integración de dna en microorganismos: herramientas genéticas ii
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Integración de DNA en microorganismos:
herramientas genéticas II
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Uso de sistemas de recombinación sitio-específica
• Preparación de GMOs• Integración en el
cromosoma• Expresión de genes
tóxicos
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Ab
Ab
Liberación de GMOs: el problema de las resistencias
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AbResolvasa
Ab
GMOs sin resistencias
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Integrasa
Ab
Ab
Ab
Integrando en el cromosoma de un modo específico
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++
+
+
-
Camino de ida pero no de vuelta
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Invertasa
Expresión de genes tóxicos: una solución...
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Resolvasa
Txt STOP
...y otra
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Integración de DNA exogeno en el genoma bacteriano
• Recombinación homóloga• Recombinación sitio-específica• Recombinación ilegítima
– Transposición
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Integración ilegitima: transposición
• Transposones: via intermediario de ADN– Secuencias de inserción
• Tipo I: IS50• Tipo II: IS3
– Transposones• TipoI (IS tipoI, Tn5)• TipoII (IS tipo II, Tn3)• TipoIII (fago Mu)
• Retrotransposones: via intermediario de ARN
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tnpAIR IR
Clase I
tnpA tnpRresIR IR
Clase II
Secuencias de inserción
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tnpA
OE
IE
IS50
5’CTGACTCTTATACACAAGT3’
DnaA
5’CTGTCTCTTGATCAGATCT3’
TnpInh
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5’3’ 5’
3’
H-O-H
5’3’ 5’
3’OH
5’3’ 5’
3’
IS50: cortar y pegar
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H-O-H
5’3’
5’3’ 5’
3’
5’3’
OH
5’3’
OH
IS50: cortar y pegar
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• Dimerización• Papel de Inh• Acción en cis• Acoplamiento con replicación
IS50: mucho es malo
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DNA binding dimerization
476 aa
Papel de la dimerización
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476 aa
dimerization
421 aa
Inh y la dimerización
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Acción en cis
tnpAIR IRen cis
tnpAIR IR
en trans
tnpAIR IR
tnpAIR IR
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Acoplamiento con replicación
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tnpA
OE
IE
OE tiene un sitio dnaA (OE y OI son suboptimos)
5’CTGACTCTTATACACAAGT3’
DnaA
P2 se activa por metilación dam
GATCCTAG
GATCCTAG
GATCCTAG
GATCCTAG
GATCCTAG
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Tn5
OE
IE
OE
IEIS50L IS50R
kan bleo str
Mutación stop
Sitios dnaA