MICORRIZAS

Los hongos micorrizicos arbusculares(HMAs) interactúan simbióticamente con el 80% de las familias de plantas terrestres con las cuales son capaces de formar Micorrizas Arbusculares (MA), encontrándose en casi todos los ecosistemas terrestres.

clasificación

Los hongos MA pertenecen al phylum Glomeromycota (ShuBler et al, 2001) son poco conocidos por la mayoría de las personas, pero de gran importancia para los ecosistemas terrestres.

El termino micorriza (del griego Mike= hongo, rrhiza = raíz) hace referencia a la asociación simbiótica entre raíces de plantas y hongos, es llamada mutualista porque tanto los hongos como la planta hospedera se benefician. El hongo simbionte recibe carbohidratos de la planta ya que el es incapaz de realizar fotosíntesis y, a cambio, brinda a la planta varios beneficios reflejados en su crecimiento.

Los hongos micorrizogenicos arbusculares(HMA) se clasifican en nueve familias

Las micorrizas puede ser de tres tipos: ectomicorriza , entendomicorrizas y endomicorrizas. Este ultimo se encuentra la mas abundante de todas, la micorriza arbuscular se presenta en diferentes biomas y latitudes.

TAXONOMIA

Los hongos producen esporas o clamidosporas queson células reproductoras producidas asexualmente,que permiten la dispersión y supervivencia por largotiempo en condiciones adversas

La producción de esporas de estos hongos puede ser individualmente en el suelo , en el interior de las raíces de la planta hospedera, o formando densas masas no estructuradas o bien en esporocarpios en o cerca de la superficie del suelo

En su mayoría, las esporas son de forma globosa (esférica) pero algunas especies tienen esporas ovaladas u oblongas; de ellas se desprende una hifa de sustentación que en conjunto dan la apariencia de un globo con su hilo colgando .

Las esporas son de diferentes colores: blancas, amarillas, pardas, magenta, etc. y su tamaño puede variar de 20 a 50 μm, y en las más grandes de 200 a 1000 μm . Son multinucleadas, contienen gotas de lípidos y otros contenidos los cuales varían en color y al romperse la espora en un porta objetos se observa su arreglo en gotas pequeñas o grandes, lo cual puede ser una ayuda en la identificación del hongo

Las paredes de las esporas están formadas por una o mas laminas, que varían en grosor, estructura, apariencia características que también ayudan a identificar la especie.

Pueden ser lisas o presentar ornamentación en forma de espinas, papilas o reticulaciones, entre otras.

• Sus hifas son multinucleadas, cenocíticas(no hay paredes, membranas o septos que separen los núcleos), aunque pueden septarseen condiciones ambientales adversas, por ejemplo deficiencia de agua.

Los HMA son capaces de crecer dentro de las raíces sin causar síntomas de una enfermedad, el hongo coloniza las raíces con sus hifas, formando arbusculos con los cuales mantiene un intercambio bioquímico con la planta.

La red de hifas producidas por los HMA en el suelo durante su asociación con la planta huésped, provee una mayor superficie de absorción que los pelos radiculares y, por lo tanto, aumenta significativamente la captación de iones relativamente inmóviles, tales como fosfato, cobre y zinc. Se les llama

arbusculares ya que en las células corticalesde la raíces, sus hifas forman estructuras que parecen tener forma de arbolitos microscópicos

. se ha demostrado que las plantas micorrizadas tienen mayor tolerancia a metales tóxicos, patógenos de la raíz, sequía, altas temperaturas, salinidad, pH desfavorable del suelo y al choque por trasplante que sufren las plantas no micorrizadas

importancia ecológica.El papel de los HMA es fundamental para los ecosistemas debido a que promueven un reciclamiento de la energía , y por lo tanto influye en el mantenimiento de la diversidad vegetal al evitar competencia por recursos.

Importancia económica.

Las plantas al asociarse con los HMA, adquieren ventajas para un establecimiento exitoso, mayor supervivencia y aumento de producción , lo cual es de gran importancia sobre todo en cultivos de productos básicos para la alimentación.

Estos hongos, han sido utilizados en la agricultura, como bioinoculantes ya que favorecen la absorción de nutrimentos, además brindan protección a la planta contra organismos patógenos.

Aislamiento y selección de esporas

1.-Se toma 100 g de muestras de suelo la zona de la rizosfera de las plantas presentes, de 0 a 40 cm de profundidad, que se guardan en bolsas plásticas a 4oC hasta el momento que se vaya a utilizar.

1. 1.-Colocar 100 g de la muestra de suelo en un vaso de precipitado y suspender en, al menos, 500 ml de agua.

4. Coloque el material retenido en el tamiz de 710 μm en una caja de Petri grande y observe bajo el microscopio de disección para observar esporas grandes (esporas de Gigaspora y Scutellospora) y esporocarpos.

5. Coloque el material retenido en el tamiz de 45 μm en una vaso de precipitados con una pequeña cantidad de agua; después transfiera este material a un tubo de centrífuga que contenga un gradiente de sacarosa de 20–60%. 

2. Agitar hasta que las esporas queden suspendidas y dejar reposar 30 segundos.

3. Pasar la suspensión repetidamente a través de dos tamices anidados con abertura de

malla de 710 μm y 45 μm.

6.-Centrifugue a 2,000 rpm durante 60 segundos.

7. Vacíe el sobrenadante en el tamiz de 45 μm y lave con agua corriente para quitar el exceso de sacarosa.

8.-El contenido del tamiz se recogió en envases de vidrio y posteriormente se agregó poco a poco en cajas Petri cuadriculadas de aproximadamente 1,25 cm entre líneas, para hacer el conteo de esporas. Bajo el microscopio colecte las esporas en un vidrio de reloj limpio.

Identificación de especies y montaje de preparaciones

Las características taxonómicas importantes que pueden observarse bajo el microscopio de disección son tamaño de las esporas, color, forma, presencia de hifa de sostén, de células suspensoras y del sáculo esporífero (raramente observado en esporas recolectadas directamente del campo). En el microscopio compuesto pueden observarse algunas características taxonómicas importantes como son la presencia y tipo de ornamentación sobre la pared de la espora, reacción al Melzer, número de paredes germinales y grosor de la pared de la espora. Las esporas necesitan montarse en líquidos de montar permanentes como son el PVLG (alcohol polivínilico lactoglicerol) y PVLG mezclado con reactivo de Melzer.

2. Colocar las esporas al centro de cada gota usando un pinza fina o una micropipeta (en este caso, tenga cuidado de no agregar demasiada agua).

1. En un porta objetos, colocar una gota de PVLG y una gota de la

solución de PVLG + Melzer.

3. Con una aguja de disección, mezcle las esporas en la solución de PVLG y de PVLG + Solución de Melzer y deje secar la superficie de la gota por lo menos cinco minutos.

4. Coloque suavemente un cubre objeto sobre la gota de PVLG y otro cubreobjetos sobre la gota

de PVLG + Solución de Melzer.

5. Usando una aguja de disección, rompa cada espora individualmente bajo el microscopio de disección. Este paso es importante para exponer las paredes germinales y sus capas.

6. Etiquetar las preparaciones incluyendo número de muestra, género y especie (sise conoce), y fecha.

7. Guardar las preparaciones a temperatura ambiente durante cinco días y luegoincubar a 40-60ºC, durante dos días para endurecer el medio de montaje. 

Cinco días

Dos días

8.-Después de este tiempo, se procedió a analizar las preparaciones con ayuda del sistema AxioVision de Carl Zeiss y se clasificaron de acuerdo con sus características morfológicas: forma, color, contenido, unión hifa y tipos de paredes o grupos de paredes, considerando además el tipo y la distribución de las ornamentaciones.El color de las esporas se obtuvo con ayuda de la carta de color del INVAM (23). Para la identificación de las especies, se empleó el manual de Schenck y Pérez, la colección fotográfica del departamento de Biofertilizantes del IES de esporas de hongos Glomales, así como la página Web del INVAM )y las descripciones originales de las especies publicadas en la literatura especializada, mediante el método propuesto por Herrera (25, 26). Se tomaron imágenes de los distintos tipos de esporas aisladas con el sistema AxioVision de Carl Zeiss.

ALGUNOS RESULTADOS OBTENIDOS CON ESTA TECNICA

Por sus características morfológicas, se han identificado Hongos Micorrizos Arbusculares agrupados según su homogeneidad respecto a la forma, el color, la apariencia de la pared externa, el tamaño de la espora y la presencia, forma y coloración de la conexión hifa, así como la reacción con el reactivo de Melzer, que se describe a continuación algunos de ellos, mostrando las imágenes de las distintas esporas de los HMA nativos aislados, así como el género y la especie a la que pertenece cada una de ellas. Sin embargo este solo es un resumen de los muchos con el que se han identificado.

Género: AcaulosporaEspecie: Acaulosporakoskei-likeColor: Pardo rojizoTamaño: (μm) 120-240Forma: Globosa,subglobosaParedes: Compuesto por tres capas

Género: AcaulosporaEspecie: Acaulosporamellea-likeColor: Amarillo naranjaTamaño: (μm) 90-140Forma: Globosa,subglobosaParedes: Tres capas

Género: GigasporaEspecie: Gigaspora sp.Color: HialinoTamaño: (μm) 160-200Forma: Globosa,subglobosaParedes: Consta de tres capas

Género: AcaulosporaEspecie: AcaulosporaspinosaColor: Pardo rojizoTamaño: (μm) 120-140Forma: Globosa,subglobosaParedes: Dos capas,el exterior continúa con la pared del cuello de la matriz del sáculo

Género: GlomusEspecie: GlomusambisporumColor: Pardo rojizoTamaño: (μm) 60-100Forma: GlobosaParedes: Consta de tres capas

Género: GlomusEspecie: Glomusmosseae-likeColor: Pardo claroTamaño: (μm) 100-260Forma: Globosa,subglobosaParedes: Consta de tres capas

Género: GlomusEspecie: Glomus sp8Color: RojoTamaño: (μm) 60-100Forma: Globosa,subglobosa, elípticaParedes: Consta de tres capas

Género: GlomusEspecie: Glomus sinuosumColor: RojoTamaño: (μm) 200-360Forma: Elíptica, organizadasen una capa a partir de unplexo centralParedes: Una capa

Género: GlomusEspecie: Glomusviscosum-likeColor: HialinoTamaño: (μm) 50-120Forma: Globosa,subglobosaParedes: Consta de trescapas