TINCIN DE EOSINA-NIGROSINA Presentacin Frasco de 30 ml. Principios bsicos La eosina-nigrosina de Mortimer resulta la ms adecuada para el examen de vitalidad y formas anormales, ya que la frmula resulta isosmtica con la muestra seminal. Una clula con la membrana celular intacta no se tie con eosina Y, mientras que una clula muerta, p.ej. con la membrana celular daada, absorbe el colorante rojo. La nigrosina se utiliza como tincin de fondo para contrastar las clulas vivas sin teir, blancas. Procedimiento 1. Sobre una placa calentable a 37-38C, mezclar una gota de 20-50 L, de semen o dosis seminal con una gota del mismo volumen de eosina-nigrosina. 2. Incubar durante 30 segundos. 3. Extender la mezcla a lo largo de todo el portaobjetos con la ayuda de un cubreobjetos delante de la gota. No debe realizarse la extensin demasiado gruesa porque el color de fondo podra ser demasiado oscuro y cubrir los espermatozoides. 4. Dejar secar al aire y examinar directamente, al menos 200 espermatozoides a una magnificacin de 1000x, o 1250x, usando un objetivo de alta calidad 100x sin contraste de fases en aceite de inmersin 5. Los espermatozoides blancos, sin teir, se clasifican como vivos, y los que poseen alguna coloracin rosa o roja se clasifican como muertos. CONSERVACIN Una vez abierto el envase conservar en nevera.