medios cromogénicos y paneles miniaturizados de identificación_2
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Identificacin bacterianaConjunto de tcnicas y procedimientos que se aplican para establecer la identidad de un microorganismo. Se utilizan en:
En el rea clnica En la industria farmacutica, cosmtica y de alimentos En investigacin bsica
Clasificacin de los mtodos de identificacin bacteriana
Mtodos basados morfolgicos Mtodos basados Mtodos basados Mtodos basados Mtodos basados Mtodos basados
en criteriosen en en en en tincin diferencial pruebas bioqumicas tipificacin con fagos pruebas serolgicas deteccin molecular
Medio de cultivoLos medios de cultivo deben contener los elementos nutritivos necesarios para permitir la multiplicacin de las bacterias
Clasificacin de acuerdo a su composicin:
Bsicos Enriquecidos Selectivos Selectivos-Diferenciales
Medios de cultivo cromognicos
Medio selectivodiferencial preparado con sustancias cromognicas.
Productos qumicos de sntesis que son incoloros cuando se unen a sustratos naturales por enlaces que al ser hidrolizados por enzimas bacterianas especificas se libera produciendo un color intenso.
Ventajas:Galactosa ONF (incoloro)
Fcil y rpida interpretacin por su coloracin especifica y morfologa.
-galactosidasa
Resultadosfiables.
seguros
y en
Galactosa + ONF (amarillo)
Diferenciacin cultivos mixtos
Menor tiempo en la identificacin presuntiva (18-24 hrs).
Reduce
gastos material y reactivos.
de
Desventaja:
No hay un medio de cultivo para cada microorganismo, solo para algunos
Medios cromognicos para el aislamiento y recuento de microorganismos causantes de infecciones urinarias:
CHROMagarOrientation
URI Select 4 Agar CPS-ID3 Chromogenic UTI
CHROMagar Candida Cromogen albicans Candida ID Albicans ID2 CandiSelect Fluoroplate Candida Agar SDCA - MUAG
Frmula:
Cromopeptona 10g Glucosa 20g Mezcla cromgena 2g Cloranfenicol 0,5g Agar 15g Agua purificada 1000mL pH 6,0 0,3
X-glucsido sustrato
para la deteccin de la enzima -glucosidasa, comn a las especies de Listeria.
Un sustrato (L--
fosphatidylinositol) para una enzima fosfolipasa C que est presente en Listeria monocytogenes.
Coliformes: enzima -D-galactosidasa, que rompe el sustrato Salmon-GAL, provocando la aparicin de colonias de color salmn a rojo.
El sustrato X-glucuronido, es usado para la deteccin de la -D-glucoronidasa, enzima caracterstico de E.coli, (a excepcin de E.coli 0157:H7) y produce una coloracin azul de las colonias positivas. E.coli, al romper tanto Salmon-GAL como Xglucuronido, generan colonias de color azul oscuro a violaceas.
Agar cromognico para Salmonella sp. El sustrato Magentacaprilate es hidrolizado por la Salmonella lactosa negativa. El sustrato X-Gal es escindido por el enzima -D galactosidasa.
Diseados para realizar varias pruebas bioqumicas simultneamente y permitir la identificacin en un tiempo ms corto.Microorganismos: Bacterias Levaduras
Caractersticas:
Pocillos de plstico Mnima cantidad de medio o de sustrato (liofilizado o desecado) Inoculacin directa del medio (rehidratacin del sustrato) Entre 10 y 50 pruebas
Manipulacin y lectura siguiendo instrucciones del fabricante
Posibilidad de identificar enterobacterias, bacilos gram negativos no fermentadores, estafilococos, estreptococos, corineformes, bacterias anaerobias y levaduras.
Consta de tubos miniaturizados que contienen el medio de cultivo que se hidratan al inocularlos con la suspensin bacteriana pura.
Las pruebas se clasifican en grupos; a c/u de los ensayos con resultados positivos se les asigna un determinado valor numrico.Obtenindose un cdigo que corresponder a un determinado gnero o especie en un texto de la base de datos.
Sistemas comercialesManuales AutomatizadosSistema ATB (API automatizado)
Becton Dickinson Diagnostics Enterotubo
API
Abactor II
RapID ONE
Vitek
BD Phoenix
Ventajas de sistemas manualesFiabilidad semejante a pruebasconvencionales Ocupan poco espacio (incubacin y almacenamiento) Larga duracin (caducidad: 6-12 meses) Manejo sencillo Fcil inoculacin Fcil interpretacin de resultados Pruebas y medios uniformes
Caractersticas:
Tubo de polipropileno (forma de lpiz) 12 compartimentos 12 medios de cultivo diferentes (pruebas bioqumicas) 15 resultados posibles
Manejo
Lectura e interpretacin de resultados
Lectura de las pruebas: Agrupar las pruebas de tres en tresnegativas (todas valen 0) Positivas: primera del triplete vale 4 segunda vale 2 tercera vale 1
Obtencin del nmero de biotipo (5 dgitos) Comprobar identificacin con ENCISE (Enterobacteriaceae
Numerical Coding and Identification System) (registro de perfiles)
Caractersticas:
Tiras de plstico con 20 minitubos Orificio en parte superior (inoculacin) Contienen sustratos deshidratados de 20 pruebas bioqumicas Aadir 5 mL de agua a la bandeja para mantener la hidratacin Necesaria suspensin bacteriana (Agua destilada o SSE NaCl al 0.85%)
Tipos
API 20E: Enterobacteriaceae
API STAPH
+
API 20 STREP
+
Levaduras Suspensin en 2 ml de agua destilada estril hasta obtener una turbidez igual a 2 de McFarland. Incubar a 30 C durante 48-72 h.
Manejo
Indicaciones: Sin sealacin: llenar solo el tubo Indicados con subrayado: llenar con aceite estril la cpula Indicados con : Se llena tubo y cpula
Lectura e interpretacin de los resultados
Agrupar las pruebas de tres en tres Negativas (todas valen 0) Positivas : Primera del triplete vale 1 Segunda vale 2 Tercera vale 4
Transformacin de las 20 pruebas en cdigo de 7 dgitos (nmero de biotipo)
Tarjeta de resultados
Sistema Uni-Yeast-Tek (Candida)Constituido por:
Una placa plstica con mltiples compartimentos Contienen un medio con agar para la asimilacin diferencial de siete hidratos de carbono. Tambin incorpora una cubeta central con agar harina de maz-Tween 80 para determinar el crecimiento micelial y la produccin de clamidosporas.
Adems, est provisto de agar urea, agar para la asimilacin y reduccin de nitratos. Un caldo con extracto de carne al 2,6% (con 0,05% de glucosa) para realizar la prueba del tubo germinal.
Galera ID 32C
Permite identificar 63 especies Puede ser utilizada manualmente o bien de forma automatizada mediante los sistemas ATB Expression o mini API.
La galera se compone de 32 cpulas: 29 contienen cada una un sustrato carbonado deshidratado Una es el control negativo Otra detecta la sensibilidad a la cicloheximida La ltima es una prueba colorimtrica para la esculina.
Ventajas de los sistemas automatizadosEstandarizacin de los procesos Requieren un proceso de inoculacin e incubacin cortos Rapidez de respuesta 6-18 hrs Adecuacin a la diversidad de agentes de importancia clnica Objetividad de las determinaciones Precisin y reproducibilidad de los resultados Bioseguridad Optimizan el tiempo el personal de laboratorio Aumenta el control de las variables
Desventajas
Alto costo No incluyen caractersticas esenciales de ciertas especies No esta disponible para todo el espectro de bacterias Necesidad de cultivo puro Paneles no definidos por el usuario
Bacterias gramnegativas, gramnegativas urinarias, estafilococos y estreptococos
Manejo
Tarjeta de lecturaI. Exacta
I. Probable
Permite identificacin de bacterias gramnegativas y grampositivas incluyendo patgenos de orina, patgenos entricos, levaduras, anaerobios, Neisseria y Haemophilus
Tarjetas
Son de plstico transparente
Manejo
BD PHOENIX
Diseado para la identificacin rpida y la prueba de sensibilidad a antibiticos Bacterias aerobias grampositivas asi como aerobias y anaerobias facultativas gramnegativas Incluye pruebas para la fermentacin, oxidacin, degradacin e hidrlisis de diversos sustratos as como diversos antibiticos
Se inocula con una solucin al 0.5 de McFarland Analiza los paneles cada 20 minutos hasta un mximo de 16 hrs.
Referencias bibliogrficas
www.quimibell.com.mx www.biomerieux.com.mx
Rodrguez CE. Bacteriologa General: Principios y prcticas de laboratorio. Costa Rica: Editorial Universidad. 2005 Prats G. Microbiologa Clnica. Madrid: Mdica Panamericana. 2005