FACULTAD DE CIENCIAS BÁSICASDEPARTAMENTO DE QUÍMICAMAESTRÍA EN BIOTECNOLOGÍA
MICROBIOLOGÍA
Carolina Arango RivasEscilda Rodríguez Calonge
Dario Gonzalez
AISLAMIENTO DE LEVADURA TOLERANTE AL ALCOHOL Y HONGO
CELULOLÍTICO
Inhibición de la
multiplicación celular
Efecto letal generalizado
para las células
Etanol
Mathews y Van Holde, 1998;Stryer, 1993)
LA TOLERANCIA A ETANOL
PRINCIPALES ASPECTOS A EXPLORAR EN LAS
CEPAS ETANOLOGÉNICAS Y LA INVESTIGACIÓN DE
NUEVOS MECANISMOS PARA EL MEJORAMIENTO
DEL PROCESO DE PRODUCCIÓN
Tóxico microorganismos fermentadores
Concentraciones limitadas
Acumuladas en el proceso de
fermentación
Proporción de etanol producido por el
organismo etanologénico
Intima dependencia con el grado de
tolerancia de la cepa al alcohol
Levaduras
Grupo más importante de microorganismos
explotados para propósitos
industriales
Son capaces de utilizar una gran
cantidad de sustratos (glucosa,
fructosa, sacarosa)
Son mas resistentes al etanol y
presentan mayores rendimientos
Ricas en esteroles, por lo que
mantienen por mas tiempo su
actividad fermentativa
Menos probable la contaminación por
bacterias ácido lácticas
Kyyper, 2006
AISLAMIETO
Medio Sabouraud Fermento
de guayabaSiembra agotamiento
Elecció
n d
e colo
nia
Siembra en YPD + alcohol Dif. concentraciones
Ob
serv
ació
n y
res
ult
ado
s
MEDIO SABOURAUD
Se suspendieron 65 g de mediodeshidratado en un litro de agua destilada
Se calentó agitando frecuentemente y sedejó dejar hervir durante 1 minuto,evitando el sobrecalentamiento
Se esterilizó a 121°C durante 15 minutos
Se distribuyó en las cajas y se dejó enfriar atemperatura ambiente antes de lautilización
EL BAJO PH DEL MEDIO RESULTA FAVORABLE
PARA EL CRECIMIENTO DE LOS
HONGOS
+ antibiótico
1.
FERMENTO DE GUAYABA
•Fermentaciones alcohólicas
espontáneas no se deben a una única
cepa de levadura, sino que es el
resultado de la acción combinada de
diversas especies de estas.
•Se sabe que es mas efectivo el uso de
cultivos autóctonos de levaduras ya que
se encuentran adaptadas a las
condiciones climáticas de la zona y a la
materia prima a fermentar.2.
3.
SIEMBRA POR AGOAMIENTO
INCUBACIÓN A
35 °C POR 48
HORAS
Selección de
colonias de
mayor
crecimiento
4.
MEDIO YPD + ALCOHOL
Medio líquido YPD con sacarosa a diferentes concentraciones
de etanol (4 %, 6 %, 8 %) , 3 replicas por concentración
Se inocularon 100μl del inoculo (colonias previamente
seleccionadas) en 9ml de medio YPD.
Los cultivos se incubaron a 30°C y su monitoreo se realizó a
las 72 horas.
Determinación del nivel de
tolerancia a etanol
Glucosa 2%
Extracto de levadura 1%
Peptona 2%
Agar 2%
CRECIMIENTO
YDP + Alcohol diferentes concentraciones
4% 6% 8%
9ml 9ml 9ml
Inocuo de colonia seleccionada
en medio YDP
100 ul
RESULTADOS
100 % LEVADURAS
TOLERANTES AL
ALCOHOL
Burbujeo (CO2) 4 % 6% 8%
CELULOSA
(Hendricks, et al, 1995) (Alexander, 1980)
Constituyente carbonado de las plantas superiores y
probablemente el compuesto orgánico más abundante
en la naturaleza.
RECICLAJE DEL MATERIAL VEGETAL Descomposición de este
carbohidrato
Ciclo biológico del carbono
Los microorganismos del
suelo que transforman
material vegetal (40-60% de
residuos de plantas) por
catabolismo llegan a la
formación de CO2 y su
liberación a la atmósfera.
Cambios en el número
Modificaciones en el contenido de materia
orgánica del suelo.
Información acerca del estado del suelo y su
productividad
Gran atención a los organismos que participan en la descomposición de esta sustancia
explicaciónLos métodos generales de la genética de levaduras especifican el uso de extracto de levadura-
cerevisiae y otras levaduras.1Las levaduras crecen bien en un mínimomedio que contiene sólo dextrosa y sales. La adición deproteínas y de levadura hidrolizados de extracto de células permite un crecimiento más rápidode manera que durante el crecimiento exponencial o log-fase, las célulasdividir cada 90 minutos.
1
Trichoderma reesei
Phanerochaete chrysosporium,
Fusarium solani,
Penicillum funiculosum,
Trichoderma koningii,
Sporotrix sp.,
Alternaria sp.,
Geotrichum sp.,
Rhizoctonia sp.,
Trametes sp.,
Paecilomyces sp. ,
Mucor sp.,
Cladosporium sp.,
Bulgaria sp.,
Chaetomium sp.,
Helotium sp.,
Aspergillus sp..
HONGOS CELULOLÍTICOS
(Aubert, 1988)
Medio de cultivoComposición
g/dm3
Agar CMC al 1%
Carboximetilcelulosa 10Extracto de levadura 2,5Peptona universal 2,5Sulfato de amonio 0,5Cloruro de calcio 0,5Fosfato mono básico de potasio 0,1Fosfato di básico de potasio 0,1Agar pithagel 2,5
MEDIO CMC
AISLAMIENTOAISLAMIENTO PRIMARIO
INCUBACIÓN
A 35 °C POR
3 DÍAS
Muestra de suelo 10 gr Solución salina al 0.89
Ino
culació
n en
Med
io
CM
C
Selección de hongos
AISLAMIENTO SECUNDARIO
AISLAMIENTO
(Teather y Wood, 1982).
ROJO CONGO AL
1% (p/v) 15 min
retiró esceso
+ Na Cl 0,5 N
Inoculación en Medio
CMC
Revelación de H.
celulolítcos
INCUBACIÓN
A 35 °C POR
3 DÍAS
OBSERVACIÓN
DE HALOS
RESULTADOS
MICROORGANISMOS DEGRADADORES
Se pudo evidenciar la hidrólisis de polisacáridos por parte de los hogos
celulolíticos debido a que el colorante forma complejos con las moléculas
aún no hidrolizadas, facilitando así la diferenciación entre microorganismos
celulolíticos y no celulolíticos por la formación de zonas de aclaramiento
alrededor de las colonias
(Hendricks, et al., 1995)