GUIA DE SOLUCIÓN DEERRORES EN EL TAMIZAJEDE HEMOTRANSMISIBLES

MINISTERIO DE SALUD

PRONAHEBAS

Esquema de investigación en pruebas fallidas

Revisar el procedimiento y determinar si ha habido algún error uomisión en la preparación de muestras y reactivos o en elprotocolo

Comprobar la fecha de caducidad de los componentes

Parámetros físicos: Tiempo de incubaciónTemperatura de incubaciónTemperatura ambiente

Equipo de laboratorio: Pipetas, lavador, lector

Calidad del agua destilada/desionizada

Preparación y conservación de los reactivos

¿Han funcionado los controles según lo esperado?

¿Estaban los reactivos a temperatura ambiente antes de usar?

Valores de absorbancias bajasen controles y muestras

Muestras: Acción:

Muestras contaminadas,Hemolizadas o lipémicasMuestras no homogenizadascorrectamenteMuestras inactivadas

Examinar cuidadosamente elAspecto de las muestras, noInactivarlas por calor.

Conjugado: Acción:

Conjugado demasiado diluidoConservar el conjugado diluidoMás tiempo del permitido.Conjugado inactivo o caducado

Utilizar el conjugado diluidoAntes de la fecha de vencimiento Señalada en el inserto

Sustrato: Acción:

Sustrato preparado demasiado pronto

Preparar el sustrato con 5-10 minutos de antelación

Sustrato demasiado diluidoPreparación incorrectaTampón sustrato demasiadoFrío

Preparar dilución correctaDejar que el TMB se disuelvaCompletamente antes de mezclarCon el Tampón sustrato. AgitarSuavemente la solución preparadaComo mínimo 10 segundos.Realizar la dilución en un vialCompletamente limpio.Mezclar cuidadosamentePermitir que el tampón sustratoEsté a temperatura ambiente.Retirar el vial de la bandeja de laCaja para que se atempere.

Controles: Acción:

Control insuficiente o sobre-diluidoMezcla insuficiente de control ydiluyenteContaminación cruzada entreControles

Dispensar la cantidad de Control necesariaPreparar la diluciónCorrecta de control.Mezclar cuidadosamentePipetear correctamente, no intercambiar los tapones de Los vialesIncubación: Acción:

Tiempo de incubación cortoTemperatura de incubación baja

Respetar el tiempo de incubaciónIncubar a la temperaturaCorrecta

Lavado: Acción:

Solución de lavado malPreparada

Preparar la solucion de lavado con la dilución correcta

Solución de lavado caducada Utilizar solucion de lavado antes de que caduque

Los pocillos se han dejado secarDespués del lavado

No dejar secar el pocillo mucho tiempo antes de la siguiente dispensación de reactivo, el contenido de la fase sólida se puede estropear

Remanente de tampon de lavado en los pocillos

Golpear la placa sobre papelAbsorbente después del lavado

Lavado excesivamente vigoroso

Reducir la presion en el lavador

Aumento de los ciclos de lavado

Respetar los ciclos de lavado

Varios: Acción:

Reactivos caducadosCondensación en la bolsa deplásticoMicroplaca inactiva porConservación incorrecta

Comprobar la caducidad del kit No Utilizar kits caducadosComprobar que la bolsa desecante Funcione correctamenteEscriba la fecha en la que se abrió la bolsa por primera vezMantenga siempre las tiras noUsadas en la bolsa de plástico conCierre minigrip, bien cerradas y con La bolsita de silica gel

Utilizar componentes de lotesDiferentes

No utilizar componentes deOtros lotes puesto que están ajustados a cada lote de Producción

Filtro de lectura incorrecto Lectura utilizado es de 450 nm TMB ó 492 OPD

Temperatura de incubación delSustrato demasiado alta

Puedei nactivarse aTemperatura superior es a los 39°C

Valores de absorbancias altasen los controles y muestras

Controles: Acción:

Contaminación de los pocillos de control negativo por el control positivoVolumen de control mayorPor error de dispensaciónControl demasiadoConcentrado

Durante el lavado no permitir el desbordamiento de los pocillosDispensar la cantidad de controlcorrectaPreparar la dilución correcta decontrol.Mezclarcuidadosamente

Incubación: Acción:

Tiempo de incubación largoTemperatura de incubación alta

Respetar el tiempo de incubacionIncubar a la temperatura correcta Según las instrucciones

Varios: Acción:

Volumen insuficiente deSolución de parada

Dispensar el volumen correcto

Muestras: Acción:

Dispensación excesiva deMuestra en los pocillosDilución incorrecta de lasMuestras o presencia deFibrina en ellas

Dispensar el volumen de muestra correctoPreparar la dilución correctaCentrifugar x 10’ a 3500rpm

Conjugado: Acción:

Conjugado excesivamenteConcentrado

Preparar dilucion correcta

Conjugado contaminado Aspecto turbio

Sustrato: Acción:

TMB u OPD excesivamenteConcentrado

Preparar dilucion correcta

Sustrato contaminado uOxidado

Comprobar que el sustrato es Transparente antes de dispensar.Rechazar si está coloreado de azul (TMB) o naranja (OPD)

Lavado: Acción:

Solución de lavado malPreparada

Preparar la solucion de lavado con la Dilución correcta

Sistema de lavadoContaminado

Realizar una purga con aguaDestilada al finalizar el ensayo

Poco vacío en el sistema deLavado Seque correctamente el pocillo

No respetar tiempo deRemojo

Dejar un tiempo de remojo dentro de cada ciclo de lavado

Volumen de llenado del pocillo y/o aspiración insuficiente o No uniforme

Comprobar el lavador. Llenar los Pocillos hasta casi el borde sinmenisco. Aspirar el contenidocompletamente.

Demasiada presión en elPeine de dispensaciónProduciendo espuma

Reducir la presion puesto que la espuma producida es difícil deEliminar

Insuficiente número de ciclos De lavado

Respetar el numero de cliclos de Lavado según inserto

Solución de lavado de trabajo (1x) contaminada

Comprobar la calidad del agua desionizada utilizada para diluir eltampón.

Utilizar el tampón de lavadoDe otro fabricante

Utilizar solo el tampon de lavado suministrado por el fabricante.

Elevado número de muestrasreactivas iniciales

Muestras:

Dispensación excesiva deMuestra en los pocillos

Contaminación cruzada conMuestras positivas fuertes

Muestras recién sacadas deRefrigeración

Dispensar el volumen de muestra correcto. Enlosensayos IPD noIntroducir la punta de la pipeta en el tubo primario, más de lo necesario: La cantidad de muestra en la parte exterior de la punta se suma al volumen total dispensadoComprobar la calidad de lasPuntas así como el lavador deMicroplacas

Acción:

Mezcla insuficiente entre elDiluyente de muestra y lasmuestras, especialmente en losEnsayos con dilución en placa(IPD)

Asegúrese que existe una mezcla correcta, agitando ligeramente la placa 10-15 segundos antes de laIncubación de la muestra. ElDiluyente de muestra contieneProteínas que bloquean losInterfirientes

Dilución incorrecta de lasMuestras

Preparar la dilucion correcta

Hematíes, hemólisis o restos deFibrina en las muestras

Centrifugar las muestras antes de ser utilizadas

POR QUE FALSOS POSITIVOS?

Espacios librescubiertos por laBSA

IgG contra la BSA

Falso Positivo

Antigeno fijado ala fase sólida

IgG especifica fijada alantigeno

Verdaderopositivo

POR QUE FALSOSO POSITIVOS?

Lavado: Acción:

Solución de lavado malPreparada

Prepara la solucion de lavado co la dilución correcta

Sistema de lavado contaminado

Limpiar el sistema de lavadoRealizar una purga con aguaDestilada al finalizar el ensayo

Poco vacío en el sistema deLavado

Comprobar que el sistema deLavado seque correctamente elPocillo

No respetar tiempo de remojo

Dejar un tiempo de remojo en cada ciclo de lavado

Volumen de llenado del pocillo y/o aspiracion Insuficiente o no uniforme

Comprobar el lavador. Llenar los pocillos hasta el borde sin menisco o menisco negativoAspirar todo el contenido

Demasiada presión en elPeine del lavadorProduciendo espuma

Reducir la presión puesto que la espuma producida es difícil de eliminar

Insuficiente número deCiclos de lavado

Respetar el número deCiclos de lavado según inserto

Uso de solución de lavado deOtro fabricante

Utilizar la solución de lavadoIncluida en el kit

Solución de lavado deTrabajo contaminada

Comprobar la calidad del aguaDesionizada utilizada paraDiluir el tampón.

Pobre reproducibilidadde lectura de las

muestras

Muestras: Acción:

Técnica de dispensacióndeficiente.

Recalibrar las pipetas yDispensar el volumen correcto.Mejorar técnica

Contaminación cruzada conMuestras positivas fuertes

Comprobar las puntas y/o elSistema del dispensador deMuestras y el lavador

Lavado: Acción:

Preparación incorrecta de laSolución de lavado

Preparar la solución de lavadoCorrectamente

Los pocillos se han dejadoSecar demasiado, antes deDispensar el siguiente reactivo

No dejar que los pocillos seSequen excesivamente

Cambio en la calidad del aguadestilada/desionizada

Comprobar la calidad del agua

Peine de lavado contaminado

Mantener el peine de lavadoEn buenas condiciones

Arrastre debido al lavado

BNNPPP

Contaminación cruzada por arrastre

BNNPPP

Sin color en los pocillos alfinal del ensayo

Controles: Acción:

Control positivo no dispensadoO poco volumen

Dispense el control positivo

Preparación incorrecta delControl positivo

Prepare correctamente elControl positivo

Conjugado: Acción:

Error en la preparaciónConjugado o no dispensado oConfusión de conjugado

Prepare la dilución correctaNo olvide de dispensar elConjugado

Conservación incorrectaConfusión de los pocillos

Conservar el conjugado enCondiciones correctas

Sustrato: Acción:

Error en la preparación Prepare la dilución correcta

Dispensación de solución deparada, en lugar del tampónSustrato

Compruebe que el TMB seDispensó correctamente

Solución de paradaDispensada demasiado pronto

Incubar el sustrato el tiempoNecesario

Sustrato no dispensado No olvide de dispensar el sustrato

Incubación muy corta desustratoSolución de lavado malPreparada

Incube el sustrato el tiemponecesarioPreparar la dilución correcta

Absorbancia del blancomuy alta

Sustrato: Acción:

Sustrato contaminado uoxidado

Compruebe que el sustrato esincoloro.

Valores máximos esperados para el blanco si no se utiliza filtro de

referencia::OD450o490<0.100Si se utiliza filtro de referencia:OD450ó490//620<0.050

Conjugado: Acción:

Se dispensó conjugado en elPocillo del blanco

Dispense sólo sustrato y soluciónDe parada en el blanco

Absorbancias incongruentes enuna placa visualmente correcta

Lector: Acción:

Filtro de lectura incorrecto Compruebe que la longitud de ondaDel filtro utilizado es elRecomendado en el inserto. Si noSe utiliza filtro de referencia de620nm la absorbancia aumentaAproximadamente en 50milinunidades.

Filtro de referenciaIncorrecto

Utilice sólo el filtro de 620nm

Interferencias en el caminoÓptico

Compruebe el lector de micro Elisa.Limpie o seque la parte inferior deLos pocillos. Compruebe la ausenciaDe burbujas de aire Repita lalectura.

Para Recordar:

TODOS LOS DIAS SIEMPRE HAYALGO NUEVO QUE APRENDER