informe practica de laboratorio proteinas

8/16/2019 Informe Practica de Laboratorio Proteinas

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INTRODUCCIÓNEn este informe se discuten algunas reacciones de coloración: reacción conNinhidrina, reacción Xantoroteica, !rue"a de #illon, rue"a de $iuret, rue"ade %o&ins'Cole, rue"a de (a&aguchi ) rue"a del gruo (%* +s tam"i-n se

reali.a la desnaturali.ación de rotenas*/a rotena, como su nom"re indica, han sido consideradas durante muchosa0os como el comonente rimario de la materia 1i1iente* %asta mucho mastarde no se reconoció la gran imortancia de los 2cidos nucleicos ) hanconstituido materia de discusión a lo largo de las 3ltimas d-cadas* El rinciio"2sico de la estructura de las rotenas es "astante simle* Consisten enlargas cadenas de amino2cidos enla.ados unos a otro mediante enlace-tidos* No o"stante aarecen comlicaciones:45 rocedentes de la resenciade alrededor de 1einte tios diferentes de radicales de amino2cidos en lascadenas -tidas6 75 rocedentes de la larga longitud de estas cadenas*



O$8ETI9O(• Identificación de amino2cidos or m-todos colorim-tricos, "asados en

las reacciones de los gruos R*

• Identificar a u- tio de amino2cido o rotena ertenece la muestra

ro"lema*• Reali.ar las reacciones de coloración: ;reacción ninhidrina,

<antoroteica, de #illon, de $iuret, de (a&aguchi, de gruo (% ) de%o&ins'Cole5*

#+RCO TEORICO/as rotenas son macromol-culas formadas or cadenas lineales deamino2cidos* !or sus roiedades fsicoumicas, las rotenas se uedenclasificar en rotenas simles ;holoroteidos5, ue or hidrólisis dan soloamino2cidos o sus deri1ados6 rotenas con=ugadas ;heteroroteidos5, ue or

hidrólisis dan amino2cidos acoma0ados de sustancias di1ersas, ) rotenasderi1adas, sustancias formadas or desnaturali.ación ) desdo"lamiento de lasanteriores* /as rotenas son indisensa"les ara la 1ida, so"re todo or sufunción l2stica ;constitu)en el >?@ del rotolasma deshidratado de todac-lula5, ero tam"i-n or sus funciones "iorreguladoras ;forma arte de lasen.imas5 ) de defensa ;los anticueros son rotenas5* /as rotenasdeseme0an un ael fundamental ara la 1ida ) son las "iomol-culas m2s1ers2tiles ) m2s di1ersas* (on imrescindi"les ara el crecimiento delorganismo* Reali.an una enorme cantidad de funciones diferentes, or e=emloestructural ;como el: col2geno5, inmunológica ;anticueros5, Contr2ctil ;actina )miosina5, entre otras*

Desnaturalización de una proteína(i en una disolución de rotenas se roducen cam"ios de %, alteraciones enla concentración, agitación molecular o 1ariaciones "ruscas de temeratura, lasolu"ilidad de las rotenas uede 1erse reducida hasta el unto de roducirsesu reciitación* Esto se de"e a ue los enlaces ue mantienen laconformación glo"ular se romen ) la rotena adota la conformaciónfilamentosa* De este modo, la caa de mol-culas de agua no recu"recomletamente a las mol-culas roteicas, las cuales tienden a unirse entre sdando lugar a grandes artculas ue reciitan* +dem2s, sus roiedades"iocatali.adores desaarecen al alterarse el centro acti1o* /as rotenas ue sehallan en ese estado no ueden lle1ar a ca"o la acti1idad ara la ue fueron

dise0adas, en resumen, no son funcionales* Esta 1ariación de la conformaciónse denomina desnaturali.ación* /a desnaturali.ación no afecta a los enlacesetdicos: al 1ol1er a las condiciones normales, uede darse el caso de ue larotena recuere la conformación rimiti1a, lo ue se denominarenaturali.ación*



MATERIALES REACTIVOS EQUIOS

• Tu"os de ensa)o

• Aradilla

• Es2tula

• !roieta• !ietas graduadas

de 4 ) B ml

• !isetas

• !in.as ara tu"os

de ensa)o

• Cilindro graduado

de4? ) 7B? ml

• $alón +forado de4??? ml

• Aoteros de 1idrio

• Ninhidrina

• %idró<ido de sodio

• (ulfato de Co"re II

• +cido Ntricoconcentrado

• +cetato de !lomo

• Naftol

• %ioclorito de sodio

• #agnesio

• +cido O<2lico

• +cido (ulf3rico

concentrado

• #ercurio

• +cido Ntrico

• +gua destilada

• +gitador de

tu"os deensa)o

•

Camana dee<tracción*

• $a0o de

mara

• $alan.a

analtica

• #echero

PRUEBA DE NINHIDRINA

Todas auellas sustancias ue resentan almenos un gruo amino ) uno car"o<ilo li"re,

reaccionaran con la ninhidrina* /a ositi1idadse manifiesta or la aarición de un color 1iol2ceo o amarillo, de"ido a ue losamino2cidos oseen esta caracterstica, lareacción sir1e ara identificarlos*

+lgunas soluciones de amonio ) aminas,dan la coloración caractersticaaarentemente de"ido a una o<idación )reducción intramolecular de la ninhidrina enresencia de amoniaco*

PROCEDIMIENTO: Tomar la sustancia ro"lema ) agregarle 4ml de reacti1o deNinhidrina se calienta hasta e"ullición durante un minuto* De=ar enfriar ) o"ser1ar* /aaarición de un color 1iol2ceo o amarillo claro indica la resencia de una rotena,oli-tido o amino2cido* ro=o o amarillo fuerte indica la ositi1idad*

ANALISIS DE RESULTADOS: Se uso como sustancia problema una muestra de carne

una muestra de pollo! en la prueba de la nin"idrina con carne se noto un color ro#i$o

en este caso se determino %ue el resultado es POSITI&O e indica presencia de

prote'nas amino(cidos) En el caso de el pollo! se obtu*o un color amarillo claro por ende podemos a+irmar %ue e,iste presencia de prote'nas %ue el resultado es

Prueba

Ninhidrina

con Pollo

Prueba

Ninhidrina

con Carne



POSITI&O)

PRUEBA DE BIURET

Es una rue"a general ara polip!ptidos )proteínas )a ue sir1e ara reconocer lasuniones etidicas* /a ositi1idad semanifiesta or la aarición de una coloración1ioleta, la formación de un comle=o decoordinación entre los cationes curico enmedio alcalino con las uniones etidicas*

PROCEDIMIENTO: Tomamos la sustancia ro"lema ) agregamos 4ml de hidró<ido desodio #e.clar* (e a0ade gota a gota (ulfato Curico al ?,B@ hasta la aarición de uncolor 1ioleta, a.ul o amarillo* El 1ioleta indica la ositi1idad*

ANALISIS DE RESULTADOS: Se uso como sustancia problema una muestra de pollo)

En la prueba de -iuret con pollo se noto un color *ioleta oscuro en este caso se

determino %ue el resultado es POSITI&O e indica presencia de prote'nas)

PRUEBA XANTOPROTEICA

Es una reacción ue reconoce losamino2cidos ue oseen el gruo "enc-nico;Tirosina" #enilalanina" Tripto$ano5* /asrotenas ue tienen en su comosiciónestos amino2cidos tam"i-n dar2n lareacción* /a ositi1idad se reconoce or laaarición de un color amarillo o 1erde de"idoa la formación de nitrocomuestos*

PROCEDIMIENTO: Tomamos la sustancia ro"lema ) agregamos 4ml de acido ntricoconcentrado, me.clamos "ien* Calentar a la llama ) o"ser1ar* /a formación de un color amarillo, naran=a o 1erde indica la ositi1idad ;%acer la rue"a de %o&ins'Cole5 (i esincoloro indica la resencia de otros amino2cidos ;%acer la !rue"a de #illon5*


En la prueba .antoproteica con pollo se obtu*o un color amarillo claro por ende

podemos a+irmar %ue e,iste presencia de prote'nas %ue el resultado es POSITI&O)

Prueba Biuret

con Pollo

Prueba

Xantoproteica con

Pollo



PRUEBA HOPKINS- COLE

Es ara identificar el Tripto$ano ) lasrotenas ue lo contienen* /a ositi1idad sereconoce or la aarición de un anillo color

1ioleta'ro=i.o*

PROCEDIMIENTO: Tomamos la sustancia ro"lema ) agregamos 4ml de reacti1o de%o&ins'Cole* Tomamos +cido (ulf3rico concentrado, se de=a caer lentamente or lasaredes del tu"o ) o"ser1amos* /a aarición de un color negro o gris indica la

ositi1idad*


En la prueba de "op/ins0cole con pollo se obtu*o un color 1risaseo!en este caso

podemos decir %ue el resultado es POSITI&O)

PRUEBA DE MILLONS

/a reacción es de"ida a la resencia del

gruo hidro<ifenilico ;'C%O%5 en lamol-cula roteica* Cualuier comuestofenolico no sustituido en la osición F,Bcomo la Tirosina, Genol ) Timol dan ositi1ala reacción* El mecanismo de la reacción esoco conocido, osi"lemente se de"a a laformación del comle=o o<ido de mercurio )fenol* /a ositi1idad se da con la resenciade un color ro=o ara la Tirosina%

PROCEDIMIENTO: Tomamos la sustancia ro"lema ) agregamos 4ml de reacti1o de#illons* /a resencia del color ro=o indica la ositi1idad* El incoloro indica la resenciade la Genilalanina*


En la prueba de Millons con pollo se obtu*o un color amarillento! en este caso

podriamos decir %ue es debido al colorante usado en el o %ue simplemente la prueba

resulto NE2ATI&A a %ue para ser positi*a era necesario un color ro#o o incoloro para

demostrar la presencia de 3enilalanina)

Prueba Hopkins-

cole con Pollo

Prueba de Millons

con Pollo



PRUEBA DE SAKAGUCHI

Es una rue"a ara identificar Ar&inina ) seusa ara identificar rotenas )a ue casitodas las rotenas oseen ese amino2cido*

El desarrollo de un color ro=o marca lareacción ositi1a ) se de"e a la resenciadel gruo guanidina, ue caracteri.a la +rginina*

PROCEDIMIENTO: Tomamos la sustancia ro"lema ) agregamos B gotas de%idro<ido de (odio, > gotas de Naftol ) 4? gotas de hioclorito de sodio* #e.clamos"ien ) o"ser1amos* /a resencia de un color ro=o indica la ositi1idad*

ANALISIS DE RESULTADOS: Se uso como sustancia problema una muestra de carne)

En la prueba de Sa/a1uc"i con carne se obtu*o un color ca+4 oscuro! en este caso

podemos decir %ue el resultado es NE2ATI&O a %ue para ser positi*a era necesario

un color ro#o)

PRUEBA GRUPO SH

Esta reacción dar2 ositi1a con auellos

amino2cidos ue resenten a.ufre en suestructura, como son la cistina! la cisteina )la 'etionina% /a reacción consiste ensometer la muestra a una hidrólisis alcalinacon (idró)ido de sodio.

PROCEDIMIENTO: Tomamos la sustancia ro"lema ) agregamos 4ml %idro<ido de

(odio, 4ml de acetato de lomo* #e.clamos "ien, calentamos a la llama or minutosme.clando continuamente, o"ser1amos* /a aarición de un color negro o gris indica laositi1idad*


En la prueba de 2rupo S5 con pollo se obtu*o un color ne1ro! de esta manera

podemos a+irmar %ue el resultado es POSITI&O)

Prueba de

Sakaguchi con

Pollo

Prueba Grupo SH



CONC/U(IÓN

E<isten diferentes rue"as ara la identificación de rotenas ) amino2cidosue ermiten esta"lecer un resultado ositi1o o negati1o de acuerdo a lascaractersticas ) comosición de cada una de ellas, e1idenciado en

coloraciones, resencia de anillos, etc* (e esta"lecieron las caractersticas deestas rue"as ara la identificación cualitati1a de sustanciasue ueden contener amino2cidos, rotenas o -tidos* cuando se usan1arias rue"as en la muestra, se ueden determinar ciertas sustancias enesecfico*#uchos resultados no dieron a los eserados ;teóricos5 ero se udo de"er ala contaminación de las muestras o la contaminación de los euios ;tu"os deensa)o5*

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