1. Mn Peroxidasa. Rojo FenolBuffer Succinato:Solucin A: 0,2 M cido Succininco (23,6g/L)Solucin B: 0,2 M Hidrxido de Sodio (18,3 ml)pH4,5: 25 ml Solucin A + 18,3 ml de Solucin B diluido en un total de 100ml

0.5 mM ABTS (2,2 azinobis (3-etilbenztiazoline-6-sulfonato) en 0.1 M buffer acetato de Na)

Sustrato: 100 ml buffer Succinato pH: 4,5, SO4Mn4H2O 22 mg y Rojo fenol 10 mg

Adicionar 2,5 ml sustrato/ tubo + muestra (50-100 l sn)

Calentar de 5-10 min en bao Mara a 30C

Adicionar 20 microlitros, peroxide de hidrogeno al 30 %

Incubar a 3C por 5 min

Adicionar 40 l NaOH 5 N. Purpura y centrifugar

Leer absorbancia a 610 nm, usar como blanco el reactivo solo

DETERMINACION DE AZUCARES REDUCTORESMETODO DNSSe hace una alcuota 1:50, tomando 4.9ml de H2O y 0.1ml de muestra de cultivo agotado, Mezclar

El reactivo DNS est compuesto por: Acido 3,5 dinitrosalicilico Tartrato de Na-K Hidrxido de SodioEl NaOH se disuelve en agua destilada aadiendo con agitacin el tartrato; se aade agua hasta un volumen especfico y posteriormente se agrega el DNSTomar 0,5 ml de stock y adicionarle 0,5 ml de reactivo DNS en un tubo de ensayo

Enfriamiento en agua fra x 2 minAgitar; calentamiento al bao Mara en agua a ebullicin x 5 min

Adicionar 5 ml de agua destilada, agitar

Dejar 15 min en reposo a T ambiente.

Leer absorbancia a 490nm, con un blanco sustituyendo los azucares por agua destilada.

2. LACASA CON ABTS COMO SUSTRATOBuffer Acetato de Na:Solucin A: 0,2 M cido actico (11.55ml/L)Solucin B: 0,2 M Acetato de Sodio (16 g de C2H2O2 Na o 27.2 g de C2H2 Na.3H2O/L

pH3.6: 43.6 ml Solucin A + 3.7 ml de Solucin B/100ml

0.5 mM ABTS (2,2 azinobis (3-etilbenztiazoline-6-sulfonato) en 0.1 M buffer acetato de Na)

27.43 mg ABTS / 100 ml buffer Ac-Na pH: 3.6

Adicionar 2.5 ml/ tubo

Calentar de 5-10 min en bao Mara a 30C

Adicionar enzima 5-10 micrilitros

Incubar por minutos hasta virar a verdoso

Leer absorbancia a 420nm, usar como blanco el reactivo solo