lvarez-Snchez M. E., Marn-Campos A. 2011. Manual de procedimientos analticos de suelo y planta Laboratorio de Qumica, Departamento de Suelos. Universidad Autnoma Chapingo. Chapingo, Mx.UNIVERSIDAD AUTNOMA CHAPINGO DEPARTAMENTO DE SUELOS LABORATORIO DE QUMICA DE SUELOS Manual de Procedimientos Analticos para Suelos y Plantas Responsabledel Laboratorio de Qumica: Dra. Ma. Edna lvarez Snchez Laboratorista: Q. Martha Anglica Marn Campos

Mayo 2011 Laboratorio de Qumica de Suelos INTRODUCCIN Elpresentemanualdetcnicas analticasdesueloyplantatiene suorigenen el ProgramadeCalidadeInterpretacindeAnlisisdeSuelosydePlantas(ISP) convocadoporelLaboratoriodeFertilidaddeSuelosdelInstitutodeRecursos Naturales del Colegio de Postgraduados y por la Sociedad Mexicana de la Ciencia delSuelo,A.C.,conlafinalidaddefomentarelusouniformedelosmtodosy mejorar e incrementar la confiabilidad de los anlisis.La mayora de los mtodos deanlisisdesueloquesepresentanenestemanualsonlosoficialmente aprobadosporlaSecretariadeMedioAmbiente,RecursosNaturalesyPescaa travs dela Norma Oficial Mexicana NOM-021-RECNAT-2000. Losaportesrealizadosenlastcnicasanalticasquesedescriben,seindicana travsdenotasfinalesysonelresultadodelaexperienciaenelusodeestos procedimientosconfinesdeinvestigacinenanlisisdesuelosyplantas;la finalidad de estas notas es facilitar el trabajo, prevenir erroresy mejorar la calidad de los anlisis. Dra. Ma. Edna lvarez Snchez Responsables del Laboratorio de Qumica Laboratorio de Qumica de Suelos INDICEANLISIS DE SUELOS ........................................................ Error! Marcador no definido. RELACIN 1:2, CON H2O4 CONDUCTIVIDAD ELCTRICA5 CONTENIDO DE HUMEDAD DEL SUELO8 MATERIA ORGNICA, MTODO WALKLEY Y BLACK9 NITRGENO TOTAL, MTODO SEMIMICRO-KJELDAHL(NO INCLUYE NITRATOS)11 NITRGENO INORGNICO EXTRACTABLE EN KCI 2N15 P EXTRACTABLE, MTODO OLSEN20 P EXTRACTABLE, BRAY Y KURTZ 1 MODIFICADO23 CATIONES INTERCAMBIABLES26 EXTRACCIN DE HIERRO, COBRE, CINC, Y MANGANESO CON DTPA31 DETERMINACIN DE CARBONATOS TOTALES EN EL SUELO38 DETERMINACIN DE CARBONATOS ACTIVOS41 ANLISIS DE PLANTAS ................................................................................................. 42 NITRGENO, MTODO SEMIMICRO-KJELDAHL MODIFICADO PARA INCLUIR NITRATOS42 SOLUBILIZACIN DE FSFORO, CALCIO, MAGNESIO, POTASIO, AZUFRE, SODIO, HIERRO, COBRE, CINC, MANGANESO Y BORO POR DIGESTIN CON MEZCLA AC PERCLRICO/ AC NITRICO46 CUANTIFICACIN DE FSFORO47 CUANTIFICACIN DE CALCIO, MAGNESIO, POTASIO YSODIO49 CUANTIFICACIN DE HIERRO, COBRE, CINC Y MANGANESO52 POTASIO EXTRACTABLE EN AGUA, MTODO DE EXTRACCIN RPIDA54 DETERMINACIN DE AZUFRE FOLIAR MTODO TURBIDIMTRICO57 DETERMINACIN DE BORO FOLIAR POR EL MTODO DE LA AZOMETINA-H59 OTRAS TCNICAS ........................................................................................................... 60 DETERMINACIN DE NITRATOS EN SOLUCIONES ACUOSAS POR EL MTODO DEL CIDO SALICILICO (COLORIMETRICO)61 DETERMINACIN DE NITRATOS EN EXTRACTOS DE SUELO POR NITRATACIN DEL CIDO SALICLICO64 Laboratorio de Qumica de Suelos ANLISIS DE SUELOS pH RELACIN 1:2, CON H2O Reactivos Agua destilada. Soluciones amortiguadoras con pH 4.0, 7.0y9.0 10.0. Material y equipo Vasos de precipitado de plstico de 100 y 150 mLAgitadores de vidrio pH-metro Procedimiento Se colocan 10 g de suelo en un vaso de precipitado de 100 mL, se aaden 20 mL de agua, lo cual da una relacin suelo/solucin 1:2. Se agita manualmente durante 1 minuto y se deja reposar por 10 minutos. La operacin se repite dos veces. Se agitaperfectamentelasuspensindelsueloantesdeefectuarlalectura correspondientedepH.Secalibraelinstrumentoconlassoluciones amortiguadoras, teniendo cuidado de leer las muestras problema en el intervalo de pH correspondiente. Referencias JACKSON,ML.1964.Anlisisqumicodesuelos.TraduccinalespaolporJ. Beltrn M. Omega, Barcelona, Espaa. Laboratorio de Qumica de Suelos CONDUCTIVIDAD ELCTRICA Reactivos Agua destilada. Material y equipo Probeta de 50 mL Vasos de precipitado de plstico de 50 100 mL Varillas de vidrio Termmetro, escala 0 a 100 C Puente de conductividad. Procedimiento Se colocan 10 g de suelo enun vaso de precipitado de polipropileno de 100 mL. Se aaden 50 mL de agua (si se utiliza la muestra en la que se determin el pH, adicionar30mL)Se agitalasuspensinysedejareposarpor24h.Se midela conductividad elctrica del sobrenadante. Se enjuaga la celda tres veces con agua destilada.Seenjuagaconlasolucinproblema,dosotresveces.Setomala temperaturadelasolucinproblema.Laslecturassecorrigenporunfactorde temperatura y se expresan de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Unavezalmesdebecalibrarseelpuentedeconductividad.Estoserealiza determinandolaconstantedelacelda.Seenjuagaconaguadestiladavarias veces la celda. En sta se coloca una solucin de KCI 0.01 N a 25 C y se realiza la lectura, se efectan tres o cuatro lecturas y se obtiene el promedio para calcular la constante de la celda. Clculos Clculo de la constante de la celda: KClcK4118 . 1= k = constante de la celda a 25 C 1.4118 mmho cm-1 = conductividad elctrica especfica de KCI 0.01 N a 25 C CKCI = conductividad de la disolucin en mmhos CE = conductividad elctrica, dS m-1,a temp. ambiente. Si mmho cm-1 = dS m-1 1000 xxFt k CCEprob=Laboratorio de Qumica de Suelos probC= conductividad de la muestra problema en mhos Ft = factor de correccin de temperatura tabulada 1000= factor para convertir de mhoa moho Referencias RICHARDS,L.A.(ed.).1990.Diagnsticoyrehabilitacindesuelossalinosy sdicos.6a.ed.,DepartamentodeAgriculturadeEstadosUnidosde Amrica. Limusa, Mxico, D. F. Factoresdecorreccinportemperaturadedatosde conductividad elctrica en extractos de suelo CftCftCft 16.01.21823.01.04328.40.936 17.01.18923.21.03828.60.932 18.01.16323.41.03428.80.929 18.21.15723.61.02929.00.925 18.41.15223.81.02529.20.921 18.61.14724.01.02029.40.918 18.81.14224.21.01629.60.914 19.01.13624.41.01229.80.911 19.21.13124.61.00830.00.907 19.41.12724.81.00430.20.904 19.61.22025.01.00030.40.901 19.81.11725.20.99630.60.897 20.01.11325.40.99230.80.894 20.21.10725.60.98831.00.890 20.41.10225.80.98331.20.887 20.61.09726.00.97931.40.884 20.81.09226.20.97531.60.880 21.01.08726.40.97131.80.877 21.21.08226.60.96732.00.873 21.41.07826.80.96432.20.870 21.61.07327.00.96032.40.867 21.81.06027.20.95632.60.864 22.01.06427.40.95332.80.861 22.21.06027.60.95033.00.858 22.41.05527.80.94733.20.843 22.61.05128.00.94333.40.829 22.81.04728.20.94033.60.815 Laboratorio de Qumica de Suelos Unidades de conversin 1 mmhos/cm = dS/m mSS=10001 cm mhos cm mS / /1000cm enS= = mmhos/cm mS 2.5 S 2500 = 10 mmhos/cm = 1S/m 1 mmhos/cm = 1dS/m 1 mmhos/cm = 1mS/cm 1S (siemens) es la conductancia de un conductor que tiene una resistencia elctricade1ohm/m.Lasequivalenciasentreambasunidadessonlas siguientes: 10 mmhos/cm = 1S/m 1 mmhos/cm = 1dS/m 1 mmhos/cm = 1mScm 000 000 1 1000 ) ( 1 11= = = = mS S Siemen mhoohmS Laboratorio de Qumica de Suelos CONTENIDO DE HUMEDAD DEL SUELO Peso botePeso bote + Suelo hmedo Peso bote + suelo seco Humedad ( %) Suelo 1 Suelo 2 Norma NOM-021-RECNAT-2001 Clculos g 100) () ( ) (xB P s s P B Ps s P B P h s P B P ++ += Donde: g=Contenido de humedad gravimtrica expresado en porcentaje ( %). PB= Peso del bote con tapa (g). Psh=Peso de suelo hmedo (g). PB+Psh =Peso del bote ms peso del suelo hmedo(g). PB + Pss=Peso del bote ms peso del suelo seco (g). Laboratorio de Qumica de Suelos MATERIA ORGNICA, MTODO WALKLEY Y BLACK Reactivos Dicromatodepotasio1.0M.Sedisuelven49.032gdeK2Cr2O7enaguayse afora a 1 L. Sulfato ferroso 0.5 N.Se disuelven 140.00 g de FeSO4.7H2O en 250 mL de agua. Se adicionan 15 mL de H2SO4 concentrado, se enfra a temperatura ambiente y se afora a 1 L con agua, o puede utilizarse sulfato frrico amnico. Sulfato frrico amnico 0.5 N. Se disuelven 196 g de Fe(NH4)2(SO4)2.6H2O en 800 mLdeaguaquecontienen20mLdeH2SO4concentrado,completea1Lcon agua. Indicadordedi/enilamina.Sedisuelven0.5gde(C6H5)2NHen20mLdeaguay 100 mL de H2SO4 concentrado. cido sulfrico concentrado. H2SO4 cido fosfrico concentrado. H3PO4 Fluoruro de sodio. NaF Material yequipo Matraz erlenmeyer de 500 mL Bureta de 25 mL Pipeta volumtrica de 10 mL Probeta de 50 mL. Procedimiento Se pesan exactamente 0.500 g de suelo y se colocan en un matraz erlenmeyer de 500 mL. Se aaden 10 mL de K2Cr2O7 1 N con pipeta volumtrica, se agita. Con unaprobetaseaaden20mLdeH2SO4concentrado,seagitacuidadosamente durante1minuto.Sedejareposar30minutosohastaquesehayaenfriado.Se aaden 200 mL de agua. Se agita y se deja enfriar. Se agregan 10 mL de H3PO4 y 0.1 g de NaF y de 20 a 25 gotas de indicador de difenilamina. Se titula con FeSO4 oconFe(NH4)2(SO4)2osaldeMohr0.5Nfrescos.Estematerialseoxidacon facilidad y cambia su normalidad. Si el consumo de la solucin ferrosa en la titulacin de la muestra es menor que 4 mL, deber repetirse la determinacin con una muestra ms pequea, ya que es probablequelaoxidacindelamateriaorgnicaenestamuestradesuelono haya sido completa. Laboratorio de Qumica de Suelos La presencia de materiales reductores como cloruros, hierro ferroso, manganeso, manganoso etc., dan resultados altos. Si se sospecha la presencia de cloruros en el suelo, aadir al cido sulfrico 25 g/L de sulfato de plata. Para hacer la valoracin de la solucin de sulfato ferroso, se corre una prueba en blanco(todoslosreactivos,sinsuelo)yseobtieneelvalordeBdeasiguiente ecuacin. El K2Cr2O7es una sustancia patrn primaria por lo que la titulacin del blancosirveparaestandarizarsimultneamentealreductor.Conelempleodela frmula siguiente no es necesario calcular especficamente la normalidad. Clculos % M. O. =) 1 ( 10BM x1.34 M = mL de sulfato ferroso gastados en la muestra problema B = mL de sulfato ferroso gastados en el blanco El factor 1.34 se deduce de la siguiente forma: 34 . 15 . 0100 77 . 072 . 1 400012) 0 . 1 ( = x x x N 1.0 = normalidad del K2Cr2O7 12/4000 = peso miliequivalente del carbono 1.72 = factor de transformacin de carbn en materia orgnica (MO) 0.77 = factor de recuperacin de 77% determinado por Walkey 0.5 = peso de muestra Sielpesodelamuestraanalizadaesdiferentea0.5gsesustituyeelpesodel sueloanalizadoenlaecuacinanteriorparaencontrarelfactorcorrespondiente para calcular el porcentaje de MO. NOTA Conlafinalidaddedisminuirlavariabilidadenlosresultadosdelosanlisisde MO, los suelosse tamizan en malla 80 (0.20 mm). CuandosedeterminaelcontenidodeMOenabonosorgnicos,serecomienda utilizar de 0.025 a 0.05 g de muestra para que la oxidacin del material se realice de forma completa. Para Andisoles, cuyo contenido de MO es mayor al 4%, utilizar 0.2 gde muestra para una adecuada oxidacin. Corra dos blancos, dos patrones y un duplicado por cada 10 muestras de suelo a analizar. Se recomienda utilizar reactivos marca Baker o Merck. Referencias JACKSON,M.L.1964.Anlisisqumicodesuelos.TraduccinalespaoldeJ. Beltrn. Omega. Barcelona, Espaa. Laboratorio de Qumica de Suelos NITRGENO TOTAL, MTODO SEMIMICRO-KJELDAHL(NO INCLUYE NITRATOS) Reactivos cido sulfrico concentrado: H2SO4

Mezcladeindicadores.Sedisuelven0.099 gdeverdedebromocresoly0.066g de rojo de metilo (C15H15N3O2) en 100 mL de alcohol etlico a 95% (preparar en el momento de usar). cido brico con indicador. Se colocan 20 g de H3BO3 en un vaso de precipitado de1L,seadicionan900mLdeagua,secalientayseagitahastalacompleta disolucin del cido. Se enfra la solucin y se agregan 20 mL de la mezcla de indicadores. El pH de la mezcla H3BO3 e indicador debe ser aproximadamente 5.0, si fuese ms cido se agregancuidadosamentegotasdeNaOH0.1Nhastaquelasolucinadquiera una coloracin prpura rojiza o se alcance el pH indicado, se completa a 1 L con aguaysemezcla(silacoloracindelasolucinesverdeantesdepH5.0,hay que preparar nuevamente la solucin). Mezcla de catalizadores. Se muele en un mortero y se mezcla 1 kg de K2SO4 100 g de CuSO4.5H2O y 10 g de selenio metlico. La mezcla se muele hasta alcanzar texturadepolvoimpalpableysehomogeneizaperfectamenteparaevitar segregacin de las partculas de los componentes. Hidrxidodesodio 10N.Secolocan 400g deNaOHenun matrazaforadode 1 litro. Se adicionan 400 mL de agua y se agita hasta que el hidrxido se disuelva. Sedejaquelasolucinseenfre.Secompletaalvolumenindicadoconagua de igualcalidadyseagitavigorosamente.ElhidrxidodesodiolibredeCO2debe protegersedelCO2atmosfrico,paralocualdebemantenerseperfectamente tapado. Agua libre de CO2. Se hierve el agua necesaria en un matraz erlenmeyer durante 15 minutos, se tapa con un vaso de precipitado y se enfra. cidosulfrico0.05N.Sediluyen1.4mLdeH2SO4;(=1.84g/cm3y95%de pureza)enaguayseenrasaa1L.SeestandarizaconNa2CO3seco.Sepesan 0.2500 g de dicha sal y se disuelven en aproximadamente 50 mL de agua libre de CO2.Se agregan cinco o seis gotas de anaranjado de metilo a 1 % y se titula con el cido cuya concentracin se quiere conocer. Es conveniente hacer mnimo tres repeticiones. Se calcula la normalidad segn la frmula siguiente: Laboratorio de Qumica de Suelos ) () ( 3 2 3 24 2L cido de Volumen x e equivalent Pesog PesoNCO NaCO NaSO H= Peso equivalente Na2CO3= 53 Nota: si se pesan0.2500g, se emplean aproximadamente 25 mL Material y equipo Tubos de 2.2 cm d.i y 20 cm de largo o matraz micro-kjeldahl Matraz erlenmeyer de 125 mL Probeta de 25 ml Bureta o titulador automtico Block digestor Aparato de destilacin por arrastre de vapor. Procedimiento Digestin.Sepesan1,0.5o0.25gdemuestraparasueloscon2,4u8%de materiaorgnica,respectivamente;ensuelosarenosossesugierepesar0.5g paraevitarquelamuestraseproyecteduranteladigestin.Seadicionan4mL decidossulfricoconcentrado.Sedejaenreposotodalanoche.Simultneamentesecorrenblancosdereactivos.Seagrega1.1gdemezcla catalizadoresysecalientahastaqueeldigestadosetorneclaro(260 oC).Se bullelamuestra1hapartirdeesemomento.Latemperaturaenestafasese deberegulardemodoquelosvaporesdecidosulfricosecondensenenel interior del cuello del tubo de digestin. Completadalaetapa anterior,sedejaenfriareltuboyseagregasuficienteagua paracolocarlasuspensin,medianteagitacin,eldigestado(4a5mLson suficientes).Sedejadecantarlaspartculasdesliceconloqueseevitala precitacin de cristales de sulfato de amonio. Destilacin. Se transfiereelcontenido al bulbo delacmara dedestilacin del aparato.Esconvenientelavarelmatrazdedigestindosotresvecescon pequeasporciones deagua, adicionarlasjuntoconla muestraalacmara.Se coloca en el tubo de salida del aparato de digestin un matraz Erlenmeyer de 125 mLcon10mLdelasolucindeH3BO3cidobricoconindicador.Seadicionan 10mLdeNaOH10Nalbulbodedestilacin.Seconectaelflujodevaporyse inicia la destilacin. Se destilan aproximadamente 75 mL y se lava el condensador. Elnitrgenoamoniacalsedeterminaportitulacinconcido0.05N.Sesugiere utilizar una microbureta de 10 mL con graduaciones de 0.02 mL o un titulador Laboratorio de Qumica de Suelos automtico. El punto de equivalencia de la titulacin ocurre cuando la solucin vira de verde a rosado (titular los blancos y tomar como referencia este vire). Clculos LaconcentracindeNencmolckg-1,enlamuestrasedeterminasegnla siguiente frmula: 428 . 711014 ) ( ) (1xx muestra Pesox cido N V Vkg cmol Nblanco muestra = Donde: Vmuestra =volumen de H2SO4 para titular la muestra (mL) Vblanco =volumen de H2SO4 titular el blanco (mL) N = normalidad exacta del H2SO4 14 = peso mili-equivalente del N (mg). 1/10 = factor para convertir a porcentaje (100/1000) 71.428 factor para convertir de porcentaje a cmol kg-1 Peso de muestra en gramos NOTACon la finalidad de disminuir la variabilidad en los resultados de los anlisis deN total, los suelosse tamizan en malla 80 (0.20 mm). ParaunarecuperacindeNde97%a100%,deberndestilarse75mL aproximadamente. Para evaluar la recuperacin de N, preparar una solucin patrn de 1000 ppm N-NH4.Pesar 3.821 g de NH4Cl,diluir a 1 L y guardar en frasco en el refrigerador.Destilar 1 mL de alcuota (1 mL de alcuota de la solucin patrn contiene 1 mg de nitrgeno). N ppm = (M-V) x 14x N cido = =mL x 14 mg x .05 N = mL x 14 mg X .05 eq/l =mL x 14 x .05 e/1000 mL = mg de N pesust ge =Corra dos blancos, dos patrones y un duplicado por cada 10 muestras de suelo a analizar.Se recomienda utilizar reactivos marca Baker o Merck.

Laboratorio de Qumica de Suelos Referencias BREMNER,J.M.1965.Totalnitrogen.pp.1149-1178.In:C.A.Black(ed.), Methodsofsoilanalysis.Part2.Agronomy9.AmericanSocietyof Agronomy. Madison, Wisconsin. Laboratorio de Qumica de Suelos NITRGENO INORGNICO EXTRACTABLE EN KCI 2N Principios Elprocedimientodescritoseutilizaparaobtenerunaindicacindela disponibilidad de nitrgeno. Consiste en la extraccin del amonio por equilibrio delamuestradesueloconKC12Nyladeterminacindeesteionpor destilacinporarrastredevaporenpresenciadeMgO.Elmismo procedimiento es satisfactorio para la determinacin de iones nitratos y nitritos siseagregaaleacindeDevarda,loquepermitetenerunaindicacinde nitrgeno inorgnico. SeutilizaKC12Nporqueestereactivoescapazdeextraerelamonio arbitrariamentedefinidocomointercambiable.Estereactivopuedeproducir volatilizacin de amoniaco en suelos alcalinos durante la extraccin. Elmtodoseempleaparalaextraccindenitratosynitritos,basadoenla presuncinqueestosionesnosonretenidosporloscoloidesypuedenser fcilmente extractados por el agua de la solucin de KC1. Sensibilidad Sisesigueelprocedimientodescritomsabajo,esposibledetectar concentracionesdeaproximadamente0.5ppmdenitrgeno-inorgnicoenel suelo, lo que es suficiente para 1os propsitos de diagnstico. Interferencias 1.En suelos alcalinos pueden ocurrir prdidas por volatilizacin de NH3. 2.En suelos con capacidad de retener aniones, el extractante acuoso puede ser inadecuado para remover iones nitratos y nitritos. 3.Sielperododedestilacinexcededelos3-4minutos,esposibletener contaminacin de glutamina y otros compuestos de nitrgeno lbiles en alcali. 4.LapresenciadeMgCO3enelMgO,resultaenliberacindeCO2, particularmente si la muestra es acdica, lo que interfiere con la determinacin de amonio por titulacin. 5.LapresenciadefosfatointerfieremarcadamenteconlaaleacindeDevarda usadaenladestilacinporarrastredevapor.Lapresenciade200mgdeP resulta en la recuperacin de slo 9% del nitrato agregado. Precisin y Exactitud 1.El mtodo da resultados altamente reproducibles. 2.La recuperacin de nitrgeno ntrico agregado alcanza a un 96-99%. Aparatos Laboratorio de Qumica de Suelos 1.Aparato de destilacin por arrastre de vapor con generador de vapor. Ver Bremner (1965) o similar. 2.Microburetas de 5 10 ml graduada en intervalos de 0.01 ml o aparato de titulacin automtica. 3.Tubos de polietileno de 10 ml o frascos erlenmeyer de 125 ml. 4.Agitador magntico y barras de fierro recubiertas con plstico. 5.Matraces erlenmeyer de 50 ml. 6.Pipetas volumtricas de 5 y 10 ml. 7.Agitador de vaivn (180 oscilaciones por minutos). 8.Dispensadores de 0.2 g para MgO y aleacin de Devarda, respectivamente. 9.Dispensador para solucin de H3BO3. Reactivos 1.Oxidodemagnesio(tipopesado).Secalcinaenunamuflaa600-700 C, durante2horasysealmacenaenfrascocontapahermtica,despusde enfriado en desecador provisto de grnulos de KOH. 2.Solucin de cido brico con indicador. Disuelva 20 g de H3BO3 puro en 700 ml de agua caliente y transfiera la solucin fra a un matraz volumtrico de 1 litro que contiene 200 ml de etanol (96%) y 20 ml de la solucin indicadora descrita msabajo.MezcleelcontenidodelfrascoyagreguegotasdeNaOH0.05N hasta que el color cambie de rosado a verde claro cuando a 1 ml de la solucin se adiciona 1 ml de agua destilada. Complete el volumen de 1 litro. 3.Mezcla de indicadores. Disuelva 0.330 g de verde de bromocresol y 0.165 g de rojo de metilo en 500 ml de etanol (96%). 4.AleacindeDevarda.En(Cu:Al:Zn=10:9:1).Mulase,siesnecesario,enun molino de bolas o un mortero hasta que el 75% pase un tamiz de 300 mallas. 5.cidosulfrico0.005N,EstandarceloconTHAM(tris(hidroximetil) aminometano). 5.Solucinpatrnde50ppmdeN-NH4y50ppmN-NO3. Pese0.236gde (NH4)2SO4 y 0.361 g de KNO3 desecados o dilyalos a 1 litro con agua destilada. Gurdese en refrigerador. Procedimiento A.Determinacin de nitrgeno inorgnico (N-NO3 + N-NO2 + N-NH4+). 1.Pese5gdesueloycolqueloenunfrascocuadradodeplsticotubode polietileno de 100 ml de capacidad o en un matraz erlenmeyer de 125 ml. Laboratorio de Qumica de Suelos 2.Agregue 50 ml de solucin de KC1 2N: pesar 149.1 g de KCl/L de agua. 3.Agitepor60minutosenagitadordevaivnreguladoa180OPMydeje decantarporaproximadamente60minutos(sielanlisisnosevaarealizar inmediatamente,filtrelasolucinyguardeelfiltradoenrefrigerador;puede almacenarse por varios meses, sin mayores cambios). 4.Dispense 10 ml de solucin H3BO3 con indicador en un matraz erlenmeyer de 50mlycolqueloeneltubodesalidadelrefrigerante,demodoqueste quede a unos 4 cm del lquido. 5.Pipeteeunaalcuotade10ml(menoromayorensuelosconaltoobajo contenido de nitrgeno inorgnico, respectivamente) a un matraz de destilacin y agregue 0.2 g de MgO calcinado y aleacin de Devarda. 6.Conecte elaparatodedestilacinydestilehastacompletaraproximadamente 75 ml en 3-4 minutos (6 a 7 ml/min.). 7.Titule la muestra y los blancos con cido sulfrico 0.005N. B.Determinacin de N-NH4 y N-NO3 + N-NO2- separadamente. 8.EnlaprimerafasedestinadaadeterminarelN-NH4+elprocedimientoes idntico al descrito en los puntos 1 a 7, excepto que no se adiciona la aleacin de Devarda. 9.ParadeterminarelN-NO3-+N-NO2-seadiciona,alfrascode destiladosque contiene el residuo de la destilacin de N-NH4+0.2 g de aleacin de Devarda y se vuelve a destilar y titular. Laboratorio de Qumica de Suelos Clculos 8.1. N, ppm = (M-B)xN x 14 x (Vi/a) x (1/p) x 1000 Donde: MyB:mililitrosdeH2SOusadosenlatitulacindelamuestrayelblanco, respectivamente N: normalidad de cido Vi: volumen del extractante; a, la alcuota destilada P: peso de la muestra en gramos. Efectos de almacenamiento y procesamiento 1.Se ha observado que el secado al aire produce cambios en las fracciones de amonio y nitrato, siendo los primeros mayores que los segundos. 2.Cambios de estas fracciones tambin ocurren durante el almacenamiento. 3.Laextensindelcambiodelafraccinnitrgenoinorgnicoparecenohaber sido evaluada. Control del sistema de destilacin Destile1mldelamuestrapatrn50ppmdenitrgenoamoniacaly50ppmde nitrgeno ntrico en presencia de 9 ml de KC1 2N. Proceda como para el caso de las muestras desconocidas. Interpretacin. La siguiente tabla tentativa puede utilizarse en la interpretacin de los resultados para el caso de cereales de grano pequeo. Clase N inorgnico en suelo, ppm Muy bajo0-10 Bajo10-20 Medio20-40 Alto40-60 Muy alto +60 Laboratorio de Qumica de Suelos Referencias BREMNER, J. M. 1965. Inorganic forms of nitrogen. pp. 1179-1237. In: C. A. Black (ed.),Methodsofsoilanalysis.Part2.Agronomy9.AmericanSocietyof Agronomy. Madison, Wisconsin. NOTA Evaluacin de recuperacin de N en el aparato de destilacin: Solucin madre de 1000 ppm de N Recuperacin de N-NH4 + N NO3 Nppm = (M B) x N x 14 1 mL de alcuota tiene1 mg N 1000 mL 1000 mg de N (NH4 + NO3) 1 x = 1.0 mg N 1 mg N 100% Obtenido x % de recuperacin LIXIVIADOS DE AGUA Se considera que la del agua es de 1 g/cm3, 10 mL de alcuota destilada = 10 gpeso de la muestra. Nppm de lixiviados =1000114 ) ( xPx N x B M + Donde: P (peso de la muestra mg) En orina, sacar su densidadpesando 1 mL de orina en balanza analtica (promedio)% N en orina = 1014 ) (x a Pesomuestrx N x V Vb M Se recomienda utilizar reactivos marca Baker o Merck. Laboratorio de Qumica de Suelos P EXTRACTABLE, MTODO OLSEN Reactivos Solucin extractora, bicarbonato de sodio 0.5 M.Se pesan 42 g de NaHCO3 y se disuelven en aproximadamente 900 mL de agua. Se ajusta el pH a 8.5 con NaOH 10 N y se enrasa a 1 L. Se debe controlar el pH de la solucinantes de utilizarla.El contacto de esta solucin con el aire tiende a cambiar el pH, por lo que debe de controlarse antes de utilizarse y realizar el ajuste si es preciso. cido sulfrico 14 N. Se diluyen 196 mL de H2SO4 concentrado (si = 1.84 g/cm3 y pureza de 95%) en agua y se enrasa a 500 mL. Tartrato de antimonio y potasio a 0.5%. Se pesan 0.5 g de K(SbO)C4H4O6.1/2H2O y se disuelven en 100 mL de agua. Molibdatodeamonio.Sedisuelven20gde| | O H O Mo NH2 24 7 6 44 . ) ( en300mLde agua. Se agregan lentamente, bajo constante agitacin y con cuidado, 450 mL de H2SO414N.Seagregan100mLdetartratodeantimonioypotasioa0.5%.Se diluyen las mezclas a 1 L con agua. Se guarda esta solucin en frasco oscuro para protegerlo de la luz. Solucin reductora, cido ascrbico. Se disuelven 0.50 g de C6H8O6 con solucin de molibdato de amonio y se afora con la misma solucin a 100 mL. Esta solucin se prepara minutos antes y cada vez que se vaya a realizar la colorimetra. EstndardePde200ppm.Sedisuelven0.8786gdefosfatodihidrgenode potasio(KH2PO4),secadoa105 Cdurante2h,enaguaysediluyea1L.Se guardaenfrascodeplsticoodevidrioblandoparaevitarcontaminacincon arsnico y se mantiene en refrigeracin. Estndar de P de 5 ppm. Se diluyen 5 mL de la solucin de 200 ppm de P a 200 mL con agua. Se prepara en el momento de desarrollar la colorimetra. Material y equipo Tubos de polipropileno de 100 mL o matraz erlenmeyer de 250 mLTapones de hule y cuadros de film o pelcula de plstico Papel whatman 5, 42 o similar Carbn activado Pipetas volumtricas clase A de 1, 2, 4, 6, 8 y 10 mL Pipetas volumtricas 5 y 10 mL Matraz aforado de 50 mL Embudos de plstico Bureta de 50 mL Laboratorio de Qumica de Suelos Frascos de vidrio Probeta de 50 mL o dosificador automtico Agitador de accin recproca Espectrofotmetro. Procedimiento Sepesan2.5gdesueloysecolocanenunmatrazerlenmeyerde250mLo en tubosdepolipropilenode100mL,seadicionan50mLdesolucinextractora (cubrir los tapones con la pelcula de plstico para evitar contaminacin) y se agita por30minutosa180oscilacionesporminuto(opm),secolocanlostubosde polipropilenoenposicinhorizontalylosmatracesenposicinvertical.Sefiltra inmediatamente a travs de papel filtro whatman 5, 42 u otro de calidad similar. Si lossuelossonricosenmateriaorgnica,seadicionaaproximadamente1gde carbnactivadoalpapelfiltro.EstecarbnactivadodebeestarlibredeP. Simultneamentesecorrenblancosdereactivos.ParaladeterminacindePse toma una alcuota de 5 mL del filtrado ( 10 mL si la concentracin de P es muy baja)ysecolocaenunmatrazaforadode50mL,seadicionaagua,5mLde solucinreductorayseafora.Despusdelaadicindecadareactivohayque agitar. Se lee en absorbancia despus de 30 minutos, pero antes de una hora, a 882 nm. Paralelamente se prepara una curva de calibracin de P como se indica a continuacin: Solucin P 5 ppma Solucin extractante b Aguac cido ascrbicoConc. de P mLppm 05 104050 15 103950.1 25 103850.2 45 103550.4 65 103450.6 85 103250.8 105 103051.0 a en matraz aforado de 50 mL b segn la alcuota que se tome c aproximadamente Laboratorio de Qumica de Suelos Clculos P(mg/kg) = ppm en CC x Dm x Dv Donde: ppm CC = partes por milln en la curva de calibracin Dm = dilucin de masa (volumen de extractante/g de muestra) DV = dilucin de volumen (aforo/alcuota) NOTA Dentrodelasvariablesqueafectanlosresultadosanalticosenlosanlisisde suelos estn el tamao y posicin de los frascos, el tiempo y el tipo de agitacin, la temperaturadeextraccinyeltiempodecontactodelsueloconlasolucin extractora. Previo al anlisis, el material de vidrio deber haberse remojado por 24 horas en una solucin de HCl 0.1 N, posteriormente, enjuagar con agua corriente y terminar conagua destilada. Se recomienda utilizar reactivos marca Baker o Merck. Referencias OLSEN, 5. R., and L.A. DEAN. 1965. Phosphorus. pp. 1035-1049. In: C. A. Black (ed.)Methodsofsoilanalysis.Part2.Agronomy9.AmericanSocietyof Agronomy, Madison, Wisconsin. Laboratorio de Qumica de Suelos P EXTRACTABLE, BRAY Y KURTZ 1 MODIFICADO Reactivos Solucin extractante Bray y Kurtz 1 (fluoruro de amonio 0.03 N en cido clorhdrico0.025N.Sedisuelven1.11gdeNH4Fenagua.Sediluyea900mLyse adicionan 2 mL de HCI concentrado ( = 1.19 y pureza de 37.23%). Se afora a 1 L. cido sulfrico 14 N. Se diluyen 196 mL de H2SO4concentrado (si = 1.84 g/cm3

y pureza de 95%) en agua y se enrasa a 500 mL. Tartratodobledeamonioypotasioal0.5%(plv).Sedisuelven0.5gdeK(SbO) C4H4O4 1/2 H2O en 100 mL de agua. Solucinstockdemolibdatodeamonio.Sedisuelven20gdemolibdatode amonio,| | O H O Mo NH2 24 7 6 44 . ) (en aproximadamente 300 mL de agua destilada. Seagreganlentamente450mLdeH2SO414Nbajoconstanteagitaciny100 mL de tartrato doblede amonio y potasio al 0.5%. Se diluye a 1 L con agua y se guarda en frasco oscuro para protegerlo de la luz. Reactivo mezclado. Se adicionan 1.5 g de L-cido ascrbico (C6H8O6)a 100 mL delasolucinstock.Estereactivodebeprepararse frescocada 24horasyaque sufre descomposicin.

EstndardePde200ppm.Sedisuelven0.8786gdefosfatodihidrgenode potasio(KH2PO4),secadoa 105Cdurante2h,enaguaysediluyea1L.Se guardaenfrascodeplsticoodevidrioblandoparaevitarcontaminacincon arsnico y se mantiene en refrigeracin. Estndar de P de 5 ppm. Se diluyen 5 mL de la solucin de 200 ppm de P a 200 mL con agua destilada. Se prepara en el momento de desarrollar la colorimetra. Material y equipo Matraz erlenmeyer de 50 mL Tapones de hule y cuadros de film o pelcula de plstico Papel whatman 5, 42 o similar Carbn activado Embudos Bureta Pipetas de 5 y 10 mL Pipetas volumtricas clase A de 1, 2, 3, 4 y 6 mL Matraz aforado de 50 mL Agitador vortex Laboratorio de Qumica de Suelos Agitador de accin recproca Espectrofotmetro ElmaterialutilizadodebedejarsetodalanocheenHCIa5%,enjuagarsecon agua de la llave y, finalmente, con agua destilada. Procedimiento Sepesan2.5gdesueloysecolocanenunmatrazerlenmeyerde50mL.Se adicionan 25 mL de la solucin extractante (se tapan los matraces con tapones de hule previamente cubiertos con la pelcula de plstico para evitar contaminacin). Se agita por 5 minutos en agitador de accin recproca a 180 opm, se colocan los matracesenposicinvertical.Elextractosefiltraenpapelwhatman5,42o similar. Simultneamente se corren blancos de reactivos.

Se toma una alcuota de 2 a 40 mL del extracto, dependiendo de la concentracin de P en solucin (alcuotas de 5 a 10 mL son en general adecuados para suelos bajosymediosenP)ysecolocaenunmatrazaforadode50mL.Seadiciona aguahastacompletaraproximadamente40mL.Seagregan5mLdelreactivo mezclado, se agitan y completan a volumen. Se esperan 30 minutos y se lee en un espectrofotmetroa882nm.Paralelamentesepreparaunacurvadecalibracin de fsforo como se indica a continuacin: Solucin P 5 ppm a Solucin extractante b Agua ccido ascrbicoConc. de P mLppm 05 104050 150.10 250.20 350.30 450.40 650.60 a en matraz aforado de 50 mL b segn la alcuota que se tome cla necesaria para tener aproximadamente 40 mL Laboratorio de Qumica de Suelos Clculos P (mg/kg) = ppm en CC x Dm x Dv Donde: ppm CC = partes por milln en la curva de calibracin Dm = dilucin de masa (volumen de extractante/g de muestra) Dv = dilucin de volumen (aforo/alcuota) NOTA Dentro de las variables que afectan los resultados analticos en los anlisis desuelosestneltamaoyposicindelosfrascos,eltiempoyeltipode agitacin,latemperaturadeextraccinyeltiempodecontactodelsueloconla solucin extractora. Previoalanlisis,elmaterialdevidriodeberhaberseremojadopor24 horas en una solucin de HCl 0.1 N, posteriormente, enjuagar con agua corriente y terminar conagua destilada. Se recomienda utilizar reactivos marca Baker o Merck. Referencias BRAY, R.H. and L.T. KURTZ. 1945. Determination of total, organic, and available phosphorus in soil. Soil Sci. 59:39-45. CSTPA.1974.Handbookonreferencemethodsforsoiltesting.CouncilofSoil Testing and Plant Analysis. Athens, Georgia. Laboratorio de Qumica de Suelos CATIONES INTERCAMBIABLES Extraccin con CH3COONH4 1 N pH 7 y cuantificacin por absorcin atmica y fotometra de llama Reactivos Acetato de amonio (CH3COONH4) 1 N, pH 7.0.Se diluyen 57 mL de cido actico glacial(CH3COOH)en800mLdeagua.Seaaden69mLdeamoniaco concentrado (NH3).Se agita. Se ajusta el pH a 7.0, con NH3 o CH3COOH segn corresponda. Se afora a 1 L con agua. Estndar de calcio de 1000 ppm.Se disuelven 2.4973 g de CaCO3 (secado a 285 Cpor 2 h) en 5 mL de HCI 6 N y se diluye con agua a 1 L y se guarda en botella de polietileno y en refrigeracin. Estndar de magnesio de 1000 ppm. Se disuelve 1.0000 g de Mg metlico puro en HCIdiluidoyseaforaa1Lconaguayseguardaenbotelladepolietilenoyen refrigeracin. Estndar de potasio de 1000 ppm.Se disuelven 1.9067 g de KCI (secado a 110 Cpor2h),enaguasediluyea1Lyseguardaenbotelladepolietilenoyen refrigeracin. Estndar de sodio de 1000 ppm.Se disuelven 2.5421 g de NaCI en agua (secado a 110 C por 2 h), se diluye a 1 L y se guarda en botella de polietileno y en refrigeracin. Estndar de Ca, Mg, K y Na de 100 ppm.Se diluyen por separado 50 mL de la solucin de1000 ppm de Ca, Mg, K y Na y se afora a 500 mL con CH3COONH4. Cloruro de lantano al 5 %.Se pesan 5.864 g de La2O3, se disuelven en 25 mL de HCI concentrado y se afora a 100 mL con agua destilada. Material y equipo Tubos de centrfuga de 100 mL Tapones de hule y cuadros de film o pelcula de plstico Probeta de 50 mL o dosificador automtico Matraces aforados de 100 mL Papel whatman 2, 4 o similar Agitador de accin recproca Pipetas volumtricas clase A de 1, 2, 3, 4 y 5 mL Centrfuga Laboratorio de Qumica de Suelos Flammetro Lmparas de ctodo hueco de Ca y Mg Espectrofotmetro de absorcin atmica provisto de quemador de oxido nitroso. Procedimiento Se pesan 5 g de suelo y se colocan en tubo de centrfuga. Se adicionan 33 mL deCH3COONH4 1 N, se tapan los tubos (se cubre el tapn con la pelcula de plstico paraevitarcontaminacin),secolocanenposicinhorizontalyseagitanpor10 minutos a 180 opm en agitador de accin recproca. Secentrifugalasuspensinhastaqueelsobrenadanteestclaro(10minutosa 1800rpm).Elsobrenadantesefiltraenunmatrazaforadode100mLconpapel whatman 2, 4 o similar. Se repite el proceso dos veces ms. Se enrasa a 100 mL conCH3COONH4seguardaparadeterminarK,Ca,MgyNaintercambiables. Simultneamente se corren blancos de reactivos. Determinacin de Ca y Mg.

Para la determinacin de Ca, en general, se toma una alcuota de 2 mL y se afora con agua a 50 mL (dilucin de volumen 50/2), se realiza otra dilucin con alcuota de3mLyseaforaa25mL,debenrealizarselasdilucionesqueconvengan, dependiendodelaconcentracindelanalito.SeleeCaen absorcinatmica en llama de N2O y C2H2 y con curvas de calibracin diluidas en agua. La preparacin de la curva de calibracin para Ca se indica en la tabla siguiente (podran tenerse otrasconcentraciones,recordarqueelintervalodetrabajodependedela sensibilidad del instrumento). Solucin de Ca (100 ppm)a Aforo con aguaConc. de Ca mLppm 01000 11001 21002 31003 41004 51005 a matraz aforado de 100 mL Esrecomendableagregarlealassolucionesclorurodelantano;tomardela segunda solucin y de cada punto de la curva de calibracin 10 mL y adicionarle 2.5mLdelasolucindeclorurodelantanoal5%conlocualsetendruna concentracinfinaldelantanode1%eigualconcentracindelospuntosdela curva de calibracin. Laboratorio de Qumica de Suelos Para la determinacin de Mg, se lee en la dilucin que corresponda. Se cuantifica conelequipodeabsorcinatmicaenllamadeaireyC2H2yconcurvasde calibracin diluidas en agua. La preparacin de la curva de calibracin para Mg se indica en la tabla siguiente (podran tenerse otras concentraciones, recordar que el intervalo de trabajo depende de la sensibilidad del instrumento). Solucin de Mg (100 ppm)a Aforo con aguaConc. de Mg mLppm 01000 11001 21002 31003 41004 51005 a matraz aforado de 100 mL Esrecomendableagregarlealassolucionesclorurodelantano;tomardela primerasolucinydecadapuntodelacurvadecalibracin10mLyadicionarle 2.5mLdelasolucindeclorurodelantanoal5%conlocualsetendruna concentracinfinaldelantanode1%eigualconcentracindelospuntosdela curva de calibracin. Determinacin de K y Na por flamometra. La cuantificacin de K y Na puede realizarse con el equipo de absorcin atmica enmododeemisin,utilizandollamadeaireyC2H2.Sinembargo,esms econmicodeterminarlosenunflammetro.Acontinuacinsedescribeel procedimiento con el flammetro. Para la determinacin de K y Na, se lee en los extractosconcentradosylacurvasepreparaaforandoconlasolucinextractora paramantenerlamatriz.SilasconcentracionesdeNayKsonaltas,deber hacerseladilucincorrespondiente,puedehacerseunadilucinde10/3,locual dependedelaconcentracin.Lomsadecuadoesleerelextractodirectoenel flammetroyenfuncindelalecturaserladilucinarealizar.Esconveniente realizarlaslecturasdelasmuestrasproblemasenlazonacentraldelascurvas. Cuandoserealizandiluciones,lospuntosdelascurvasdecalibracinseaforan con agua. . La preparacin de las curvas de calibracin para K y Na se indican en lastablassiguientes(podrantenerseotrasconcentraciones,recordarqueel intervalo de trabajo depende de la sensibilidad del instrumento). Laboratorio de Qumica de Suelos Solucin de K (100 ppm)a Aforo con NH4OAcb Conc. de K mLppm 01000 51005 1010010 2010020 3010030 4010040 a matraz aforado de 100 mL b en diluciones, aforar con agua Solucin de Na (100 ppm)a Aforo con NH4OAcb Conc. de NamLppm 01000 51005 1010010 2010020 3010030 4010040 a matraz aforado de 100 mL b o con agua en diluciones Se calibra el instrumento a 100 con la solucin de 40 ppm (podran tenerse otras concentraciones,recordarqueelintervalodetrabajodependedelasensibilidad delinstrumento)yaceroconlasolucindeCH3COONH4encasodeleerlas muestrasenelextractoconcentradooconaguasisehanrealizadodiluciones. Paracorregirparcialmentelavariacininstrumental,esconvenientevolvera calibrarelinstrumentoa100antesdehacerlaslecturasdecadaunadelas solucionespatrones.Laseriedepatronesymuestrasseleencomomnimodos veces y se promedia para obtener una lectura constante. La experiencia indica que las lecturas deben realizarse entre 10 a 15 segundos de iniciadalaaspiracin,paraevitarasdesviacionesdebidoaincrustaciones.Por otraparte,despusdeleercadamuestradebeaspirarsesuficienteaguapara limpiar el quemador. Clculos Laboratorio de Qumica de Suelos Ca (cmol/kg ) =1000 04 . 20100xx D x D x CC ppmv m Mg (cmol / kg) =1000 15 . 12100xx D x D x CC ppmv m K (cmol/kg) = 1000 1 . 39100xx D x D x CC ppmv m Na (cmol/kg) = 1000 0 . 23100xx D x D x CC ppmv m Donde: ppm CC = partes por milln en la curva de calibracin Dm = dilucin de masa (volumen de extractante/g de muestra) Dv = dilucin de volumen (aforo/alcuota) 20.04, 12.15, 39.1, y 23.0 = factor para convertir a miliequivalentes para Ca, Mg, K y Na. 100/1000 = factor para expresar resultados en funcin de 100 g de muestra.Loscationesanteriormenteseexpresabanenmeq/100g,yesigualacmol/kgo cmolkg-1. NOTA Diluciones recomendadas K: 50/2;Ca 50/1; Mg 50/1. Se recomienda utilizar reactivos marca Baker o Merck. Referencias CHAPMAN,H.D.1965.Cationexchangecapacity.pp.891-901.In:C.A.Black (ed.),Methodsofanalysis.Part2.Agronomy9.AmericanSocietyof Agronomy. Madison, Wisconsin. Laboratorio de Qumica de Suelos EXTRACCIN DE HIERRO, COBRE, CINC, Y MANGANESO CON DTPA Reactivos Solucin extractora: cido dietilentriaminopentactico (DTPA) 0.005 M, cloruro de calcio (CaC12.2H2O)0.01 M y trietanolamina (TEA, C6H15NO3) 0.1 M, ajustada a pH7.30.Para1Ldeestasolucinsedisuelven1.967gdeDTPA,1.47gde CaC12.2H2Oy14.92gdeTEA(=1.12g/cm3semiden13.3mL)en aproximadamente20mLdeaguadesionizada;sediluyea900mL.Seajustael pH a 7.30 0.05 con HCI 6 N, se agita y se diluye a 1 L con agua de igual calidad. Esta solucin se guarda en frasco de plstico. cido clorhdrico 6 N.Se diluyen con agua 5.9 mL de HCI a 37% en un matraz aforado de 10 mL. Estndar de CINC de 1000 ppm. Se disuelve 1.0000 g de Zn metlico puro, con 5 10 mL de HCI concentrado. Se evapora casi a sequedad y se diluye a 1L con solucinextractora(DTPA0.005M),seguardaenbotelladepolietilenoyen refrigeracin. Estndardemanganesode1000ppm.Sedisuelven1.5824gdexidode manganeso (MnO2) en 5 mL de HCI concentrado. Se evapora casi a sequedad y se diluye a 1 L con solucin extractora (DTPA 0.005 M), y se guarda en botella de polietileno y en refrigeracin. Estndardehierrode1000ppm.Sedisuelven1.0000gdeFe(enformade alambreopolvopurocon5a10mLdeHCIconcentrado).Seevaporacasia sequedad y se diluye a 1 L con la solucin extractora (DTPA 0.005 M), y se guarda en botella de polietileno y en refrigeracin. Estndardecobrede1000ppm.Sedisuelve1.0000gdeCumetlicoenuna cantidadmnimadeHNO3concentradoy5mLdeHCI.Seevaporacasia sequedad y se diluye a 1 L con solucin extractora (DTPA 0.005 M), y se guarda en botella de polietileno y en refrigeracin. Estndar de Fe, Cu, Zn y Mn de 100 ppm.Se diluyen por separado 10 mL de la solucinde1000ppmdeFe,Cu,ZnyMnyseaforaa100mLconsolucin extractora (DTPA 0.005 M). Material y equipo Tubos de polipropileno de 50 mL o matraz erlenmeyer de 125 mL Laboratorio de Qumica de Suelos Matraces volumtricos de 25 y 50 mL Tapones de hule y cuadros de film o pelcula de plstico Pipetas volumtricas clase A de 1, 2, 3, 4, 5 y 10 mL Papel whatman 5, 42 o similar Probeta de 25 mL o dosificador automtico Agitador mecnico de accin recproca Medidor de pH Espectrofotmetro de absorcin atmica Lmparas de ctodo hueco de Fe, Cu, Zn y Mn El material utilizado debe dejarse toda la noche en HCI a 5%, enjuagarse con agua de la llave y, finalmente, con agua destilada y desionizada. Procedimiento Sepesan10gdesueloysecolocanentubosdepolipropilenode50mLoen matraceserlenmeyerde125mL,seagregan20mLdesolucinextractora.Se tapanlostubos(secubrepreviamenteeltapnconlapelculadeplsticopara evitarcontaminacin),seagitandurantedoshorasa180opm(colocarlostubos enposicinhorizontalylosmatracesenposicinvertical).Sefiltranenpapel whatman5,42osimilarysecuantificanlosmicroelementosenelextracto. Simultneamente se corren blancos de reactivos. ElFe,Cu,ZnyMnsedeterminanmedianteespectrofotometradeabsorcin atmica,yseutilizallamadeaireyC2H2.Laconcentracindelamuestra problemaseobtienedelascurvasdecalibracin.Esimportantemantenerla matriz,sienlosextractosseleendirectamentelascurvassepreparanconla solucinextractora,sinembargo,sisehacendilucionesdelosextractosse prepararncurvasconaguadesionizada.Lapreparacindelascurvasde calibracin se indica en la tabla siguiente (podran tenerse otras concentraciones, recordar que el intervalo de trabajo depende de la sensibilidad del instrumento): Solucin de 100 ppm de Fe, Cu, Zn y Mn Aforar conDTPAa Conc. deFe, Cu, Zn y Mn mLppm 01000 11001 21002 31003 41004 51005 a con agua desionizada en diluciones. Clculos

Fe, Cu, Zn, Mn (mg/kg) = ppm CC x Dm x Dv Laboratorio de Qumica de Suelos Donde: ppm CC= partes por milln en la curva de calibracin Dm = dilucin de masa (volumen de extractante/g de muestra) Dv = dilucin de volumen aforo/alcuota) Nota LosmaterialesdebenserremojadosenHCl0.1N(8mLdeHClporL agua)durante toda la noche, enjuagar con agua de la llave, agua destilada yterminarconaguadesionizada.Lasdilucionesdebenserconagua desionizada. Diluciones recomendadas: Fe, Cu, Zn y Mn lectura directa Se recomienda utilizar reactivos marca Baker o Merck. Referencias LINDSAY, W. L.; W.A. NORVELL. 1978. Development of a DTPA soil test for CINC, iron, manganese, and coper. Soil Sci. Soc. Am. J. 42: 421 428 Laboratorio de Qumica de Suelos DETERMINACIN DE ANIONES SOLUBLES EN EL EXTRACTO DE SATURACIN Objetivo y campo de aplicacin EstaNormaOficialMexicanaestablecequeelmtodoparadeterminarlos anionessolubles(Cl-,CO32-,HCO3-,SO42-enextractodesaturacinpor titulacin volumtrica los tres primeros y por turbidimetria el ltimo. Principio Los aniones que se encuentran principalmente en extractos acuosos de suelos, (anionessolubles)sonoscarbonatos,bicarbonatos.sulfatosyclorurosyen menorcantidadnitratos,silicatosyfosfatos.ParaadeterminacindeCO32-

HCO3-yCl-sepuedenutilizarmtodosvolumtricosconunaciertaexactitud. Los SO42- pueden ser determinados por gravimetra turbidimtrica. Reactivos 3.1. cidosulfrico0.05N.Diluir3mLdeH2SO4concentradoen100mL. de H2O destilada y aforar a 2000 mL valorado. 3.2.Fenolftaleina al 1% con etanol al 85%. Preparar 100 mL. 3.3.Anaranjado de metilo al 0.1% en agua destilada. Preparar 100 mL. 3.4.Agua destilada. 3.5.Cromato de potasio al 5%. Preparar 100 mL. 3.3.Nitratodeplata0.025N.Pese4.2468g.deAgNO3enunmatraz volumtrico de 1 L y lleve al volumen con agua. 3.7.Cloruro de BarioDihidratado. (BaCl2x2H2O).3.8.Solucinacondicionadora.Disolver75gdeNaClen275mLdeagua destilada en un matraz de 500 mL con un agitador magntico, aadir 30 mL de HCl concentrado. 50 mL de glicerol, 100 mL etanol al 96%; afore a 500 mL. 3.9.Solucin estndar de SO4 de 1 Cmol(-) L-1;Disolver 0.0871 g de Sulfato de Potasio (K2,SO4 )en 1000 mL de agua destilada. Material y Equipo 4.1.Material comn de laboratorio. 4.2.Agitador electromagntico. 4.3.Fotocolormetro. Laboratorio de Qumica de Suelos 5. DETERMINACIN DE CO32-. 5.1.Procedimiento. 5.1.1.Tomar 5 mL del extracto de saturacin en un matraz erlenmeyer de 125 mL. 5.1.2.Agregar 15 mL de agua destilada. 5.1.3.Aadir 2 a 3 gotas de fenolftalena. 5.1.4.Sipresentauncolorrosado,titularcanH2SO4 0.05Nhastala desaparicin del color, anotar este valor como Y. 6.DETERMINACIN DE HCO3- 6.1. Procedimiento 6.1.1.Al matraz procedente de la titulacin con H2SO4 aadirle 3 gotas de anaranjado de metilo. 6.1.2.Seguir la titulacin con el H2SO4 0.05 N hasta un vire de naranja a canela. Anotar este valor como Z.

Clculos Alicuota mL1000xSO4 H2 del N x2Y.231=CO de L mol m = 31H . CO de L mol mAlicuota mL1000xSO4 H2 del N x2Y) - (Z 8.DETERMINACIN DE Cl- 8.1.Procedimiento. 8.1.1.Tomar .5 mL del extracto de saturacin en un matraz erlenmeyer de 125 mL. 8.1.2.Agregar 15 mL de agua destilada 8.1.3.Adicionar 4 gotas de indicador cromato de potasio 8.1.4.TitularconAgNO30.025N.Hastauncambiodecolordeamarilloa rojo ladrillo. Clculos Alicuota mL1000xAgNO de N xAgNO de mL.3 3 1=Cl de L mol mLaboratorio de Qumica de Suelos 10.DETERMINACIN DE SO 24 10.1. Preparacindelacurvadecalibracin.Delasolucinestndarde SO 24de1Cmol(-)L-1 setomarnalcuotasquesernllevadasaun volumen de 100 mL en matraces aforados con agua destilada como se indica en la tabla siguiente: me L-1 SO 24 Solucin estndar de 1 me, agregar (mL) 0.00 0.110 0.220 0.330 0.440 0.550 Afore a 100 mL (con H2O destilada) 10.2.Procedimiento. 10.2.1. En un matraz volumtrico de 100 mL agregar una alcuota de 10 mL del extracto con una pipeta volumtrica y afore a 100 mL con H2O destilada. 10.2.2. Vacelo a un matraz erlenmeyer de 125 mL y adicione 5 mL de solucin acondicionadora y aproximadamente 0.2 g de BaCl22H2O. 10.2.3.Agite en un agitador electromagntico durante 60 segundos. 10.2.4.Lea inmediatamente en un espectrofotmetro a una longitud de onda 340 nm. 10.2.5.Previamente lea a curva de calibracin agregando el contenido de los matraces de 100 mL a matraces erlenmeyer de 125 mL y adicione 5 mL de solucin acondicionadora y aproximadamente 0.2 g de BaCl2.2H2O. 10.2.6. Agite y lea en el espectrofotmetro como se indic para las muestras. 10.2.7.Silalecturadelasmuestrassesaledelrangodelacurvade calibracin haga una dilucin. Clculos Graficarlacurvadecalibracinenpapelmilimtrico,ydeterminela concentracindeSO 24porinterpolacin.Siefectuarondiluciones multiplicar por el factor correspondiente. = 41) (SO de L mol m a x 10 x d Donde: a = Cmol(-) L-1 calculados en la curva de calibracin. 10 = Factor de dilucin de la curva. (100/10) d = Factor de dilucin de la muestra (si a hubo). Referencias Laboratorio de Qumica de Suelos LOVEDAY,J.1974.Methodsforanalysisofirrigatedsolis.Techn.Comm.54, Commonwealth Bureau of Soils, Famham Royal. Bucks. England. Richards,LA..(ed).USSalinityLaboratoryStaff(1954,Reprint1969).Diagnsis andimporvementofsalineandalkalinesolis.USDAAgricultureHandbook No. 60. Laboratorio de Qumica de Suelos DETERMINACIN DE CARBONATOS TOTALES EN EL SUELO Introduccin Loscarbonatosdecalcioseencuentranencantidadesapreciablesenelsuelo.Segn el plano mundial de suelos (FAO-UNESCO,1974),se ha estimado que el 6.5 % de los suelos de Mxico tienen un alto contenido de carbonatos, a los cuales se les clasifica comoRendzinas.Cuandosecultivaensuelosconestascaractersticaselproblema nutrimentalprincipalendiferentesespeciesvegetales,seasociaconbajadisponibilidad deFe,loquepromuevesemanifiestelaclorosisfrricaenelfollaje,disminuyael desarrollo del cultivo y merme de manera significativa la produccin,originando prdidas econmicas importantes.ElFeconstituyeel3.2%delpesodelalitsferayenlossuelosalcalinosy calcimrficos se encuentra formando xidos e hidrxidos de muy baja solubilidad, lo que disminuye la concentracin de Fe libre y aprovechable para las plantas a menos de 10-10 M, cantidad mucho menor (10-7 M) a la requerida para una buena nutricin de los cultivos (Loeppert et al., 1986).La baja disponibilidad de Fe, en suelos calcimrficos est controlada por la concentracin de CaCO3, principalmente, al mantener el pH en el intervalo alcalino (7.5 a 8.5). Ya que la disolucin del CaCO3, proveniente de la calcita y aragonita, forma OH-, segn la reaccin siguiente: CaCO3 (calcita) Ca2+ + CO32- + H2OHCO3- + OH- HCO3- +H2OH2CO3 + OH- H2CO3CO2 + H2O La mayor influencia del CaCO3 sobre el Fese presenta en condiciones de unambientedeoxidacinyaltopH,dondeelCaCO3proporcionaunasuperficie reactivaquedemandaprotones,enunareaccincidobasequeinvolucraalas especies de Fe disueltas en la solucin del suelo, segn la reaccin siguiente: 2Fe3+ +3CaCO3 + 3H2O 2Fe(OH)3 + 4Ca2++ 3CO2 4Fe2+ +4CaCO3 + 2H2O + O2 FeOOH + 4Ca2+ + 4CO2

En esta reaccin son importantes la concentracin de Fe, el pH alcalino en equilibrio con CaCO3, la superficie especfica del CaCO3, la composicin del aire y tipodeanionespresentes.EspecficamentelaconcentracindeO2influyeenla cantidaddeFe2+oxidadoaFe3+,gobernandolareaccingeneralenfavorde formas no disponibles de Fe (Loeppert and Hossner, 1984). Ladeterminacindecarbonatostotalesycarbonatosactivosseutilizancomo valoresreferenciaparadeterminarposiblesdeficienciasdeFeenloscultivos.Algunos cultivares tolerantespueden establecerse en suelos conuncontenidode carbonatostotalesentre10y20ydecalcioactivoentre2y7%(Ministeriode Agricultura, Pesca y Alimentacin, 2004). Laboratorio de Qumica de Suelos Materiales -Suelo calcreo-Dispositivo de Horton y Nwson Reactivos HCl 1:1 (concentrado, deludo con FeSO4 5%) CaCO3 anhdro (puro) Procedimiento 1.Realizar una curva de titulacin con CaCO3. Pesar 0.05, 0.1, 0.15, 0.2 y 0.3 g de CaCO3 puro en balanza analtica y colocar en matraz de 125 ml. 2.Llenarelmatrazde500mlconaguadestiladayconectarelsistema evitando fugas de aire (ver Figura 1). 3.Inyectar 10 ml de HC1 1:1 con FeSO4 5%. 4.Despusdequepareelflujodeagua,medirelvolumendeagua desplazado. 5.Repetir el procedimiento para 3 g de muestra del suelo. Laboratorio de Qumica de Suelos Clculos Graficarlacurvadetitulacin(mldeaguadesplazadoscontracantidadde carbonatodecalcio).Estimarlosgramosdecarbonatodecalcioequivalentes derivadosdelvolumendeaguadesplazadosporloscarbonatospresentesenel suelo (gramos de de CaCO3en la muestra). El porcentaje equivalente a CaCO3

en la muestra se calcula mediante la frmula: (gramos de CaCO3 en la muestra) % CaCO3= --------------------------------------------------------- x 100 gramos de muestra de suelo Referencias FAO-UNESCO. 1974. Soil map of the world, 1:5,000,000. Vol. Leged.U.N.E.S.C.O. Paris. HORTON, J. H. y NEEEWSON, D. W. 1953.A rapid gasevolution for calcium carbonateequivalent in liming materials.Soil. Soc. AM. Proc. 17: 414-415. MINISTERIODEAGRICULTURA,PESCAYALIMENTACIN.2004ORDEN APA/1657/2004,de31demayo,porlaqueseestablecelanormatcnica especficadelaidentificacindegarantanacionaldeproduccinintegradade ctricos. Boletn Oficial del Estado. Madrid, 31 de mayo de 2004. LOEPPERTR.H.,L.R.HOSSNERANDP.K.AMIN.1984.Formationofferric oxihydroxidesfromferrousperchloratesinstirredcalcareoussystems.Soil Sci.Soc. Am. J. 48:677-683. Laboratorio de Qumica de Suelos DETERMINACIN DE CARBONATOS ACTIVOS La velocidad de dilucin de los carbonatos de calcio es funcin de la dureza y del tamao.Aigualdurezalavelocidaddedisolucinaumentaconlafinura.Porlo quelacapacidad deunsuelo paragenerarclorosisauncultivodepender dela facilidad con que los carbonatos de calcio entren en solucin, de su dureza, de su tamaoycomposicin.Lacapacidaddeunsueloparagenerarclorosisaun cultivosemidesometiendolosCaCO3duranteuntiempolimitadoalaaccin disolvente de una solucin de oxalato de amonio 0.1 N. El oxalato de calcio que se forma precipita e impide que la solucin se sature y se interrumpa la disolucin de los CaCO3. Reactivos 1.Oxalato de amonio 0.1 N. Disuelva en un matraz de aforado de 1 L 14.3 g de oxalato de amonio y afore a un L. 2.Permanganatodepotasio0.1N.Enunacpsuladeporcelanacoloque3.2g del reactivo con 100 mL de agua destilada. Caliente hasta ebullicin y agite con unavarilla,procurandoquelasparedesdelacpsulanosesobrecalienten. Agregue otros 100 mL de agua fra y vaci la solucin a un matraz volumtrico de1Lenelquepreviamentesehancolocado50mLdeaguafra.Lavela cpsulaconaguahastaquestasalgaincolora.Enfroaforeelmatrazy valore la solucin de permanganato de potasio con una solucin de oxalato de solio0.1N.Conservelasolucindepermanganatoenunrecipientecolor mbar. Procedimiento Coloque 10 g de suelo seco y tamizado a malla 2 mm y colquelo en un frasco de 500 mL. Aada 250 mL de oxalato de amonio y agite mecnicamente durante dos horas.FiltreatravsdepapelW-40.Tomeunaalcuotade20mLdelfiltradoy valreloconpermanganatodepotasio0.1N.Porotroladovaloreotros20mL oxalatoamnico.Ladiferenciaentreambasvaloracionesmultiplicadopor0.0028 corresponderalacantidaddecalcioactivoqueexisteen0.8gdemuestra. Expreselosresultadosen%decarbonatodeCalcio(CaCO3)considerandoel factor de conversin de 1.785. NIJENSOHN, L.,PIZARRO O. C. 1960.Un procedimiento para la determinacin de calcio activo en suelos orgnicos yesosos. Boletn tcnico No.2 IPA. Espaa. Laboratorio de Qumica de Suelos ANLISIS DE PLANTAS NITRGENO, MTODO SEMIMICRO-KJELDAHL MODIFICADO PARA INCLUIR NITRATOS Reactivos Mezcla de cido sulfrico con cido saliclico. Se disuelven 50 g de cido saliclico (C7H6O3 ) en 2 L de H2SO4 concentrado. Mezcla de indicadores. Se disuelven 0.099 g de bromocresol y 0.066 g de rojo de metilo (C15H15N3O2) en 100 mL de alcohol etlico a 95% (preparar en el momento de usar). cido brico con indicador. Se colocan 20 g de H3BO3 en un vaso de precipitado de1L,seadicionan900mLdeagua,secalientayseagitahastalacompleta disolucin del cido. Se enfra la solucin y se agregan 20 mL de la mezcla de indicadores. El pH de la mezcla H3BO3 e indicador debe ser aproximadamente 5.0, si fuese ms cido se agregancuidadosamentegotasdeNaOH0.1Nhastaquelasolucinadquiera una coloracin prpura rojiza o se alcance el pH indicado, se completa a 1 L con aguaysemezcla(silacoloracindelasolucinesverdeantesdepH5.0,hay que preparar nuevamente la solucin). Mezcla de catalizadores. Se muele en un mortero y se mezcla 1 kg de K2SO4 100 g de CuSO4.5H2O y 10 g de selenio metlico. La mezcla se muele hasta alcanzar texturadepolvoimpalpableysehomogeneizaperfectamenteparaevitar segregacin de las partculas de los componentes. Hidrxidodesodio 10N.Secolocan 400g deNaOHenun matrazaforadode 1 litro. Se adicionan 400 mL de agua y se agita hasta que el hidrxido se disuelva. Sedejaquelasolucinseenfre.Secompletaalvolumenindicadoconagua de igualcalidadyseagitavigorosamente.ElhidrxidodesodiolibredeCO2debe protegersedelCO2atmosfrico,paralocualdebemantenerseperfectamente tapado. Agua libre de CO2. Se hierve el agua necesaria en un matraz erlenmeyer durante 15 minutos, se tapa con un vaso de precipitado y se enfra. Anaranjado de metilo.Se disuelven 0.01 g de C14H4N3NaO3S en 100 mL de agua. cidosulfrico0.05N.Sediluyen1.4mLdeH2SO4;(=1.84g/cm3y95%de pureza)enaguayseenrasaa1L.SeestandarizaconNa2CO3seco.Sepesan 0.2500 g de dicha sal y se disuelven en aproximadamente 50 mL de agua libre de CO2.Se agregan cinco o seis gotas de anaranjado de metilo a 1 % y se titula con Laboratorio de Qumica de Suelos el cido cuya concentracin se quiere conocer. Es conveniente hacer mnimo tres repeticiones. Se calcula la normalidad segn la frmula siguiente: ) () ( 3 2 3 24 2L cido de Volumen x e equivalent Pesog PesoNCO NaCO NaSO H= Peso equivalente Na2CO3= 53 Tiosulfato de sodio. Se muele el tiosulfato de sodio (Na2S2O3.5H2O), debe pasar el tamiz de 20 mallas. Material y equipo Tubos de 2.2 cm d.i y 20 cm de largo o matraz micro-kjeldahl Matraz erlenmeyer de 125 mL Probeta de 25 ml Bureta o titulador automtico Block digestor Aparato de destilacin por arrastre de vapor. Procedimiento Digestin. Se pesan 0.1 g de muestra y se colocan en un matraz microkjeldahl o en tubos. Se adicionan 4 mL de la mezcla de cidos sulfrico - saliclico, cuidando que sta se ponga en ntimo contacto con la muestra. El H2SO4 es un mal agente mojanteporloquelaimpregnacindelamuestrasedebefavoreceragitando suavementeelcontenidodeltubo.Simultneamentesecorrenblancosde reactivos. Se deja en reposo toda la noche o al menos 6 horas. Se aaden 0.5 g de Na2S2O3 a travs de un embudo de tallo largo para alcanzar el bulbo del matraz. Se calienta cuidadosamentelamezclahastaqueceselaformacindeespuma.Sedebe evitar que la espuma suba por el cuello del matraz. Esto se logra mezclando bien el Na2S2O3 con el cido y calentando suavemente al inicio de la digestin. Una vez terminada esta fase, para la cual bastan de 5 a 15 minutos, se adicionan 1.1 g de mezclacatalizadora.LaadicindelNa2S2O3lamezclapuedehacersemediante medidas volumtricas calibradas. Se digierenuevamente y se aumenta la temperatura.La placa de digestin debe alcanzar entre 360 y 390 C para permitir la ebullicin de la mezcla de cido con salesqueseadicionanalsuelo.Temperaturasinferioresosuperioresasta puedenprovocarrecuperacinincompletaoprdidasdeN,respectivamente. Despusdeunacortaebullicinlamezclaseaclara.Cuandosealcanzaeste punto,sebullelentamenteporunahoraadicionalparaelcasodemuestrasde rutina.Cuandosedeseaunarecuperacinentre99y100%,sedebebulle por5 horasdespusdeclarear.Latemperaturaenestafasedeberegularseparaque losvaporesdeH2SO4secondensenenelprimertercioinferiordelcuellodel Laboratorio de Qumica de Suelos matraz.Cuandoladigestinestcompletaseenfrayseagregan aproximadamente 3 mL de agua. Se agita vigorosamente para disolver el material soluble. Destilacin. Se transfiereelcontenido al bulbo delacmara dedestilacin del aparato.Selavaeltuboconpequeasporcionesdeagua,paratener aproximadamente 7 mL. Se coloca en el tubo de salida del aparato de digestin un matraz erlenmeyer de 125 mL con 10 mL de la solucin de H3BO3 cido brico con indicador. Se adicionan 10 mL de NaOH 10 N al bulbo de destilacin. Se conecta el flujo de vapor y se inicia la destilacin. Se destilan aproximadamente 75 mL y se lava el condensador. Elnitrgenoamoniacalsedeterminaportitulacinconcido0.05N.Sesugiere utilizarunamicroburetade10mLcongraduacionesde0.02mLountitulador automtico. El punto de equivalencia de la titulacin ocurre cuando la solucin vira de verde a rosado (titular los blancos y tomar como referencia este vire). Clculos LaconcentracindeNencmolckg-1,enlamuestrasedeterminasegnla siguiente frmula: 428 . 711014 ) ( ) (1xx muestra Pesox cido N V Vkg cmol Nblanco muestra = Donde: Vmuestra =volumen de H2SO4 para titular la muestra (mL) Vblanco =volumen de H2SO4 titular el blanco (mL) N = normalidad exacta del H2SO4 14 = peso mili-equivalente del N (mg). 1/10 = factor para convertir a porcentaje (100/1000) 71.428 factor para convertir de porcentaje a cmol kg-1 Peso de muestra en gramos Laboratorio de Qumica de Suelos NOTA 1 Con la finalidad de disminuir la variabilidad en los resultados de los anlisis, las muestras vegetales se tamizan en malla 40 (0.42 mm). Para evaluar la recuperacin de N, preparar una solucin patrn de 1000 ppm N-NH4.Pesar 3.821 g de NH4Cl,diluir a 1 L y guardar en frasco en el refrigerador.Destilar 1 mL de alcuota (1 mL de alcuota de la solucin patrn contiene 1 mg de nitrgeno). N ppm = (M-V) x 14x N cido = =mL x 14 mg x .05 N = mL x 14 mg X .05 eq/l =mL x 14 x .05 e/1000 mL = mg de N pesust ge =Pex e sust = g NOTA 2 Paraabonosorgnicosycompostas.Predigestarpor48horasycolocar perlas de vidrio para evitarproyecciones. Se recomienda utilizar reactivos marca Baker o Merck.

Referencias BREMMER,J.M.1965.Totalnitrogen.pp.1149-1178.In:C.A.Black(ed.), Methodsofsoilanalysis.Part2.Agronomy9.AmericanSocietyof Agronomy. Madison, Wisconsin. Laboratorio de Qumica de Suelos SOLUBILIZACIN DE FSFORO, CALCIO, MAGNESIO, POTASIO, AZUFRE, SODIO, HIERRO, COBRE, CINC, MANGANESO Y BORO POR DIGESTIN CON MEZCLA AC PERCLRICO/ AC NITRICO Reactivos cido perclrico, 70 a 72%.HCIO4. cido ntrico, 65%.HNO3. Mezcla digestora. Se utilizan 4 mL de HNO3 y 2 mL de HCIO4 por muestra (relacin 2:1).Esta mezcla puede realizarse con anticipacin ya que es estable. Material y equipo Tubos de 2.2 cm d.i y 20 cm de largo o matraz micro-kjeldahl Matraces volumtricos de 25 mL Bureta de 50 mL Block digestor Enanlisisdemicronutrimentos,dejarelmaterialtodalanocheenHCIa5%, enjuagar con agua de grifo, agua destilada y agua desionizada.1 Procedimiento Sepesaelmaterialvegetal,0.50gysecolocaenmatracesmicrokjeldahlde30 mLotubosdedigestin.Seadicionan6mLdemezcladigestora.Sedejaen predigestinpor12horascomomnimooenreposotodalanoche. Simultneamentesecorrenblancosdereactivos.Seadicionandosotresperlas de vidrio para mantener una ebullicin pareja. Se colocan los matraces, o los tubos, en la unidad digestora y se calienta a 150 Chastaquedesaparezcanloshumospardosdelosoxidasdenitrgeno.Este procesotomaentre30y45minutos.Duranteestaetapaserataelmatrazoel tubo para lavar las paredes de todo residuo orgnico. Una vez concluida la etapa anterior se eleva la temperatura del aparato digestor a 210 CparallevaraebullicinalamezclaazeotrpicadeHClO4(203 C).El ataquedelHCLO4alamatrizorgnicaresidualsenotainicialmenteporla aparicin de vapores pardos leves y luego por una reaccin viciosa con formacin deespuma(CUIDADO!:eloperadordebeconocerlasprecaucionescuandose trabaja con HClO4). Elfinaldelareaccinestmarcadoporlaaparicindevaporesblancosdensos caractersticos del HCLO4.Esta etapa dura aproximadamente una hora. Despus de la aparicin de vapores pesados, dejar las muestras por cinco minutos ms en Laboratorio de Qumica de Suelos elaparatodigestor.Setransfierecuantitativamenteeldigestadoaunmatraz aforado de 25 mL y se afora con agua desionizada. CUANTIFICACIN DE FSFORO Reactivos Reactivo vanadomolbdico.Este reactivo se prepara en el momento de desarrollar lacolorimetraparacuantificarP,seutilizanpartesigualesdelosreactivos siguientes: -cido ntrico 1:2.Se mezclan 333 mL de HNO3 concentrado con 667 mL de agua. -Vanadatodeamonioa0.25%.Sedisuelven2.5gdeNH4VO3en800mLde agua, se calienta ligeramente, se agita, se enfra y se afora a 1 L. - Molibdato de amonio a 5%.Se disuelven 50 g de (NH4)6Mo7O24.H2O en 400 mL de agua. Se calienta lentamente y se agita para disolver los cristales. Se enfra y se afora a 1 L. Estndardefsforode200ppm.Sepesan0.8787gdefosfatodihidrgenode potasio (KH2PO4,secado al horno a 105 C por 2 horas), se disuelven en agua y sediluyea1L.Estasolucindeberefrigerarseenfrascodeplsticoodevidrio blando (no pyrex) para evitar contaminacin con arsnico. Estndardefsforode50ppm.Sediluyen25mLdelasolucinpatrnde200 ppm de fsforo a 100 mL con agua. Material y equipo Pipetas volumtricas de 2, 3 y 5 mL Matraces aforados de 50 mL Pipetas volumtricas clase A de 2, 4, 8, 10, 15 y 25 mL Bureta o dosificador automtico Espectrofotmetro Procedimiento Se pipetea una alcuota que contenga menos de 0.3 mg de P, se toman 2 mL y se colocanenunmatrazaforadode50mL,seadicionaaguadestiladahastatener aproximadamente40mL.Seadicionan7.5mLdereactivovanadomolbdico,se afora con agua y se agita. Se esperan 20 minutos y se lee la absorcin de luz por el complejo fosfovanadomolbdico a 470 nm. Se prepara la curva de calibracin siguiente y se le trata como a las muestras. Laboratorio de Qumica de Suelos Solucin de P (50 ppm)a Reactivovanadomolbdico Conc. de P mLppm 07.50 27.52 47.54 87.58 107.510 157.515 a matraces aforados de 50 mL Clculos P (cmol kg-1 ) =32.289 x10000D xD xCC ppmvm

Donde: ppm CC = partes por milln en la curva de calibracin Dm = dilucin de masa (volumen de extractante/g de muestra)Dv = dilucin de volumen (aforo/alcuota) 32.289 factor para convertir de porcentaje a cmol kg-1 NOTA Lavar el material VEGETAL:1 Lavar con agua de llave para quitar tierra. 2LavarconHCl0.1Mvigorosamente(15seg)(~8mL HCl conc. por litro de agua) 3 Enjuagar agua destilada4 Enjuagar agua desionizada Se recomienda utilizar reactivos marca Baker o Merck. Laboratorio de Qumica de Suelos CUANTIFICACIN DE CALCIO, MAGNESIO, POTASIO YSODIO Reactivos Estndar de calcio de 1000 ppm.Se disuelven 2.4973 g de CaCO3 (secado a 285 C por 2 h) en 5 mL de HCI 6 N y se diluye con agua a 1 L. Se guarda en botella de polietileno y en refrigeracin. Estndar de magnesio de 1000 ppm.Se disuelve 1.0000 g de Mg metlico puro en HCI diluido y se afora con agua a 1 L. Se guarda en botella de polietileno y en refrigeracin. Estndar de potasio de 1000 ppm.Se disuelven 1.9067 g de KCI (secado a 110 Cpor2h)enagua,sediluyea1Lysemezcla.Seguardaenbotellade polietileno y en refrigeracin. Estndar de sodio de 1000 ppm.Se disuelven 2.5421 g de NaCI ( secado a 110 Cpor2h)enagua,sediluyea1Lysemezcla.Seguardaenbotellade polietileno y en refrigeracin. Estndares de Ca, Mg, K y Na de 100 ppm.Se diluyen, por separado, 50 mL de las soluciones de 1000 ppm de Fe, Cu, Zn y Mn y se aforan con agua destilada a 500 mL. Cloruro de lantano al 5 %.Se pesan 5.864 g de La2O3, se disuelven en 25 mL de HCI concentrado y se afora a 100 mL con agua destilada. Material y equipo Matraces volumtricos de 25 y 50 mL Pipetas volumtricas de 2, 3 y 5 mL Pipetas volumtricas clase A de 1, 2, 3, 4, 5 mL Flammetro Lmparas de ctodo hueco de Ca y Mg Espectrofotmetro de absorcin atmica provisto de quemador de oxido nitroso. Procedimiento Para el anlisis de macroelementos se deben efectuar diluciones adecuadas. Por ejemplo,paraCa,serealizaunadobledilucingeneralmente:setomauna alcuota de 2 mL con una pipeta volumtrica y se coloca en un matraz aforado de 50 mL. Se enrasa y se agita. De esta primer dilucin se toma una alcuota de 3 5 mLyseenrasaa25mL.Sepodranrealizarotrasdilucionesdependiendodela concentracin de los analitos. Laboratorio de Qumica de Suelos Leer Ca en absorcin atmica y con llama de N2O y C2H2. La curva de calibracin se debe realizar de acuerdo con las especificaciones del aparato. Comnmente la cuantificacindeCaserealizaenlasegundasolucin,porloquelacurvade calibracinserealizaconagua,conestassolucionesnohayefectosmatriciales. La preparacindela curvadecalibracinseindicaenlatablasiguiente(podran tenerse otras concentraciones, recordar que el intervalo de trabajo depende de la sensibilidad del instrumento): Solucin de Ca (100 ppm)a Aforo con agua Conc. de Ca mLppm 01000 11001 21002 31003 41004 51005 a en matraz aforado de 100 mL Esrecomendableagregarlealassolucionesclorurodelantanoparaleercalcio; tomar de la segunda solucin y de cada punto de la curva de calibracin 10 mL y adicionarle 2.5 mL de la solucin de cloruro de lantano al 5% con lo cual se tendr una concentracin final de lantano de 1% e igual concentracin de los puntos de la curva de calibracin.(Si es xido de lantano debe ser de 0.2-05%) Generalmente,elMgseleeenlaprimerasolucinylacurvadecalibracinse afora con agua ya que no hay efectos de matriz. Se lee en absorcin atmica con llama aire y C2H2,de acuerdo con las especificaciones del aparato. Solucin de Mg (100 ppm)a Aforo con agua Conc. de Mg mLPpm 01000 51001 11002 21003 31004 41005 a en matraz aforado de 100 mL El Na y el K se cuantifican en un fotmetro de llama, con el filtro correspondiente o a la longitud de onda indicada por el fabricante, o en absorcin atmica en modo deemisinalalongituddeondacorrespondiente.Estosdoselementosse cuantificangeneralmenteenlaprimeradilucin,sinembargodependiendodela concentracin del analito ser la dilucin que deber efectuarse. Laboratorio de Qumica de Suelos Solucin de K (100 ppm)a Aforo con aguaConc. de K mLPpm 01000 51005 1010010 2010020 3010030 4010040 a en matraz aforado de 100 mL Solucin de Na (100 ppm)a Aforo con aguaConc. de Na mLppm 01000 51005 1010010 2010020 3010030 4010040 a en matraz aforado de 100 mL Clculos Ca (cmol kg-1 ) =95 . 2410000D xD xCC ppmv mx Mg (cmol kg-1 ) =41.13510000D xD xCC ppmv mx K (cmol kg-1 ) =575 . 2510000D xD xCC ppmv mx Na (cmol kg-1 ) =478 . 4310000D xD xCC ppmv mx Donde: ppm CC = partes por milln en la curva de calibracin Dm = dilucin de masa (volumen de aforo/g de muestra) Dv = dilucin de volumen (aforo/alcuota) 25.575, 249.5, 41.135 y 43.478, factores para convertir de porcentaje a cmol kg-1. Laboratorio de Qumica de Suelos CUANTIFICACIN DE HIERRO, COBRE, CINC Y MANGANESO Reactivos Estndardehierrode1000ppm.Sedisuelve1.0000gdeFe(enformade alambreopolvopuro)en510mLdeHCIconcentrado.Seevaporacasia sequedadysediluyeconaguadesionizadaa1L.Seguardaenbotellade polietileno y en refrigeracin. Estndardecobrede1000ppm.Sedisuelve1.0000gdeCumetlicoenuna cantidadmnimadeHNO3concentradoy5mLdeHCI.Seevaporacasia sequedadysediluyea1Lconaguadesionizada.Seguardaenbotellade polietileno y en refrigeracin. Estndar de CINC de 1000 ppm.Se disuelve 1.0000 g de Zn metlico puro en 5 10mLdeHCIconcentrado.Seevaporacasiasequedadysediluyeconagua desionizada a 1 L. Se guarda en botella de polietileno y en refrigeracin. Estndar de manganeso de 1000 ppm.Se disuelven 1.5820 g de MnO2 en 5 mL deHCIconcentrado.Seevaporacasiasequedadysediluyeconagua desionizada a 1 L. Se guarda en botella de polietileno y en refrigeracin. Estndares de Fe, Cu, Zn y Mn de 100 ppm.Se diluyen, por separado, 10 mL de las soluciones de 1000 ppm de Fe, Cu, Zn yMn y se aforan a 100 mL con agua desionizada. Material y equipo Pipetas volumtricas de 2 y 3 mL Pipetas volumtricas clase A de 1, 2, 3, 4, 5 y 10 mL Lmparas de ctodo hueco de Fe, Cu, Zn y Mn Equipo de absorcin atmica.

Procedimiento Engeneral,losmicronutrimentosseleendirectamenteenelextractodigerido (matrazde10mL),estoes,sinrealizarningunadilucin,exceptoparaFe.Se tomaunaalcuotade2mLyseaforaa25mL.Silasmuestrasseleen directamente en absorcin atmica, las curvas deben mantener la matriz, es decir, lamismacantidadde HCLO4enel digestadoyaaforado.Generalmentequeda 1 mL de cido, si se afora a 10 mL el digestado, entonces esta solucin tiene 10% de cido y la misma cantidad deben tener los puntos de la curva. Por ejemplo, si se preparan 100 mL de cada punto de la curva, la solucin deber tener 10 mL de HCLO4 para mantener la matriz. Si se hacen diluciones en los extractos se lee en curvas aforadas solamente con agua. La preparacin de la curva de calibracin se Laboratorio de Qumica de Suelos indica en la tabla siguiente (podran tenerse otras concentraciones, recordar que el intervalo de trabajo depende de la sensibilidad del instrumento): Solucin de Fe, Cu, Zn o Mn (100 ppm) Aforo con aguaa Conc. de Fe, Cu, Zn o Mn mLppm 01000 11001 21002 31003 41004 51005 a desionizada,enmatrazaforadode100mL,y10mLdeHCLO4paramantenerla matriz. Clculos Fe, Cu, Zn, Mn (mg kg-1)=ppm CCxDmxDv Donde: ppm CC = partes por milln en la curva de calibracin Dm = dilucin de masa (volumen de aforo/g de muestra) Dv = dilucin de volumen (aforo/alcuota) Referencias ALLAN,J.E.1971.Thepreparationofagriculturalsamplesforanalysisbyatomic absorption spectroscopy. Varian Techtron, Walnut Creek, California. Laboratorio de Qumica de Suelos POTASIO EXTRACTABLE EN AGUA, MTODO DE EXTRACCIN RPIDA Reactivos Estndar de potasio de 1000 ppm.Se disuelve 1.9067 g de KCI en agua (secar a 110 C por 2 h), se diluye a 1 L y se mezcla. Se guarda en botella de polietileno. Estndar de potasio de 100 ppm.Se diluyen por separado 50 mL de la solucin de 1000 ppm de K y se afora a 500 mL. Material y equipo Tubos de polipropileno de 100 mL. Probeta de 10 mL o dosificador automtico Tapones de hule y cuadros de plstico Papel Whatman 40 o similar Agitador de accin recproca Fotomtro de llama o espectrofotmetro de absorcin atmica Procedimiento Secoloca0.1gdematerialvegetalenuntubodepolipropilenode100mL.Se adicionan50 mLdesolucindeagua,setapanlostubos(secubreeltapncon plsticoparaevitarcontaminacinporlostapones)yseagitanpor10minutosa 180 opm. Se filtra en papel Whatman 40 y se determina la concentracin de K en fotomtrodellamaoenespectrofotmetrodeabsorcinatmicaenmodode emisin.Sepreparaunacurvadecalibracindepotasiocomoseindicaa continuacin: Solucin de K (100 ppm)a Aforo con aguaK mLppm 01000 55 1010 2020 3030 4040 a Matraz aforado de 100 mL Se calibra el instrumento a 100 divisiones con el patrn ms concentrado y a cero conagua.Paracorregirparcialmentelavariacininstrumental,esconveniente volver a calibrar el instrumento a 100 antes de hacer las lecturas de cada una de lassolucionespatrn.Laseriedepatronesseleenhastaobtenerunalectura constante. Despus de esto se lee las muestras problema. Es conveniente releer lasmuestrasdosotresveces.Laexperienciaindica,quelaslecturasdeben Laboratorio de Qumica de Suelos realizarseentre10a15segundosdeiniciadalaaspiracin,paraevitaras desviaciones debido a incrustaciones. Clculos K (cmol kg-1) = 000 10Dx Dx CC ppmv m x25.575 Donde: ppm CC = partes por milln en la curva de calibracin Dm = dilucin de masa (volumen de aforo/g de muestra) Dv = dilucin de volumen (aforo/alcuota) 25.575 factor para convertir de porcentaje a cmol kg-1 Comentarios Elpresentemtodonodestruyelamatrizorgnica,haceextraccindeuna fraccin soluble del nutriente en el tejido con agua (AOAC, 1970) aunque tambin esposiblehacerlaconcidosdiluidos(JohnsonyUlrich,1958)osoluciones salinasdiluidas(Jackson,1964).Estosprocedimientossonaplicablessolamente enaquelloscasosenqueelelementonoformapartedeloscompuestos estructurables,sinomsbienseencuentraasociadoacidosorgnicosysales como es el caso del potasio en material vegetal. Algunosestudios(Etcheversetal.,1982)hanevaluadoaquellasvariablesde extraccindepotasioenaguaquepudieraninfluirenlaexactitudyprecisindel mtodo. Se ha observado que el tiempo de extraccin afecta significativamente los nivelesdepotasioextractableenagua.A2 y120minutosseha extradomenos potasio que a 10, 30 y 60 minutos. Las diferencias que llegan a observarse entre estosltimoscarecen,sinembrago,deimportanciadebidoalacual,es conveniente utilizar un tiempo de extraccin de 10 minutos. Respecto a la relacin suelo/extractante,aunquesehaobservadounaligeradiferenciaenelporcentaje deKextractablealvariarlarelacindemuestra/volumendelextractante,carece deimportanciaparalosanlisisderutina.Desdeelpuntodevistaprcticoes ventajosoutilizarunarelacinmuestra/extractantede0.1/50loquepermite determinarlasconcentracionesdepotasioenextractosfoliaressinhacer diluciones o con diluciones mnimas, evitndose de esta manera el error analtico que stas implican. Los resultados obtenidos al comparar la extraccin del potasio en agua vs. potasio total en vid y otro gran nmero de especies vegetales muestra unaaltacorrelacin(r=0.997),loquepermiteconcluirqueesposiblehacer estimacionesadecuadasdelosnivelesdepotasiototalentejidosvegetales, medianteextractosacuosossinsacrificiodeexactitudyprecisin.Algunas ventajasimportantesdeestemtodosonsubajousodereactivos,ahorran tiempo, es de fcil realizacin, por no usar cidos elimina peligro de explosiones, Laboratorio de Qumica de Suelos no provoca prdidas por cidos elimina peligro de explosiones, no provoca prdida por volatilizacin, no cambia la viscosidad de las soluciones, etc. Unadesventajadelmtodoeslafacilidadconquelaflorafungosanormalse estableceenlosextractos,porloquelaslecturasenelfotmetrodellamase deben realizar lo ms breve posible una vez efectuada la filtracin del extracto, a objeto de evitar los errores que pudieran ocurrir por esta causa. Referencias ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS, 1970. official Methods of Analysis. 11 Ed. Washington, D. C. pg. 47. JACKSON,M.L.1964.Anlisisqumicodesuelos.Trad.dela1ra.edicin norteamericana por Jose Beltom. Barcelona, Omega. 662 p. JOHNSON,C.M.andULRICH,A.1958.Analyticalmethodsforuseinplant analysis.California,AgriculturalExperimentalStation.BulletinNo.766.78 p. ETCHEVERSB.,J.D.,R.CARRASCOF.yR.MERINOH.1982.Anlisisde potasioenvid.Depto.deSuelosyFitotecnia,EscueladeAgronoma, Universidad de Concepcin, Chile. Laboratorio de Qumica de Suelos DETERMINACIN DE AZUFRE FOLIAR MTODO TURBIDIMTRICO El azufre se determina por turbidimetra con cloruro de bario (BaCl2) al 10% y glicerina, directamente del digestado. Reactivos Cloruro de bario al 10% (BaCl2) [6.2]. Se toman 100 g de cloruro de bario y se afora a 1 L con agua desionizada. Solucin de glicerina-cloruro de bario. Se toman 500 mL de BaCl2 al 10%, se agregan 250 mL de glicerina, se agita y se afora a un litro con agua desionizada. Patrn primario de S de 1000 ppm. Se pesan 4.1195 g de sulfato de amonio [3.13] (NH4)2SO4 y se afora a 1 L con agua desionizada. Patrones secundarios. A partir del patrn primario se preparan patrones de trabajo de 0, 40, 60, 80 y 120 ppm aforando la respectiva cantidad a 100 mL con agua desionizada. Material Espectrofotmetro Agitador magntico Pipetas Matraces volumtricos Tubos de ensayo Procedimiento Se toma 1 mL del filtrado de la digestin hmeda de la muestra vegetal y se le agregan 4mL de agua desionizada ms 2 mL de la solucin de glicerina-cloruro de bario, se agita y se lee en el colormetro a una longitud de onda de 800 nm. Para los patrones se procede de la misma manera que con las muestras. Laboratorio de Qumica de Suelos Curva tipo. Se prepara al momento una serie de patrones de 0 a 25 ppm del ion SO42- aintervalosde5ppm(0,5,10,15,20y25),paralocualsetransfieren alcuotas de 0,1, 2, 3, 4 y 5 mL de una solucin de 1000 ppm de SO42- y finalmente son llevadas a un volumen de 20 mL. Correr un blanco de reactivos y seguir con el procedimiento ya descrito para las muestras. Clculos ppm CCxDmxDvS (%)= 10000 Donde: Ppm CC = partes por milln en la curva de calibracin Dm = dilucin de masa (Vol. del extractante / g de muestra) Dv = dilucin de volumen (aforo / alcuota). Laboratorio de Qumica de Suelos DETERMINACIN DE BORO FOLIAR POR EL MTODO DE LA AZOMETINA-H Reactivos Solucin patrn primario de Boro 50 ppm. Se disuelven 0.1429 g de H3BO3 en agua destilada aforando a 500 mL mantenindolo en botella plstica. Patrones secundarios. Se preparan a partir del patrn de 50 ppm. Solucin de 50 ppm de Boro Aforo Concentracin de Boro mlppm 01000 0.41000.2 1.01000.5 2.01001.0 3.01001.5 4.01002.0 5.01002.5 Solucin de Azometina-H. Se disuelven 0.9 g de Azometina-H y 2 g de cido ascrbico en 100 mL de agua. Se conserva la solucin en refrigeracin y puede conservarse hasta una semana. Solucin reguladora. Se disuelven 140 g de acetato de amonio, 10 g de acetato de potasio, 4 g de Titriplex I al 99%, 10 g de Titriplex II y 350 mL al 10% v/v de cido actico y diluir con agua a 1 L. Esta solucin es estable. Reactivo desarrollo de color. Tomar 35 mL del reactivo de Azometina-H y 75mL de la solucin reguladora en un matraz de 250 mL y aforar con agua. (este reactivo se prepara en el momento de trabajo). Laboratorio de Qumica de Suelos Procedimiento Se pesan 0.5 g de la muestra seca y molida. Se hace digestin con mezcla cida HNO3 HClO4 despus de la digestin se afora a 25 mL con agua desionizada. Del filtrado se toman 0.5 mL, se agrega 5 mL del reactivo de desarrollo de color y sedejareposardurante1hatemperaturaambiente.Leerlasmuestrasenun espectrofotmetro420nm.Dadoqueelpunto0 delacurvadesarrollacolorpor los reactivos, el espectrofotmetro se calibrar a cero con agua. Clculos B (ppm) =ppm CCxDmx1/v Donde: ppm CC = partes por milln en la curva de calibracin al que previamente se le ha restado la lectura del blanco. Dm = dilucin de masa (Vol. del extractante / g de muestra) v =alcuota de la muestra en que se desarroll color (si se sigue la tcnica es de 0.5 mL). NOTA Para los clculos, al patrn se le resta el blanco de la digestin.A la lectura de los puntos de la curva se les restar la lectura del punto 0 (o blanco de reactivos). Al analito (de concentracin conocida) se la resta el blanco de reactivos. La azometina H preparada, slo dura 1 semana almacenada. Se recomienda utilizar reactivos marca Baker o Merck. OTRAS TCNICAS Laboratorio de Qumica de Suelos DETERMINACIN DE NITRATOS EN SOLUCIONES ACUOSAS POR EL MTODO DEL CIDO SALICILICO (COLORIMETRICO) Reactivos 1.Buffer de fosfato.(hoja anexa) Utilizar en casos especficos de anlisisde N-orgnico. 2.Reactivo cido saliclico-H2SO4-

5% p/v.Disolver 5 g de cido saliclico gradoreactivoen100mldeH2SO4concentrado.Estereactivodebe prepararse fresco antes de realizar las determinaciones. 3.Hidrxidodesodio2N.Disolver80gdeNaOHenunlibrodeagua destilada, bajo chorro de agua fra.Guardar en frasco mbar. Solucin patrn 500 ppm N-NO3 Disolverexactamente3,611gdeKNO3(puroysecadoalaestufaa 105)en1litrodeaguadestilada.Guardarenfrascoplsticobajo refrigeracin. Curva de calibracin Preparar las siguientes soluciones en matraces de 100 ml, aforando con agua destilada. Alcuota a partir de 500 ppm N-NO3 (mL) ppm N-NO3mg/0.2 mL 00.00.0 105010 2010020 3015030 4020040 5025050 Laboratorio de Qumica de Suelos Procedimiento 1.Extraccin de nitratos. El material vegetal, seco o liofilizado se muele y tamiza a travs de una malla40mesh.Lasmuestrasmolidassevuelvenasecarenhornoa 70 C,sepesan100mgdematerialysesuspendeen10mldeagua desionizada. Las suspensiones deben incubarse a 45 C por una hora.Homogenizarycentrifugara5,000rpmdurante15minutos.Elsobrenadante se guarda para anlisis. Entejidovegetalfresco,sehomogeniza1.0gdematerialen6mlde agua a solucin buffer, se filtra y los filtrados centrifugados a 30,000 rpm por 15 minutos.El sobrenadante se guarda para anlisis. 2.Desarrollo de color Alcuotas de 0.2 ml del extracto se pipetean en matraces erlenmeyer-50 ml y mezclados con 0.8 ml del reactivo cido saliclico H2SO4.Despus de 20 minutos a temperatura ambiente, se agregan lentamente 19 ml de NaOH 2N (con pipeta automtica) para elevar el pH a 12.Las muestras seenfranatemperaturaambienteysedeterminaabsorbanciaa410 nm. Paralacurvadecalibracinseutilizanalcuotasde0.2mldecada solucin y se continua con el procedimiento.Para material vegetal seco, se utiliza con 0.2 ml de agua.Para material vegetal fresco, debidoa la pigmentacindelosextractosseutilizaunblancocon0.2mldel extracto,0.8mldeH2SO4concentrado(sincidosaliclico)y19mlde NaOH 2N. Clculos La curva de calibracin(CC) se puede trazar en ppm de N-NO3 o mg. a)A partir de la C. C. en ppm ppm N-NO3 = ppm CC x gV donde: ppm CC = obtenidas de la curva de calibracinV=volumen extracto g = peso muestra (gramos) Laboratorio de Qumica de Suelos b)Apartir de la CC en g/0.2 ml g N-NO3/g = CCx 5 xgV Referencia CATALDO,D.A.;M.HAROON,L.E.SCHIANDERYV.L.YOUNGS1975.RAPIDCOLORIMETRICDETERMINACINOFNITRATEINPLANT TISSUEBYNITRATIONOFSALICYLICACID.Commun.SoilSci.Plant Anal 6(1)71-80.

Solucin Buffer-fosfato Lacitaoriginalproponedosmediosdiferentesdeextraccin(AyB)segnel materialvegetalutilizado.Enamboscasos,mezclarvolmenesigualesdecada reactivo: Solucin A Solucin B 0.01 M K3PO4 0.025 MK3PO4 0.01 M EDTA0.005 M EDTA 5 x 10-3 M cistena10-2 M cistena Ajustar pH 8.2 con HClAjustar pH 8.8 conHCl Tejido de rabanitoTejido de maz El tejido fue homogenizado en la solucin buffer en una relacin 4:1 6:1 (v/p) por dosminutosavelocidadmxima.Lasolucinfuefiltradaatravsdefiltro(4 capas) en tubos de centrfugay centrifugados a 15000 rpm por 15 minutos. El extracto fue utilizado para anlisis de enzimas, protenas y nitratos. Referencia BEEVERSL;SCHARADERL.E.;FESHER,D.;HAGEMAN,R.H.1965.Plant Physiol 40:691-695. Laboratorio de Qumica de Suelos DETERMINACIN DE NITRATOS EN EXTRACTOS DE SUELO POR NITRATACIN DEL CIDO SALICLICO Campo de aplicacin SeutilizaparaevaluarladisponibilidaddeN-NO3enelsueloantesdela siembradecualquiercultivoygenerarrecomendacionesdefertilizacin.LosN-NO3determinadosconesteprocedimientohan mostradounaaltarelacinconla respuesta del cultivo en estudios de correlacin de mtodos qumicos de nitrgeno aprovechable en el suelo (1). Principio Estemtodosebasaenlanitratacindelcidosaliclicoenpresenciade cido sulfrico.La sensitividad de este procedimiento permite una operacin lineal hasta50mgdeN-NO3porlitroperoesmsrecomendableenunintervalode operacin de 0.5 a 30 mg de N-NO3/L. Material y equipo - Bureta de 10 ml - Matraces volumtricos de 1 L de capacidad - Matraz volumtrico de 100 ml - Tubos de ensayo - Gradilla - Balanza analtica - Mezclador Vrtex - Fotocolormetro y celdas Reactivos 1.Acidosaliclicoal5%(p/v)encidosulfricoconcentrado.Estereactivoes preferibleprepararloantesdeserutilizado,delocontrarioseobservaun decremento en el rango de sensitividad y operacin lineal. La disolucin del cido saliclico en cido sulfrico durante la noche proporciona resultados satisfactorios. 2.Hidrxidodesodio4N.Pesar160gdeNaOH(lentejas)ydisolverenagua destilada.Enfriar y aforar a 1 litro. 3. Solucin patrn de 100 mg N-NO3/L.Disolver 0.7221 g de KNO3 (puro y seco a laestufaa105C)enaguadestiladayaforara1litro.Guardarenfrascode plstico y refrigerarlo. Laboratorio de Qumica de Suelos 4. Solucin de cloruro de calcio 0.1 N.Pesar 5.6 g de CaCl2 y disolver en agua destilada, aforar a 1 litro. Procedimiento Pesar 10 g de suelo y adicionar 50 ml de solucin de cloruro decalcio 0.1 N,agitara180opmduranteunahora;filtraratravsdepapelWhatman42. Pipetear 0.5 ml del extracto en tubo de ensayo.Adicionar 1 ml de cido saliclico al 5 % en cido sulfrico concentrado y mezclar inmediatamente los contenidos en unmezcladorVortex(precaucin:lareaccinliberacalorysecalientanlos tubos).Adicionar10mldeNaOH4Nymezclarnuevamente.Permitirel enfriamientodelostubosatemperaturaambiente.Mezclarydeterminarla absorbanciaa410nm(elcolorpuedeserestablehastapor5horas).Preparar blancos pipeteando solucin extractora y adicionando el resto de los reactivos. Se prepara una curva de calibracin transfiriendo alcuotas de 0, 1.25, 5.0, 7.5,10,12.5,15,20y25mldelasolucinpatrnde100mgdeNO-NO3/L,en matracesvolumtricosde50mlyaforarconaguadestilada.Lassoluciones preparadas tienen una concentracin final de 0, 2.5, 5.0, 10, 15, 20, 25, 30, 40 y 50 mg N-NO3/L. Proceder a la determinacin de nitratos como en las muestras. Observaciones: Lasmuestrasturbiasdebensercentrifugadasobiendebepermitirseel asentamiento antes del anlisis. Clculos N-NO3 en ppm= CC x Vi/p donde CC= ppm de N-NO3 en la solucin colorimtrica correspondiente a la absorbancia otransmitancialeda(seobtienedelacurvadecalibracin),aestalecturasele debe restar la del blanco. Vi=volumen de la solucin extractante utilizada (cloruro de calcio 0.1 N) p=peso de la muestra de suelo. Referencias ALVAREZS.M.E.1988.Seleccindemtodosdediagnsticodenitrgeno aprovechableenelsuelo.ColegiodePostgraduados,Chapingo,Mx.Tesisde Maestra. ROBARGE, W. P., A. EDWARDS AND B. JOHNSON. 1983. Water and waste water analysis for nitrate via nitration of salicylic acid. Commun. inSoil Sci. Plant Anal., 14:1207-1215.