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Universidad Autónoma de San Luis Potosí
Facultad de Ingeniería - Área Agroindustrial
Evaluación del efecto cicatrizante en piel
del extracto etanólico de Calea urticifolia
(Mill.) DC en un modelo in vivo.
Presenta
Luis Gerardo Rangel Baena
Asesores
Dra. Erika García Chávez
Dr. Gerson A. Soto Peña
Mayo, 20181
Contenido
▪ Introducción
▪ Antecedentes
▪ Justificación
▪ Hipótesis
▪ Objetivo General
▪ Objetivos Específicos
▪ Metodología
▪ Avances
▪ Cronograma de actividades
▪ Referencias
2
PielÓrgano de
Protección
Homeostasis
fisiológica
Interacción con
el medio
ambiente
Barrera física
Se compone de
3 capas
principales
Epidermis: Capa superior formada por
células (sistema inmune)
Dermis: Capa inferior formada
por tejidos
Hipodermis:Capa mas
espesa de piel formada por adipocitos.
Estímulos
ambientales y a la
invasión de
agresores externos
Se
enfrenta
http://boletinvipassana.tripod.com/id39.ht
ml
3
Herida
Pérdida de la
integridad de la
piel
Fuerzas
mecánicas o
térmicas que
rompen la piel y
dañan el tejido
conjuntivo y los
vasos
sanguíneos
causas
Daña y
expone la
piel
causaProfundidad
Superficiales
Epidermis
Profundidad parcial
Dermis
Profundidad Total
Tejido subcutáneo
http://www.elenaconde.com/?p=583
4
Cicatrización
Complejo
proceso
destinado a
reparar los
tejidos dañados
Una compleja
interacción
entre muchos
componentes
celulares de la
piel
Hemostasia
• Respuesta inicial
de los tejidos
• Vaso construcción
inicial
• Comienzo de la
cascada de
coagulación
• Taponamiento de
la coagulación
INFLAMACIÓN
Liberación de
interleucinas
pro-
inflamatorias
(TNF- α, IL-1
β e IL-6)
• Síntesis de
colágeno
• Angiogénesis
(VEGF)
• Re-epitelización
https://enfermeriamayor.wordpress.com/tag/heridas/
5
• Comprende
la
hemostasia
• Secreción de
histamina
• Aumento de
flujo
sanguíneo y
temperatura
• Reposición
de capilares
deteriorados
• Aumento de
la fuerza
tensional del
tejido dañado
Inflamación FibroplasticaRemodelaci
ón
Etapas
0 a 3 días4 días a 3
semanas
4 semanas
a 6 meses 6
Aumento del
volumen de
pacientes en
México con
heridas crónicas
Estrategias
eficaces de
distribución de
recursos
humanos y
materiales
Se requieren
Problemática actual
Pérdida de la integridad de la
piel
Lesión o enfermedad que puede conducir a una discapacidad grave o incluso la
muerte
Medicina tradicional
Calea urticifoliaDC. (Mill)
7
Antecedentes
8
Calea urticifolia Mill DC.
Calea urticifolia conocida como negrito es una planta
utilizada tradicionalmente por la etnia Xi’oi de la región
de La Palma en el municipio de Rayón-Tamasopo en
San Luis Potosí.
Cicatrización Anti-
Inflamatorios
9
Aspecto Referencia
Inhibitorios de la
diferenciación
preadipocitaria
Matsuura , 2005
Citotóxico en células de
cáncer de colon y leucemia
Nakagawa, 2005
Antioxidante Umemura, 2008
Tratamiento gastritis y Matsuura, 2005
Gamboa, 2005
Guzmán , 2010
Aspectos farmacológicos de la especie
10
Justificación
11
Continuidad a la caracterización farmacéutica de Calea urticifolia
(Mill.) DC
Demostrar su utilidad clínica y
garantizar un bajo riesgo para la salud.
Desarrollo de un fitomedicamentoseguro y eficaz
12Inhibición del proceso
inflamatorio e
Inductor vascular
El uso de la medicina
tradicional o herbolaria
sigue estando muy
extendido
Proporcionar indicios
para nuevas áreas de
investigación
Productos naturales de
plantas se consideran las
fuentes más disponibles y
baratas
El extracto etanólico de Calea urticifolia (Mill.) DC.,
estimulará el proceso de cicatrización a través de
modular positivamente la secreción de los mediadores
biológicos relacionados en el proceso de cicatrización
(inflamación y vascularización), reduciendo así el tiempo
de recuperación del epitelio.
Hipótesis
13
Evaluar el efecto cicatrizante del extracto etanólico de
Calea urticifolia (Mill.) DC., mediante la medición del
área de la incisión dorsal quirúrgica y la cuantificación
de los mediadores biológicos en el proceso de
cicatrización (citocina proinflamatoria y el factor de
vascularización VEGF).
Objetivo general
14
• Valorar el efecto cicatrizante mediante la
disminución del área de incisión quirúrgica del dorso
de la rata.
• Evaluar el efecto antiinflamatorio y de angiogénesis
del extracto etanólico de Calea urticifolia (Mill.) DC.
por medio de la cuantificación del factor VEGF y la
inhibición de la secreción de la citocina
proinflamametoria TNF-α.
Objetivos Específicos
15
Avances
16
Metodología
17
Recolección del
material vegetal
Elaboración del
extracto etanólico
y rendimiento de
extracción
Valoración del extracto
etanólico de Calea urticifolia
Disminución
del área
quirúrgica
dorsal
Cuantificación de
los medidores
biológicos
𝑨𝒓𝒆𝒂 𝒊𝒏𝒊𝒄𝒊𝒂𝒍 −𝑨𝒓𝒆𝒂 (𝒅í𝒂 𝒙)
𝑨𝒓𝒆𝒂 𝒊𝒏𝒊𝒄𝒊𝒂𝒍𝒙 𝟏𝟎𝟎
Antiinflamatorio Angiogénesis
TNF-α VEGF
Técnica ELISA
Modelo animal
incisión
quirúrgica
18
Comunidad Potrero del Carnero
(comunidad indígena Xi’iuy) en
el municipio de Rayón, S.L.P.
Recolección del material vegetal
Preparación del extracto etanólico
Ejemplares en papel
adsorbente por un
período de 48 h.
Secado: 15 días al
abrigo a una
temperatura de 22°C
Pulverizado y macerado con etanol
durante 14 días.
Filtrado y desecado a
temperatura ambiente del
exceso de etanol.
1. Preparación de los extractos de Calea
urticifolia
peso de extracto seco/100 g de planta seca
Rendimiento del extracto etanólico: 3.46 g/100 g de
planta seca
Extracto etanólico
Aspecto ceroso
• Las ratas fueron sometidas a la
adaptación del ciclo luz-
obscuridad de 12 h
• Capacitación en la
manipulación y el cuidado de
animales de laboratorio.
• Entrenamiento en las
condiciones quirúrgicas sin
dañar el músculo del animal.
Manejo animal
20
25 ratas hembra cepa
Wistar
10 a 12 semanas de edad
NOM-062-ZOO-1999
21
𝑨𝒓𝒆𝒂 𝒊𝒏𝒊𝒄𝒊𝒂𝒍 −𝑨𝒓𝒆𝒂 (𝒅í𝒂 𝒙)
𝑨𝒓𝒆𝒂 𝒊𝒏𝒊𝒄𝒊𝒂𝒍𝒙 𝟏𝟎𝟎
• Objetivo específico 1. Efecto cicatrizante del
extracto vegetal, mediante la disminución del
área de incisión quirúrgica del dorso de la rata.
% de contracción de la
herida (n=5)=
Herida Cicatrización
20 días
Aplicación de tratamientos
Día 0
Extracción muestra de sangre
Día 4 Día 8 Día 12 Día 16
Día 5 Día 10 Día 15
22
Elaboración del Excipiente (gel) y preparación de los tratamientos
a) b) c) d)
Tratamientos empleados; a) Dosis alta, b)
Dosis baja, c) Excipiente (gel) y d)
Fármaco de referencia (Brosín).
Suspensión coloidal
de Carbopol (2.5 g en
500 ml de agua
desionizada).
Trietanolamina (5
ml) Gel
Dosis baja: gel con
7.95 mg de extracto
etanólico/kg de peso
Dosis alta: gel con
15.9 mg de extracto
etanólico/kg de peso
dosis referida al doble
del uso tradicional;
Guzmán y
colaboradores 2010
Control. Solución salina al 0.9%
Excipiente. Gel sin extracto etanólico.
Fármaco de referencia. Brosín.
Dosis baja. Gel con 7.95 mg de extracto etanólico/kg
de peso (dosis referida al doble del uso tradicional;
Guzmán y colaboradores 2010).
Dosis alta. Gel con 15.9 mg de extracto etanólico/kg
de peso (el doble de la dosis baja).
Tratamientos
23
http://www.mendozapetshop.com/mascotas/ratitas-de-laboratorio/
24
Fármaco de Referencia Brosín
Sulfato de
NeomicinaAntibiótico
Vitamina AIncrementa la síntesis de
colágeno
Acetato de
PrednisolonaAntiinflamatorio
Clorhidrato de
TetraciclinaAntibiótico
http://www.veterimaster.com/producto.php?Id=147
Inducción de la herida
Remoción
quirúrgicamente del
parche de piel del dorso
de la rata de 1.5 x 1.0 cm.
25
1.5 𝑐𝑚2
https://www.emaze.com/@AOOLCRZR/aprendizaje-y-memoria
http://scielo.isciii.es/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0376-78922012000200007
Rasurado
eléctrico (24 h
antes)
limpieza
séptica con
etanol 90%.
Pentobarbital
dosis
(80mg/kg), vía
intraperitoneal
.
https://es.slideshare.net/manuelgug/inoculacin-en-animales-va-intraperitoneal-subcutnea-e-intracutnea
Remoción quirúrgica de piel
Porcentaje de contracción =𝐴𝑟𝑒𝑎 𝑖𝑛𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙 −𝐴𝑟𝑒𝑎 (𝑑í𝑎 𝑥)
𝐴𝑟𝑒𝑎 𝑖𝑛𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙𝑥 100
(Sana et al.2016).
Medición del área de la herida
26
https://www.emaze.com/@AOOLCRZR/aprendizaje-y-memoria
ImageJ
Resultados
27
28
0
20
40
60
80
100
120
0 4 8 12 16 20
Po
rce
nta
je d
e c
on
trac
ció
n d
e la
he
rid
a (%
)
Tiempo (días)
CONTROL
EXCIPIENTE
REFERENCIA
DOSIS BAJA
DOSIS ALTA
% DE CONTRACCIÓN A LOS 20 DÍAS
29
99.62 99.42
89.04
97.39
98.38
82.00
84.00
86.00
88.00
90.00
92.00
94.00
96.00
98.00
100.00
102.00
CONTROL EXCIPIENTE REFERENCIA DOSIS BAJA DOSIS ALTA
Tratamientos
Co
ntr
ac
ció
n d
e la
he
rid
a (
%)
Biomarcadores biológicos
Valoración del efecto
cicatrizante de Calea urticifolia
30
https://biologyblogg.wordpress.com/tag/elisa/
310
500
1000
1500
2000
2500
3000
3500
4000
Día 0 Día 5 Día 10 Día 20
Co
nce
ntr
ació
n [
pg/
mL]
Tiempo
TNF-α
CONTROL
EXCIPIENTE
REFERENCIA
DOSIS BAJA
DOSIS ALTA
* * *
*
* P> 0.05
320
200
400
600
800
1000
1200
1400
Día 0 Día 5 Día 10 Día 20
Co
nce
ntr
ació
n [
pg/
mL]
Tiempo
VEGF
CONTROL
EXCIPIENTE
DOSIS ALTA
DOSIS BAJA
REFERENCIA
* P> 0.05
*
* * **
*
*
*
* *
*
*
*
El extracto etanólico de Calea urticifolia (Mill.) DC.,
mediante la medición del área de la incisión dorsal
quirúrgica favorece el proceso de cicatrización de
forma superficial.
Con este mismo efecto se corroboro a nivel molecular a
través de la cuantificación de los biomarcadores :
Concentraciones bajas de TNF-α y concentraciones
altas VEGF.
La dosis baja de 7.95 mg/kg del extracto etanólico de
Calea urticifolia (Mill.) DC, favorece de mejor manera el
proceso de cicatrización tanto de forma superficial
como interna a través de los biomarcadores.
Conclusiones
33
Cronograma de actividades
Enero – Mayo 2018
39
Actividad Enero Febrero Marzo Abril Mayo
Semana 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4
Análisis de
ELISA
(VEGF)
Realización
del análisis
estadístico
Comparación
de resultados
Elaboración
del un
articulo
científico
Presentación
40
Referencias
Albuquerque S. P.; A. Terezinha de Rocha A., A. P. Fernandes B.; X. de Araújo-Júnior; I. Martins Leite L., y M. L. de Assis B.
(2014). Evaluación del extracto de la Zeyheria tuberculosa. Rev. Latino-Am. Enfermagem, 22 (1), 165 – 72.
Almaguer, G.J.A.; Vargas, V. y García, R.H. (2014).Interculturalidad en Salud: Experiencias y aportes para el fortalecimiento
de los servicios de salud. Biblioteca mexicana del conocimiento. Disponible en:
http://www.dgplades.salud.gob.mx/Contenidos/Documentos/MedicinaTradicional/InterculturalidadSalud.pdf.
Almeida Neves, A. L.; M. Chinali Komesu y M. A. Sala Di Matteo (2010). Effects of Green Tea Use on Wound Healing. Int. J.
Morphol. 28 (3): 905 – 910.
Biblioteca Digital de la Medicina Tradicional Mexicana. 2013. Disponible en:
http://www.medicinatradicionalmexicana.unam.mx/index.php.
Bouwstra JA, Ponec M. 2006. The skin barrier in healthy and diseased state. Biochim Biophys. Acta 1758: 2080-2095.
Bullard KM, Longaker MT, Lorenz HP. 2004. Fetal wound healing: current biology. World J Surg 2003;27:54–61. 17 Redd MJ,
Cooper L, Wood W, Stramer B, Martin P: Wound healing and inflammation: embryos reveal the way to perfect repair. Philos
Trans R Soc Lond B Biol Sci. 359:777–784.
Dardour JC. 2012. New anatomo clinic approach of adipose tissue. Ann Chir Plast Esthet. 57(5):454 - 464.
DiPietro LA, Polverini PJ. 1993. Role of the macrophage in the positive and negative regulation of wound neovascularization.
Behring Inst Mitt. 92:238–247.
Eming SA, Krieg T, Davidson JM. 2007. Inflammation in wound repair: molecular and cellular mechanisms. J Invest Dermatol.
127:514–525.
Gamboa, A.M.M.; Alejo, J.C.; Medina, B.I.L.; Chí, R.F.; Méndez, G.R.; Simá, P.P. and May, P.F. (2008). Antifungal properties of
selected plants from the Yucatán Península, México. World J Microbiol Biotechnol. 24: 1955-1959.
41
Referencias
Martin P, Nunan R. 2015. Cellular and molecular mechanisms of repair in acute and chronic wound healing. Br J Dermatol.
173(2):370-378.
Matsuura, N.; Yamada, M.; Suzuki, H.; Hasegawa, N.; Kurosaka, C.; Ubukata, M.; Tanaka, T. and Linuma, M. (2005).
Inhibition of preadipocyte differentiation by germacranolides from Calea urticifolia in 3T3-L1 cells. Biosci Biotechnol
Biochem. 69(12):2470-4.
Nakagawa, Y.; Linuma, M.; Matsuura, N.; Yi, K.; Naoi, M.; Nakayama, T.; Nozawa, Y. and Akao, Y. (2005). A potent
apoptosis-inducing activity of a sesquiterpene lactone, arucanolide, in HL60 cells: a crucial role of apoptosis-inducing
factor. J Pharmacol Sci. 97(2):242-52.
Robson MC, Steed DL, Franz MG. 2001. Wound healing: biologic features and approaches to maximize healing
trajectories. Curr Probl Surg. 38:72–140.
Rodriguez A.; E. Bustamante. 2014. Productividad de una clínica de heridas modelo del sector salud de México. VII
Congreso Iberolatinoamericano de heridas por presióny heridas crónicas, I congreso de argentino de heridas; Noviembre
2014. Tucumán Argentina
Sana Bardaa, Nihed Ben H., Fatma Aloui, Riadh Ben M., Hazem Jabeur, Mohamed Bouaziz y Zouheir Sahnoun (2016). Oil
from pumpkin (Cucurbita pepo L.) seeds: evaluation of its functional properties on wound healing in rats. Lipids in Health
and Disease, 15 (1), 15 –73. doi: 10.1186/s12944-016-0237-0
Shwayder T, Akland T. 2005. Neonatal skin barrier: structure, function, and disorders. Dermatol Ther. 18: 87-103.
Torres, R.M.L.; García, Ch.E.; Aradillas, G.C.J. y Cubillas, T.A.C. (2015). Evaluación tóxica (in vivo) y biológica (in vitro) del
extracto acuoso liofilizado de Calea urticifolia (MILL) DC. Tesis de doctorado. Programa Multidisciplinario de Posgrado en
Ciencias Ambientales, UASLP. San Luis Potosí, SLP, México. 90p.42
43
Análisis estadístico
Concentraciones de TNF-α
VEGF
Análisis de normalidad de
varianzas
Análisis de post hoc
Contracción de la herida
(áreas)
Análisis de varianza (ANOVA)
Comparación múltiple de
medías
SAS (Statistical Analysis
System) V8, Copyright SAS
Institute Inc. 1999.