evaluación del uso del coagulo y sangre total para el diagnóstico de la enfermedad de chagas ...
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Introducción.- La PCR a tiempo real (PCR-TR) ofrece la ventaja de ser más sensible y específica que las técnicas actualmente utilizadas para el diagnóstico de la enfermedad de Chagas, como son la microscopia y las técnicas serológicas. Además, los procesos de amplificación y detección se producen de manera simultánea en el mismo vial cerrado, sin necesidad de ninguna acción posterior lo cual minimiza probables problemas de contaminación. Actualmente los laboratorios que realizan diagnostico utilizan generalmente la sangre total y en algunos casos coagulo como fuente de ADN, en consecuencia, el objetivo fue evaluar los dos tipos de muestra para definir cuál es la más adecuada en la optimización del resultado y reproducibilidad de la técnica. Objetivo: Determinar la sensibilidad y especificidad de la técnica de PCR-TR en coagulo y sangre total.TRANSCRIPT
Evaluación del uso del coagulo y sangre total para el diagnóstico de la enfermedad de Chagas mediante la PCR en tiempo real
Janet Acosta1*, Leny Sanchez1, Milagros Bastos1, Maritza Calderon1, Robert H. Gilman1,2
1 Laboratorio de Investigación en Enfermedades Infecciosas-LIEI- Universidad Peruana Cayetano Heredia. Lima-Perú. 2 Dpto. International Health, Johns Hopkins University, Bloomberg School of
Hygiene and Public Health, Baltimore, Maryland- Estados Unidos.*[email protected]
RESUMEN
Introducción.- La PCR a tiempo real (PCR-TR) ofrece la ventaja de ser más sensible y específica que las técnicas actualmente utilizadas para el diagnóstico de la enfermedad de Chagas, como son la microscopia y las técnicas serológicas. Además, los procesos de amplificación y detección se producen de manera simultánea en el mismo vial cerrado, sin necesidad de ninguna acción posterior lo cual minimiza probables problemas de contaminación. Actualmente los laboratorios que realizan diagnostico utilizan generalmente la sangre total y en algunos casos coagulo como fuente de ADN, en consecuencia, el objetivo fue evaluar los dos tipos de muestra para definir cuál es la más adecuada en la optimización del resultado y reproducibilidad de la técnica.
Objetivo: Determinar la sensibilidad y especificidad de la técnica de PCR-TR en coagulo y sangre total.
Materiales y Métodos: Se analizaron muestras tomadas con y sin anticoagulante (sangre total y coágulo) de 52 pacientes provenientes de Cochabamba-Bolivia con resultados positivos y negativos a serología por técnicas de ELISA y ELISA recombinante (WIENER) utilizados como Gold estándar, de los cuales 18 fueron positivos y 34 negativos. Para la realización de la PCR-TR se utilizaron los iniciadores que amplifican un fragmento de 166 pb de la secuencia del gen de la región satelital del ADN nuclear de T. cruzi.
Resultados: La PCR-TR tuvo una sensibilidad del 39% (7/18) en muestras de coagulo en comparación con el 28% (4/18) en muestras de sangre total y una especificidad de 100% (34/34) en coagulo y 97% (33/34) en sangre total.
Conclusiones: Las muestras de coagulo sanguíneo presentaron mayor sensibilidad y especificidad con la técnica de PCR-TR a diferencia de las muestras de sangre total. Los resultados obtenidos contribuirán el diagnóstico óptimo de la Enfermedad de Chagas contribuyendo de esta forma en el control de su propagación.
PALABRAS CLAVE: Trypanosoma cruzi, PCR-TR, coagulo, sangre total