integración de dna en microorganismos: herramientas genéticas i
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Integración de DNA en microorganismos:
herramientas genéticas I
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Integración de DNA exogeno en el genoma bacteriano
• Recombinación homóloga• Recombinación sitio-específica• Recombinación ilegítima
– Transposición
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Homologous pairing
Resolution
One-strand repair/replication
Recombinación homóloga
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3’
5’RecBCD
3’
5’
3’
5’
5’3’
Recombinación homóloga: respuesta a DSB
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3’
5’RecBCD
3’
5’RecBCD
RecA3’
5’
Chi sites:E. coli 5’GCTGGTGG3’B. subtilis 5’ACTGCG3’L. lactis 5’GCGCGTG3’
Recombinación homóloga: RecBCD y Chi
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RecA3’
5’
RecA
Recombinación homóloga: desplazamiento de hebra
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RuvABC
A
B
A B
RuvAB
RuvCRuvC
Intermediario de Holliday
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Integración tipo Campbell Conversión génica
Integrando DNA por recombinación homóloga
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Intercambio alélico
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Resolución de secuencias en tandem
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3’
5’
3’
5’RecBCD
RecBCD
Chi mejora el intercambio alélico
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Genes marcadores de selección positiva y negativa
sacBR (B.subtilis)
Production of levansucrasa in presence of 5% sacarosa es tóxica en Gram -
nar1Necesario para asimilar nitrato, tóxico en presencia de clorato
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Ab
Ab
Ab
Conversión génica
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Ab
Conversión génica y Chi, haciendo más facil el trabajo
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Ab
Ab
X XAb
X X
Ab
X XAb
Ab
Conversión génica: para KOs y mas...
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Integración de DNA exogeno en el genoma bacteriano
• Recombinación homóloga• Recombinación sitio-específica• Recombinación ilegítima
– Transposición
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Recombinación específica de sitio
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Estructura de una diana de SSR
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SSR en acción
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SSR en acción
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SSR en acción
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SSR en acción
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Invertasas
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Sistemas de variación de fase
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Resolvasas/Integrasas
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Estabilidad plasmidica, transposición...