser un enfoque conveniente.

Tabla 5

Muestra

Otros analitos queBPA

I.S. Preparación de la muestra(pasos principales)

Derivatization

Columna GC

temperatura

programa y

inyección

Parámetros de MS

Rango lineal, LOD oLOQ, recuperaciones (R)

Referencia

Verduras frutas, pescadosopas y salsas,Conservas de carnes,espa

--- BPA-d14

SE o LLE

Anhídrido acético

DB-5MS,

30m×0.25mm

Destinados a 120 ◦C2min, rampa en10 ◦C minuto−1 a280 ◦C. INJ: splitless

BPA diacetyl: m/z

228, m/z 213.

LOQ: 10 ng g−1(muestras 1% de materia grasa); R: 42–112%.

Thomson et

al. [17

gueti y al hornohabas, alimentos infantiles,bebidas

pescado

4-tercbutilfenol

4-n-butilfenol

4-Pentylphenol

4-n-hexilfenol

4-terc-octilfenol

4-n-heptilfenol

nonilfenol

4-octilfenol

BPA-d16

SE–SPE

MTBSTFA, 100 L ael eluyente SPE seco(75 ◦C, 30min)

I.D., 0.25_m (J&W,

Folsom, CA, USA).

DB-5MS,

30m×0.25mm

I.D., 0.25_m (J&W,

Folsom, CA, USA)

Destinados a 100 ◦C1min, rampa en◦C 3 minuto−1 a 200 ◦C,durante 1 minuto,rampa en◦Cmin−1 20 a280 ◦C, destinados a5 minutos Inj: Divisiónrelación 1:10

I.S.: m/z 224

TBDMS derivate

BPA: m/z 441, m/z

470

I.S.: m/z 452, m/z 470

LR: 0.5–50 ng g−1;

LOD: 0.41 ng g−1; R:

105–120%.

Gyong et al.

[38]

bebi -- BPA LLE Ácido HP-5 Destin (O-BIS LR: Vareli

das -d14 trifluoroacéticoanhídrido, 200Lañadido a la SPEeluyente (30 min,a temperatura ambiente)(60 ◦C, 5 minutosquitarDerivatizaciónreactivo en exceso)

Trace Analysis,

25m×0.2mm I.D.,

0.33um

ados a 100 ◦C1min, rampa en25 ◦C minuto−1 a150 ◦C, rampa en5 ◦C minuto−1 a 210 ◦C,rampa en25 ◦C minuto−1 a280 ◦C, destinados amín. 2,5 Inj: splitless

trifluoroacetyl)derivados de BPA: m/z405, m/z 420

0.01–50_gmL−1;

LOD: 1ngg−1; R:

18–97%

s and

Balafas [33]

Infant formula

Daidzein

Genistein

La genisteína

Criseno-d1

SE–SPE

BSTFA:TMCS: DTE(1000:10:2, v/v/w),100L ha añadido a laeluyente SPE seco(80 ◦C, 30min)

DB-5MS,

30m×0.25mm

Destinados a 100 ◦C2min, rampa en10 ◦C minuto−1 a◦C 250, se apresuró a

I.S.: m/z 416, m/z 434

O-bis(Trimethylsilyl)derivados de BPA: m/z372 y m/z 357

LR: 0.01–50_g

mL−1; LOD: 1ngg−1;

R: 18–97%

Kuo and

Ding [43]

5 ◦C minuto−1 a 300 ◦C,Mantenga pulsado durante 5 minutos Inj:1L, splitless

Agua de mar y mariscos

4-terc-butilfenol

4-n-Butylpheno

4-Pentylphenol

4-n-hexilfenol

4-terc-octilfenol

4-n-heptilfenol

4-nonilfenol

2,4-diclorof

BPA-d14

LLE–SPE (agua de mar)

MAE-SPE (mariscos)

BSTFA, 100L, aSPE evaporadaefluente (60 ◦C,30 min)

I.D., 0.25_m (J&W,

Folsom, CA, USA)

DB-5MS,

30m×0.25mm

I.D., 0.5_m (J&W,

Folsom, CA, USA)

Inyección: 1L

I.S.: m/z 284 and m/z

269

O-bis(Trimethylsilyl)derivados de BPA: m/z357

I.S.: m/z 416

R: 74–97% (sweater),

92–111% (seafood)

LOD: 6.30 ng L−1

(water), 1.35 ng g−1

(seafood)

Basheer et

al. [51]

enol

pentaclorofenol

Simulador de alimentos

BADGE -- SPME -- HP-5 MS,

30m×0.25mm,

0.25_m

200 ◦C held for

2min, ramped at

10 ◦Cmin−1 to

270 ◦C, hold 15 min

BPA: m/z 213, m/z

228

LR: 0.01–8gg−1(agua destilada),0.02–10gg−1(agua con el 3 %ácido acético),0.02–3GG−1 (aguacon 10% de etanol)

LOD: 0.1 ng g−1(agua destilada),1ngg−1 (agua conácido acético al 3%),2ngg−1 (agua con10% de etanol)

R

Salafranca

et al. [93]

Simul --- -- SPME BSTFA:T DB- 80 ◦C O- LR: Chan

ador de alimentos

MCS (99:1,v/v), 7 L (usando elvapor de laDerivatizaciónreactivos en elespacio libre en elfibra) (65 ◦C, 30 s)

5MS,

30m×0.25mm

I.D., 0.5_m (J&W,

Folsom, CA, USA)

held for 2 min,

ramped at

20 ◦Cmin−1 to

280 ◦C, hold 1 min

bis(trimethylsilyl)

derivate of BPA: m/z

372, m/z 357

0.001–100_gL−1

LOD:0.4 ng L−1

R: 13.8%

g et al.

[94]

muestra

Otros analitos que BPA

ls

preparación de la muestra(pasos principales)

Columna de LC

LC parámetros

Detector parámetros gama lineal,

métodoLOD o LOQ

recuperaciones(R)

Referencia

Cereales

4-n-Nonylphenol

- – PLE–SPE

XTerra MS C18,100 mm × 2. 1mm, 3,5 m(Sistema de aguas).

Fase móvil:Amonio de 0,0025 Mtampón de formiato (pH 3.1,ajustado con fórmicoácido) / metanol con

(-) De ESI-MS: capilarVoltaje: 3.0 kV, conoVoltaje: 40 V, fuentetemperatura: 120 ◦C,desolvationtemperatura: 250 ◦C,

LR: 0.08–0.8gg−1(adición estándar),LOD: 43 ng g−1; R:81–104% (PLErecuperaciones)

Carabias-Martínezet al [32]

gradiente elución,0.2mLmin−1, Inj: 50 L

desolvation de gas (N2):410Lh−1, gas de cono(N2): 50 L h−1

4-tert-butilfenol

2, 4-Diclorofenol2,4,5 TriclorofenolPentaclorofenolácido 4-terc-Butylbenzoic

además postcolumnade una base fuerte[1, 8 - Diazabiciclo -(5,4,0) undec-7-es],10Lmin−1

Frutas y verduras

- - SE–SPE simetría escudo RP18,150 mm

Fase móvil:agua/acetonitrilo(60: 40,

FL: 275/300 nm

LR: 10–1000 ngmL−1;LOD:

Kang et al [41]

× 4. 6mm I.D.,3,5 m con un protectorcolumna, 10 mm × 2. 1mmIdentificación, 3,5 m (Millipore)

v/v);1.2mLmin−1; INJ:50L.

1.3ngg−1; R:82–101 %

Conservas para mascotas

- - E–SPE (totalcontenido)

Simetría escudo RP18150 mm × 4. 6mm I.D.,3,5 m (MilliporeCorporación, Milford, MA,ESTADOS UNIDOS).

Fase móvil:agua/acetonitrilo(60: 40, v/v), 40 ◦C,1mLmin−1, Inj: 50L.

FL: 275/300 nm

LR: 50–1000 ngmL−1;LOD: 2ngmL−1(agua), 3 ng g−1 (petalimentos); R: 95 %

Kang y Kondo

Conservas de grasa, acuosa de medios ácidos.

Señal - SPE (lixiviación delatas vacías)

SE–SPE

Nucleosil C18,250 mm x 4 mm de diámetro interior, 5m(Hichrom Limited,Berkshire, Reino

Fase móvil:agua/acetonitrilo congradiente elución, 25 ◦C,0.4mLmin−1, Inj:10μL.

FL: 235/317nm

LR: 200–2000 ngmL−1;LOD: 4.5–7.9 ng g−1; R:87–105% (alimentossimulador)

Sol et al [46]

BADGE-H2O

BADGE-2H2O

BADGE-H2O-HCl

BADGE-HCl

BADGE-2HCl

Unido).

Agua mineral

p-Butylphenol

- LLE Inertsil ODS-2,150 mm × 4. 6mm I.D.,5m (GL Ciencias, Tokio).

Fase móvil:agua/acetonitrilo(40: 60) que contiene 0.2 %H3PO4; 40◦C;1mLmin−1; INJ: 10μL.

ED, culombiométricodetección con una doblecélula analítica de electrodo

LOD: 5.7gL−1;R(Mean): 63 %

Toko'oya et al.

p-tert-butilfenol p-Hexylphenol

p-tert-Octilfenol p-Nonylphenol

E1: 400mV (vs Pd)

E2: 650mV (vs Pd)

protector celular: 700mV (vs

p-HeptylphenolNonilfenol

PD))