FACULTAD DE CIENCIAS BÁSICASDEPARTAMENTO DE QUÍMICAMAESTRÍA EN BIOTECNOLOGÍA

MICROBIOLOGÍA

Carolina Arango RivasEscilda Rodríguez Calonge

Dario Gonzalez

AISLAMIENTO DE LEVADURA TOLERANTE AL ALCOHOL Y HONGO

CELULOLÍTICO

Inhibición de la

multiplicación celular

Efecto letal generalizado

para las células

Etanol

Mathews y Van Holde, 1998;Stryer, 1993)

LA TOLERANCIA A ETANOL

PRINCIPALES ASPECTOS A EXPLORAR EN LAS

CEPAS ETANOLOGÉNICAS Y LA INVESTIGACIÓN DE

NUEVOS MECANISMOS PARA EL MEJORAMIENTO

DEL PROCESO DE PRODUCCIÓN

Tóxico microorganismos fermentadores

Concentraciones limitadas

Acumuladas en el proceso de

fermentación

Proporción de etanol producido por el

organismo etanologénico

Intima dependencia con el grado de

tolerancia de la cepa al alcohol

Levaduras

Grupo más importante de microorganismos

explotados para propósitos

industriales

Son capaces de utilizar una gran

cantidad de sustratos (glucosa,

fructosa, sacarosa)

Son mas resistentes al etanol y

presentan mayores rendimientos

Ricas en esteroles, por lo que

mantienen por mas tiempo su

actividad fermentativa

Menos probable la contaminación por

bacterias ácido lácticas

Kyyper, 2006

AISLAMIETO

Medio Sabouraud Fermento

de guayabaSiembra agotamiento

Elecció

n d

e colo

nia

Siembra en YPD + alcohol Dif. concentraciones

Ob

serv

ació

n y

res

ult

ado

s

MEDIO SABOURAUD

Se suspendieron 65 g de mediodeshidratado en un litro de agua destilada

Se calentó agitando frecuentemente y sedejó dejar hervir durante 1 minuto,evitando el sobrecalentamiento

Se esterilizó a 121°C durante 15 minutos

Se distribuyó en las cajas y se dejó enfriar atemperatura ambiente antes de lautilización

EL BAJO PH DEL MEDIO RESULTA FAVORABLE

PARA EL CRECIMIENTO DE LOS

HONGOS

+ antibiótico

1.

FERMENTO DE GUAYABA

•Fermentaciones alcohólicas

espontáneas no se deben a una única

cepa de levadura, sino que es el

resultado de la acción combinada de

diversas especies de estas.

•Se sabe que es mas efectivo el uso de

cultivos autóctonos de levaduras ya que

se encuentran adaptadas a las

condiciones climáticas de la zona y a la

materia prima a fermentar.2.

3.

SIEMBRA POR AGOAMIENTO

INCUBACIÓN A

35 °C POR 48

HORAS

Selección de

colonias de

mayor

crecimiento

4.

MEDIO YPD + ALCOHOL

Medio líquido YPD con sacarosa a diferentes concentraciones

de etanol (4 %, 6 %, 8 %) , 3 replicas por concentración

Se inocularon 100μl del inoculo (colonias previamente

seleccionadas) en 9ml de medio YPD.

Los cultivos se incubaron a 30°C y su monitoreo se realizó a

las 72 horas.

Determinación del nivel de

tolerancia a etanol

Glucosa 2%

Extracto de levadura 1%

Peptona 2%

Agar 2%

CRECIMIENTO

YDP + Alcohol diferentes concentraciones

4% 6% 8%

9ml 9ml 9ml

Inocuo de colonia seleccionada

en medio YDP

100 ul

RESULTADOS

100 % LEVADURAS

TOLERANTES AL

ALCOHOL

Burbujeo (CO2) 4 % 6% 8%

CELULOSA

(Hendricks, et al, 1995) (Alexander, 1980)

Constituyente carbonado de las plantas superiores y

probablemente el compuesto orgánico más abundante

en la naturaleza.

RECICLAJE DEL MATERIAL VEGETAL Descomposición de este

carbohidrato

Ciclo biológico del carbono

Los microorganismos del

suelo que transforman

material vegetal (40-60% de

residuos de plantas) por

catabolismo llegan a la

formación de CO2 y su

liberación a la atmósfera.

Cambios en el número

Modificaciones en el contenido de materia

orgánica del suelo.

Información acerca del estado del suelo y su

productividad

Gran atención a los organismos que participan en la descomposición de esta sustancia

explicaciónLos métodos generales de la genética de levaduras especifican el uso de extracto de levadura-

cerevisiae y otras levaduras.1Las levaduras crecen bien en un mínimomedio que contiene sólo dextrosa y sales. La adición deproteínas y de levadura hidrolizados de extracto de células permite un crecimiento más rápidode manera que durante el crecimiento exponencial o log-fase, las célulasdividir cada 90 minutos.

1

Trichoderma reesei

Phanerochaete chrysosporium,

Fusarium solani,

Penicillum funiculosum,

Trichoderma koningii,

Sporotrix sp.,

Alternaria sp.,

Geotrichum sp.,

Rhizoctonia sp.,

Trametes sp.,

Paecilomyces sp. ,

Mucor sp.,

Cladosporium sp.,

Bulgaria sp.,

Chaetomium sp.,

Helotium sp.,

Aspergillus sp..

HONGOS CELULOLÍTICOS

(Aubert, 1988)

Medio de cultivoComposición

g/dm3

Agar CMC al 1%

Carboximetilcelulosa 10Extracto de levadura 2,5Peptona universal 2,5Sulfato de amonio 0,5Cloruro de calcio 0,5Fosfato mono básico de potasio 0,1Fosfato di básico de potasio 0,1Agar pithagel 2,5

MEDIO CMC

AISLAMIENTOAISLAMIENTO PRIMARIO

INCUBACIÓN

A 35 °C POR

3 DÍAS

Muestra de suelo 10 gr Solución salina al 0.89

Ino

culació

n en

Med

io

CM

C

Selección de hongos

AISLAMIENTO SECUNDARIO

AISLAMIENTO

(Teather y Wood, 1982).

ROJO CONGO AL

1% (p/v) 15 min

retiró esceso

+ Na Cl 0,5 N

Inoculación en Medio

CMC

Revelación de H.

celulolítcos

INCUBACIÓN

A 35 °C POR

3 DÍAS

OBSERVACIÓN

DE HALOS

RESULTADOS

MICROORGANISMOS DEGRADADORES

Se pudo evidenciar la hidrólisis de polisacáridos por parte de los hogos

celulolíticos debido a que el colorante forma complejos con las moléculas

aún no hidrolizadas, facilitando así la diferenciación entre microorganismos

celulolíticos y no celulolíticos por la formación de zonas de aclaramiento

alrededor de las colonias

(Hendricks, et al., 1995)