“LA UNICA HERRAMIENTA QUEESTANDARIZA LOS BANCOS

DE SANGRE : CALIDAD”

ALDREDO MARTINEZLABORATORIO DE ANÁLISIS CLÍNICOS

CEMIC

“ La única fuente de obtención de sangre es el serhumano, por lo cual la misma debe emplearse encondiciones de equidad, raciocinio e igualdad, de estemodo la disponibilidad de la misma y sus componentesse transforman en una problemática de orden público einterés nacional dada su calidad de irreemplazable ynecesaria”.

Marcos Andrés Bujas; “Revista Argentina deTransfusión”, prologo de la editorial

“Guias Nacionales para el uso apropiado desangre y sus hemocomponentes”

Volumen XXXIII/ Nº 3,4/ 2007, Pag. 193

UN HIJO LE ESCRIBE A SU MADRE:

“MAMÁ AYUDAME A SABER QUE PASA CON

ESTE AMIGO QUE NO ALCANZO A ENTENDERLO,

PORQUE SE DIVORCIÓ DE SU MUJER SE

ENAMORÓ DE LA HERMANA DE SU CUÑADA

QUE ES MADRE DE SUS SOBRINOS, NIETOS

DE SU EX SUEGRO”

LA MADRE LE CONTESTA A SU HIJO:

“NO SE SI PUEDO AYUDARTE HIJO MIO, PORQUE

TAMBIEN YO TENGO ALGUNAS INCOGNITAS, YO SE

QUE ERES MI HIJO, PERO YO ESTUVE ENAMORADA

DE TU PADRE, QUE FUE MI CUÑADO, AUNQUE NO

ERA EL TIO DE TUS PRIMOS PERO SI EL HIJO DE

TU ABUELO Y EL HERMANO DE MI CUÑADA”

NO ENTENDER!!

RESULTADOS

QUE DEBEMOS HACER?

EN EL BANCO DE SANGRE EXISTENMÉTODOS:

-CUANTITATIVOS

- CUALITATIVOS

METODOS CUALITATIVOS

SI - NORESPUESTA BINARIA:

PRESENCIA - AUSENCIA

POR ARRIBA DE UNA DETERMINADO NIVEL(CONCENTRACIÓN)a

Métodos Cualitativos : Definición

EXISTEN GUÍAS CLARAMENTE DEFINIDAS PARALA VALIDACIÓN DE MÉTODOS CUANTITATIVOS.

NO EXISTEN LINEAMIENTOS CLAROS PARA LOSMÉTODOS CUALITATIVOS .

LOS PARÁMETROS DE DESEMPEÑO QUECARACTERIZAN A LOS MÉTODOS CUALITATIVOS YCUANTITATIVOS SON DISTINTOS.

VALIDACION VERIFICACION

VALIDACION ES LA CONFIRMACIÓN MEDIANTE EL EXAMENY LA PROVISIÓN DE UNA EVIDENCIA OBJETIVA DE QUE SE

HAN SATISFECHO UNOS REQUISITOS PARTICULARESPARA UN USO PRETENDIDO Y ESPECIFICO

DEFINICION DE VALIDACION SEGUN LA NORMA ISO 8402

Validación. Definición

“Verificar las especificaciones provistas por elfabricante y asumimos que el ensayo puede

ser incorporado al laboratorio”

Verificación. Definición

LAS PREGUNTAS A CONSIDERAR SON:

-CUMPLE ESE ENSAYO CON NUESTROS REQUERIMIENTOSDE CALIDAD?

-DE ACUERDO A LOS PARÁMETROS DE DESEMPEÑOVOLCADOS POR EL FABRICANTE EN SUS INSERTOS (QUESE TRANSFORMARAN EN NUESTRAS ESPECIFICACIONESA VERIFICAR),¿PODEMOS DECIR QUE EN FORMA TEÓRICAEL ENSAYO CUMPLE CON NUESTROS REQUERIMIENTOSDE CALIDAD

- ¿CÓMO PODEMOS ASEGURAR ESTO?

FABRICANTE VALIDACION

PARAMETROS DEDESEMPEÑO

BIAS, CV, RANGOREPORTABLE

VERIFICACION

SE INCORPORA ALBANCO DE SANGRE

“Los métodos cualitativos o semi-cualitativosse suelen emplear como métodos descreening”Separan o discriminan muestras de un grupo más grande.-Uno o más analitos por encima o por debajo de un valorpreestablecido.

- Este valor preestablecido puede haber sido establecido dedistintas formas:

1) Organismo oficial2) Control de Calidad Interno3) Requerimientos del Cliente VALOR DE CORTE

CUT OFF

Como pueden Verificarse los parámetrosde un ENSAYO

ESTÁNDAR INTERNACIONAL

PANELES DE SEROCONVERSIÓN

MUESTRAS CLINICAS

REQUERIMIENTOS MINIMOS PARALA VALIDACION Y/O VERIFICACION

DE UNA PRUEBA

Parámetros de Desempeño:

-Veracidad:

“Se define como el grado de acuerdo entreuna cantidad medida o calculada y a su valor

estimado (mejor estimación del valorverdadero), mediante análisis de materialesde referencia o comparación de resultados

con los obtenidos por un método deReferencia.”

PrecisiónLA PRECISIÓN ES CUAN CERCA LOS VALORES

MEDIDOS ESTÁN UNOS DE OTROS.

Precisión en condiciones de repetibilidad (Sr, SDr)- El mismo procedimiento de medida- El mismo laboratorio- El mismo operador- El mismo equipo- Repeticiones en un intervalo corto de tiempo-“Es lo que comúnmente denominamos precisiónintra corrida o intra serie”

VALOR DE CORTE : “CUT Off”

“ES EL UMBRAL ESTABLECIDO POR ELFABRICANTE POR ENCIMA DEL CUAL EL TESTES POSITIVO Y POR DEBAJO DEL CUAL EL TEST

ES NEGATIVO “

CUT OFF : 50%(+)- 50% (-)

C50

RESPUESTANEGATIVA

RESPUESTAPOSITIVA

C= 0,02 CONCENTRACION

C= 0,02 CONCENTRACION

ZONA DEVERDADEROS

NEGATIVOS

ZONA DEVERDADEROS

POSITIVOS

ZONA DE FALSOSPOSITIVOS

ZONA DE FALSOSNEGATIVOS

VALOR DE CORTE “CUT OFF”

IDEAL

REAL

CURVA DE IMPRESICION

CONCENTRACIONES DEL ANALITO CERCANOAL CUT OFF

INTERVALO 95 %

INTERVALO C5-C95

INTERVALO 95% (C5-C95)

C5 CUT OFF- (C5-C95) C95

5%(+)95%(-)

50%(+)50%(-)

95%(+)5%(-)

1- Preparar tres tipos de muestras una con laConcentración del cut off C50 y las otras dos conun rango de concentraciones 20% por arriba delcut off y 20% por debajo de manera de poder hacer40 replicados sobre la misma muestra

2-Las muestras deben testearse 40 veces o más porduplicado y determinar el porcentaje de resultadospositivos y negativos

VERIFICACION DE PARAMETROSDE ENSAYOS

CON MUESTRAS CLINICAS

ES EL C50 PREPARADO EL CORRECTO ?

REPLICADOS C50 REPLICADOS (+) % (+)

N=40 13 32.5

27 67.5

C50INCONSISTENTE

REPLICADOSC50 n=40

18 A 22 (+) 45 % A 55%

C50CONSISTENTE

EL RANGO DE CONCENTRACION +20% -20%CONTIENE EL INTERVALO C5-C95 ?

1- SI 35/40 (87.5%) RESULTADOS (+) ESTAN DENTRO DELRANGO +20% Y 35/40 (87.5%) DE RESULTADOS NEGATIVOSESTAN DENTRO DEL RANGO -20%. EL RANGO +20% -20%ESTA DENTRO DEL INTERVALO C5-C95

2- SI 36/40 (90%) RESULTADOS (+) ESTAN DENTRO DELRANGO +20% Y 36/40 (90%) DE RESULTADOS NEGATIVOSESTAN DENTRO DEL RANGO -20% . EL RANGO +20% -20%CONTIENE EL INTERVALO C5-C95

3- SI 36/40 (90%) RESULTADOS (+) ESTAN DENTRO DELRANGO +20% Y 35/40 (87.5%) DE RESULTADOS NEGATIVOSESTAN DENTRO DEL RANGO -20% . EL RANGO +20% -20%ESTA PARCIALMENTE DENTRO DEL INTERVALO C5-C95

4- SI 35/40 (87.5%) RESULTADOS (+) ESTAN DENTRO DELRANGO +20% Y 36/40 (90%) DE RESULTADOS NEGATIVOSESTAN DENTRO DEL RANGO -20% . EL RANGO +20% -20%ESTA PARCIALMENTE DENTRO DEL INTERVALO C5-C95

Falso Positivo (FP)“Muestras (+) por el “test de screening” y (-) porel método de referencia”

Falso Negativo (FN)“Muestras (-) por el “test de screening” y (+) porel método de referencia”

Tasa de Falsos Positivos“Probabilidad de que una muestra con valorverdadero negativo de un valor positivo por eltest de screening”

FP

FP + TNTASA DE FP =

FP: Falso PositivoFN: Falso NegativoTP: Positivo VerdaderoTN: Negativo Verdadero

Tasa de Falsos Negativos

“Probabilidad de que una muestra con valor verdaderopositivo de un valor negativo por el test de screening”

FN

FN + TPTASA DE FALSON NEGATIVOS =

Método X Diagnóstico ClínicoPositivo Negativo Total

Positivo A B A+BNegativo C D C+D

Total A+C B+D N

S= 100% (A/A+C)

E=100% (D/B+D)

PVP= 100%{A/(A+B)}

PVN= 100%{D/(C+D)}

EE= 100%{(A+D)/N}

TABLA DE CONTINGENCIA

CONTROL CALIDAD ENHERRAMIENTASMOLECULARES

FLUJO DE TRABAJO EN EL USO DEHERRAMIENTAS MOLECULARES

Preanalítico Analítico Post

analítico

Toma de muestraExtracción ADN/ ARNAlmacenamiento

Toma de muestraExtracción ADN/ ARNAlmacenamiento

Preparación reacción PCRAmplificaciónDetección

Preparación reacción PCRAmplificaciónDetección

Informe del resultadoInterpretaciónInforme del resultadoInterpretación

DESAFÍOS DEL CONTROLCALIDAD EN MÉTODOS

MOLECULARES

• Nuevas tecnologías y de rápida evolución• Altas expectativas de precisión en pruebas

génicas• Falta de materiales de control de calidad y

de calibradores estandarizados• Posible contaminación de muestras,

equipos y aerosoles• Presencia de inhibidores de amplificación• etc.

Basic QC Practice ,3er edicion. Westgard

INCORPORACIÓN DE NUEVO ENSAYO MOLECULAR¿POR DONDE EMPIEZO?

• Revisar bibliografía disponible• Establecer la población a la que se le

realizara la prueba• Seleccionar metodología apropiada para la

enfermedad o condición a evaluar• Establecer las especificaciones analíticas y

determinar el procedimiento de control decalidad

• Implicancias del ensayo y limitaciones

Good Laboratory Practices for Molecular Genetic Testing for Heritable Diseases and ConditionsCDC. MMWR June 12, 2009

INCORPORACIÓN NUEVOENSAYO MOLECULAR

• Validación/ Verificación analítica

• Validación clínica

Integridad de lamuestra (DNA, RNA)Integridad de lamuestra (DNA, RNA)

Preparación de lamuestra, amplificación,detección.Calibradores y controles

Preparación de lamuestra, amplificación,detección.Calibradores y controles

Documentación,interpretación e informeDocumentación,interpretación e informe

CONTROL DE CALIDAD :DISEÑADO PARACONTROLAR …

Integridad de lamuestra (DNA, RNA)Integridad de lamuestra (DNA, RNA)

Preparación de lamuestra, amplificación,detección.Calibradores y controles

Preparación de lamuestra, amplificación,detección.Calibradores y controles

Documentación,interpretación e informeDocumentación,interpretación e informe

ETAPA PRE ANALÍTICA

• PLANILLAS: INFORMACIÓN PACIENTE OCONSENTIMIENTO PARA TEST GENÉTICOS

• TOMA DE MUESTRA: TUBOS, MEDIOS DETRANSPORTE, HISOPO . ALMACENAMIENTOHASTA EL PROCESADO (SEPARACIÓN DEPLASMA)

• TRANSPORTE Y ALMACENAMIENTO DE LAMUESTRA: TEMPERATURA Y CONDICIONES

• PREPARACIÓN DE LA MUESTRA: TEMPERATURAY VELOCIDAD DE CENTRIFUGADO

SOLICITUD DEL TEST- TIPO Y TOMA DE MUESTRA-TRANSPORTE

Good Laboratory Practices for Molecular Genetic Testing for Heritable Diseases and ConditionsCDC. MMWR June 12, 2009

ETAPA ANALÍTICA

• CONTROL AMPLIFICACIÓN: CONTROL POSITIVO,NEGATIVO Y CUANTIFICADOS (DOSCONCENTRACIONES) PARA TEST CUANTITATIVOS

• CONTROL DE EXTRACCIÓN ÁCIDOS NUCLEICOS• CONTROL DE INHIBICIÓN: CONTROL INTERNO• CONTROL DE CONTAMINACIÓN O DE REACTIVOS• CONTROL DE INSTRUMENTAL

PROCESAMIENTO DE MUESTRAS- EXTRACCIÓN DE ÁCIDOSNUCLEICOS, PREPARACIÓN Y EVALUACIÓN;- REACCIÓN ENZIMÁTICAO AMPLIFICACIÓN - DETECCIÓN DE ANALITOS - REGISTRO DERESULTADOS

Eileen Burd. Clin Microbiol Rev.23 (3)550-576 .2010

FALSOS NEGATIVOS/POSITIVOS

FALSOS NEGATIVO• TOMA DE MUESTRA Y/O CONSERVACIÓN INADECUADA• FALLA EN LA EXTRACCIÓN / AMPLIFICACIÓN : CONTROL

INTERNO• PROBLEMAS TÉCNICOS: REACTIVOS O INSTRUMENTOS

Good Laboratory Practices for Molecular Genetic Testing for Heritable Diseases and ConditionsCDC. MMWR June 12, 2009

FALSOS POSITIVOCONTAMINACIÓN: CONTROL BLANCO DE REACTIVOS

FLUJO UNIDIRECCIONAL DE MUESTRAS, REACTIVOSY PERSONAL

ETAPA ANALÍTICA

Objetivo: minimizar la contaminación de reactivos y de las muestras

• FLUJO UNIDIRECCIONAL DE MUESTRAS,REACTIVOS Y PERSONAL

ETAPA ANALÍTICA

Etapa analítica

AMPLICONES

ETAPA POST ANALÍTICA

• INTERPRETACIÓN DEL RESULTADO• INFORME DE RESULTADOS• TIEMPO DE ENTREGA DEL

RESULTADO• REGISTRO DE RESULTADOS

CRÍTICOS• NUEVAS MUTACIONES DETECTADAS

CONTROL DE CALIDAD EXTERNO

CONTROL DE CALIDAD EXTERNODEFINICIÓN ISO

SISTEMA QUE CONTROLA OBJETIVAMENTELOS RESULTADOS DE LABORATORIO POR

MEDIO DE UNA AGENCIA EXTERNA,INCLUYENDO LA COMPARACIÓN DE LOS

RESULTADOS DEL LABORATORIO AINTERVALOS CON LOS DE OTROS

LABORATORIOS, SIENDO SU MAYOROBJETIVO EL ESTABLECIMIENTO DE LA

VERACIDAD

UN CONTROL DE CALIDAD EXTERNO…

•EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL PARTICIPANTE

•EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DE LA METODOLOGÍA

•HERRAMIENTA DE EDUCACIÓN CONTINUA

•EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO ANALÍTICO Y SURELACIÓN CON LA CLÍNICA

•SOPORTE PARA EL CONTROL DE CALIDAD INTERNO

• VALIDACIÓN DE RESULTADOS DE INVESTIGACIÓN

TIPO 1– DISEÑADO PARA INFORMAR A TERCEROS EL DESEMPEÑO DE

LABORATORIOS : AUTORIDADES, ORGANISMOS DEACREDITACIÓN, SEGURIDAD SOCIAL, ETC.

TIPO 2– DISEÑADO PARA REPORTAR DESEMPEÑO ANALÍTICO A LOS

PARTICIPANTESTIPO 3

– DISEÑADO PARA RESPALDAR SOLUCIONES DE PROBLEMASEN LOS LABORATORIOS.

TIPO 4– DISEÑADOS PARA EVALUAR MÉTODOS DE MEDICIÓN Y

APARATOS IVDS

CONTROL DE CALIDAD EXTERNOTIPOS

DIAPOSITIVA Dra. Silvia Quiroga

• ESTIMULAR LA FILOSOFÍA Y PRÁCTICA DEL CONTROLDE CALIDAD

• RESPALDAR LA CONFIABILIDAD DE LOS RESULTADOSDE LOS LABORATORIOS CON UNA EVALUACIÓNINDEPENDIENTE

• MEJORAR EL CONSENSO ENTRE LABORATORIOSCONTROLAR METODOLOGÍAS Y EQUIPOS DISPONIBLESCOLABORAR EN LOS PROCESOS DE ACREDITACIÓN /CERTIFICACIÓN DE LOS LABORATORIOS

• VALIDAR LOS RESULTADOS DE INVESTIGACIÓN

CONTROL DE CALIDAD EXTERNOOBJETIVOS

OBJETIVOS DE CONTROL DE CALIDADEXTERNO PARA ENSAYOS DE BANCO DE

SANGRE

CONTROL DEL DESEMPEÑO

MUESTRAS ADECUADAS ?DISEÑO DEL ESQUEMA

EVALUACIÓN APROPIADA

COMUNICACIÓN CONLOS PARTICIPANTES

DESEMPEÑODEL PARTICIPANTE

HERRAMIENTAS SEGUIMIENTO

DESEMPEÑODEL MÉTODO

EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEUN MÉTODO

• INCLUYE REACTIVOS, CALIBRADORY EQUIPO

• ASPECTOS: TRAZABILIDAD,ESPECIFICIDAD, RANGO DINAMICO,LÍMITE DE DETECCIÓN, LIMITE DECUANTIFICACIÓNINTERFERENCIAS, PRECISIÓNCONTROL DE CALIDAD DEBE CREAR

GRUPOS HOMOGÉNEOS DE USUARIOS

• DESEMPEÑO DE LOS LABORATORIOSPARTICIPANTES

• VARIACIÓN INTRA LABORATORIO• VARIACIÓN INTER LABORATORIO• RELACIONES ENTRE PROCEDIMIENTOS DE

RESULTADOS ANALÍTICOS Y:– procedimientos analíticos adecuados– reactivos comerciales– instrumentos analíticos– constituyentes del material de control de

calidad

DESEMPEÑO DEL PARTICIPANTE

EL ORGANIZADOR

CONTROL DE CALIDAD EXTERNOEDUCATIVO

LAS MUESTRAS DEBEN DAR INFORMACIÓN CORRECTA YSER APROPIADAS PARA EL OBJETIVO

EL OBJETIVO DEL CC DEBE SER DELINEADO ANTES DECOMENZAR LA RONDA Y PREPARAR LAS MUESTRAS

LOS ORGANIZADORES DEL CC DEBEN BUSCAR ELORIGEN DE RESULTADOS ABERRANTES Y ENCONTRAR ELREMEDIO APROPIADO

MONITOREO DE LOS PARTICIPANTES, SIN ESPECIFICARLA CALIDAD ESPERADA

COMPARACIÓN ENTRE LOS DISTINTOS GRUPOS

COMPARACIÓN ENTRE DISTINTOS MÉTODOS

EVALUACIÓN DE FACTORES DE CALIDAD

OBJETIVOS DEL PROGRAMADE CC

CUALES SON LAS DESVENTAJASPARA REALIZAR UN CCE

1- LAS MUESTRAS A EVALUAR DEBEN PREPARASE CON UNESTANDAR INTERNACIONAL

2- DISTINTOS TIPOS DE HERRAMIENTAS MOLECULARES

3- DNA ES MAS ACCESIBLE QUE RNA

4- NO EXISTEN MÉTODOS DE REFERENCIA

“ DONAR SANGRE NO ESDOLOROSO, NECESITARLA Y NOTENERLA SÍ ”

GRACIAS…