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LIC .TM JESUS RIQUELME ARREDONDO
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Premio Nobel en Medicina : 2008
Harald Zur Hausen (1976):
Descubrimiento de los PVH causantes del cáncer cervical.
Cáncer Research (1976) : 573-575.
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Virus: Definición Partícula
Ácido nucleico
Capa de proteínas Cápsula
capsómeros
Parásito celular obligado
Pequeño
Infeccioso
Capaz de replicarse y dirigir la síntesis de proteínas utilizando la maquinaria del hospedero .
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Clasificación de los Virus
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TAXONOMIA
Según la Clasificación de Baltimore :
GRUPO I: Papovavirus
FAMILIA: Papillomaviridae
GENERO:
PV-alfa,. asociado a epidermodisplasia verruciformis
PV-beta, asociado.LESIONES DE MUCOSA GENITAL
PV-gamma, asociado a lesiones cutáneas benignas.
PV-delta, en fibropapilomas, etc.
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- Genoma ADN circular de doble cadena de
8000 pb.
- Codifica 8 proteínas y su genoma se divide
en 3 regiones: región LCR, región temprana,
región tardía.
- El genotipo, subtipo y variantes; se basa en
la secuencia de los genes L1, E6 y E7.
- Existen más de 100 Genotipos de PVH, 40
tipos transmitidos sexualmente (Alto Riesgo
y Bajo Riesgo).
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GENOMA VIRAL
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CARACTERIZACION DEL PVH La mayoría de los genomas de los HPV contienen
entre 8 y 10 marcos abiertos de lectura
El genoma del HPV tipo 16 contiene 6 genes de expresión temprana (denominados E1, E2, E3, E4,
E5 y E6 por early genes) y 2 de expresión tardía (denominados L1 y L2 por late genes).
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REGION TEMPRANA: EARLY
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REGION TARDIA : LATE
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MECANISMO CARCINOGENICO
Eventos:
ESCAPA DE LA RESPUESTA INMUNOLOGICA
INTEGRA DNA VIRAL AL DNA DEL HOSPEDERO
INMORTALIZA LA CELULA
INESTABILIDAD GENOMICA
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ESTRUCTURA DE PROTEINA E6
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Proteína E6: p53
Se une a la proteína p53 a través de la proteína E6AP y promueve su degradación por ubiquitinación.
Activa a la sub unidad hTERT de la Telomeras
Degradación de las proteínas PDZ a través de la proteína E6AP
Disminuye la actividad de la proteína BAK.
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E6 -degradación de p53 - inhibe la
apoptosis de la célula infectada, manteniéndola con vida hasta que ha generado una cantidad suficiente de progenie viral.[27]
La acción conjunta de E7 (inhibiendo pRb) y E6 (degradando p53) produce un efecto sinergístico en la activación del ciclo celular, dando como resultado la proliferación descontrolada de las células infectadas
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Interaccion de la E6
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ESTRUCTURA DE PROTEINA E7
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E7 se une a pRb E7 se une a pRb, inactivándolo, de manera que la
célula entra en la fase S del ciclo celular y se activa la maquinaria de replicación del ADN, necesaria para la amplificación del genoma viral.[27]
Los productos del gen E7 de los tipos de alto riesgo VPH 16 y 18 se unen a pRb con mayor afinidad que proteínas E7 de virus no-oncogénicos.
El producto del gen E6 de los tipos VPH 16 y 18 se caracteriza por su capacidad de mediar la destrucción de la proteína p53, a través de la vía proteolítica mediada por ubiquitina
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Proteína E7: pRB
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La proteína E7
La proteína diana de E7 es el producto
del gen supresor tumoral denominado pRb, y las proteínas asociadas p107 y p130.
La pRb es regulador del ciclo celular, que funciona uniéndose e inhibiendo la actividad del factor de transcripción E2F.
Entonces pRb libera E2F, éste activa la expresión de genes implicados en la progresión en el ciclo celular y en la síntesis de ADN.
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Proteína E5: PDGF-β Transforma células
epiteliales y fibroblastos (BPV-4)
Activa a la ciclina A
Promueve la autofosforilación del receptor del factor de crecimiento derivado de plaquetas
Activa al factor de crecimiento epidérmico.
Disminuye la apoptosis
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Infección
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PATOGENIA
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PATOGENIA
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Infección inicial por
el VPH
Regresión de la infección
LIE BG/NIC 1 57% regresión
Infección crónica
LIE AG/NIC 2/3
32-43% Cáncer del cuello del
útero
0 - 1 año 0 - 5 años 10 años o más
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SISTEMA BETHESDA 2001
Categorías
Lesión intraepitelial escamosa bajo grado
(HPV, CIN1/DISPLASIA LEVE)
Lesión intraepitelial escamosa alto grado
(CIN2,CIN3/DISPLASIA MODERADA, SEVERA O CIS)
Hallazgos sospechosos de invasión
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Lesión intraepitelial escamosa
Bajo Grado: CIN-I/HPV
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CORRELACION DE CAMBIOS CITOMORFOLOGICOS CON LAS ALTERACIONES MOLECULARES
.
Crecimiento nuclear e hipercromasia –Síntesis del ADN del huésped mediada por la activación de los genes virales E6/E7.
Aumento en la relación núcleo citoplasma –Síntesis anormal del ADN del huésped mediada por E6/E7.
Halos para nucleares –Forma anormal de citoqueratina regulada por la expresion del gen E4 del PVH.
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Lesión intraepitelial escamosa
Bajo Grado: CIN-I/HPV
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Lesión intraepitelial escamosa
Bajo Grado: CIN-I/HPV
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Lesión intraepitelial escamosa
Bajo Grado: CIN-I/HPV
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Métodos de detección de HPV
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Métodos de detección de HPV.(1) MORFOLOGÍA
LIMITACIONES:
1. Sensibilidad para H-SIL 60-80%.
2. Errores en el muestreo e interpretación.
3. Dificultad de obtener células glandulares atípicas.
4. Falsos positivos 5-50%.
5. Falsos negativos 30%
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Métodos de detección de HPV. (3) ÁCIDOS NUCLEICOS
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Estudio Molecular PVH
MUESTRAS
• Células cervicales (escobillados)
• Tejidos (biopsias).
PCR
• Amplificar L1 y posterior RFLP.
• Consensus primers : My09/My11.
• Enzima de restricción: RSA I
• Control Positivo.
ELECTROFORESIS EN GEL DE AGAROSA
• Electroforesis horizontal
• Ladder de 100 pb
• Gel de agarosa
• Sybersafe
Extracción ADN
Amplicòn
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Métodos de detección de HPV. (3) ÁCIDOS NUCLEICOS
2. Amplificación de señal:
Digene Hybrid Capture®(HC2)
“Captura de híbridos”
(inmunoensayo)
Especimen desnaturalizado
Hibridación con sonda de ARN
Captura y detección de híbridos
Luminiscencia
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- El sistema Cobas 4800 = cobas x 480 + cobas z 480.
- Es un test cualitativo para la detección de 14 tipos de PVH de AR
( , ).
- En una sola Rx identifica los tipos 16 y 18 y detecta el resto
de tipos de PVH AR .
- La detección e identificación se basa en la técnica de Real Time
PCR.
cobas x 480 instrument Extrac.
automatizada de Ac. Nucléicos
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- Multiplex PCR en Tiempo Real.
- Utiliza 4 canales y sondas Taqman.
- Control de contaminación mediante sistema Amperasa (N-Uracilglicosilasa).
Ch4 Ch3 Ch2 Ch1
glob 18 16 AR
HR
PVH 18
PVH
PVH 16
Panel Alto Riesgo
31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59,
66, 68
glob.
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EPIDEMIOLOGIA
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VACUNAS
Compuestas por proteínas L1-PVH en forma de partículas no infecciosas similares al virus producidas por tecnología ADN recombinante
GARDASIL (MSD): PVH-6,11,16,18
CERVARIX (GSK) : PVH-16,18
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