MATERIALES Y METODOSEl cndor andino es el ave ms pesada del mundo alza y una de las especies de aves ms sexualmente dimrficos: varones adultos (15 kg,) pesan aproximadamente un 30% ms que las mujeres (11 kg),. Esta especie es la nica excepcin a la dimorfismo sexual invertido que se encuentra en las aves rapaces. El cndor andino es un carroero amenazado a nivel mundial que vive en zonas montaosas a lo largo de los Andes sudamericanos regin. Cndores son aves sociales de agregacin en las canales y los sitios, donde se segregan por edad y sexo, con los machos adultos estar en la cima de la jerarqua y las hembras juveniles en el rango inferior [23,31] dormideros. Aparicin de la especie difiere entre las edades y sexos de acuerdo a las caractersticas del plumaje, morfologa, color y tamao de las piezas desnudas, especialmente en la cabeza y el cuello [28,32]. Los machos tienen un gran peine, iris marrn, barbas del cuello y la piel desnuda que vara de gris a amarillo en la cabeza y el cuello; las hembras tienen un iris de color rojo, la piel de menos de color amarillo y ningn peine, y juveniles muestran oscuro piel desnuda de color gris. La intensidad del color en las partes desnudas de subadultos adultsand puede cambiar de color rosa plido, amarillo o gris a amarillo intenso, naranja y rojo dentro de un par de segundos durante los concursos en las canales, especialmente en los machos (Fig. 1), lo que sugiere un papel como indicadores de dominancia que faciliten el establecimiento de jerarquas de alimentacin.El buitre negro americano (1,5 kg) es profundo negro y de color gris, con excepcin del parche ala blanca y marrn del iris, y no muestra diferencias externas de patentes entre las edades o sexos. Esta especie habita una gama grande en toda Amrica y muestra una tendencia al aumento de la poblacin, debido principalmente a la explotacin oportunista de los recursos alimentarios asociados con las actividades humanasRecogida de muestrasBuitres fueron capturados con redes de can en octubre-noviembre de 2010 cerca de Bariloche, Ro Negro, Patagonia Argentina. Una muestra de sangre (3.2 ml) se extrajo de la vena braquial de cndores andinos (n = 22) y buitres negros americanos (n = 17), transferidos a viales que contienen heparina seca y transportados en un refrigerador. En el da de la recoleccin, las muestras de sangre se centrifugaron a13 000 g durante 10 min para obtener plasma, que se congel a 220uC hasta el anlisis. Adems, las muestras de sangre de los cndores andinos cautivos (n = 27) se obtuvieron del Zoo de Buenos Aires, Argentina, donde fueron alimentados cndores en carne sin contenido vegetal de las vsceras: el tejido muscular, fresco, con huesos y la piel de animales de laboratorio y mamferos ganado herbvoro , en su mayoraganado bovino y caprino. Individuos muestreados incluidos los menores en su primer, segundo y tercer ao de calendario, subadultos (3-5 aos de edad) y adultos con plumaje definitivo ($ 6 aos) de ambos sexos.Permisos para capturar y toma de muestras de sangre de los cndores andinos y buitres negros americanos fueron proporcionados por Direccin de Fauna Silvestre de Ro Negro, la Administracin de Parques Nacionales de Argentina, el Zoolgico de Buenos Aires, Argentina, y los propietarios y gerentes de las granjas locales, quienes tambin aprobaron el protocolos de captura y muestreo. Determinacin de la edad y el sexo de los cndores andinos se llevaron a cabo de acuerdo a las caractersticas del plumaje, morfologa y tamao [28,32]

Determinacin y cuantificacin de carotenoides de plasmaUn procedimiento optimizado se utiliz para el anlisis de carotenoides.Brevemente, un volumen conocido de plasma (100 ml) se liofiliz, y los pigmentos carotenoides se extrajeron a partir del residuo seco con 200 ml de N, N-dimetilformamida durante 60 min, incluyendo sonicacin (Una corriente elctrica transmite su energa a un sistema mecnico que la convertir en vibraciones de alta intensidad que generan ondas de ultrasonido. Los ultrasonidos generan, a su vez, vibraciones en el material objetivo. Si contiene lquidos, se generarn millones de burbujas microscpicas, las cuales sufren rapidsimos procesos de expansin y colapso que pueden transmitir su energa a otros materiales. Este fenmeno se llama cavitacin y puede ser incrementado aadiendo al medio pequesimas esferas de vidrio) durante 5 min cada 30 min. El extracto resultante fue posteriormente se centrifug a 12.000 g durante 5 min y la capa superior se almacena a 230uC hasta que el anlisis por cromatografa lquida de alto rendimiento (HPLC). El anlisis cromatogrfico se llev a cabo en el mismo da como la preparacin de los extractos.Los anlisis se llevaron a cabo por duplicado. Todas las operaciones se llevaron a cabo bajo la luz tenue para evitar la isomerizacin y la fotodegradacin de los carotenoides.Identificacin de los carotenoides presentes en las muestras de plasma se llev a cabo siguiendo procedimientos estndar [33], y consisti en la separacin y el aislamiento de los pigmentos por cromatografa en capa fina (TLC) y co-cromatografa con las normas, la adquisicin de los espectros UV-visible en diferentes disolventes , as como pruebas de microescala derivatizacin qumica para el examen de grupos 5,6- epoxi, hidroxilo y carbonilo [34]. Las propiedades cromatogrficas, espectroscpicas y qumicas de los pigmentos se compararon con muestras autnticas de carotenoides, as como con los datos en la literatura [35,36,37,38,39]. Se aislaron muestras de pigmentos autnticos de carotenoides, y se purificaron mediante TLC, a partir de fuentes naturales: b-caroteno (a, b-caroteno), b-criptoxantina (a, b-caroten-3-ol), y zeaxantina (b, b-caroteno-3,39-diol se obtuvieron) de pimentn (Capsicum annuum L.), y la lutena (b, e-caroteno-3,39-diol) de las hojas de menta (Mentha arvensis) [40].Norma equinenona fue generosamente dada por el Dr. George Britton (Escuela de Ciencias Biolgicas de la Universidad de Liverpool, Reino Unido). La identificacin de los ismeros cis de lutena y zeaxantina se bas en la presencia y la intensidad relativa (% AB / AII) del pico de cis a aproximadamente 330-340 nm en el espectro UV-visible, una reduccin en la estructura fina y un pequeo cambio hipsocrmico en lmax con respecto a la lutena todo-trans, y el comportamiento cromatogrfico en la columna C18 HPLC de fase inversa (los ismeros cis son ligeramente ms retenidos que el ismero todo trans) [38].El anlisis cuantitativo de los carotenoides por HPLC se llev a cabo de acuerdo con el mtodo de M'nguez-Mosquera y Hornero-Mendez [40] con algunas modificaciones. La HPLC systemconsisted de un cromatgrafo Waters Alliance 2695 equipado con un detector de matriz de fotodiodos Waters 2998, y controlado conEmpower2 software (Waters Cromatograf'a, SA, Barcelona,Espaa). Una columna de fase inversa C18 analtica (Mediterranea SEA18, 20.064,6 Identificacin mm, 3 mm; Teknokroma, Barcelona, Espaa) se utiliz. La separacin se consigue mediante una elucin en gradiente binario usando una composicin inicial de 75% de acetona y 25% de agua desionizada, que se aument linealmente hasta 95% de acetona en 10 min, luego elevada a 100% en 2 min, y se mantuvo constante durante 10 min . Se alcanzaron las condiciones iniciales en 5 min. Se utiliz un volumen de inyeccin de 20 ml y una velocidad de flujo de 1 ml / min. La deteccin se realiz a 450 nm, y los espectros fueron adquiridos en lnea en el rango de longitud de onda de 350-700 nm. La cuantificacin se realiz utilizando curvas de calibracin estndar externos preparados con normas zeaxantina, lutena, b-criptoxantina, equinenona y b-caroteno.Las curvas de calibracin se prepararon en el intervalo de 0,5 a 45,0 mg / mL, y construidos por el trazado de la zona pico a 450 nm frente a la concentracin de pigmento. Las curvas de calibracin de todo-trans-lutena y todo-trans-zeaxantina tambin se utilizaron para determinar la concentracin de sus respectivos ismeros cis. a-criptoxantina se cuantific mediante el uso de la curva b-criptoxantina.Los anlisis estadsticos univariados diferencias en la concentracin de carotenoides en plasma entre las especies silvestres (cndores andinos y negro americano buitres) y dentro de las especies (cndores andinos en cautiverio y silvestres) fueron evaluados de acuerdo con el tamao del efecto de las diferencias (d de Cohen y sus intervalos de confianza del 95%) y las pruebas t en transformado datos para alcanzar la normalidad. Para determinar la magnitud del tamao del efecto que constituye una diferencia biolgicamente relevantes, se evalu si los intervalos de confianza superior e inferior al 95% se superponen con el valor de referencia d de Cohen cero indica que no hay diferencia entre los grupos [41,42].Las relaciones entre las concentraciones de cada tipo de carotenoides en plasma dentro de los individuos se calcularon mediante correlaciones de Pearson. Para intentar reducir objetivamente la base de datos original a las variables de compuestos ms pequeo, mutuamente no correlacionados o factores, se llevaron a cabo anlisis factorial utilizando la matriz de correlacin.Las puntuaciones de los factores subyacentes que causan la covariacin de potencial entre las concentraciones observadas de cada carotenoide fueron extrados y utilizados como (ortogonales) variables de respuesta independientes.Las diferencias en la concentracin de carotenoides plasmtica total (mg / ml) con la edad, el sexo y el estado (salvaje o en cautividad) de cndores andinos fueron evaluados por medio de tres vas ANOVA. La variacin en la concentracin de cada tipo de carotenoide de acuerdo a la edad y sexo de los cndores andinos silvestres fue evaluada por dos vas ANOVA. La modelos fueron reducidos a su forma ms simple mediante la eliminacin, de una manera escalonada hacia atrs, las variables o interacciones independientes que no pudieron explicar la variacin significativa en la dependiente variable. Se procedi al probar la importancia de todas las variables y interacciones bidireccionales, eliminando slo las que dio lugar a una menor asociacin con la variable dependiente, a partir de la interaccin de dos vas. El significado de las variables restantes se ensay de nuevo, hasta que no variable o interacciones adicionales podran ser retirados de la modelo. El resultado es el modelo ms adecuado para explicar la variabilidad en la variable de respuesta, donde se retienen slo las variables explicativas significativas. Tambin se inform de modelos completos incluyendo trminos de efectos fijos no significativas, pero con exclusin de las interacciones no significativas. Parcial Eta al cuadrado (gp 2) se utiliz como una medida del tamao del efecto en ANOVA [41].