metodología de la técnica histológica

5/28/2018 Metodologa de la Tcnica Histolgica

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Metodologa de la Tcnica Histolgica

DEFINICIN:

Se denomina Tcnica Histolgica al conjunto de opeaciones a !ue se somete unamateia ogani"ada# a $in de !ue sea posi%le su estudio po medio del micoscopio#posi%ilitando la o%se&acin de estuctuas no &isi%les al ojo 'umano(

MET)D)*)+,- DE EST.DI):

*os mtodos paa el estudio de una mateia ogani"ada son:

/0 E1amen inmediato o in &i&o:

a0 -l estado $esco: -nimales micoscpicos uni o multicelulaes# clulas li%es de

animales supeioes 2descamadas natualmente# po aspado o po e1taccin# popincelamiento# etc(0# componentes celulaes !ue !uedan li%es po mtodos !uedesintegan la clula 2mitocondias# n3cleo# mem%ana plasm4tica0# ganos mu5delgados 2mesenteio# o cotes $inos diectos de tejidos como el catilaginoso0# clulaso%tenidas de culti&os de tejidos( En stos casos# paa e&ita la desecacin 5 polongalas posi%ilidades de o%se&acin# se agegan l!uidos como sueo sanguneo# sueo$isiolgico a tempeatua semejante a la del animal# usando platinas calientes a 678 968 C(

%0 E1amen con coloacin &ital: .sando soluciones mu5 diluidas de coloantes not1icos# !ue se intoducen po &a digesti&a o po in5ecciones# o !ue act3an so%e

clulas li%es# mtodo !ue se desci%e m4s adelante( 2;e p4gina motem:

E1igen la muete de las clulas 5 segui una seie de pasos !ue constitu5en la TcnicaHistolgica .ni&esal# 5a !ue se utili"a en todos los la%oatoios 5 sus esultados seintepetan de la misma manea(

?-S)S DE *- T@CNIC- HIST)*+IC- C)AAIENTE 2?aa$ina > Hemato1ilina >

Eosina0:

En el desaollo de la misma# se pueden distingui la sucesin de los siguientespocesos:

/0 )%tencin del mateial 'istolgico(

=0 ?oceso de $ijacin(

60 ?oceso de inclusin(

B0 )%tencin de cotes(

0 ?oceso de coloacin(


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70 Montaje $inal(

/0 )TENCIN DE* M-TEAI-*:

El mismo genealmente po&iene de:

a0 iopsias !ui3gicas(

%0 Mateial o%tenido de necopsias(

c0 .tili"acin de animales de la%oatoio(

d0 Estudios e1peimentales en animales o &egetales(

e0 Mateial o%tenido po culti&o de tejidos(

$0 Fotis o e1tendidos(

En la o%tencin del mateial 'istolgico 'a5 !ue cumpli con &aias eglas# como se:

Aeali"a la toma del tejido del luga coecto(

Es peciso o%a con cuidado 5 pecaucin# a $in de e&ita la destuccin de lostejidos(

Cota la pie"a de ganos maci"os en to"os pe!ueos 2ente / 5 6 cm( 1 G# cm(0#

teniendo en cuenta la con$iguacin anatmica(

*os ganos 'uecos no de%en se mu5 distendidos paa !ue se conse&e su aspectonomal(

Aeali"a ste poceso con la ma5o apide" posi%le paa e&ita la autodestuccin deltejido 2autlisis0(

=0 ?A)CES) DE FI-CIN:

?o medio de la $ijacin se %usca inteumpi el desaollo de los pocesos og4nicos$ijando 5 conse&ando de la manea m4s $idedigna posi%le el estado 5 la situacin en!ue se enconta%an los tejidos en &ida( *os tejidos de%en se $ijados inmediatamentedespus de e1tipalos sta es la 3nica $oma de inteumpi instant4neamente lospocesos &itales( Si la $ijacin se poduce alg3n tiempo despus de la o%tencin delmateial# puede sucede !ue 5a 'a5an comen"ado los pocesos de post > motem( Enun oganismo mueto pueden tene luga &aios tipos de desintegacin# como poejemplo# Jla autlisisK# !ue consiste en la destuccin de los tejidos po sus popiasen"imas locales poducidas po los lisosomas( El segundo tipo de desintegacinconsiste en la Jpute$accinK# en donde se poduce la destuccin de los tejidos en

accin conjunta con las %acteias(


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?o lo enunciado# podemos de$ini a la JFijacinK como un poceso !ue consiste enalcan"a una situacin esta%le de los constitu5entes tisulaes# de%ido a la inteupcinde las eacciones en"im4ticas(

FI-D)AES L.,MIC)S SIM?*ES:

Fomol al /G : Es el m4s utili"ado( Su empleo de%e aconsejase en todos los casosen !ue no se disponga de un $ijado especial# pincipalmente cuando se tata de $ijaganos o tejidos paa estudios 'istolgicos( Conse&a %ien los tejidos 5 po ello est4indicado en el estudio del sistema ne&ioso 5 es mu5 utili"ado en anatoma patolgicapaa la $ijacin de pie"as opeatoias o de %iopsias( En el comecio se lo encuenta auna solucin de Fomalde'do al BG (

+lutaalde'ido 5 Tet1ido de osmio 24cido smico0: Son mu5 %uenos $ijadoes# mu5

utili"ados en micoscopa electnica# 5a !ue pese&an las estuctuas $inas 5 algunossistemas en"im4ticos(

-lco'ol etlico# a%soluto 5 de motem 5 pemite el empleo posteio de$ijadoes !umicos o calo seco paa completa la $ijacin(

Calo seco: Es utili"ado a menudo en %acteiologa so%e e1tendidos desecados#poco empleado en 'istologa(

Calo '3medo: En $oma de agua 'i&iente es utili"ado en algunas in&estigacionesmico!umicas o paa $ija in&ete%ados(


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Fo: No es un &edadeo $ijado# peo detiene los pocesos &itales 5 los cada&icosde necosis 5 autlisis# peo en cuanto deja de actua# se eanudan las acti&idades&itales si la clula no 'a mueto# o se desaollan los pocesos de post > motem(

Congelacin > desecacin 2Mtodo de -ltmann > +es'0(

Aeglas de la $ijacin:

El mateial de%e se cotado en to"os pe!ueos 5 no demasiado gueso# paa$acilita la penetacin del $ijado(

*a elacin del &olumen ente el o%jeto a $ija 5 el $ijado# &aa seg3n el $ijadoempleado# peo como mnimo la elacin de%e se de / a =G(

El l!uido $ijado se de%e &ete pimeo en el $asco 5 luego se intoducen los to"os

de tejido en caso contaio !uedan stos pegados en el $ondo 5 no se $ijan po eselado( Si son tejidos !ue tienden a i al $ondo 2'gado# m3sculo# gl4ndulas0# se de%eagita el $asco duante unos minutos( *os tejidos !ue $lotan 2pulmn# gasas0# seecu%en con un to"o de algodn o papel de $ilto paa !ue se pongan totalmente encontacto con el $ijado(

*a duacin del tiempo de $ijacin &aa seg3n el $ijado utili"ado# el tamao 5 late1tua del tejido( El geneal 5 como pomedio# =B 'oas es su$iciente# peo puede!ueda en el l!uido $ijado# so%e todo con el $omol taponado duante &aios aos(

la osmoalidad es un $acto impotante 5 de%e en lo posi%le tene una concentacin

inica en el $ijado simila al tejido !ue se &a a $ija( *as &aiaciones de la osmoalidadse logan po la adicin de clouo de sodio# sacaosa o de1t4n(

Mecanismo de accin de los $ijadoes:

;a a depende de la sustancia utili"ada# pueden desci%ise B mecanismos de accin:

a0 ?o coagulacin de las potenas: Sin com%inase con ella# como po ejemplo lo'ace el alco'ol# 4cido pcico# 5odo# $omol# etc(

%0 Fomando com%inaciones !umicas con las sustancias og4nicas de las clulas otejidos como po ejemplo el 4cido cmico 5 sus sales# %icomato de potasio# %icomatode amonaco# etc(

c0 ?o educcin al contacto con las sustancias og4nicas $omando un pecipitadomu5 $ino# como po ejemplo el 4cido smico# %iclouo de mecuio# etc(

d0 ?o o1idacin# como po ejemplo el %icomato de potasio(

/0 ?A)CES) DE INC*.SIN:


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?aa o%tene cotes delgados# en un solo plano 5 uni$omes# es necesaio !ue laspie"as ad!uiean una due"a deteminada

Si %ien en sta gua de estudio se desci%e los pasos de la Tcnica Histolgicacoiente# en la cual se utili"a paa la o%tencin del cote el mtodo de inclusin# es

necesaio aclaa !ue e1isten = pocedimientos $undamentales paa la o%tencin delcote# ellos son:

a0 ?e&ia congelacin del mateial de estudio: Este pocedimiento con$iee a los tejidosun enduecimiento uni$ome 5 pemite eali"a diagnsticos inmediatos de pie"asopeatoias 5 estudios 'isto!umicos# 5a !ue la congelacin no altea la composicin!umica de los componentes 'istolgicos del mateial a e1amina(

%0 ?e&ia inclusin del mateial en una sustancia denominada ?aa$ina: El mateialcongelado no e3ne de manea su$iciente las condiciones ptimas# 5a !ue los coteso%tenidos po congelacin son siempe m4s guesos !ue los o%tenidos po inclusin(

?o lo dic'o 5 si se cuenta con el tiempo necesaio# es pe$ei%le impegna los tejidoscon una sustancia l!uida !ue luego pasa a una $ase slida 5 'omognea( Estepocedimiento se denomina JInclusinK( En su tanscuso# se deposita el medio deinclusin en todos a!uellos lugaes en donde se encuenta el agua# o donde sta 'asido e1tada( *os medios o sustancias de inclusin pueden se: Solu%les en el agua:Como se la JCeloidina# +elatina# ?le1iglas# o %ien Insolu%les en el agua: Como poejemplo la J?aa$inaK 5 otos(

En la Tcnica Histolgica coiente# solo nos inteesa el empleo de la paa$ina comomedio de inclusin# 5 dado !ue no es solu%le en agua# su empleo condiciona la pe&iae1taccin del agua contenida en el tejido !ue se &a a somete al poceso de inclusin(Es as !ue la inclusin consta de los siguientes pasos:

a0 Des'idatacin(

%0 -claacin(

c0 Impegnacin en paa$ina 5 con$eccin del taco o %lo!ue(

a0 Des'idatacin:

Tiene po $inalidad la e1taccin del agua del tejido paa !ue la paa$ina ocupe suluga( Si el mateial no se des'idata su$icientemente# la inclusin es de$ectuosa( Enste paso se emplea una seie de alco'oles en concentacin ceciente: G8# OG8#


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.na &e" o%tenida la des'idatacin a%soluta de la pie"a# se coloca a la misma en elseno de un l!uido# !ue me"cl4ndose con el alco'ol# tenga al mismo tiempo lapopiedad de disol&e la paa$ina# es po sta popiedad !ue eci%e el nom%e deJ*!uido intemediaioK( ?etenecen a ste gupo de sustancias el cloo$omo# toluol#1ilol 5 %en"ol# siendo ste 3ltimo el m4s utili"ado( -l se la paa$ina insolu%le en

alco'ol# es necesaio !ue el l!uido intemediaio lo eemplace po completo# po talmoti&o con&iene eno&alo una o dos &eces paa aseguanos !ue todo el asto dealco'ol 'a desapaecido( ?aa danos si la penetacin del l!uido intemediaio escompleta# de%emos o%se&a la pie"a ste al peneta en el tejido an'ido# poduceuna tanspaencia caactestica en el mismo# 5 es po sta a"n !ue tam%in se losllama J-claantesK( El tiempo &aa seg3n la sustancia usada 5 el tamao de la pie"a#genealmente de / a 6 'oas en cada %ao(

c0 Impegnacin en paa$ina 2inclusin popiamente dic'a0:

*a paa$ina utili"ada en la Tcnica Histolgica es una me"cla de cadenas de ==ca%onos 'asta =< ca%onos# &aiando su punto de $usin ente B8 a 7G8 C# seg3n sucomposicin( Como su nom%e lo indica# es una sustancia !umicamente inacti&a# polo !ue puede conse&ase inde$inidamente en la estu$a( Se li!ue$acta con $acilidad alos 78 C 5 a tempeatua am%iente se encuenta en estado slido( *as pie"as#despus de 'a%e sido aclaadas# se pasan a una me"cla de paa$ina l!uida 5 l!uidointemediaio en pates iguales 5 se las lle&a a la estu$a duante una 'oa( *uego selas intoduce en un ecipiente !ue tenga paa$ina l!uida 5 se guada en la estu$a paa!ue la paa$ina impegne totalmente el tejido en toda su intimidad( *a inclusin

completa de las pie"as dua apo1imadamente B 'oas(

Con$eccin del taco o %lo!ue:

Despus de los pasos ai%a mencionados# &iene la inclusin de$initi&a del to"o detejido# !ue nos da4 no9solo la solidi$icacin de la paa$ina intena de la pie"a# sinotam%in una en&oltua !ue $acilita4 su ulteio manejo 5 cote# utili"4ndose paacumpli con lo cometido# un molde especial de metal denominado J%aas de *eucPatK#dento del cual se &iete paa$ina l!uida a 7G8 C( -ll se deposita la pie"a !ue se saca

del %ao de paa$ina en !ue se enconta%a# cuidando de oientala con&enientementepaa sa%e despus la dieccin en !ue de%e se cotada( Se deja a en$ia atempeatua am%iente duante 6G minutos o m4s# 5 una &e" solidi$icada se etia delmolde o%tenindose de ste modo el taco !ue !ueda listo paa se cotado po elmictomo(

En sta situacin la pie"a puede conse&ase inde$inidamente( El o%jeto de la inclusinen paa$ina es popociona al tejido la consistencia su$iciente 5 necesaia paa !uepueda se educido a cotes $inos !ue posean un goso tal en micas paa !ue pemitael paso de la lu" 5 se e1aminados con el micoscopio(

/0 )TENCIN DE *)S C)ATES:


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Con el o%jeto de eali"a los cotes adecuados paa el estudio al micoscopio# seutili"an distintos mtodos 5 &aiados apaatos de gan pecisin# a los !ue sedenominan JMictomosK( Su empleo est4 condicionado al estudio !ue se deseeeali"a en los di&esos tejidos( -s se cuenta con mictomos de desli"amiento#mictomo Tetande# mictomo de paa$ina tipo Minot 2cuc'illa $ija0# el ultamictomo#

citomo# ente otos( El de cuc'illa $ija o tipo Minot es el m4s utili"ado en la TcnicaHistolgica coiente es uno de los m4s pe$ectos# pues nos da cotes seiadosautom4ticamente en $oma de cinta el espeso del cote puede &aia de = a =G um(*os espesoes m4s utili"ados &an desde a O um( *a eleccin del goso depende dela te1tua del tejido 5 de los elementos 5 detalles !ue se !uiean o%se&a 5 estudia(

El mictomo de tipo Minot consta de dos gandes pates:

El cail de la cuc'illa: Es una pie"a $ija duante el cote# po&ista de tonillos en su%ase# de la !ue emegen dos pilaes paalelos en cu5a pate supeio se encuentandos discos cilndicos anuados 5 m&iles po&istos de tonillos( En la anua se

intoduce la cuc'illa po su %ode menos anc'o# se la oienta con elacin a lasupe$icie del cote 5 se la ajusta( la calidad de los cotes# depende4 de laspopiedades de la cuc'illa( E1isten &aios tipos de cuc'illas: ?lanocnca&as# plano'ipecnca&as# %iplano simple# %iplano cono$acetada# de &idio# de diamante# enteotas(

*a platina: Es una pie"a de metal !ue posee canales e1ca&ados en la supe$iciedispuestos concnticamente# su tamao es &aia%le 5 $oma es cuadangula ocicula( En la platina se de%e $ija la pie"a a cota# lo !ue se loga $undiendo lapaa$ina con una esp4tula de metal calentada a la llama 5 !ue tend4 contacto con la

supe$icie canaliculada( Siempe el lado elegido paa esto se4 el lado opuesto al !uese desea cota( *a platina conjuntamente con el cao en !ue se encuenta montadaes lo !ue se desli"a &eticalmente cuando se 'ace gia la manija 5 al mismo tiempocada &e" !ue llega a su e1temidad supeio# se coe 'acia delante en un n3meo demicas pe&iamente elegido# !ue nos da4 el espeso del cote(

Montaje del cote:

*os cotes se etian del mictomo con un pincel de pelo $ino 5 se e1tienden en agua

coiente contenida en una %andeja o c4psula de ?eti( *uego de se la&ados# se &ieteen el mismo ecipiente agua a B8 C paa !ue los cotes se e1tiendan %ien 5uni$omemente( *uego en esa misma agua se intoducen los potao%jetos desgasados5 %ien limpios# so%e los cuales anteiomente se 'a depositado una $ina capa deal%3mina gliceinada o al%3mina de Ma5e 2me"cla en pates iguales de claa de'ue&o 5 gliceina con un cistal de timol como antisptico0# paa !ue la ad'eencia deltejido sea ma5o 5 con la a5uda de una aguja 'istolgica se empujan los cotes !ue$lotan en el l!uido 'asta colocalos en el potao%jeto( ?osteiomente se lle&an lospotao%jetos u%icados en una escaleilla de madea a la estu$a paa mejoa suad'eencia po coagulacin de la al%3mina(


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/0 ?A)CES) DE C)*)A-CIN:

De$inicin: Coloacin es el poceso po el cual un cuepo toma colo %ajo la accin deun coloante 5 no desapaece con la&ados de la misma sustancia en !ue se disol&i elcoloante(

Fundamentacin: *as estuctuas contenidas en las pepaaciones 'istolgicas#poseen poco contaste o caecen de l completamente# po lo !ue no &an a pode sedistinguidas al micoscopio( Este incon&eniente !ueda sal&ado po la popiedad !uetienen los distintos componentes celulaes 5 tisulaes de incopoa con &aia%leintensidad sustancias coloantes( En la Tcnica Histolgica coiente solo nos inteesados coloantes: Hemato1ilina 5 Eosina(

De$inicin de coloantes: Son todas a!uellas sustancias !ue pueden comunica sucolo a otos cuepos# sea el mismo colo !ue ellas tienen 2coloantes otocom4ticos0#o %ien tei de un colo distinto 2coloantes metacom4ticos# ejemplo: -"ul de

Toluidina# tie de ojo deteminados gupos !umicos de las clulas 5 a"ul todo lodem4s0

Sustancias %as$ilas: Son los componentes de las estuctuas !ue se tien concoloantes %4sicos(

Sustancias acid$ilas: Son los componentes de las estuctuas !ue se tien concoloantes 4cidos(

Sustancias neut$ilas: Son los componentes de las estuctuas !ue se tien concoloantes neutos(

Sustancias a"u$ilas: Son los componentes de las estuctuas !ue se tien con a"ulde metileno(

Sustancias osmi$ilas: Son los componentes de las estuctuas !ue se tien contet1ido de osmio(

Sustancias agi$ilas: Son los componentes de las estuctuas !ue se tien con sales

de plata(

Mtodos de coloacin:

Coloacin diecta o sustanti&a: Cuando e1iste una &edadea a$inidad ente el o%jeto5 la sustancia coloante(

Coloacin indiecta o adjeti&a: Cuando e!uiee la inte&encin de intemediaios omodientes paa !ue la coloacin tenga luga( El modiente puede actua antes del

%ao con el coloante o $oma pate de l( En ste 3ltimo caso# la com%inacin$omada eci%e el nom%e de J*acaK( Ejemplo: -lum%e de ?otasio o de Sodio(


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Coloacin pogesi&a: Se 'ace actua al coloante 'asta !ue llegue 'asta su puntoptimo(

Coloacin egesi&a: Se eali"a pimeo una so%ecoloacin 5 luego se elimina ele1ceso de coloante po medio de di$eenciadoes( Este poceso se denomina

Jdi$eenciacinK 5 se lle&a a ca%o con agua# alco'oles# %ases o soluciones met4licas(

Coloacin simple: Cuando se coloean solamente algunos elementos del pepaado(Como n3cleos# $i%as el4sticas# glucgeno# etc(

Coloacin com%inada: Cuando se tien los elementos nucleaes 5 citoplasm4ticos#ecuindose en geneal al empleo sucesi&o de coloes %4sicos 5 4cidos !uecontastan po sus coloes( Ejemplo: Hemato1ilina# tie de &ioleta el n3cleo Eosina#tie de osado el citoplasma(

Coloacin panptica: Es una coloacin com%inada eali"ada sucesi&amente po

coloantes neutos( Ejemplo: Ma5 > +QnRald > +iemsa( Coloacin pancmica: Cuando en un solo %ao coloante act3an todos loscoloantes neutos !ue se necesitan( Ejemplo: ?ancmico de *a&eman# de?appen'eim(

Coloacin en %lo!ue: Coloea a la pie"a en su conjunto antes de cotala( Es pocoutili"ada(

Coloacin en cotes: Coloea cada cote po sepaado( Es el mtodo m4s lago peode esultados supeioes(

Tcnica de coloacin con Hemato1ilina 5 Eosina:

Hemato1ilina: Es un coloante nuclea# est4 cagado positi&amente 5 es po lo tanto uncoloante %4sico( Se deposita en los gupos $os$atos del -DN 5 -AN !ue tienen caganegati&a( Es el coloante nuclea m4s utili"ado( Se lo o%tiene a pati de la e1taccindel palo de campec'e 2'emato1ilon campec'ianum0( *a sustancia es incoloa 5 'a dese tans$omada pimeo po o1idacin en 'ematena !ue es el autntico coloante( *a'ematena es un coloante indiecto# po lo !ue e!uiee el uso de un modiente# !ueen la p4ctica el m4s usado es el Hemalum%e de Ma5e# !ue $oma pate de lacoloacin 'emato1ilina > eosina# 5 !ue est4 compuesto po 'ematena# alum%e depotasio 5 4cido ctico( Coloea al n3cleo de colo &ioleta( Es una coloacinpogesi&a(

Eosina: Es un coloante ati$icial# d%ilmente 4cido !ue petenece al gupo de las$luoescenas( Es $4cilmente solu%le en agua( Coloea al citoplasma# tejido conjunti&o#$i%as col4genas de osado intenso( Lumicamente es un eosinato de potasio# siendoel 4cido eosnico el !ue act3a en la coloacin( Es una coloacin egesi&a 5 diecta(

?ocedimientos paa coloea la muesta:


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a0 Despaa$ini"acin e 'idatacin del cote: Dado !ue los coloantes se 'allan ensoluciones acuosas# la paa$ina impedi4 su entada( Como sol&ente de la paa$ina seutili"a en"ol o ilol# completando con el pasaje po alco'oles en oden dececiente/GG8#


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Cu%i con / gotas de Ma5 +QmRald# / minutos(

-gega igual cantidad de agua destilada en gotas# deja / minuto 5 &olca sin la&a(

Cu%i con solucin de +iemsa 26G cc de agua destilada 5 6 gotas del coloante0#deja /G > / minutos(

Enjuaga con agua destilada# seca 5 monta(

Tcnica de Impegnacin -gntica: Coloacin especial !ue utili"a sales met4licascomo clouo de oo# nitato de plata# sales de como# oiginando pecipitadosmet4licos( *a tcnica consiste en tata el mateial 2ejemplo $i%as eticulaes0 con unasolucin de una sal educi%le de plata 5 a continuacin con un agente educto# !ueact3a como lo 'acen los e&eladoes de $otoga$as# con&itiendo la sal de plata enplata met4lica# !ue tona de nego a los componentes !ue la toman( .na sustancia esJ-genta$nK cuando educe la plata# 5 es J-gi$ilaK cuando la impegnacin es posi%le

luego de una educcin con modientes o $omalina(

Tcnicas Histo!umicas:

a0 Tcnicas de coloacin paa potenas: Se %asan en el econocimiento 5 locali"acinde deteminados amino4cidos o %ien se utili"an anticuepos espec$icos macadospaa deteminadas potenas(

%0 Tcnicas de coloacin paa nucleopotenas 5 4cidos nucleicos: ?aa identi$ica al-DN 5 -AN se cuenta con dos mtodos:

Mtodos comunes a am%os 4cidos nucleicos: - ta&s del uso de coloantesnucleaes o %4sicos como la Hemato1ilina# -"ul de metileno o de Toluidina a ta&s laa%socin de a5os ulta&ioletas de deteminadas longitudes de onda o %ien# con elempleo de istopos adioacti&os# como timidina titiada !ue pone en e&idencia laTimina del -DN# o uidina titiada paa demosta .acilo en el -AN(

Mtodos de identi$icacin di$eencial: AE-CCIN DE FE.*+EN ) DE FE.*+EN >A)SEMEC: Es espec$ica paa -DN# pues depende del a"3ca Deso1ii%osa( Tasuna 'idlisis ligea po la accin %e&e so%e los cotes de 4cido clo'dico diluido# seloga la e1taccin del -AN 5 la desintegacin de la unin deso1ii%osa > puina# conli%eacin de gupos alde'dos# so%e los cuales act3a el eacti&o de Sc'i$$ 2$ucsina%4sica decoloada con an'dido sul$uoso0# con el !ue se tatan los cotes( Se o%tieneun colo p3pua o &ioleta oscuo en las estuctuas !ue contienen -DN# colo tantom4s macado# cuanto ma5o es su concentacin( Se demuesta as la u%icacin del-DN en la comatina de n3cleos inte$4sicos# en comosomas duante la mitosis# 5mu5 pe!uea cantidad en mitocondias 5 en los clooplastos de las clulas &egetales(

c0 Tcnicas de coloacin paa Hidatos de Ca%ono 2Ca%o'idatos o +l3cidos0: Seutili"an los siguientes mtodos:


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Aeaccin de ?-S 2?e5odic acid Sc'i$$0: Se %asa en la li%eacin de guposalde'dos po la accin o1idante del 4cido peidico 5 su e&idencia ulteio po mediodel eacti&o de Sc'i$$( Tie de ojo o ojo p3pua a las estuctuas !ue 'an li%eado losalde'dos( Se4 positi&a paa las siguientes estuctuas: Mem%ana %asal# clulascalici$omes# clulas !ue contengan glucgeno como po ejemplo los Hepatocitos 5 las

clulas musculaes( E1isten otas sustancias !ue no son 'idatos de ca%ono peo !ueson ?as positi&as como los lpidos no satuados# $i%as col4gena 5 eticula(

Mtodo de -lcian lue: Tie selecti&amente los polisac4idos 4cidos en solucin depH de =#= o menos( Tiene tam%in especial a$inidad po los gupos sul$atados#coloeando de a"ul a los mucopolisac4idos 4cidos# 5 no tie a los neutos(

d0 Tcnicas de coloacin paa lpidos: .tili"ando coloantes tipo Sud4n III# insolu%lesen agua 5 mu5 solu%les en gasa( No es un &edadeo mtodo de coloacin# sino un

poceso de tans$eencia de colo po disolucin de la sustancia empleada en el lpido()tos coloantes son Sud4n I;# Aojo escalata# Sud4n nego # ente otos( Tene encuenta !ue cuando se !uiee pocede al econocimiento de lpidos# es necesaioelegi un $ijado !ue no los disuel&a# aconsej4ndose $omol al /G o l!uido de ouinen cotes con mictomo de congelacin(

/0 M)NT-E FIN-*:

Tiene po o%jeto mejoa la o%se&acin# $acilita el manejo 5 aumenta la duacin de

los pepaados 'istolgicos( *a coloacin deja totalmente em%e%ido en agua alpepaado 5 de%e se eliminada( Esta pate de la Tcnica Histolgica consta de Bpasos:

a0 Des'idatacin: - ta&s de alco'oles en $oma ceciente G8# OG8#


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=0 Fija con tet1ido de osmio# o alde'do glut4ico# con el agegado o no de 4cidot4nico(

60 Des'idata la muesta(

B0 Inclusin en esina epo1i# !ue dan la due"a necesaia paa o%tene cotes de =GG-8 a G#/ um(

0 Cota con ultamictomo de a&ance mu5 lento 5 cuc'illas de &idio o diamante(

70 Aecepcin de los cotes en agua 5 luego en una ejilla de co%e ecu%ieta po unadelgada ejilla pl4stica 2Fom&a0# !ue se4 la !ue sostenga el cote(

0 ?asa po 4cido smico# acetato de uacilo# sales de plomo# etc(# !ue se deposita4nso%e deteminados componentes celulaes(

O0 )%se&acin en pantalla $luoescente(

metodología de la técnica histológica

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