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ESTUDIO ETNOBOTÁNICO Y FITOQUIMICO DEL MOSQUERO (CROTON LEPTOSTACHYUS) ENFOCADO EN LA VALORACIÓN DE SU POTENCIAL USO
VETERINARIO
AURA LORENA TACHA ROJAS
Trabajo de grado presentado como requisito parcial para optar al título de Magister en Ciencias Pecuarias con énfasis en Ganadería Ecológica.
Director: JONH JAIRO MÉNDEZ ARTEAGA
Ph.d. QUIMICA
UNIVERSIDAD DEL TOLIMA
FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
MAESTRIA EN CIENCIAS PECUARIAS
IBAGUE
2014
2
3
AGRADECIMIENTOS
El autor expresa sus agradecimientos a:
Al doctor Jonh Jairo Méndez director del trabajo de grado, por su orientación en la
formación profesional, entrega, apoyo en la investigación, formulación y ejecución de
este proyecto.
Al grupo de investigación GIPRONUT de la Universidad del Tolima por ofrecerme su
laboratorio e instrumental de trabajo necesario en la realización de la práctica
investigativa.
Al los directivos y docentes de la institución Educativa José Miguel Montalvo de
Gigante por permitirme realizar este trabajo.
Tatiana Ortiz y Daniel Pardo por su colaboración, comprensión y apoyo en tiempos
difíciles.
A Héctor persona colaboradora y servicial que me regalo entusiasmo y ganas de
continuar
Finalmente y no por eso menos importante a Dios y a mi familia, y sobre todo a mi
Mamá; por ser siempre el sostén y polo a tierra en cada uno de mis propósitos, por
apoyarme incondicionalmente a superar todo tipo de obstáculos y disfrutar juntos la
alegría de mis logros y metas.
AURA LORENA TACHA ROJAS
4
CONTENIDO
Pág.
INTRODUCCIÓN 11
1. OBJETIVOS 13
1.1 OBJETIVO GENERAL 13
1.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS 13
2. ÁREA DE ESTUDIO 14
2.1 DELIMITACIÓN DEL ÁREA 14
2.1.1 Aspectos generales. 14
3. MARCO REFERENCIAL 16
3.1 ANTECEDENTES Y ESTADO ACTUAL DEL PROBLEMA. 16
3.2 MARCO TEORICO 20
3.2.1 La etnobotánica 20
3.2.2 Mosquero 21
3.2.3 Estudio fitoquímico 22
4. MATERIALES Y METODOS 23
4.1 MATERIALES 23
4.2 METODOLOGIA 24
4.2.1 FASE DE CAMPO 24
4.2.2 FASE DE LABORATORIO 24
4.2.2.1 Tamizaje fitoquímico 25
4.2.2.2 Actividad antimicrobiana . 25
4.2.2.3 Actividad anti-fúngica 25
4.2.2.4 Actividad anti-insecto 25
4.2.2.5 Actividad Citotóxica. 26
5
5. RESULTADOS Y DISCUSIÓN 27
5.1 FASE DE CAMPO 27
5.2 FASE DE LABORATORIO 30
5.2.1 Estudio del tamizaje fitoquímico. 30
5.2.2 Actividad antimicrobiana. 33
5.2.3 Actividad anti-insecto por contacto. 35
5.2.4 Actividad anti-insecto por repelencia 36
5.2.5 Actividad Citotóxica. 36
6. CONCLUSIONES 36
RECOMENDACIONES Y PERSPECTIVAS 37
REFERENCIAS. 38
ANEXOS 44
6
LISTA DE TABLAS
Pág.
Tabla 1. Usos Etnofarmacológicos datos de Croton leptostachyus
(mosquerillo) por la comunidad campesina de Gigante.
28
Tabla 2. Uso medicinal, parte utilizada, modo de empleo, dosificación y
frecuencia de uso del mosquerillo dada por la comunidad campesina de
Gigante-Huila.
29
Tabla 3. Metabolitos secundarios en los extractos obtenidos de Croton
leptostachyus
31
Tabla 4. Porcentajes de inhibición de los extractos de Croton
leptostachyus frente a Fusarium oxysporum y Aspergillus niger.
34
7
LISTA DE FIGURAS
Pág.
Figura 1. Mapa geográfico del Municipio de Gigante – Huila, Zonas de
muestreo.
17
Figura 2. A. Efecto inhibitorio de la tetraciclina (2000 mg/L) sobre S.
aureus, se evidencia halos de inhibición de aproximadamente 3.5 cm.
B. Efecto del extracto etanólico de hoja sobre S. aureus, no se
evidencia ningún tipo de inhibición sobre el organismo ensayado
33
Figura 3. Efecto inhibitorio del extracto de tallo sobre el crecimiento de
Fusarium oxysporum.
35
8
LISTA DE ANEXOS
Pág.
Anexo A. Encuesta Etnobotánica del mosquero - (Croton leptostachyus) 39
Anexo B. Resumen de Articulo presentado al premio nacional de
Entomología “Hernán Alcaráz Viecco” Ibagué – Tolima 2012. 40
9
RESUMEN
El presente estudio de investigación es insertada con la comunidad, para desarrollar
acciones que permitan el uso del conocimiento tradicional confrontándolo con análisis
de laboratorio que confirmen su efecto sobre la salud animal, por tal motivo se utilizó la
especie Croton leptostachyus comúnmente llamada como mosquerillo, siendo
ampliamente usada por productores en el municipio de Gigante Huila, para el
tratamiento de patologías asociadas a bacterias y hongos.
Se desarrolló en fases, primera fase de campo se realizó una encuesta para conocer
los usos etnobotánicos del mosquero dentro de la comunidad rural del municipio, en 10
veredas ubicadas entre los 0 a 1200 mnsn, sitios dispuestos para colección de material
vegetal necesario para la fase de laboratorio en la cualificación de metabolitos
secundarios y el análisis de uso seguro mediante la evaluación del efecto citotóxico, se
ejecutó el estudio bioprospectivo de la especie en función de actividad biológica in vitro
(antimicrobial, antifúngica, anti-insecto).
Los resultados mostraron que el tallo y la raíz de la planta son las estructuras que
acumulan mayor cantidad de metabolitos secundarios, además el etanol solvente más
adecuado para extraerlos y el extracto etanólico de raíz, evidenció inhibición y en
algunos casos daños de estructuras frente a Fusarium Oxysporum y Aspergillus niger,
el bajo efecto de los extractos sobre el ciclo celular de Allium cepa indica la inocuidad
sobre los organismos.
Este trabajo constituye una investigación promisoria en las capacidades bioactivas del
Croton leptostachyus, la diversidad de metabolitos secundarios, la búsqueda los usos
etnofarmacológico.
Palabras claves: Croton leptostachyus, Mosquero, Etnobotánica, Etnoveterinaria,
Tamizaje fitoquímico, bioactividad.
10
ABSTRACT
This research study is inserted with the community to develop actions to enable the use
of traditional knowledge by confronting it with laboratory analysis to confirm their effect
on animal health, for this reason the species Croton leptostachyus commonly known as
mosquerillo was used, with widely used by farmers in the town of Gigante Huila, for the
treatment of diseases associated with bacteria and fungi.
Developed in phases, the first phase of field survey for ethnobotanical uses of flycatcher
within the rural community in the municipality, in 10 villages located between 0-1200
mnsn sites arranged for collection of required plant material phase was conducted
laboratory qualification of secondary metabolites and analysis of safe use by assessing
the cytotoxic effect, the study of the species bioprospectivo executed according to
biological activity in vitro (antimicrobial, antifungal, anti-insect).
The results showed that the stem and roots of the plant are the structures that
accumulate as many secondary metabolites, in addition to extracting the most
appropriate solvent ethanol and the ethanolic root extract, showed inhibition and in
some cases structural damages against Fusarium oxysporum and Aspergillus niger,
under the effect of the extracts on cell cycle indicates safety Allium cepa on organisms.
This work constitutes a promising research in Croton leptostachyus bioactive
capabilities, diversity of secondary metabolites, search the ethnopharmacological uses.
Keywords: Croton leptostachyus, Flycatcher, Ethnobotany, ethnoveterinary,
phytochemical screening, bioactivity.
11
INTRODUCCIÓN
El uso de plantas medicinales constituye una parte importante de la medicina y la
etnoveterinaria, estas ofrecen un gran potencial para el desarrollo sostenible y
proporcionan a bajo costo alternativas para el tratamiento de múltiples patologías;
Pakistán, China y la India son los países con mayores usuarios de los medicamentos a
base de plantas, sus tradiciones en el uso de sustancias vegetales se remontan por lo
menos a 7000 años A.C. (Iqbal Z. et al., 2005).
El punto de partida consiste en considerar que el acervo cultural de las comunidades es
de gran valor, no sólo para el patrimonio cultural de la región, sino también para la
consolidación del saber científico en Medicina Veterinaria.
Comúnmente los estudios etnobotánicos suelen centrarse en los grupos humanos cuya
relación con la naturaleza es más directa. Los estudios más representativos están
dados en el conocimiento de los saberes indígenas y de las culturas rurales, (Pardo &
Gómez 2003); El municipio de Gigante-Huila, es un lugar que sigue manteniendo sus
tradiciones, costumbres y conocimientos sobre el uso de sus recursos florísticos, sin
embargo dichas prácticas se están viendo afectadas debido a que las nuevas
generaciones empiezan a adoptar costumbres ajenas al lugar y sobre todo al
despoblamiento rural y los cambios socioculturales que impide la transmisión oral de
estos conocimientos, perdiéndose así gran parte de este rico patrimonio, dejando de
lado el legado de nuestros antepasados.
Actualmente existen diferentes formas de clasificación, diagnostico, prevención y
tratamiento común de enfermedades en los animales, sin embargo, se evidencia con
preocupación, que muchos de los mecanismos de control actuales no son eficientes
frente a los patógenos, de ahí el aumento de la resistencia bacteriana a los antibióticos,
parásitos a los ixiodicidas , entre otros; convirtiéndose en un problema para la industria
animal cada día más generalizado, por tanto el desarrollo de nuevos antisépticos y
12
agentes antimicrobianos para el tratamiento de infecciones es de interés creciente
(Weckesser S. et al., 2007), lo cual ha propiciado la búsqueda de métodos alternativos
de control de estos, tales como la selección de razas resistentes, uso de vacunas,
control biológico y extractos de plantas (Rodríguez-Vivas et al., 2005).
Por lo mencionado anteriormente, se está retornando al uso de las plantas como fuente
de compuestos bioactivos más seguros para el medio ambiente, animales y la salud
humana. Sin lugar a dudas los insecticidas naturales a partir de extractos vegetales
constituyen una muy interesante alternativa de control de insectos, sumado a esto sólo
se han evaluado muy pocas plantas en relación a la fuente natural que ofrece el
planeta, por lo que las perspectivas futuras en cuanto a investigación, son aún mayores
(Mansaray, 2000; Ottaway, 2001).
El presente estudio pretendió, mediante una dinámica de investigación insertada en la
comunidad, desarrollar acciones que permitan el uso del conocimiento tradicional
confrontándolo con análisis de laboratorio que confirmen su efecto sobre la salud
animal, por tal motivo se eligió la especie Croton leptostachyus comúnmente llamada
como mosquerillo, siendo esta especie ampliamente usada por pequeños productores
en el municipio de Gigante en el tratamiento de patologías asociadas a bacterias y
hongos.
Para el logro de los objetivos se define un enfoque metodológico y una presentación de
las categorías centrales de la discusión de los resultados, en los cuales se logran
identificar conocimientos tradicionales, reconfirmados en el estudio bioprospectivo de
la especie (Croton leptostachyus) en función de su actividad biológica in vitro
(antimicrobial, antifúngica, anti-insecto), cualificación de metabolitos secundarios y el
análisis de su uso seguro mediante la evaluación del efecto citotóxico. Finalmente se
identifican los aportes brindados por el trabajo al conocimiento científico y se definen
líneas de acción para estudios posteriores.
13
1. OBJETIVOS
1.1 OBJETIVO GENERAL
Realizar un análisis Etnobotánico y bioprospectivo de la especie Croton leptostachyus
en función de su actividad biológica, con el fin de establecer su potencial uso en
aplicaciones veterinarias.
1.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS
Recolectar información sobre los usos etnobotánicos de. C. leptostachyus.
Realizar el tamizaje fitoquímico de la Euphorbiacea (C. leptostachyus).
Medir la capacidad bioactiva con ensayos in vitro (antimicrobial, antifúngica y
anti-insecto).
Determinar el uso seguro de la planta mediante la evaluación del posible efecto
citotóxico usando el modelo biológico Alium cepa.
14
2. ÁREA DE ESTUDIO
2.1 DELIMITACIÓN DEL ÁREA
2.1.1 Aspectos generales. La recolección de la información etnobotánica y de la
muestra vegetal, se realizó en el municipio de Gigante, perteneciente a la región andina
de nuestro país; de la subregión centro en el departamento del Huila. Posición
Astronómica: Latitud norte 2º 23´23´´ y una Longitud de 75º 33´ al Oeste del Meridiano
de Greenwich, Topográficamente la cabecera municipal se encuentra a una altura de
840 msnm; su altura mayor se ubica a 3200 msnm en el cerro de Miraflores de la
cordillera oriental y su menor altura se ubica a 600 msnm en la desembocadura de la
Quebrada Las Vueltas, se encuentra a una distancia de 84 Km de la ciudad de Neiva,
Según el PIU (2009).
El municipio de Gigante cuenta con aproximadamente 28.174 habitantes según censo
del DANE, 2005, de los cuales 13.857 habitan en la zona rural (POT, 2005), estos
últimos se encuentran distribuidos en 5 corregimientos y 50 veredas. Esta investigación
se llevó a cabo contando con la participación activa de la comunidad, con tal propósito
se escogieron 10 veredas que se encuentran comprendidas en las altitudes donde
crece la planta que oscilan entre los 0 a los1200 msnm, las cuales fueron: La Gran vía,
El tendido, Vueltas Arriba, La Guandinosa, El rodeo, El mesón, Rio Loro, Matambo,
Pueblo Nuevo (ver figura 1) , de la población rural de estas veredas se procedió a
diligenciar la ficha de encuesta etnobotánica basada en el modelo ofrecido por el
programa TRAMIL de Germonsén – Robineau (1995), y unas fichas etnobotánicas
basadas en el estudio realizado por Gil, Mejía, Carmona & Rodríguez (2003). ANEXOS
1 y 2.
15
Figura 1. Mapa geográfico del Municipio de Gigante – Huila, Zonas de muestreo.
Fuente: tomado de la página web: www.gigante-huila.gov.co.
16
3. MARCO REFERENCIAL
3.1 ANTECEDENTES Y ESTADO ACTUAL DEL PROBLEMA.
La investigación sobre el uso de plantas medicinales forma parte de la etnoveterinaria,
que ha sido definida como el estudio de las relaciones entre el hombre, animales y las
plantas (Yepes, 2004), generando conocimientos que contribuyen al fortalecimiento de
una conciencia de protección y conservación de nuestra riqueza biológica y cultural,
sobre todo cuando la selección de plantas se utilizan para fines farmacológico.
Múltiples familias vegetales han sido usadas por la etnoveterinaria en el tratamiento de
patologías, entre las más representativas se encuentra la familia Euphorbiaceae con
más de 300 géneros y 5000 especies, ubicándose la mayoría de ellas en América y
África tropical. El rango de variación morfológica de la familia es enorme y por lo tanto
difícil de caracterizar, entre la familia Euphorbiaceae, el género Croton según Bittner y
colaboradores (2001), se sitúa como uno de los más estudiados debido principalmente
a las posibilidades terapéuticas que han podido ser identificadas en estas plantas entre
las que se encuentran: tratamiento de próstata, congestión nasal, fiebre, reumatismo,
dolores de estómago, enfermedades asociadas a hongos y bacterias, entre otras.
El género Croton ha sido también motivo de diversos estudios fitoquímicos, entre las
especies estudiadas se encuentra C. lechleri, árbol de cuya corteza se extrae un látex
viscoso de color rojo denominado sangre de grado o de drago, es usado en la
amazonia peruana como agente cicatrizante, el cual ha sido validado mediante
evaluaciones preclínicas en piel de animales de experimentación mostrando
propiedades regenerativa en tejido epitelial (Ayala et al., 2010), otras investigaciones
realizadas en esta especie reportan efectos sobre el tratamiento del cáncer (Pieters,
1992), inflamaciones (Cai, 1993) como cicatrizante de cortes, heridas y en
hemorragias, antiinflamatorio en afecciones bucales de la garganta, gastritis, úlceras
uterinas y se le usa para lavados vaginales (flujos e inflamaciones) (Meza, 1999).
17
C. palanostigma y C. draconoides presentan actividades citotóxica "in vitro" e "in vivo"
(Itokaw et al., 1991), varias de estas especies se utilizan en África como fuente de
veneno para la caza y la pesca, ya que producen un látex del cual se extrae un raro
alcaloide llamado "taspina" que acelera la curación de heridas. La resina, además
contiene metabolitos antitumorales como la piridona, indol aporfina, quinoleina,
tropanos, ácidos grasos insaturados, antraquinonas y triterpenos (Castro, Jakupovic y
Murillo, 2004).
Croton tiglium es ampliamente utilizado para el tratamiento de trastornos
gastrointestinales, en estudios previos han establecido sus propiedades como purgante
y antinflamatorias, en este Crotón los principales componentes son los monoterpenos y
sesquiterpenos (Wang, et al., 2008).
Por otra parte Croton cajucara conocido como "Sacaca", distribuido ampliamente en la
Región amazónica del norte de Brasil, tiene un historial de uso seguro en la medicina
popular, en la investigación realizada por Maciel en 1998, se encontraron varios
diterpenos con núcleo del clerodano que poseen propiedades antialimentaria en
insectos, antimicrobial, antiviral, antiulcerosa, y/o antitumoral.
El Croton hovarum es un árbol tóxico endémico de Madagascar, de la corteza de este
Croton se aíslan varios tipos de terpenos, presentes en el aceite esencial, en los cuales
se reportan actividades biológicas que van desde actividades antibacterianas hasta
actividades contra el cáncer (Siqueira et al., 2006; Simionatto, et al., 2007; Sylvestre, et
al., 2006 & Van Vuuren & Viljoen, 2008).
Investigaciones realizadas por Camura - Vasconcelos & colaboradores (2007) sobre los
aceites esenciales del Croton zehntneri y Lippia sidoides demostraron actividades
antihelmínticas contra los nematodos gastrointestinales de ovinos y caprinos.
18
Croton flavens ha sido usada para tratar problemas a la próstata, congestión nasal,
fiebre, reumatismo, dolores de estómago, enfermedades de la piel, sífilis y neumonía.
También se utiliza como expectorante y en el tratamiento de heridas. Tal variedad de
propiedades farmacológicas se atribuye, entre otras cosas, a la presencia de alcaloides
(Hecker, 1968)
En el estudio de Gurgel L. & otros (2005) estableció la actividad antifúngica in vitro
contra dermatofitos con extractos del genero Croton urucurana, en la corteza se
encontró una inhibición en la zona amplia a concentraciones inhibitorias mínimas.
C. draco (Murillo et al. 2001) y C. jimenezii (Murillo & Jakupovic 2000) se han aislado
una serie de diterpenos, con estructuras muy singulares para especies de la familia
Euphorbiaceae y Asteraceae. Aunque en muchas de las investigaciones presentadas
para estas especies no se registra un estudio de actividad biológica, se hace
interesante el análisis sistemático, pues se ha comprobado la actividad promotora de
tumores para compuestos derivados de este género, tal es el caso de esteres de fórbol
aislados de C. flavens (Hecker, 1984).
Muchas especies amazónicas de Croton, como C. draco, C. zenhtneri, C. epetaefolius,
C. argyrophylloides, C. urucurana, C. cajucara y C. flavens, en los que se han extraído
aceites esenciales y determinados los compuestos como terpenos y diterpenos, donde
han detectado la presencia de inusuales metabolitos secundarios, que puede justificar
el interés de los investigadores hacia Croton spp. (Rossi, D. et al., 2011).
Como las investigaciones mencionadas anteriormente existen muchas más a nivel
mundial de las diferentes especies de Croton; pero de una manera específica se
reporta de la planta Croton leptostachyus (parte aérea), utilizada junto con otras plantas
en el tratamiento de la malaria, estudio realizado en Colombia por la universidad
Nacional; extracto etanólicos de Croton leptostachyus estudiado en ensayos in vitro
sobre Plasmodium falciparum y en la prueba de FBIT, reporta toxicidad en ratones
usados como modelo (Garavito et al., 2006).
19
Por su parte el estudio de Correa y colaboradores (2009) en Colombia, describe la
actividad antifúngica de manera in vitro sobre Cándida krusei y Aspergillus fumigatus y
el efecto citotóxico en células de vero, de los aceites esenciales y extractos de plantas
medicinales y aromáticas, donde tomaron varias plantas, entre estas el Croton
leptostachyus.
En el estudio de Canizales (2010) en fincas ganaderas del alto magdalena el
departamento del Tolima, se realizó una identificación y reconocimiento en la
diversidad y uso de arvenses en pasturas ganaderas, entre las arvenses encontradas
cabe resaltar que se encontró el croton leptostachyus resistente al verano, invierno y se
le atribuye uso medicinal (Mora & Acosta, 2001; Soto & Águila, 2006 & Esquivel 1999).
Cabe anotar que existen diversos reportes acerca de plantas usadas como repelentes
contra ectoparásitos, obtenidos por procesos simples de maceración y fermentación,
ejerciendo un buen control de las infestaciones; estos extractos son obtenidos de
algunas plantas en los estudios realizados de acaricidas para la garrapata
Rhipicephalus boophilus (Rosado et al., 2010), en la actividad acaricida de extractos de
tallo Petiveria alliacea (Phytolaccaceae) comúnmente llamado anamú, en larvas y
adultos encontrando en los extractos metanólicos compuestos como el benzyltrisulfide
(BTS) y benzyldisulfide (BDS); de igual modo Castro & compañia (2011) estudio la
Palicourea marcgravii encontrando en el extracto efectos ixiodicidas.
Como puede apreciarse en la literatura, la presencia de compuestos interesantes en la
especie del genero Croton ha motivado el estudio fitoquímicos y la capacidad
bioactivos de planta Croton leptostachyus, contrastarlo con el saber popular en la
comunidad de Gigante Huila, siendo esta ampliamente distribuida en las diferentes
zonas del país.
20
3.2 MARCO TEORICO
3.2.1 La etnobotánica. Derivada del griego Etnos que significa pueblo o raza y botáne
que significa hierba, en este orden de ideas, en el 2004, Yepes, define la etnobotánica
como “el estudio de las relaciones que existen entre el hombre y su ambiente vegetal o
animal, es decir las plantas que lo rodean”.
Esta disciplina se ocupa de definir el papel de los vegetales en la sociedad humana;
estudia la interacción de los grupos humanos con las plantas, su uso para fabricar
instrumentos, herramientas, vestuario, vivienda, alimento y además en la cura de
enfermedades (Yepes, 2004).
La etnobotánica ha adquirido especial relevancia en las dos últimas décadas debido a
la creciente pérdida del conocimiento tradicional de las sociedades nativas y de la
degradación de hábitats naturales (Caniago & Siebet 1998), es indispensable entonces,
hacer esfuerzos para evitar esta pérdida, no solo para preservar la herencia cultural,
sino también para registrar la información sobre ciertas especies útiles, que podrían ser
relevantes para el desarrollo de nuevas fuentes de medicamentos y de otros beneficios
para la humanidad, contribuyendo, al mismo tiempo a proteger la biodiversidad
(Akerele, 1993; Katewa, et al., 2004). Es clave entonces no solo dirigir el estudio en
comunidades nativas sino incluir a todo tipo de grupos humanos sin importar su origen
(Hernández, M. et al., 2009).
3.2.2 Mosquero. Respecto a la familia Euphorbiacea, a nivel mundial cuenta con 8000
especies de distribución pantropical, agrupadas en 317 géneros según Webster (1994)
y representada en Colombia por 78 géneros, 390 especies, 12 subespecies y 9
variedades; de los cuales el género más diverso y endémico es Croton con 80
especies, ampliamente distribuidas en todas las regiones naturales de Colombia, el
mayor número de especies se encuentra en la región andina, 210 spp (Murillo, 2004),
la gran mayoría de estas plantas presenta látex, son plantas monoicas y se
21
caracterizan por inflorescencias en las que la unidad básica es el ciatio que consta de 5
brácteas y 4 - 5 nectarios entorno a 5 flores masculinas reducidas a 1 estambre y una
flor femenina central con gineceo tricarpelar.
La familia es de gran importancia económica (Murillo A. 2004) algunas especies se
obtienen productos industriales, alimentos, sustancias con propiedades medicinales y
varias son ornamentales; el género croton según Murillo (1999), poseen alta gama de
alcaloides activos, terpenos y otros compuestos químicos, presentan propiedades
medicinales, industriales, tóxicas, carcinógenas y varias de estas especies son
conocidas como plantas medicinales usadas como purgantes y tóxicos.
Del mosquero o mosquerillo (Croton leptostachyus H.B.K), los primeros investigadores
que la apartaron taxonómicamente Humboldt, Bompland, Kunth (H.B.K); es una planta
sufruticosa, semiarbustiva catalogada como maleza de distribución, sobre todo tropical,
aunque también está bien representada en regiones templadas entre los 0 -1200
msnm, Árbol o arbusto, 4-10 m de altura; monoico; indumento de tricomas estrellados,
grisáceos o ferrugíneos. Estípulas 3-6 x 0,2-0,4 mm, lineares, cubiertas por tricomas
estrellados. Hojas 7-30 x 3-15 cm, Lámina foliar lanceolada a elíptica, ápice acuminado,
base aguda a redondeada, margen subentero o con pocos dientes, el haz
diminutamente pustulado, flores en fascículos, descripción dada por el Dr. Esquivel,
(2010).
Según en el estudio de impacto ambiental ejecutado por INGETEC (2007) de la
caracterización de la flora en el proyecto hidroeléctrico del Quimbo en Gigante Huila, se
realizó un listado de especies encontradas en el área de influencia donde apartaron y
clasificaron el Croton leptostachyus de nombre vulgar Mosquero, como un arbolito de
Rastrojos altos, se encuentran generalmente en zonas cercanas a las márgenes de los
cursos de agua y/o en el borde de bosques secundarios intervenidos en cuanto a la
composición; en el inventario florístico realizado por Cárdenas D. en 2003, en el cerro
del cuchillo tapón del Darién Colombiano se registró la existencia de la familia
Euphorbiaceae con 21 especies y entre estas el género Croton de igual modo apartada
22
en el desierto de la Tatacoa en el departamento del Huila realizado por Figueroa &
Galeano en 2007.
En estudios bromatológicos realizado por Serrano & Pabón en el 2003, indican que la
planta puede ser utilizada como nutrición en bovinos, ovinos y caprinos, con una
materia seca de 37 %, Proteína Bruta 20 %, Fibra Bruta 22 %, cenizas 9.9 %, Calcio
1.86 %, y fosforo 0.49 %.
3.2.3 Estudio fitoquímico. Entre los estudios realizados en plantas, se destaca la
determinación de los metabolitos secundarios, que cumplen funciones de defensa
contra predadores y patógenos y actúan como agentes alelopáticos; los estudios de la
Fitoquímica conllevan a la búsqueda de nuevas drogas, antibióticos, insecticidas y
herbicidas, o a reevaluar los diferentes usos que posee una planta (Lock, O. 1994).
El análisis fitoquímico tiene como objeto determinar los metabolitos secundarios
presentes en la especie vegetal a estudiar, aplicando para ello una serie de técnicas de
extracción, separación, purificación y de determinación estructural. Estos
constituyentes químicos se agrupan según su origen biosintético común, así podemos
mencionar a los terpenos y esteroides, flavonoides, cromenos y benzofuranos,
cumarinas, quinonas, alcaloides, entre otras Lock, O. 1994.
23
4. MATERIALES Y METODOS
4.1 MATERIALES
El material fue recolectado en la finca los Cauchos, temperatura de 31°C, altitud de
850 msnm en el municipio de Gigante-Huila, una muestra fue depositada con el número
de colección 009586 para su descripción y determinación taxonómica en el herbario
“Toli” de la Universidad del Tolima – Ibagué por Dr. Esquivel, H., la planta se
encontraba en floración y fructificación.
El secado del material vegetal se realizó en una estufa a 50ºC por 48 horas, se empleó
los estándares de calidad del laboratorio LASEREX de la universidad; posteriormente
se trituro hasta conseguir partículas finas pasando el material por un tamiz de 2 micras,
luego el material (Hojas, Tallo y Raíz) se pondrá a extracción por medio de maceración
(1:10 material/solvente) en H2O, Etanol y hexano, tras 46 horas el macerado será
filtrado en papel cualitativo y almacenado en frasco de vidrio oscuro a temperaturas de
5 C°. Una vez obtenidos cada uno de los extractos se estandarizo a través de la
determinación de sus índices farmacognósticos y caracterización fitoquímica.
4.2 METODOLOGIA
4.2.1 Fase de campo. Encuestas en las veredas seleccionadas y se llenaron los
respectivos formularios para tal fin (ver anexos 1 y 2) se entrevistaron a 180 miembros
de la comunidad, distribuidos en las 10 veredas en un lapso de 20 días.
4.2.2 Fase de laboratorio.
24
4.2.2.1 Tamizaje fitoquímico. Se siguió la metodología propuesta por Sanabria, (1983)
y modificada por Murillo, E. & Méndez, J. (2008) para la determinación de los extractos
obtenidos con solventes de diferente polaridad (Hexano, etanol y agua), y se desarrolló
el análisis fitoquímico, por medio de una serie de técnicas de separación, purificación y
determinación estructural; teniendo como objetivo comprobar los metabolitos
secundarios presentes en la especie vegetal.
4.2.2.2 Actividad antimicrobiana. Se implementó el método de pozos en agar Mueller
Hinton, una vez solidificado el medio de cultivo previamente inoculado con los
microorganismos, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Salmonella stiphymurium,
Staphylococcus aureus, se disponen tres perforaciones de 0.5 cm en el agar en las
cuales se sirve 0.25 ml del extracto a concentraciones conocidas. Las placas se
incuban a 37 °C por 24 h, al cabo de este tiempo se evalúan los resultados mediante la
lectura en milímetros de diámetro del halo de inhibición del crecimiento de los
microorganismos (Cona, 2002). Todos los ensayos se realizan por triplicado.
4.2.2.3 Actividad anti-fúngica. Se implementó el método de difusión en agar, utilizando
agar PDA (papa dextrosa) como medio de cultivo, se sirve en cajas de petri,
previamente desinfectadas hasta su solidificación (3 réplicas), se realizó una curva de
concentraciones de los extractos a ensayar; posteriormente se dispone una rodaja de
0,5 cm de diámetro de micelio de las especies Fusarium Oxysporum, Aspergillus niger,
Candida albicans, provenientes de cultivo in vitro.se incuban a una temperatura de 30
C° hasta que la base del hongo cubra todo el diámetro de la caja de Petri en el blanco.
Se calcularon las CI50 a partir de la inhibición en milímetros de los extractos respecto a
los controles (Torres, 2005).
4.2.2.4 Actividad anti-insecto. Se obtuvo un pie de cría de la mosca Drosophila
melanogaster, el cual fue mantenido en agar banano, las unidades experimentales
estuvieron compuestas por adultos; el ensayo por contacto se realizó en frascos de
vidrio en los cuales un papel filtro fue impregnado con los extractos a diferentes
concentraciones (5 réplicas por concentración) con una población de 5 moscas por
25
replica; se observaron permanentemente durante 8 horas, contando las moscas
muertas y vivas cada 15 minutos (Huerta, et al., 2008).
El ensayo de repelencia a la ovoposición se realizó con el mismo pie de cría del ensayo
por contacto; las unidades experimentales fueron adultos vírgenes de dos días de
nacidos. El agar fue inoculado con una curva de concentraciones de cada uno de los
extractos. Se sometieron 3 parejas de moscas por cada concentración y cada
concentración tuvo tres replicas. Transcurridas 24 h se anota el número de larvas
distribuidas en cada montón de dieta ofrecida. El índice de repelencia se calculó como
I.R. = (C - T)/(C + T) x 100 siendo C = n.° de larvas en la dieta control y T = n.° de
larvas en la dieta tratada. Metodología recomendada por Pascual-Villalobos (1998).
4.2.2.5 Actividad Citotóxica. Se colocaron discos de papel filtro Whatman dentro de la
caja Petri. Estos discos deben ser proporcionales al diámetro de la caja. Sobre el papel
filtro se adicionan 2 ml de cada una de las diluciones preparadas del extracto original,
en un intervalo de concentraciones amplio, distribuyéndolo de forma homogénea.
Como control del disolvente se utiliza una caja a la que se le agregan 2 ml de los
solventes utilizados para la extracción. Además, se utiliza un control positivo con agua
destilada y un control negativo con dicromato de potasio. Luego se colocan 10 semillas
de Allium cepa por cada caja, distribuyéndolas aleatoriamente permitiendo el adecuado
crecimiento. Se preparan 3 réplicas por tratamiento. Las semillas se incuban a
temperatura ambiente por ocho días.
Después de ese período, se registra el número de semillas germinadas,
adicionalmente, se registra el crecimiento o alargamiento de la radícula, como un
posible efecto tóxico adicional, por medio de la medición de la longitud al término de la
prueba (Iannacone, J. & Alvariño, L., 2005). Además se retiran meristemos radiculares
y se someten a fijación, maceración y coloración con orceina para proceder a los
estudios cromosómicos. Para la determinación del índice mitótico se realizó un
conteo celular registrando malformaciones cromosómicas. Los preparados se
observaron en el microscopio con objetivo de inmersión 100x (Bolaños A.; Colmenares,
D. C.& Dominguez, E. C, 2006).
26
5. RESULTADOS Y DISCUSIÓN
5.1 FASE DE CAMPO
Existe poca documentación acerca del conocimiento tradicional del Croton
leptostachyus (mosquerillo), ya sea como medicamento para los humanos o bien para
los animales; lo que motiva a indagar sobre el uso y forma de empleo de esta planta.
La recolección de esta información a través de la indagación oral resulta útil a la hora
de realizar trabajos de investigación que permitan confrontar las pesquisas realizadas
con los resultados obtenidos en el laboratorio.
Por las razones anteriores, este trabajo se inició con una etapa de campo en donde se
recabó información a través de entrevistas semi-estructuradas, complementadas con
conversatorios libres e informales al encuestado acerca del vegetal; iniciando por el
reconocimiento del espécimen y continuando con los usos y aplicaciones que la
comunidad hace de la planta.
Las entrevistas se realizaron entre octubre y noviembre de 2011. Se dialogó con 190
personas, distribuidas en 10 veredas del municipio de Gigante – Huila, seleccionadas
de acuerdo al rango de crecimiento de la planta (0 – 1200 m.s.n.m.), distribuidos en las
siguientes veredas: Potrerillos (30 personas), El tendido, Pueblo Nuevo, Rio Loro,
Vueltas Arriba y la Guandinosa (20 habitantes en cada una); en la Gran Vía y Matambo
(15 habitantes en cada caso), en el Rodeo, el Mesón y el Recreo (10 personas/vereda).
El 89% de los encuestados correspondió al género masculino y el 11% género
femenino; la edad osciló los 28 y 55 años. Un 56% de las personas se dedica las
labores de campo, 28% declararon desempeñarse como mayordomos, un 5% a oficios
varios y un 3% manifestaron ser ganaderos y administradores.
El anexo 1 deja ver el instrumento aplicado en su totalidad. En la pregunta relacionada
con nombres dados a la planta en la región, los encuestados afirman conocerla como
27
mosquerillo (45%), escoba (22%), mosquero (17%), yerba amarga (8%), sangregado
(7%) y montesina (1%).
En la tabla 1, se consignan los usos más comunes, que según la población
entrevistada, se da a la planta en la región de Gigante-Huila. Se nota claramente que el
vegetal encuentra gran aplicación en el tratamiento de padecimientos orgánicos del
mundo animal () y de humanos (52%); aunque también el vegetal encuentra aplicación
como especie ornamental (32%).
Tabla 1. Usos etnofarmacológicos dados a Croton leptostachyus (mosquerillo) por la
comunidad campesina de Gigante.
USOS ETNOBOTÁNICOS
VEREDA Alimenticio Artesanal Colorante Animales Medicinal Ornamental Forrajera
Gran vía - - - 4 8 3 -
Tendido - - - 9 7 2 2
Vueltas arriba - - - 5 10 5 -
La Guandinosa - - - 11 3 5 1
Rodeo – recreo - 2 - 5 1 2 -
Potrerillos 2 - - 17 8 2 1
Meson - 3 - 5 1 1 -
Rio Loro - - - 12 6 2 -
Matambo - - - 5 5 5 -
Pueblo Nuevo 1 - - 11 3 5 -
Totales 3 5 0 84 52 32 4
Fuente: Autor.
En el ánimo de ahondar en el conocimiento etnocultural de Croton leptostachyus, se
dialogó con los pobladores acerca de la parte del vegetal utilizada, el rito aplicado para
obtener beneficio de la planta, e incluso, acerca de las dosis o proporción aplicada.
Estos resultados los agrupa la tabla 2.
Concordantes con los datos que muestra la tabla 1, el mayor porcentaje de personas
utiliza la planta en el control de enfermedades básicas, tanto para animales como para
28
humanos: como repelente de insectos (28%); cólicos, úlceras, papilomas, alergias,
brotes de piel, etc (32%). Importa mencionar el uso de C. leptostachyus, aunque en
bajo porcentaje, como antidiabético (2%). Es llamativo que, en casos de veranos
prolongados la planta encuentra aplicación como forrajera, aunque en muy baja
proporción (2%).
Tabla 2. Uso medicinal, parte utilizada, modo de empleo, dosificación y frecuencia del
mosquerillo dada por la comunidad campesina de Gigante-Huila.
Enfermedad % Parte utilizada Modo de
empleo Dosificación
Frecuencia
de uso
Ulcera gástrica (humanos) 2 Hojas Infusión Puñado Año
Sarna (bovinos , caninos) 7 Toda la planta Maceración Baños 5 L Mes
Miasis (enfermedad
parasitaria) 5 Toda la planta Emplastos Tanteo Días
Cólicos: humanos,
caninos, caprinos 3 Hojas Infusiones Puñado Año
Diabetes 2 Hojas Decocción Puñado Año
Control de moscas
repelente 28 Toda la planta Maceración Baños 5 L Semanal
Alopecia 2 Hojas Zumo Tanteo Año
Mezquinos - papilomas 19 Látex - hojas Refregar Tanteo Días
Alergias, salpullido, brotes
piel 8 Toda la planta Maceración
Baños 500
mL Días
Fuente: Autor.
La tabla deja ver además que los metabolitos estrechamente asociados con las
funcionalidades biológicas de C. leptostachyus están distribuidos en toda la planta
(48%), particularmente en sus hojas o en el látex (28%). El rito cultural de preparación,
la dosis y la frecuencia de uso es variado y parece más bien dependiente del sujeto
que la aplique; no obstante, el agua como solvente y la energía calórica (decocción o
infusión) parecen ser los mecanismos más frecuentes para extraer los principios
activos de la especie vegetal.
En la decocción, someten el material vegetal a calentamiento con agua en una olla y se
hierve unos 5 min y se deja reposar antes de administrar el extracto acuoso obtenido.
29
En las infusiones, se coloca la matriz vegetal en un recipiente, luego se agrega agua
hirviendo, se tapa se deja reposar. Refregar es presionar directamente la planta sobre
la parte afectada para forzar la salida de los metabolitos.
La aplicación tópica, para el tratamiento de mezquinos y papilomas, o bien en el caso
de enfermedades parasitarias vehiculizadas por larvas de moscas (miasis), es otro
método de uso de C. leptostachyus, tal como lo evidencia la tabla 3. En estos casos se
desmenuza y machaca la planta completa o la parte que se vaya a usar, hasta formar
una pasta blanda para ser aplicada en la zona afectada.
De acuerdo a lo manifestado, los conocimientos etnoculturales han sido adquiridos
oralmente transmitidos de padres a hijos (35%), y en menor proporción en forma escrita
(10%). Sin embargo, el 55% declaró que aprendió a utilizar la planta a través de amigos
o compañeros de trabajo. El 96% compensa el aprendizaje adquirido transmitiéndolo
nuevamente a las nuevas generaciones. Este conocimiento ha sido capaz de persistir
hasta hoy en día a pesar de que muchos jóvenes no muestran un interés real en el uso
de prácticas complementarias en veterinaria y en labores de campo. Se determinó que
los saberes sobre la planta están fuertemente ligados a los hombres con más del 75%
de los encuestados.
Con relación a los comentarios que hacen los pequeños productores sobre los
remedios caseros utilizados, vemos que obedecen a prácticas tradicionales que se han
transmitido de generación en generación y que llevan en su interior saberes locales,
relacionados con el tratamiento de diversas afecciones en los animales. Algunas de
estas prácticas también se realizan en otras partes del relieve colombiano, sin importar
las influencias culturales o la ubicación de la región (Jurado et al., 2007).
30
5.2 FASE DE LABORATORIO
5.2.1 Estudio del tamizaje fitoquímico. En la tabla 3 se pueden apreciar los resultados
obtenidos en la búsqueda de los metabolitos secundarios presentes en los extractos
etanólicos obtenidos a partir de tallos y raíz. Dado que la mayor parte de los vegetales
acumulan los metabolitos bioactivos en las hojas, y porque además los usuarios de
“mosquerillo” manifestaron utilizar esta parte de la planta en un 28%, se determinó
preparar un extracto acuoso de hojas además del etanólico. El análisis cuidadoso de
los resultados de la tabla podría resumirse así:
La tabla deja ver que, en efecto, los metabolitos se encuentran distribuidos en toda la
planta, especialmente en las hojas y, en forma emergente en el tallo o en la raíz, lo cual
es concordante con lo manifestado por los habitantes de la zona de interés en este
trabajo.
La presencia abundante de carbohidratos, reductores y no-reductores, podría ser el
atrayente de la planta para ser utilizada como forrajera, además de los nutrientes que la
especie posee (no determinados en este trabajo), los cuales se concentrarían durante
la época de sequía.
Tabla 3. Metabolitos secundarios en los extractos obtenidos de Croton leptostachyus.
Metabolitos Prueba ETANOL AGUA
Tallo Hoja Raíz Hoja
Carbohidratos Molisch
+
+
+
+++
Benedict ++ +++ + +++
Saponinas Rosenthaler + +++ ++ +
Polifenoles Folin-Ciocalteu (FC) ++ ++ + ++
Taninos
cloruro férrico + ++ + +++
gelatina-sal ND ND - -
taninos condensados - - - +++
Flavonoides Shinoda + ++ - -
31
Fenilpropanos Arnow + + - ++
Antraquinonas Bornträger ND ND ND ND
Terpenos Lieberman-Burchard
Salkowski
-
+
++
+++
++
+
-
+
Iridoides Vainillina
etanólico + ++ +++ +
Alcaloides
Tanred
Dragendorff
Mayer
Erhlich
Valser
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
++
++
++
++
++
-
-
-
-
-
Cumarinas NaOH - - - -
Lactonas - - - -
Fuente: Autor.
El vegetal aparece con contenidos relativamente abundantes de compuestos de
naturaleza fenólica, tales como polifenoles, flavonoides, fenilpropanoides, entre otros.
Los saponósidos, terpenoides e iridoides fueron también encontrados en todas las
partes del vegetal, y alcaloides sólo en la raíz.
Esta gama de biocompuestos harían de Croton leptostachyus una especie vegetal
promisoria con usos potenciales como antioxidante, agente antimicrobial,
antiinflamatoria, antimicrobiana, amebicida (Correa et al., 2009).
Parece importante mencionar que existe una serie de plantas que se emplean por sus
propiedades farmacológicas precisamente porque algunos de sus principios activos son
de naturaleza iridoídica, se destacan la valeriana, la genciana, el noni, entre otros
(Palacios, 2013) De otra parte, los iridoides son precursores para la formación de
alcaloides indolterpénicos, tales como la yohimbina, la ajmalicina, la estrictosidina, la
vindolina, la catarantina, la ibogaína, la cinconamina, la quinidina y la brucina, algunos
de los cuales podrían estar presentes en la raíz de mosquerillo (Tabla 3).
32
Se sabe además que las drogas que poseen saponinas pueden actuar como
expectorantes, tienen acción diurética, depurativa y disminuyen el colesterol; por su
parte las saponinas esteroídicas sirven como materia prima en la hemisíntesis de
hormonas sexuales y corticales (Palacios, 2013).
5.2.2 Actividad antimicrobiana. Se utilizó el método Se utilizó el método de pozos para
probar la bioactividad de Croton leptostachyus frente a Escherichia coli, Klebsiella
pneumoniae, Salmonella stiphymurium, Staphylococcus aureus. Se usó como control
postivo tetraciclina a una concentración de 2000 mg/L (ver figura 2.A). No se observó
ningún efecto sobre estos organismos, trabajando los cuatro extractos a una
concentración de 10000 mg/L (etanólico de hojas, raíz y tallo, y acuoso de hojas). Ver
figura 2.B.
FIGURA 2. A. Efecto inhibitorio de la tetraciclina (2000 mg/L) sobre S. aureus, se
evidencia halos de inhibición de aproximadamente 3.5 cm. B. Efecto del extracto
etanólico de hoja sobre S. aureus, no se evidencia ningún tipo de inhibición sobre el
organismo ensayado.
Fuente: Autor.
Se aplicó el método de difusión en agar, con agar PDA como medio de cultivo, para
probar la funcionalidad antifúngica de los extractos del vegetal, frente a cepas de
Fusarium Oxysporum, Aspergillus niger, Candida albicans. Los extractos se probaron
en primera medida a través de un ensayo preliminar en el cual todos se probaron a una
concentración de 10000 mg/L; los extractos que mostraron la mayor actividad en dicho
ensayo preliminar se seleccionaron para pruebas más concienzudas (ver tabla 4), en
B A
33
ese orden de ideas los extractos a ensayar fueron los etanólicos de raíz y tallo y se
probaron a concentraciones entre 500 y 10000 mg/L. El extracto etanólicos del tallo
inhibió el crecimiento de Fusarium Oxysporum en un 58.6% a 10000 ppm y obtuvo
una CI50 de 9726±130 (ver figura 3), en tanto que el de raíz inhibió las cepas del
mismo organismo en un 97.5% a 10000 mg/L y alcanzo una CI50 1133±56.8 mg/L El
ketoconazol por su parte, utilizado como control positivo, evidenció una inhibición del
100% a 2000 mg/L.
Tabla N°4. Porcentajes de inhibición de los extractos de Croton leptostachyus frente a
Fusarium oxysporum y Aspergillus niger.
ENSAYOS PRELIMINARES
Fusarium oxysporum Aspergillus niger
Extracto Concentración Diámetro %
inhibición PROMEDIO Diámetro
%
inhibición PROMEDIO
hoja acuosa 10000 mg/L 2,76 27,94
30,68 2,14 29,61
30,26 2,55 33,42 2,1 30,92
hoja
etanólica 10000 mg/L
2,68 30,03 29,50
2,24 26,32 26,15
2,72 28,98 2,25 25,99
tallo
etanólica 10000 mg/L
2,38 37,86 33,03
1,9 37,50 39,47
2,75 28,20 1,78 41,45
raíz
etanólica 10000 mg/L
0,98 74,41 74,02
1,2 60,53 60,36
1,01 73,63 1,21 60,20
emulsión
3,69 3,66 4,18
2,82 7,24 5,10
3,65 4,70 2,95 2,96
absoluto
3,71 0,00 0
3,01 0 0
3,95 0,00 3,07 0
ketoconazol 2000 mg/L 0 100,00
100 0 100
100 0 100,00 0 100
Fuente: autor 2011- 2012.
34
Con Aspergillus niger, el extracto etanólico del tallo alcanzó la CI50 a los 11883 mg/L y
44.2% de inhibición a 10000 mg/l. El extracto etanólico de Raíz impidió el crecimiento
del organismo un 46% a una concentración de 1500 mg/l, provocando daño estructural
de la espora. El ketoconazol inhibió este mismo organismo en un 98%, preparado a
2000 mg/l.
Los extractos etanólicos de tallo y raíz no inhibieron el desarrollo de Candida albicans,
a ninguna de las concentraciones probadas.
Figura 3. Efecto inhibitorio del extracto de tallo sobre el crecimiento de Fusarium
oxysporum.
Fuente: Autor.
5.2.3 Actividad anti-insecto por contacto. Para determinar la actividad anti insecto se
obtuvo un pie de cría de mosca Drosophila melonogaster; trabajando con unidades
experimentales compuestas por adultos y mediante el método por contacto. Se
realizaron 5 réplicas por cada nivel de concentración (500-10000 ppm). La variable
respuesta fue el número de moscas muertas y vivas realizando conteos cada 15
minutos por 8 horas, según lo sugerido por Huerta, et al. (2008).
No se observaron moscas muertas durante el tiempo del ensayo. Sin embargo, en las
3 primeras horas se observaron moscas quietas, con poca movilidad y cortas en vuelo.
35
5.2.4 Actividad anti-insecto por repelencia. Se realizó pruebas preliminares a una
concentración 10.000 mg/L, con los dos extractos más promisorios los cuales fueron
tallo etanólico y raíz etanólico, y se encontró que el extracto etanólico de raíz alcanzó
inhibiciones sobre la ovoposición de un 60%, por su parte la inhibición del extracto
etanólico de tallo alcanzo un 40%.
5.2.5 Actividad Citotóxica. El ensayo se realizó en cajas de Petri sobre el papel filtro y
adicionando 2 ml de cada una de las diluciones preparadas del extracto original acuoso
y etanólico de hoja, y etanólico de tallo y raíz. Las semillas se incubaron a temperatura
ambiente durante ocho días, no registrándose inhibición del crecimiento radicular. La
observación anterior se verificó mediante un análisis de microscopía, el cual consistió
en un conteo de células en fase mitótica. No se evidenciaron alteraciones en el ciclo de
crecimiento (profase, metafase, anafase, telofase y citocinesis).
36
6. CONCLUSIONES
Los resultados de esta investigación permiten afirmar que el tallo y la raíz de Croton
leptostachyus son las estructuras de la planta donde parece acumularse la mayor
diversidad de fitocompuestos; resultando el etanol el solvente más adecuado para
extraerlos, particularmente de la raíz.
Los compuestos de la planta no evidenciaron actividad frente las bacterias Escherichia
coli, Klebsiella pneumoniae, Salmonella stiphymurium, Staphylococcus aureus y la
levadura Candida albicans, bajo las metodologías aplicadas; sin embargo fueron
activas cuando se expusieron frente a Fusarium Oxysporum, Aspergillus niger,
mostrando una apreciable inhibición y en algunos casos daños de estructuras.
El bajo efecto de los extractos de mosquerillo sobre el ciclo celular de Allium cepa da a
entender la inocuidad de la planta sobre los organismos
Las pruebas anti insecto por contacto no demostraron un efecto letal sobre las
unidades experimentales; sin embargo, los ensayos por repelencia evidenciaron un
efecto dosis respuestas sobre el número de larvas
Todos los resultados obtenidos, justifican al menos en parte, el uso etnofarmacológico
dado a la planta por parte de la comunidad campesina de Gigante-Huila, e igualmente
justifican el interés por continuar estudiándola realizando trabajos que permitan
ahondar en los conocimientos de esta promisoria especie vegetal.
37
RECOMENDACIONES Y PERSPECTIVAS
Es necesario continuar con la evaluación de los extractos vegetales en otras posibles
enfermedades de animales ya que es una alternativa económica y ambientalmente
sustentable para evaluar su eficacia contra moscas y hongos.
El estudio permitió destacar la importancia de implementar dentro de los programas de
medicina veterinaria y zootecnia, áreas de estudio e investigación en saberes
populares (etno-veterinaria), la fitoquímica, con tratamientos alternativos en la salud
animal.
Realizar un fraccionamiento de los extractos más activos, con el fin de identificar y
cuantificar los compuestos responsables de la actividad antifúngica.
38
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44
ANEXOS
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Anexo A. Encuesta Etnobotánica del mosquero - (Croton leptostachyus)
FECHA: ________________________________________ HORA: __________________ NOMBRES__________________________________ SEXO: M F ACTIVIDAD QUE REALIZA: trabajador (a) campo - mayordomo – administrador (a) - ama de casa – ganadero - oficios varios
UBICACIÓN GEOGRAFICA LUGAR: VEREDA: ____________________________ NOMBRE DE LA FINCA O PREDIO: __________________ COORDENADAS: _________________________ TEMPERATURA: ______________ PREGUNTAS
1. Otros nombres de esta planta? Cual (es):________________________________
2. Cuál de los siguientes usos emplea usted esta planta? Alimenticio, artesanal, colorante, animales, medicinal, ornamental, forrajera, otro
3. Para que utiliza usted esta planta?______________________
4. Enfermedades para la que la utiliza?_____________________
5. Parte de esta planta usa?: Raíz ( ) Tallo ( ) Hojas ( ) Flores ( ) Corteza ( ) Brotes ( ) Toda planta ( ) Látex ( )
6. En uso medicinal, el modo de empleo de la planta es? cocimientos ( ), emplastos ( ), refregar ( ) zumo ( ), infusiones ( ), baños ( ), Otro cual?
7. Cómo es la dosificación o cantidad que maneja? Litro ( ), botella ( ), puñado ( ), Jarra ( ), vaso ( ), taza ( ), cucharada ( ), otros:___
8. Como adquirió los conocimientos de uso de esta planta? Oral ( ) tradición familiar ( ) escrita ( ) otros ___________________
9. Cada cuanto emplea o utiliza esta planta? Días ( ) semanas ( ) meses ( ) año ( )
10. Transmite usted sus conocimientos sobre el uso de la planta? Si - No
11. Conoce usted alguna anécdota o historia relacionada con el uso de esta planta? _______________________________________________________________________________________________________________________
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Anexo B. Resumen de Articulo presentado al premio nacional de entomología “Hernán
Alcaráz Viecco” Ibagué – Tolima 2012.
POTENCIAL ANTIMICROBIAL Y ANTIINSECTO DE EXTRACTOS DE Croton
leptostachyus MEDIANTE EL MODELO BIOLÓGICO Drosophila melanogaster
(DIPTERA, DROSOPHILIDAE)
Lorena Tacha, Daniel Pardo, Walter Murillo, Elizabeth Murillo, John Méndez
Grupo de investigación en química de productos naturales “GIPRONUT” Facultad de
Ciencias, Universidad del Tolima
El creciente número de organismos nocivos que afectan drásticamente las poblaciones
animales y, consecuentemente, la economía basada en las mismas, obliga a
implementar nuevas alternativas para el manejo integrado de plagas, buscando reducir
el impacto negativo de productos sintéticos sobre los ecosistemas. Considerando estas
problemática, este trabajo se interesó en evaluar los efectos antiinsecto, antibacteriano
y antifúngico de cuatro extractos (acuoso de hojas y etanólicos de hoja tallo y raíz) de
Croton leptostachyus (Euphorbiacea), comúnmente conocida como mosquero. La
muestra vegetal (hojas, tallo y raíz) se colectó en el municipio de Gigante-Huila. La
actividad antibacterial fue evaluada en Salmonella typhimurium, Klebsiella pneumoniae,
Staphylococcus aureus y Escherichia coli, mediante el ensayo de pozos; el potencial
antifúngico se probó en Fusarium oxysporum, Aspergillus niger, Candida albicans a
través de la metodología de difusión en agar. En la prueba antiinsecto se midieron dos
actividades: insecticida por contacto y repelencia a la ovoposición; en ambos casos se
trabajó con el organismo Drosophila melanogaster, especie ampliamente utilizada
como modelo biológico, debido a su cercanía filogenética con los verdaderos vectores.
Los resultados obtenidos dejaron ver que C.leptostachyus no evidencia propiedades
antibacterianas en ninguno de los extractos ensayados. No obstante, el extracto de raíz
mostró elevada actividad antifúngica frente a F. oxysporum (CI50=1133 mg/L) y daño en
estructuras de A. niger , con concentraciones superiores a 1500 mg/L. En los ensayos
47
antiinsecto por contacto, no se evidenció respuesta de los organismos blanco; sin
embargo, las pruebas de repelencia a la ovoposición mostraron disminución en el
número de posturas en forma dependiente de la concentración, siendo más notorio en
el extracto de raíz. Croton leptostachyus se perfila como una especie vegetal
promisoria por su acción antifúngica frente a Fusarium oxysporum, Aspergillus niger, y
repelencia a la ovoposición en Drosophila melanogaster.
Palabras claves: Control biológico, Antimicrobial, Antiinsecticida, Croton
leptostachyus,Drosophila melanogaster
Sesión: Manejo Integrado de Plagas
Presentación oral
Premio Nacional de Entomología “Hernán Alcaráz Viecco”