Revista Mexicana de Fitopatología

ISSN: 0185-3309

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Sociedad Mexicana de Fitopatología, A.C.

México

Gutiérrez Alonso, Omar; Gutiérrez Alonso, Juan Gabriel

Evaluación de Resistencia a Benomil, Thiabendazol y Azoxystrobin para el Control de Antracnosis

(Colletotrichum gloeosporioides Penz.) en Frutos de Guayaba (Psidium guajava L.) en Postcosecha

Revista Mexicana de Fitopatología, vol. 21, núm. 2, julio-diciembre, 2003, pp. 228-232

Sociedad Mexicana de Fitopatología, A.C.

Texcoco, México

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Evaluación de Resistencia a Benomil, Thiabendazol yAzoxystrobin para el Control de Antracnosis [Colletotrichum

gloeosporioides (Penz.) Penz. and Sacc.] en Frutos de Guayaba(Psidium guajava L.) en Postcosecha

Omar Gutiérrez-Alonso, INIFAP, Campo Experimental Uxmal, Apdo. Postal Sucursal4-50, Av. Pérez Ponce s/n, Mérida, Yucatán, México CP 97101; y Juan Gabriel Gutiérrez-Alonso, SEMINIS Veg Seeds Mexicana, S. de R.L. de C.V., Rancho El Refugio, 1ª Fracc.Apdo. Postal 16, Apaseo el Grande, Guanajuato, México CP 38160. Correspondencia:zadiky@hotmail.com

Gutiérrez-Alonso, O., y Gutiérrez-Alonso, J.G. 2003.Evaluación de resistencia a benomil, thiabendazol yazoxystrobin para el control de antracnosis (Colletotrichumgloeosporioides Penz.) en frutos de guayaba (Psidiumguajava L.) en postcosecha. Revista Mexicana deFitopatología 21:228-232.Resumen. Se evaluó la resistencia a benomil, thiabendazoly azoxystrobin en seis aislamientos de Colletotrichumgloeosporioides obtenidos de frutos de guayaba conantracnosis colectados en Zitácuaro, Michoacán, México. Losfungicidas se adicionaron al medio de cultivo papa-dextrosa-agar a razón de 0.1, 1, 5, 10, 50 y 100 ppm para estimar ladosis letal media (DL50) mediante un análisis Probit, y serealizaron pruebas de efectividad para el control deantracnosis en frutos en postcosecha. La mayoría de losaislamientos fueron sensibles a benomil y thiabendazol apartir de 0.1 ppm, excepto los aislamientos Co-6 y Co-7, yaque a esa concentración presentaron 90 y 70% de inhibiciónen benomil, respectivamente, y 6% en thiabendazol para elcaso de Co-7; todos los aislamientos presentaron diferenciasen el porcentaje de inhibición cuando se adicionóazoxystrobin al medio. Se determinó que aislamientos convalores de DL50 > 0.010, 1.158 y 3.246 ppm se puedenconsiderar como resistentes a benomil, thiabendazol yazoxystrobin, respectivamente; únicamente los aislamientosCo-6 y Co-7 presentaron resistencia a los tres fungicidasevaluados. En pruebas de efectividad, el azoxystrobin redujosignificativamente (p = 0.05) el síntoma de antracnosis enfrutos de guayaba.

Palabras claves adicionales: Resistencia, DL50,benzimidazoles, estrobirulinas, control químico.

Abstract. Resistance to Benomyl, Thiabendazole andAzoxystrobin was evaluated in six isolates of Colletotrichumgloeosporioides obtained from guava fruits affected withanthracnose collected in Zitacuaro, Michoacan, Mexico.

Fungicides were added to a potato-dextrose-agar culturemedium at 0.1, 1, 5, 10, 50, and 100 ppm to calculate thelethal concentration (LC50) using a Probit analysis; also, testsof effectiveness to control anthracnose in guava fruits atpostharvest were carried out. Most isolates were sensitive tobenomyl and thiabendazole at 0.1 ppm, with the exceptionof isolates Co-6 and Co-7 which showed 90 and 70%inhibition, respectively, and 6% in thiabendazole for Co-7;all isolates had differences in percent inhibition whenazoxystrobin was added to the medium. Isolates with LC50 >0.010, 1.158, and 3.246 ppm can be considered as resistantto benomyl, thiabendazole and azoxystrobin, respectively;only isolates Co-6 and Co-7 were resistant to the threefungicides. Azoxystrobin reduced significantly (p = 0.05)anthracnose symptoms in guava fruits in effectiveness tests.

Additional keywords: Resistance, LC50, benzimidazolecompounds, strobirulins, chemical control.

Los fungicidas son importantes para el manejo deenfermedades en cultivos agrícolas; para que sean efectivosdeben aplicarse antes de que se haya establecido una infecciónexitosa y en cantidad suficiente para lograr una coberturaadecuada de la planta u órgano afectado; sin embargo, laprotección que ofrecen es temporal debido a que están sujetosa efectos del medio ambiente (Brent y Hollomon, 1998). Elescaso control que en ocasiones ofrecen los fungicidas sepuede deber a baja efectividad del producto, método deaplicación y tiempo inadecuado, condiciones ambientales yresistencia del patógeno al fungicida. Entender qué es laresistencia, cómo se desarrolla y cómo puede manejarse sonaspectos cruciales para un manejo de la enfermedad seguro ysustentable (Damicone, 2000). Colletotrichumgloeosporioides (Penz.) Penz. and Sacc. causa pudricionesen postcosecha en varios frutales tropicales como mango(Mangifera indica L.), aguacate (Persea americana Mill.),papaya (Carica papaya L.), y guayaba (Psidium guajava),

(Recibido: Julio 31, 2002 Aceptado: Noviembre 4, 2002)

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debido a que induce infecciones quiescentes durante eldesarrollo de frutos (Jeffries et al., 1990; Gutiérrez-Alonsoet al., 2002); además, posee una gran capacidad de adaptacióny variabilidad (Alahakoon et al., 1992), por lo que laresistencia a fungicidas es un peligro latente, especialmentecuando la estrategia de control ha sido el uso intensivo deproductos con mecanismos de acción monositio (Dekker,1977; Delp, 1980). En México, el control químico de laantracnosis en mango se ha basado en el uso de fungicidasbenzimidazoles (Vega, 1994; Becerra-Leor, 1995), lo cualprovocó que la presión de selección sobre C. gloeosporioidesfuera mayor, contribuyendo a la expresión de resistencia(Dekker, 1977; Delp, 1980); en el caso de guayaba sedesconoce este aspecto. El Azoxystrobin es un productoreciente en el mercado, que ha mostrado un control eficientede varias enfermedades como Mycosphaerella fijiensisMorelet en plátano (Musa acuminata Colla) (Miravete et al.,1999), antracnosis (Colletotrichum acutatum J.H. Simmonds)en limón mexicano [Citrus limon (L.) N.L. Burm.] (Álvarez,1999), Pseudoperonospora cubensis (Berk. and M.A. Curtis)Rostovzev y Erysiphe cichoracearum D.C. en pepino(Cucumis sativus L.) (Huerta, 1999), por lo que representauna alternativa para el control de patógenos postcosecha. Lapresente investigación se diseñó para detectar la existenciade aislamientos de C. gloeosporioides, obtenidos de frutosde guayaba, con resistencia a benomil, thiabendazol yazoxystrobin, y para evaluar su efectividad en el control dela antracnosis en guayaba en postcosecha bajo condicionesde laboratorio.Se emplearon seis aislamientos de C. gloeosporioidesobtenidos de frutos de guayaba en un huerto comercial deZitácuaro, Michoacán, México, previamente identificados ycaracterizados (Gutiérrez-Alonso et al., 2002). Se tomarondiscos de 5 mm de diámetro con medio de cultivo y miceliode cada aislamiento y se colocaron en cajas de petri con mediode cultivo papa-dextrosa-agar (PDA) adicionado con benomil,thiabendazol y azoxystrobin a dosis de 0.1, 1.0, 5.0, 10.0,50.0 y 100.0 ppm, y un testigo sin fungicida. De cadaaislamiento se colocaron cinco cajas por fungicida porconcentración, y se incubaron a 24 ± 2°C y luz fluorescentecontinua. Siete días después se midió el diámetro de la coloniadel hongo. El porcentaje de inhibición del crecimiento delmicelio se estimó mediante la fórmula de Abbott (1925), ylos resultados se sometieron a un análisis Probit para laestimación de la dosis letal media (DL50) en SAS®. Laefectividad de los fungicidas in vivo se estimó con la fórmulade Abbott sobre frutos de guayaba en estado de madurezfisiológica, los cuales previamente se desinfestaron conhipoclorito de sodio al 3% durante 2 min, se dejaron secar yse les hizo una herida de 5 mm de profundidad con aguja dedisección estéril. Previamente, se preparó una suspensión deconidios (1 x 105/mL) del aislamiento Co-1 de C.gloeosporioides, debido a que éste indujo el síntoma típicode antracnosis y presentó el mayor crecimiento de micelio a20 y 28°C (Gutiérrez-Alonso et al., 2002), que se asperjó

sobre la herida. Se inocularon 50 frutos y cada uno seconsideró como una repetición. Los frutos inoculados semantuvieron en cámara húmeda a temperatura ambiente (24± 2°C) durante 24 h; después, se sumergieron en las solucionesde los fungicidas a una concentración de 500 ppm, durante 5min. Se estableció un testigo absoluto sin inoculación y unoinoculado con la cepa mencionada. Posteriormente, los frutosse dejaron secar y se mantuvieron en cámara húmeda atemperatura ambiente (24 ± 2°C) durante 12 días; al cabo deeste período se evaluó la severidad del síntoma con base enel diámetro de la lesión; C. gloesporioides induce lesionesoscuras circulares (Gutiérrez-Alonso et al., 2002). Losresultados se sometieron a un análisis de varianza ycomparación múltiple de medias de Tukey (p = 0.05) enSAS®.La mayoría de los aislamientos fueron sensibles a losfungicidas benzimidazoles, debido a que mostraron 100%de inhibición del crecimiento a 0.1 ppm de benomil ythiabendazol; excepto los aislamientos Co-6 y Co-7, ya quea esa misma concentración expresaron 90 y 70% en benomily 6% de inhibición en thiabendazol (Fig. 1B y C). Todos losaislamientos presentaron diferencias en el porcentaje deinhibición cuando se adicionó azoxystrobin al medio decultivo, debido a que las cepas Co-1 y Co-5 mostraron 100%de inhibición del crecimiento, desde 5 hasta 100 ppm; Co-2y Co-3 a partir de 50 ppm; en tanto que Co-6 y Co-7presentaron 50 y 30% de inhibición a 10 ppm, y ambosterminaron en 50% de inhibición a 100 ppm (Fig. 1A). Laestimación de la dosis letal media (DL50) indicó que losaislamientos Co-1, Co-2, Co-3, Co-5 y Co-6 fueron sensiblesa la aplicación in vitro de fungicidas benzimidazoles, ya quepresentaron una DL50 de cero; mientras que la cepa Co-7manifestó menor sensibilidad, presentando valores de DL50ligeramente mayores cuando se adicionó benomil (0.0108ppm) y thiabendazol (1.158 ppm) (Cuadro 1). Losaislamientos de C. gloeosporioides presentaron variación enlos niveles de susceptibilidad a azoxystrobin; la DL50 oscilóentre 0.442 (Co-3) y 8250 ppm (Co-7) (Cuadro 1). Engeneral, los fungicidas evaluados redujeron significativamente(p = 0.05) la severidad de la antracnosis ocasionada por elaislamiento Co-1 en frutos bajo condiciones de laboratorio,con respecto al testigo inoculado. La aplicación deazoxystrobin a 500 ppm durante 5 min indujo el mejor controlcon una efectividad del 74%; mientras que la aplicación defungicidas benzimidazoles a esa misma dosis, no controlaronadecuadamente dicho síntoma y presentaron una bajaefectividad (< 38%) en postcosecha (Cuadro 2).La resistencia a fungicidas puede detectarse y medirse devarias formas, dependiendo de la combinación fungicida-patógeno; no obstante, el reconocimiento de una cepa comoresistente debe realizarse a través de la comparación con cepassensitivas al fungicida en cuestión (Georgopoulos, 1982). Conbase en este criterio, los aislamientos Co-6 y Co-7 presentaronresistencia en laboratorio a los fungicidas benzimidazolesevaluados, debido a que mostraron porcentajes de inhibición

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Cuadro 2. Efectividad de los fungicidas azoxystrobin, benomil ythiabendazole en el control de antracnosis en frutos de guayaba(Psidium guajava), inoculados con el aislamiento Co-1 deColletotrichum gloeosporioides bajo condiciones de laboratorio. Tratamiento Severidadx Eficaciay

(%)

xDiámetro de la lesión en mm.yEficacia de Abbott.zValores con la misma letra dentro de columnas son iguales deacuerdo con la prueba de Tukey (p = 0.05).

Testigo absoluto 0.00Testigo inoculado 18.41 az

Azoxystrobin (500 ppm) 4.75 c 74.19Benomil (500 ppm) 11.50 b 37.53Thiabendazole (500 ppm) 12.16 b 33.94D.M.S. 5.12C.V. 47.52

Cuadro 1. Dosis letal media (DL50) en ppm de seis aislamientos de Colletotrichum gloeosporioidesobtenidos de frutos de guayaba (Psidium guajava) con síntomas de antracnosis, y cultivados enpapa-dextrosa-agar adicionado con azoxystrobin, benomil y thiabendazole a 24 ± 2°C y luz continua.

Aislamientos de Coletotrichum gloeosporioides

Azoxystrobin 0.756 3.245 0.442 2.004 36.176 8250Benomil 0.000 0.000 0.000 0.000 0.003 0.010Thiabendazole 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 1.158

Fungicida Co-1 Co-2 Co-3 Co-5 Co-6 Co-7

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de Fitopatología y XXVI Congreso Nacional de laSociedad Mexicana de Fitopatología. Guadalajara, Jalisco.México. Resumen 47.

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