impregnaciones argenticas...
TRANSCRIPT
IMPREGNACIONES ARGENTICAS
TM PATRICIA TOLEDO RODRIGUEZ
Qué son?
Solución de sal metálica y la precipitación del
metal (plata, oro o cromo) reducida
fibras reticulares del tejido conjuntivo,
prolongaciones celulares de glia y neuronas,
melanina y otras granulaciones.
tejido
físicos
REDUCCION agentes red.
químicos
Recomendaciones
• Portaobjetos: éstos deben ser silanizados,
pues las soluciones de plata suelen ser
alcalinas lo que favorece el desprendimiento
de los cortes.
• No utilizar pinzas metálicas (tipo pato para
manipular las láminas), pues al contacto con
metal la plata se reduce.
• Usar reactivos pro análisis
• Usar agua destilada de buena calidad. La
calidad del agua se chequea agregando un
grano de plata al agua, si se vuelve lechosa
desecharla.
• Lavado de material de vidrio acucioso.
• Para la utilización de reactivos como el
amoníaco, hacerlo siempre bajo campana, no
pipetear ácidos ni bases fuertes.
• Para las soluciones amoniacales eliminar
INMEDIATAMENTE aquellas donde se ha
formado un cristal negro brillante.
• Mantener las soluciones de plata simples en
frascos ambar, bien tapados y rotulados a 4°c
• Evitar luz directa en soluciones y polvos de
plata.
• Eliminar soluciones de plata precipitadas
• La impregnación argéntica se basa en la
interacción de determinadas estructuras
del tejido con los iones Ag+ y la
capacidad de éstas estructuras de
formar puntos de nucleación de Ag°
metálica.
MECANISMOS
1.- Predominantemente F y FQ
mecanismo puro de impregnación, tejido (-)
Por mec. electroestático atrae iones de plata
cargados + = argirofília
2.- Impregnación por mec. histoquímicos.
Además de +-, reducción de Ag Ag°
Fibras reticulares
Prolongaciones de
diferentes tipos celulares
como glia y neuronas.
Melanina
Cls. Endocrinas en sistema
digestivo
IMPREGNACION PRO MEC.FISICOS
Y FISICO QUIMICOS
• Impregnación argéntica en un paso
• Impregnación argéntica en dos pasosLa primera reducción de la plata es en solución, sin contacto con el tejido.
Un Paso
• Nitrato de plata
• Hidroquinona
• Las técnicas de Bodian para neurifibrillas y la
de Grimelius para argirofilia son
impregnaciones argénticas de un tiempo.
DOS PASOS: PLATA AMONIACAL
NITRATO DE PLATA CON BASE FUERTE
(HIDROXIDO)
OXIDO DE PLATA QUE PP
AMONIACO
OXIDO DIAMINOARGENTICO
Solución de nitrato de plata
Nitrato de plata con hidroxido.
Se agrega amoniaco gota a gota hasta disolver el precipitado
Dos Pasos
1. Impregnación primaria:
Solución de plata (plata amoniacal, diamina de
plata, proteinato de plata), la Ag es captada
por ciertos tejidos, donde se forman puntos
de nucleación de la plata.
Dos pasos
• 2.- Impregnación secundaria:
• Se coloca un agente reductor, puntos de
nucleación se genera Ag°
• Hidroquinona
• formalina
Pasos
1.- Mordentación: Oxidación CONTROLADA
•
2.- Blanqueamiento: ác. Oxálico, Metabisulfito
3.- Impregnación: de 1 / 2 tiempos
4.- Reducción: 1 tiempo hidroquinona
2 tiempos formalina
5.- Contraste: cloruro de oro
3 Ag° + Au Cl Au° + 3 AgCl
6.- Fijación: tiosulfato de sodio
Estructuras Argentafines
• La capacidad de algunas estructuras de
precipitar la plata en un paso único sin
necesidad de agentes reductores externos se
denomina argentafinidad.
• Son argentafines la melanina y algunas células
endocrinas (granulaciones entero cromafines)
.
Argentafines
• El mecanismo preciso …??
• 5-hidroxitriptamina la que es convertida a
terahidro-4-carbonila por el formol.
Estructuras Argirofilas
• La capacidad de ciertas estructuras de los
tejidos de atraer iones plata derivados de
nitratos de plata o platas amoniacales.
• Se demuestran en tinciónes de Bielchowsky,
Sevier-Munger y Grimelius
• Todas las estructuras argentafines son
argirófilas, pero no alrevés.
METODO DE GOMORI
FIBRAS RETICULARES
Es una técnica de dos tiempos.
Oxidante: permanganato de potasio
Blanqueamiento: metabisulfito de potasio
Mordentador: alumbre férrico
Reductor: formol
Plata: plata amoniacal
Fijador: hiposulfito de sodio
• El permanganato oxida grupos HO de la fibra
reticular a CHO, y éstos son argirofilos a la
plata, la que se fija la plata por ADORCION
.-
METODO DE GOMORI PARA
FIBRAS RETICULARES
• Plata amoniacal. Se toman 10 ml de nitrato de
plata al 10%, se añaden 2 ml de hidróxido de
potasio al 10%, se debe formar un precipitado
el que se disuelve agregando gota a gota
amoniaco puro, agitar permanentemente y
bajo campana; después de añade unas gotas
de nitrato de plata hasta que empiece a
formarse un nuevo precipitado, diluir al doble
con agua destilada.
Platas Amoniacales
Las platas amoniacales se descomponen
generando vapores altamente
explosivos. Tener extremo cuidado con el
manejo y eliminación de cristales de
plata generados.
METODO DE GOMORI
FIBRAS RETICULARES
• RESULTADOS
• Fibras reticulares negras
• Fibras colágenas y fondo amarillo/café
TEC. GOMORI
CONTRASTE NUCLEAR
FAST RED. (10 Y 40X)
METODO DE GORDON SWEET
FIBRAS RETICULARES
• Impregnación argéntica en dos tiempos.
• Oxidante: permanganato de potasio
• Blanqueamiento: acido oxálico
• Mordentador: alumbre de hierro
• Reductor: formalina
• Contraste: cloruro de oro.
• Plata: plata amoniacal
• Fijador: tiosulfato de sodio
METODO DE GORDON SWEET
PARA FIBRAS RETICULARES
• Baño argéntico de Wilder.
• Se toman 5 ml de nitrato de plata 1%; añadir gota a
gota amoniaco puro hasta que desaparezca el
precipitado formado; agregar 5 ml de hidróxido 3%
acuoso(se forma un nuevo precipitado) y volver a
agregar amoniaco puro gota a gota hasta disolver el
precipitado, completar hasta 50 ml con agua
destilada.
METODO DE GORDON SWEET
PARA FIBRAS RETICULARES
• RESULTADOS
• Fibras reticulares negras azuladas
• Resto sin teñir
Gordon Sweet
TECNICA DE MASSON FONTANA
PARA ARGENTAFINIDAD
Impregnación argéntica en dos tiempo.
El amoniaco realiza la primera reducción del nitrato
de plata a óxido diamino argéntico y el tejido
la segunda, precipitando la plata metálica sobre
las granulaciones con capacidad reductora.
• Ppal. Dificultad SS de Plata
• Debe estar a punto de pp
TECNICA DE MASSON FONTANA
PARA ARGENTAFINIDAD
• RESULTADOS
• Sustancias reductoras de plata negras
• Núcleos y fondo (contraste) rosa
Masson –Fontana (Argentafin)
MF sobre teñida, inespecifica
TECNICA DE GRIMELIUS PARA
ARGIROFILIA
Impregnación argéntica de un tiempo
La reducción del nitrato de plata es con
hidroquinona.
Se recomienda post fijar las muestras en Bouin.
TECNICA DE GRIMELIUS PARA
ARGIROFILIA
• RESULTADOS
Células argirófilas negro
Cél. alfa 2 de islotes de pancreáticos negro
Grimelius
Tec. De Sevier
Warthin Starry