Fitoplasmas y virus que afectan a

frutales de pepita y hueso

Equipo investigador IRTA:

Assumpció Batlle

Amparo Laviña

Jose Aramburu

Colaboración con el Programa de Fruticultura del IRTA:

Lérida, Gerona (Mas Badia) y Reus (Mas Bover). Con

técnicos de Laboratorios de Sanidad Vegetal, técnicos de

distintas cooperativas frutícolas y técnicos de las ADVs.

IRTA, Patología Vegetal, Cabrils, Barcelona

Proyectos R+D en frutales, participantes y colaboradores.

Fondos públicos

INIA SC97-131-C2

INIA RTA01-077

INIA RTA2004-066

INIA RTA2005-00156

INIA-TRT2006-00004

COST FA0807

Euphresco 2010

INIA-RTA09-0070

Ester Torres. Laboratorio Sanidad Vegetal, DAAM

Luis Asín (IRTA, Lleida)

Pere Vilardell (Estación Mas Badia, Girona)

Miquel Peris (IRTA,Lleida)

Vicente Medina (UDL, Lleida)

Dionisio Berra. Laboratorio Agrario de Fraisoro,

Guipúzcoa

Elena Landeras, Lab Sanidad Vegetal. Oviedo. Asturias

Remedios Santiago, Lab.Sanidad Vegetal, Badajoz,

Extremadura

Rafael Balduque y MªJosé Rubio (CITA, Zaragoza)

-Entidades y empresas colaboradoras: Certiplant,

Agromillora, Viveros Orero, Viveros Provedo,

PLANASA, Grup Actel, Cooperativa Fruits de Ponent,

Cooperativa Crex y CAVAL (Extremadura)

-Fitoplasmas del grupo ribosómico 16Sr-X que afectan a frutales de pepita y hueso

Ca. Phytoplasma pyri o Pear decline (decaimiento peral)

Ca.P.prunorum o European stone fruit yellows (enrollamiento clorótico del albaricoquero, leptonecrosis ciruelo, amarilleamientos melocotonero)

Apple proliferation or Ca.P.mali

Líneas de investigación en fitoplasmas.

-Líneas de Investigación

-Epidemiología: Evolución de la incidencia. Identificación , dinámica

poblacional y biología de los vectores, Identificación de plantas huésped.

-Caracterización biológica y molecular de aislados.

-Mejora técnicas de detección de fitoplasmas

-Desarrollo y evaluación de métodos de control

PCR and nested-PCR P1/ P7 (Deng y Hiruki, 1991; Schneider et al., 1995)

fO1/ rO1 (Lorenz et al., 1995)

Resultados (1.-Identificación de vectores)

-Transmision de Pear decline por Cacopsylla pyri en España

-Identificación de C.pruni y ciclo de ESFY en frutales de hueso

-Identificación de C.picta y C.melanoneura como vectores de proliferación del manzano

2.-Resultados (Técnicas de detección) de fitoplasmas del grupo 16Sr-X mediante PCR y PCR a tiempo real

Comparación de métodos de

extracción :

Extracción con E.Z.N.A.

Extracción con CTAB

Extracción con PGB

Figura 2. Comparación de los métodos de extracción y amplificación.

-Evaluación de distintos

métodos de PCR a tiempo real :

-Cinco con sondas TaqMan

-Uno con tinción SYBR

Metodología del muestreo: época, tejido

Comparación de técnicas: PCR a tiempo

real, PCR nido

3.-Caracterización molecular de aislados de Ca.P.prunorum y Ca.P.pyri, mediante secuenciación de los genes imp, aceF, pnp, y secY

-Variabilidad genética determinada con el estudio del gen Imp Trabajo realizadoen colaboración con el INRA de Burdeos.

Ca.P.Pyri

-Se ha identificado un recombinante de

Ca.P.pyri, causante del Pear decline que

presenta dos genes de Ca.P. prunorum

causante de los ESFY. Se ha encontrado en

peral y en melocotonero.

-Secuenciación del genoma completo de Ca.P.prunorum

-Se han determinado distintos aislados de Ca.P. prunorum y de Ca.P.pyri. Se están utilizando para evaluar tolerancia o resistencia en material vegetal.

-Se han determinado 9 aislados de Ca.P.prunorum en Europa, 4 en España.

• 4.1. Se ha evaluado la susceptibilidad/ resistencia en material vegetal de Pyrus y Prunus. Se han determinado distintos grados de tolerancia pero no resistencia.

• 4.2.Control de vectores. Identificación de sustancias volátiles para ser utilizadas como atrayentes de psilas

• 4.3. Se esta evaluando el saneamiento mediante termoterapia de agua caliente.

• 4.4. La micorrización con hongos seleccionados incrementa la tolerancia a la infección con fitoplasmas

4.-Control de fitoplasmas del grupo 16r-X

Puesta a punto de técnicas de detección de virus de frutales por RT-PCR. Etiología de

algunas enfermedades transmisibles. Programas de selección sanitaria de material

vegetal. Control sanitario bancos de Germoplasma de nogal, almendro y algarrobo.

-INIA-TRT2006-004

-Proyecto Cefrut

-INIA RFP 2009-0013

-INIA RFP 2013-0014

ACLSV

Detección de virus en árboles con distintas

enfermedades

-Detección de 6 virus mediante RT_PCR

-Todos las muestras positivas por

indexaje también lo fueron por técnicas

de laboratorio.

• Identificación y caracterización biológica y molecular de fitoplasmas y virus.

• Estudio de la epidemiologia en una determinada zona. Identificación de vectores y plantas huésped. Diseño de métodos de control.

• Puesta a punto de técnicas de detección de PCR y PCR a tiempo real. Diseño de cebadores para reconocimiento de distintos aislados de fitoplasmas y virus.

• Ensayos con distintos productos que incrementen la tolerancia a fitoplasmas y/o virus (BTH, Fosetil-Al, AIA, AIB, SA) o inhiban su multiplicación (péptidos).

• Ensayos de control sostenible de vectores, con la utilización de atrayentes de psilas como trampas.

4.-Oferta Tecnológica

Parcela 8 (Blanquilla) Parcela 3 (Limonera)

Impacto del cambio climático en las enfermedades

producidas por fitoplasmas

-Ampliación del limite geográfico

del fitoplasma y de los vectores a

zonas donde no estaban

presentes por exceso de frio.

-Mayor permanencia del

fitoplasma en la parte aérea del

árbol durante todo el año, lo que

implica una mayor concentración

del mismo

-En especies sensibles mayor

concentración implica mayor

expresión y virulencia de

síntomas.

Transmisión a través de injerto de

yemas tomadas en febrero Detección del PD a lo largo del año