UNIVERSIDAD DISTRITAL FRANCISCO JOSÉ DE CALDAS FACULTAD DE MEDIO AMBIENTE Y RECURSOS NATURALES

Laboratorio de Bioquímica-Ingeniería Ambiental EXTRACCIÓN DE DNA

FUNDAMENTO El ADN es la mayor de las moléculas conocidas. Una hebra entera de ADN consta de millones de átomos. Al separarse de una célula, el ADN se rompe en múltiples fragmentos. En solución, esas hebras poseen una carga eléctrica levemente negativa, hecho que contribuye a crear una química fascinante. Por ejemplo, los iones salinos son atraídos hacia las cargas negativas del ADN, con el efecto de neutralizarlos, y ese fenómeno impide que los fragmentos separados de ADN se adhieran entre sí. Controlando las concentraciones de sales, los biólogos provocan que los fragmentos de ADN se dispersen o se aglomeren. Y en esto reside el secreto de la remoción del ADN celular. MATERIALES Y REACTIVOS IMPORTANTE. Cada grupo debe traer: Hígado de pollo, Arena, Gasa, Jabón Líquido • Mortero con Pistilo • 1 probeta de 100ml • 1 Erlenmeyer de 100ml • 1 Embudo • 1 Pipeta graduada de 1 ml • 1 Pipeta graduada de 10ml • 1 Beaker de 100ml • 1 Beaker de 250ml • 1 Agitador de vidrio • 1 Mechero • 1 Placa • 1 Trípode

• 5 Tubos de ensayo • 1 Pinza para tubo de ensayo • 1 Gradilla • Papel Filtro • Agua destilada • NaCI 2M • NaCI (sólido) • NaHCO3 • Solución de SDS • Alcohol Isopropílico al 96% • Reactivo de Difenilamina*

*Reactivo de Difenilamina: 1g de difenílamina en 100ml de ácido acético glacial y 2.5ml de ácido sulfúrico concentrado

DESARROLLO EXPERIMENTAL I. EXTRACCIÓN DE DNA • Triturar medio higadito de pollo en un mortero. Añadir arena para que al triturar se

puedan romper las membranas y queden los núcleos sueltos. • Añadir al triturado, 50ml de agua. Remover hasta hacer una especie de papilla o

puré. • Filtrar varias veces (2 o 3) para separar los restos de tejidos que hayan quedado por

romper. • Medir el volumen del filtrado con una probeta. • Añadir al filtrado un volumen igual de cloruro sódico 2M. Con esto conseguimos

producir el estallido de los núcleos para que queden libres las fibras de cromatina. • A continuación se añade 1ml de SDS o de jabón líquido. La acción de este detergente

es formar un complejo con las proteínas y separarlas del ADN. Así quedará el ADN libre de las proteínas que tiene asociadas.

• Añadir mediante una pipeta 50 centímetros cúbicos de alcohol isopropílico al 96%. Hay que hacerlo de forma que el alcohol resbale por las paredes del vaso y se formen dos capas. En la inferfase, precipita el ADN.

• Introducir una varilla de vidrio e ir removiendo en la misma dirección. Sobre la varilla se van adhiriendo unas fibras blancas, visibles a simple vista, que son el resultado de la agrupación de muchas fibras de ADN.

II. IDENTIFICACIÓN DE ÁCIDOS NUCLEICOS. REACCIÓN DE DIFENILAMINA Tome el ADN obtenido en el proceso anterior y resuspéndalo en 3 ml del buffer preparado con 120ml de agua; 1.5g de NaCl; 5g de NaHCO3 y 5ml de jabón líquido. Adicione a esta solución 5ml del reactivo de difenilamina (recién preparado). Caliente en un baño de agua hirviendo durante diez minutos y observe la coloración obtenida. BIBLIOGRAFÍA • Deshilando el Tejido de la Vida. Revista Investigación y Ciencia. Noviembre de 1998. • PLUMMER, David. Bioquímica Práctica. Bogotá: Editorial Me Graw Huí. 1981.