i

HASIL PENELITIAN TESIS

EFEK PEMBERIAN EKSTRAK DAUN PAGODA (Clerodendrum

Paniculatum. L) TERHADAP KADAR IL-6 PADA MAMMAE TIKUS BETINA SPRAGUE DAWLEY YANG DI INDUKSI

STAPHYLOCOCCUS AUREUS

THE EFFECT OF PAGODA LEAVES EXTRACT (CLERODENDRUM PANICULATUM. L) ON THE LEVEL OF IL-6 TO MAMMAE

FEMALE RATS (SPRAGUE DAWLEY) INDUCED BY STAPHYLOCOCCUS AUREUS

FITRIANA IBRAHIM

P4400216010

SEKOLAH PASCASARJANA

UNIVERSITAS HASANUDDIN

MAKASSAR

2018

ii

EFEK PEMBERIAN EKSTRAK DAUN PAGODA (Clerodendrum Paniculatum. L) TERHADAP KADAR IL-6 PADA MAMMAE

TIKUS SPRAGUE DAWLEY YANG DIINDUKSI Staphylococcus Aureus

THE EFFECT OF PAGODA LEAVES EXTRACT (CLERODENDRUM PANICULATUM. L) ON THE LEVEL OF IL-6 TO MAMMAE

FEMALE RATS (SPRAGUE DAWLEY) INDUCED BY STAPHYLOCOCCUS AUREUS

Tesis

Sebagai Salah Satu Syarat Untuk Mencapai Gelar Magister

Program Studi

Ilmu Kebidanan

Disusun dan Diajukan Oleh

FITRIANA IBRAHIM

P4400216010

Kepada

SEKOLAH PASCASARJANA

UNIVERSITAS HASANUDDIN

MAKASSAR

2018

iii

iv

v

PRAKATA

Bismillahirrohmanirrohim

Assalamualaikum Warahmatullahi Wabarakatu.

Alhamdulillah, Puji dan syukur penulis panjatkan kehadirat Allah

SWT atas segala nikmat dan berkat, kekuatan dan pengetahuan kepada

hambanya sehingga tesis ini dapat disusun dan diselesaikan dengan baik.

Shalawat dan Taslim atas junjungan kita Nabi Besar Muhammad SAW

dan keluarga, sahabat-sahabat dan para pengikutnya.

Pertama-tama penulis menyampaikan rasa hormat dan rasa terima

kasih yang tak terhingga sehingga penghargaan yang tulus kepada kedua

orang tua tersayang, bapak H. Ibrahim dan Ibu Hj. Nahar atas do’anya,

kasih sayang, dukungan, serta nasehat yang berharga sehingga penulis

bisa seperti sekarang ini.

Penulis menyadari bahwa keberhasilan penyusunan disertasi ini

tidak lepas dari bantuan, bimbingan, nasehat dan dorongan dari berbagai

pihak. Untuk itu perkenalkan penulis menyampaikan ungkapan terima

kasih yang sebesar-besarnya dan penghargaan yang setinggi-tingginya

kepada yang terhormat :

1. Prof. Dr. Dwia Aries Tina Pulubuhu, MA selaku Rektor yang telah

memberikan kesempatan kepada penulis untuk mengikuti Pendidikan

pada Program Studi Magister Kebidanan Pascasarjana Universitas

Hasanuddin

vi

2. Hj. Ernawati Rifai, SE, MM selaku kepala Biro Akademik Universitas

Hasanuddin yang selalu dengan sabar memberikan do’a, dorongan,

serta bimbingan kepada penulis dari awal hingga akhir pendidikan.

3. Prof. Dr. dr. Suryani As’ad, M.Sc, Sp.GK selaku ketua Program Studi

Magister Kebidanan Universitas Hasanuddin Makassar sekaligus

sebagai penguji satu dalam penelitian ini yang telah memberikan

bimbingan dan arahan sehingga penyusunan ini bisa terselesaikan

4. Dr. dr. Prihantono, S.PB (K) Onk, M.Kes selaku Pembimbing Utama

yang dengan penuh kesabaran membimbing penulis, memberikan

masukan, serta arahan-arahan hingga selesainya proposal tesis ini

5. Dr. Mardiana Ahmad, S.SiT, M.Keb selaku Pembimbing kedua dalam

penyususnan proposal tesis ini yang telah banyak memberikan

masukan dan arahan dalam proses pembimbingan kepada penulis

hingga proposal ini terselesaikan

6. Dr. dr. Burhanuddin Bahar, MS dan dr. Aryadi Arsyad, M.Biom,

Ph.D, atas kesediaan dan telah meluangkan waktu untuk menguji

sekaligus memberikan bimbingan, arahan dan bantuannya dalam

penyelesaian tesis ini

7. Dr. Hayarna Basmin, SH, M.Si selaku ketua Yayasan Mitra Bahari

Katangka, serta Drs. Basri Abdi, M.pd, M.kes selaku Ketua STIKes

Datu Kamadre yang telah memberikan bimbingan moril serta materi

kepada penulis, sekaligus memberikan ijin untuk melanjutkan

pendidikan pada Program Pascasarjana Unhas

vii

8. Seluruh Dosen dan staf Program Magister Kebidanan pada Program

Pascasarjana Universitas Hasanuddin Makassar yang telah membekali

penulis dalam menyusun proposal tesis

9. Teman-teman seperjuangan satu bimbingan penelitian tesis yang

telah berjuang bersama-sama penulis dalam menyelesaikan penelitian

ini, serta teman-teman Magister Kebidanan Angkatan V atas bantuan,

motivasi dan kebersamaan dalam suka dan duka menimba ilmu dari

awal hingga akhir pendidikan di Program Pascasarjana Unhas.

10. Kepada semua Staf/Pengelola STIKes Datu Kamandre yang telah

memberikan dukungan dan semangat selama mengikuti Pendidikan.

Ucapan terima kasih yang setulus-tulusnya dan tak terhingga

kepada suami tercinta Wahyu Hidayat dan anakku tersayang Syakira

Faiza Wahyu dan Muhammad Aqlan Wahyu, terima kasih atas semua

pengertian, kesabaran dan kasih sayang serta senantiasa mendoakan,

memberikan motivasi kepada penulis dari awal pendidikan hingga tahap

akhir menyelesaikan tesis ini. Terkhusus pula kepada ibu mertuaku, adik-

adikku, kakak ipar dan adik ipar serta seluruh keluargaku. Penulis tak

lupa menyampaikan ucapan terima kasih yang tak terhingga atas bantuan,

dorongan, motivasi dan doanya sehingga penulis dapat menyelesaikan

tesis ini tepat waktu dan dengan baik.

Ucapan terima kasih dan penghargaan yang setinggi-tingginya juga

penulis sampaikan kepada semua pihak yang namanya tidak tercatum

viii

dalam kata pengantar ini tetapi telah banyak membantu penulis dalam

penyelesaian tesis ini.

Semoga Allah SWT selalu melimpahkan berkah dan rahmatNya

serta melipat gandakan segala amal kebaikan kepada semua pihak yang

telah membantu penyelesaian tesis ini dan semoga tesis ini bisa

bermanfaat bagi kita semua Aamiinn.

Wassalamualaikum Warahmatullahi Wabarakatuh.

Makassar, 30 Oktober 2017

Fitriana Ibrahim

ix

x

xi

DAFTAR ISI

SAMPUL ............................................................................................. i

HALAMAN PENGAJUAN .................................................................... ii

HALAMAN PENGESAHAN ................................................................. iii

PRAKATA ........................................................................................... iv

ABSTRAK ........................................................................................... viii

DAFTAR ISI ........................................................................................ x

DAFTAR TABEL ................................................................................. xiii

DAFTAR GAMBAR ............................................................................. xiv

BAB I : PENDAHULUAN..................................................................... 1

A. Latar belakang .................................................................. 1

B. Rumusan masalah............................................................. 4

C. Tujuan penelitian ............................................................... 4

D. Kegunaan penelitian .......................................................... 5

E. Ruang lingkup penelitian ................................................... 5

F. Definisi dan istilah ............................................................. 6

G. Sistematika penulisan ........................................................ 7

BAB II : TINJAUAN PUSTAKA............................................................ 9

A. Tinjauan tentang Mastitis ................................................... 9

B. Inflmasi .............................................................................. 16

C. Respon imun terhadap Staphylococcus Aureus ................ 19

D. Tinjauan tentang IL-6 pada Staphylococcus Aureus .......... 23

xii

E. Tinjauan tentang Daun Pagoda (Clerodendrum

Paniculatum. L) ................................................................... 25

F. Tinjauan tentang Daun Pagoda dan IL-6 ........................... 29

G. Hewan Coba...................................................................... 31

H. Kerangka teori ................................................................... 33

I. Kerangka konsep .............................................................. 34

J. Hipotesis ........................................................................... 34

K. Definisi oprasional ............................................................. 35

BAB III : METODE PENELITIAN ......................................................... 36

A. Rancangan penelitian ........................................................ 36

B. Lokasi dan waktu penelitian ............................................... 36

C. Populasi dan teknik sampel ............................................... 37

D. Instrumen pengumpulan data ............................................ 38

E. Etika penelitian .................................................................. 48

F. Analisa data....................................................................... 49

G. Alur penelitian .................................................................... 50

BAB IV : HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN .......................... 51

A. Hasil Penelitian .................................................................. 51

B. Pembahasan ..................................................................... 63

C. Jawaban Hipotesis ............................................................ 70

D. Keterbatasan Penelitian .................................................... 70

xiii

BAB V : KESIMPULAN DAN SARAN................................................. 71

A. Kesimpulan ....................................................................... 71

B. Saran................................................................................. 71

DAFTAR PUSTAKA

LAMPIRAN

xiv

DAFTAR TABEL

Tabel 2.1. Taksonomi bakteri Staphylococcus aureus

Tabel 2.2. Taksonomi tanaman beruwas laut

Tabel 2.3. Aktivitas antiinflamasi genus Clerodendrum

Tabel 2.4. Taksonomi tikus putih

Tabel 4.1. Analisis kandungan fitokimia ekstrak daun pagoda

Tabel 4.2. Rerata berat badan tikus pada masing-masing kelompok

Tabel 4.3. Rerata perbedaan kadar IL-6 pada masing- masing kelompok

tikus betina sebelum, selama dan setelah pemberian ekstrak

daun pagoda (clerodendrum paniculatum.L)

Tabel 4.5 Analisis perbedaan kadar IL-6 sebelum, setelah diinduksi

staphylococcus aureus dan setelah diberikan treatment pada

masing-masing kelompok.

Tabel 4.6 Analisis perbedaan kadar IL-6 antar kelompok tikus betina

strain sprague dawley sebelum, setelah diinduksi bakteri

staphylococcus aureus dan setelah diberikan treatment.

xv

DAFTAR GAMBAR

Gambar 2.1. Mekanisme Terjadinya Inflamasi

Gambar 2.2. Bakteri Staphylococcus aureus yang dilihat dari Mikroskop

Eelektron

Gambar 2.3. Bunga pagoda (Clerodendrum paniculatum L.)

Gambar 2.4. Kerangka Teori

Gambar 2.5. Kerangka konsep

Gambar 3.1. Alur Penelitian

Gambar 4.1. Trend kadar IL-6 pada masing-masing kelompok tikus betina

strain Sprague Dawley sebelum, setelah diinduksi S.aureus

dan setelah diberikan treatment.

Gambar 4.2. Gambaran mikroskopik pada payudara tikus kelompok

kontrol normal

Gambar 4.3. Gambaran mikroskopik pada payudara tikus kelompok

kontrol negatif.

Gambar 4.4. Gambaran mikroskopik pada payudara tikus kelompok

kontrol positif

Gambar 4.5. Gambaran mikroskopik pada payudara tikus kelompok

perlakuan

1

BAB I

PENDAHULUAN

A. Latar Belakang

Daun Pagoda (Clerodendrum Paniculatum. L) merupakan

tanaman yang banyak di jumpai di pekarangan rumah, yang biasa di

jadikan tanaman hias oleh sebagian masyarakat. Khususnya di

kabupaten Luwu.Daun Pagoda telah digunakan dalam pengobatan

tradisional di India, China, Korea, dan Jepang.Tanaman ini digunakan

dalam terapi, khususnya untuk pengobatan Asma, katarak, malaria,

penyakit kulit, kanker, tifus, dan hipertensi.Organisasi kesehatan dunia

mengestimasi sekitar 80% populasi di dunia menggunakan tanaman

alami sebagai bahan dasar pembuatan obat (Adiguzel et al.,

2005;(Shrivastava and Patel, 2007; Arun. P. V, Sachin. S, 2011)

Senyawa kimia yang terkandung dalam tanaman Daun Pagoda

yaitu flavonoid, terpen, tanin, alkaloid, sterol, dan glikosida.Flafonoid

merupakan senyawa polifenol yang terdapat pada tumbuhan yang

memiliki efek biologis seperti antimikroba, antiviral, antihipertensi,

antioksidan, antiplatelet, sitotooksik, dan aktivitas anti-inflamasi

(Rathee et al., 2009; Joseph, Bindhu and Aleykutty, 2013). Hasil

penelitian mendapati bahwa flavonoid yang terkandung dalam ekstrak

metanol dan kloroform Daun Pagoda merupakan anti inflamasi yang

efektif terhadap bakteri Staphylococcus Aureus (Praveen et al.,

2

2012).Penelitian lain menunjukkan bahwa ekstrak daun pagoda

memiliki aktivitas anti-inflamasi sebesar 50 mg/kg (Hafiz, Rosidah and

Silalahi, 2016)

Mastitis adalah peradangan payudara yang bisa disertai atau

tidak disertai infeksi. Dua penyebab utama mastitis adalah stasis ASI

dan infeksi (WH O, 2000; BFN Mastitis and breastfeeding, 2015).

Mastitis yang disebabkan oleh stasis ASI sangat menyakitkan dan

kejadiannya sekitar 9-33% dari semua wanita menyusui, akibatnya

banyak ibu yang terpaksa berhenti menyusui dan bahkan mastitis ini

bisa menjadi abses payudara (Amir, Forster and Mclachlan, 2004;

History, 2017). Sedangkan mastitis karena infeksi disebabkan oleh

bakteri, Staphylococcus aureus merupakan penyebab yang paling

utama (Chen et al., 2013; Jahanfar, Ng and Teng, 2016;Lai et al.,

2017).

Staphylococcus aureus adalah patogen utama yang dapat

menyebabkan berbagai penyakit mulai dari infeksi kulit dan jaringan,

syok, hingga pneumonia nekrosis (Lowy, 1998; Myles and Datta,

2012). Beberapa penelitian yang menguji coba Staphylococcus Aureus

yang di induksikan pada mammae tikus menunjukkan gejala mastitis,

penurunan berat badan dan kerusakan pada jaringan kelenjar susu

(Guo et al., 2013; Chinchali and Kaliwal, 2014). Inflamasi dan respon

imun merupakan bentuk pertahanan diri terhadap serangan stimulus

dari lingkungan luar tubuh, yang terdiri dari infeksi bakteri patogen

3

(Matsushima et al., 2011). Respon imun yang optimal mampu

melindungi dirinya dari invasi patogen dan kerusakan sel serta

mengeliminasi dan mengontrolnya ketika patogen tersebut berhasil

masuk (Abbas et al., 2016).

Sitokin merupakan salah satu mediator terlarut, yang membantu

komunikasi sel-sel dalam respon kekebalan tubuh yang diperlukan

pada awal reaksi inflamasi (Tanaka and Kishimoto, 2014), contoh

sitokin yang diproduksi oleh makrofag adalah IL 6. IL 6 berfungsi

dalam imunitas, diproduksi oleh fagosit monokuler, sel endotel

vaskular, fibroblast, dan sel lain sebagai respon terhadap mikroba dan

sitokin lain (Baratawidjaja dan Rengganis, 2010).

Interleukin 6 adalah sitokin pro-inflamasi yang berperan penting

dalam mekanisme pertahanan diri(Banks, Kastin and Gutierrez, 1994;

Ishartadiati, 2010; Sugimoto et al., 2015). Sitokin ini merupakan

mediator yang lebih unggul dalam merespon suatu inflamasi lokal

seperti infeksi, luka bakar, trauma, neoplasia, dan memiliki fungsi

sebagai protein fase akut yang menginduksi diferensiasi sel B dan sel

T (van der Poll et al., 1997; Álvarez, 2009). Selain itu, reseptor IL 6

juga merupakan terapi klinis yang sangat baik, karena antibodi IL 6

telah berhasil digunakan melawan kelainan autoimun seperti

rheumatoid artritis, artritis idiopatik remaja, dan penyakit castleman

(Hirano, 2010; Kamimure et al., 2014)

4

Berdasarkan uraian diatas bahwa daun pagoda (clerodendrum

paniculatum. L) banyak tersedia di wilayah Sulawesi selatan

khususnya di sekitar pekarangan rumah masyarakat daerah Belopa

kabupaten Luwu dan juga penelitian tentang daun pagoda sebagai

antiinflamasi pada mastitis belum pernah dilakukan sebelumnya. Maka

peneliti tertarik melakukan penelitian untuk mengetahui efek dari

pemberian ekstrak daun pagoda (Clerodendrum Panuculatum. L)

sebagai anti inflamasi terhadap kadar interleukin 6 yang di uji cobakan

pada mammae Tikus betina sparague dawley yang telah di induksi

oleh bakteri S.aureus.

B. Rumusan Masalah

“Apakah Ada Pengaruh Ekstrak Daun Pagoda (Clerodendrum

Paniculatum. L) Terhadap Kadar Il-6 Pada mammae Tikus betina

sparague dawley yang diinduksi Staphylococcus aureus ? “

C. Tujuan Penelitian

1. Tujuan Umum

Membuktikan bahwa pemberian ekstrak daun pagoda

(Clerodendrum Paniculatum. L) dapat berpengaruh terhadap kadar

IL 6 pada mammae Tikus betina sparague dawley yang di induksi

staphylococcus aureus.

5

2. Tujuan Khusus

a. Diketahuinya perubahan kadar IL-6 pada masing-masing

kelompok sebelum, setelah penyuntikan S.aureus dan setelah

pemberian ekstrak Daun Pagoda (Clerodendrum Paniculatum.

L) pada Tikus betina sparague dawley yang di induksi S.aureus.

b. Diketahuinya perbedaan kadar IL-6 yang telah di induksi

S.aureus sebelum pemberian ekstrak Daun Pagoda

(Clerodendrum Paniculatum. L)

c. Diketahuinya perbedaan kadar IL-6 yang telah di induksi

S.aureus setelah pemberian ekstrak Daun Pagoda

(Clerodendrum Paniculatum. L).

D. Kegunaan Penelitian

1. Memberikan informasi ilmiah tentang efek ekstrak Daun Pagoda

(Clerodendrum Paniculatum. L) dalam menurunkan kadar IL 6.

2. Dapat digunakan sebagai referensi untuk penelitian lebih lanjut

sehubungan dengan ekstrak Daun pagoda sebagai anti inflamasi

untuk pengobatan mastitis yang di sebabkan oleh bakteri S.aureus

yang di uji cobakan pada manusia.

6

E. Ruang Lingkup Penelitian

Adapun ruang lingkup dari penelitian ini adalah:

1. Subjek penelitian ini adalah ekstrak daun pagoda (Clerodendrum

Paniculatum. L) sebagai anti inflamasi.

2. Objek penelitian ini adalah kadar sitokin pro-inflamasi khususnya

IL 6 pada Tikus betina sparague dawley yang di induksi bakteri

S.aureus.

F. Definisi dan Istilah

- Abses payudara : Peradangan (bengkak, merah) dan bernanah

yang di sebabkan oleh bakteri

- Anti-inflamasi : Obat yang dapat menghilangkan radang yang

disebabkan bukan karena mikroorganisme

(non infeksi)

- Flavonoid : Senyawa yang terdiri dari 15 atom karbon

yang umumnya tersebar di dunia tumbuhan

- IL 6 : Interleukin yang berfungsi sebagai sitokin pro-

inflamasi dan miokin anti-inflamasi

- Makrofag : Sel pada jaringan yang berasal dari sel darah

putih yang membersihkan tubuh dari partikel

mikroskopis yang tidak diinginkan seperti

bakteri dan sel mati.

- Mammae : Payudara

7

- Patogen : agen biologis yang menyebabkan penyakit

pada inangnya

- Respon imun : respon tubuh berupa suatu urutan kejadian

yang kompleks terhadap antigen untuk

mengeliminasi antigen tersebut

- Sitokin : Suatu molekul protein yang dikeluarkan oleh

sel ketika diaktifkan oleh antigen

- Sitokin pro-inflamasi: Protein yang memberikan sinyal kepada

sistem imun untuk bekerja lebih keras.

- Stasis : Penyumbatan atau perlambatan aliran darah

atau cairan tubuh lainnya.

G. Sistematika Penulisan

1. Bab I Pendahuluan

H. Latar belakang

I. Rumusan masalah

J. Tujuan penelitian

K. Kegunaan penelitian

L. Ruang lingkup penelitian

M. Definisi dan istilah

N. Sistematika penulisan

2. Bab II Tinjauan pustaka

A. Tinjauan tentang Mastitis

8

B. Respon imun terhadap Staphylococcus Aureus

C. Tinjauan tentang IL-6 pada Staphylococcus Aureus

D. Tinjauan tentang Daun Pagoda (Clerodendrum Paniculatum. L)

E. Tinjauan tentang Daun Pagoda dan IL-6

F. Kerangka teori

G. Kerangka konsep

H. Hipotesis

I. Definisi oprasional

3. Bab III Metode penelitian

A. Rancangan penelitian

B. Lokasi dan waktu penelitian

C. Populasi dan teknik sampel

D. Instrumen pengumpulan data

E. Analisa data

F. Alur Penelitian

4. Bab IV Hasil penelitian dan pembahasan

A. Hasil

B. Pembahasan

C. Jawaban Hipotesis

D. Keterbatasan Penelitian

5. Bab VI Penutup

A. Kesimpulan

B. saran

9

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

A. Tinjauan tentang Mastitis

1. Definisi

Mastitis adalah proses peradangan payudara yang dapat

disertai atau tidak disertai infeksi, hal ini bisa menyebabkan nyeri lokal,

kemerahan, demam, menggigil dan kelelahan, kemudian berkembang

seperti gejala flu. Pada umumnya, mastitis terjadi dalam 3 hari sampai

12 bulan pertama setelah melahirkan namun ada juga yang

berlangsung sampai 2 tahun. Selain itu, mastitis juga bisa terjadi pada

wanita yang tidak menyusui(Spencer, 2008; Branch-Elliman et al.,

2012; Amir, 2014; BFN Mastitis and breastfeeding, 2015; History,

2017).

Dua penyebab utama mastitis adalah stasis ASI dan infeksi,

apabila saluran ASI tersumbat atau atau payudara bengkak sehingga

menyebabkan ASI menetap di bagian tertentu maka ini disebut stasis

ASI. Jika dibiarkan, akan terjadi peradangan jaringan payudara dan

bila terinfeksi bakteri disebut mastitis terinfeksi (World Health

Organization, 2000), Ibu yang mengalami mastitis biasanya akan

memberhentikan sementara pemberian ASI, padahal hisapan bayi

akan membantu membersihkan infeksi di samping pemberian antibiotik

sebagai terapi (Amir, 2014).

10

2. Patofisiologi

Terjadinya mastitis diawali dengan peningkatan tekanan dalam

duktus (Saluran ASI) akibat stasis ASI.Bila ASI tidak segera

dikeluarkan maka terjadi tegangan alveoli yang berlebihan dan

mengakibatkan sel epitel yang memproduksi ASI menjadi datar dan

tertekan, sehingga permeabilitas jaringan ikat meningkat.Beberapa

komponen (terutama protein kekebalan tubuh dan natrium) dari plasma

masuk kedalam ASI dan selanjutnya kejaringan sekitar sel sehingga

memicu respon imun.Terjadinya infeksi biasanya disebabkan oleh

stasis ASI, adanya respon inflamasi, dan kerusakan jaringan (Suradi

dan Hegar, 2010)

Ada beberapa cara masuknya kuman ke dalam payudara yaitu;

melalui duktus laktiferus ke lobus sekresi, melalui putting yang retak ke

kelenjar limfe sekitar duktus (periduktal) atau melalui penyebaran

hematogen (pembuluh darah). Adapun bakteri yang paling sering

adalah Staphylococcus Aureus, Escherecia coli dan

Streptococcus.(Suradi dan Hegar, 2010).

Faktor risiko terjadinya mastitis antara lain:

a. Puting lecet

b. Pengosongan payudara yang tidak sempurna

c. Frekuensi menyusui yang pendek

d. Terdapat riwayat mastitis pada anak sebelumnya

11

e. Perlekatan bayi pada payudara yang kurang baik. Bayi yang hanya

mengisap putting (tidak termasuk areola) menyebabkan putting

terhimpit diantara gusi atau bibir sehingga aliran ASI tidak

sempurna

f. Produksi ASI yang terlalu banyak

g. Ibu atau bayi sakit

h. Ibu stres atau kelelahan

i. Sumbatan pada saluran atau muara saluran oleh gumpalan ASI,

jamur, serpihan kulit, dll.

j. Penggunaan krim pada puting

k. Ibu malnutrisi

3. Gejala klinis

Diagnosis mastitis ditegakkan berdasarkan kumpulan gejala

sebagai berikut:

a. Demam dengan suhu lebih dari 38,5 0C

b. Menggigil

c. Payudara menjadi kemerahan, tegang, panas, bengkak,

d. Nyeri atau ngilu seluruh tubuh

e. Peningkatan kadar natrium dalam ASI yang membuat bayi menolak

menyusu karena ASI terasa asin

f. Timbul garis-garis merah kearah ketiak

Pemeriksaan laboratorium dan pemeriksaan lain untuk

menunjang diagnosis tidak selalu diperlukan. World Health

12

Organization (WHO) menganjurkan pemeriksaan kultur dan uji

sensivitas pada beberapa keadaan yaitu bila:

a. Pengobatan dengan antibiotik tidak menyebabkan respon yang baik

dalam 2 hari

b. Terjadi mastitis berulang

c. Mastitis terjadi di Rumah sakit

d. Penderita alergi terhadap anti biotik atau pada kasus yang berat

Bahan kultur diambil dari ASI pancar tengah hasil dari perahan

tangan yang langsung ditampung menggunakan penampung urin

steril. Putting harus dibersihkan terlebih dahulu dan bibir penampung

diusahakan tidak menyentuh puting untuk mengurangi kontaminasi

dari kuman yang tedapat di kulit yang dapat memberikan hasil positif

palsu dari kultur. Beberapa penelitian memperlihatkan beratnya gejala

yang muncul berhubungan erat dengan tingginya jumlah bakteri atau

patogenitas bakteri

4. Penatalaksanaan dan Pengobatan

a. Pemberian ASI yang efektif

Stasis ASI merupakan faktor awal dalam mastitis, jadi langkah yang

efektif untuk mengurangi terjadinya mastitis adalah:

1) Ibu harus di dorong untuk menyusui sesering mungkin, dimulai

darii payudara yang terkena

2) Jika ibu merasa kesakitan karena proses let-down, maka bisa

dimulai dari payudara yang normal kemudian beralih ke

13

payudara yang terkena mastitis segera setelah proses let-down

tercapai.

3) Posisikan bayi dengan dengan dagu atau hidung yang

mengarah ke penyumbatan payudara untuk membantu

mengosongkan payudara

4) Pijat payudara selama menyusui dengan minyak nabati atau

baby oil yang tidak beracun untuk membantu mengosongkan

payudara

5) Setelah bayi berhenti menyusu, pompa payudara dengan

tangan atau pompa untuk mempercepat pengosongan

payudara.

Pendekatan alternatif untuk payudara bengkak adalah

mobilisasi cairan, yang bertujuan untuk mendorong cairan

kekelenjar getah bening aksila.Caranya, ibu bersandar dan gerakan

tangan lembut mulai memijat kulit dari areola ke aksila.Tidak ada

penelitian yang mengatakan ada resiko pada bayi yang terus

menyusui pada ibu yang terkena mastitis.ibu yang tidak dapat

melanjutkan menyusui harus mengeluarkan ASI dengan tangan

atau pompa.Karena penghentian menyusui secara tiba-tiba

menyebabkan risiko yang lebih besar. Yaitu bisa mengarah ke

abses payudara (Bolman et al., 2013)

14

b. Tata laksana suportif

Hal yang perlu diperhatikan adalah ibu harus beristirahat,

mengkonsumsi cairan yang adekuat dan nutrisi berimbang.

Anggota keluarga yang lain perlu membantu ibu di rumah agar ibu

dapat beristirahat. Kompres hangat terutama saat menyusu akan

sangat membantu mengalirkan ASI. Setelah menyusui atau

memerah ASI, kompres dingin dapat dipakai untuk mengurangi

nyeri dan bengkak.Pada payudara yang sangat bengkak kompres

panas kadang membuat rasa nyeri bertambah.Pada kondisi ini

kompres dingin justru membuat ibu lebih nyaman. Keputusan untuk

memilih kompres panas atau dingin lebih tergantung pada

kenyamanan ibu (Bolman et al., 2013).

Perawatan di rumah sakit dipertimbangkan bila ibu sakit

berat atau tidak ada yang dapat membantunya di rumah. Selama di

rumah sakit dianjurkan rawat gabung ibu dan bayi agar proses

menyusui terus berlangsung(Suradi dan Hegar, 2010)

c. Penggunaan obat-obatan

Meskipun ibu menyusui sering enggan untuk mengkonsumsi

obat, ibu dengan mastitis dianjurkan untuk mengkonsumsi

beberapa obat sesuai indikasi.

1) Analgesik

Rasa nyeri merupakan faktor penghambat produksi hormon

oksitosin yang berguna dalam proses pengeluaran ASI.

15

Analgesik diberikan untuk mengurangi rasa nyeri pada mastitis.

Analgesik yang dianjurkan adalah obat antiinflamasi seperti

ibuprofen. Ibuprofen lebih efektif dalam menurunkan gejala yang

berhubungan dengan peradangan dibandingkan parasetamol

atau asetaminofen. Ibuprofen sampai dosis 1,6 gram per hari

tidak terdeteksi pada ASI sehingga direkomendasikan untuk ibu

menyusui yang mengalami mastitis.

2) Antibiotik

Jika gejala mastitis masih ringan dan berlangsung kurang dari

24 jam, maka perawatan konservatif (mengalirkan ASI dan

perawatan suportif) sudah cukup membantu.Jika tidak terlihat

perbaikan gejala dalam 12 - 24 jam atau jika ibu tampak sakit

berat, antibiotik harus segera diberikan. Jenis antibiotik yang

biasa digunakan adalah dikloksasilin atau amoxicillin 500 mg

setiap 6 jam secara oral. Dikloksasilin mempunyai waktu paruh

yang lebih singkat dalam darah dan lebih banyak efek

sampingnya ke hati dibandingkan amoxicillin.

Pemberian per oral lebih dianjurkan karena pemberian secara

intravena sering menyebabkan peradangan pembuluh

darah.Sefaleksin biasanya aman untuk ibu hamil yang alergi

terhadap penisillin tetapi untuk kasus hipersensitif penisillin yang

berat lebih dianjurkan klindamisin. Antibiotik diberikan paling

sedikit selama 10 - 14 hari. Biasanya ibu menghentikan

16

antibiotik sebelum waktunya karena merasa telah membaik. Hal

ini meningkatkan risiko terjadinya mastitis berulang. Tetapi perlu

pula diingat bahwa pemberian antibiotik yang cukup lama dapat

meningkatkan risiko terjadinya infeksi jamur pada payudara dan

vagina.

Sebuah penelitian memperlihatkan bahwa pemberian antibiotik

disertai dengan pengosongan payudara pada mastitis

mempercepat penyembuhan bila dibandingkan dengan

pengosongan payudara saja. Sedangkan penelitian Jimenez

dkk. memperlihatkan pemberian Lactobacillus salivarius dan

Lactobacillus gasseri mempercepat perbaikan kondisi klinik

pada kasus mastitis yang sementara mendapat antibiotik

(Bolman et al., 2013).

B. Inflamasi

Inflamasi merupakan sebuah reaksi yang kompleks dari sistem

imun tubuh pada jaringan vaskuler yang menyebabkan akumulasi dan

aktivasi leukosit serta protein plasma yang terjadi pada saat infeksi,

keracunan maupun kerusakan sel. Inflamasi pada dasarnya

merupakan sebuah mekanisme pertahanan terhadap infeksi dan

perbaikan jaringan tetapi terjadinya inflamasi secara terus-menerus

(kronis) juga dapat menyebabkan kerusakan jaringan dan bertanggung

jawab pada mekanisme beberapa penyakit (Abbas et al., 2007).

17

Terjadinya proses inflamasi diinisiasi oleh perubahan di dalam

pembuluh darah yang meningkatkan rekrutmen leukosit dan

perpindahan cairan serta protein plasma di dalam jaringan. Proses

tersebut merupakan langkah pertama untuk menghancurkan benda

asing dan mikroorganisme serta membersihkan jaringan yang rusak.

Tubuh mengerahkan elemen-elemen sistem imun ke tempat benda

asing dan mikroorganisme yang masuk tubuh atau jaringan yang rusak

tersebut. (Judarwanto, 2012).

Inflamasi dibagi dalam 3 fase, yaitu inflamasi akut (respon awal

terhadap cidera jaringan), respon imun (pengaktifan sejumlah sel yang

mampu menimbulkan kekebalan untuk merespon organisme asing),

dan inflamasi kronis. Proses inflamasi akut dan inflamasi kronis ini

melibatkan sel leukosit polimorfonuklear sedangkan sel leukosit

mononuklear lebih berperan pada proses inflamasi imunologis

(Katzung, 2004). Secara umum, dalam proses inflamasi ada tiga hal

penting yang terjadi yaitu :

1. Peningkatan pasokan darah ke tempat benda asing,

mikroorganisme atau jaringan yang rusak.

2. Peningkatan permeabilitas kapiler yang ditimbulkan oleh

pengerutan sel endotel yang memungkinkan pergerakan molekul

yang lebih besar seperti antibodi.

3. Fagosit bergerak keluar pembuluh darah menuju ke tempat benda

asing, mikroorganisme atau jaringan yang rusak. Leukosit terutama

18

fagosit polymorphonuclear neutrophilic (PMN) dan monosit

dikerahkan dari sirkulasi ke tempat benda asing, mikroorganisme

atau jaringan yang rusak. (Hamor,1989)

Mekanisme terjadinya inflamasi secara umum disebebkan

adanya rangsang iritan atau cidera jaringan akan memicu pelepasan

mediator-mediator inflamasi. Senyawa ini dapat mengakibatkan

vasokontriksi singkat pada arteriola yang diikuti oleh dilatasi pembuluh

darah, venula dan pembuluh limfa serta dapat meningkatkan

permeabilitas vaskuler pada membran sel. Peningkatan permeabilitas

vaskuler yang lokal dipengaruhi oleh komplemen melalui jalur klasik

(kompleks antigen-antibodi), jalur lectin (mannose binding lectin)

ataupun jalur alternatif.

Gambar 2.1 Mekanisme Terjadinya Inflamasi (Anonim, 2012)

19

Mediator-mediator inflamasi dalam keadaan normal akan

didegradasi setelah dilepaskan dan diproduksi secara serempak jika

ada picuan. Selama proses inflamasi berlangsung, diproduksi sinyal

untuk menghentikan reaksi inflamasi. Mekanisme ini meliputi

perubahan produksi mediator proinflamasi menjadi mediator

antiinflamasi. Ketika infeksi jaringan yang terjadi terlalu besar dan

respon inflamasi akut yang terjadi tidak mampu mengatasinya. Proses

inflamasi tersebut akan tetap berlangsung terus-menerus dan dapat

memicu terjadinya inflamasi kronis.

C. Respon Imun terhadap Staphylococcus Aureus

Staphylococcus aureus adalah bakteri gram positif yang

menghasilkan pigmen kuning, bersifat aerob fakultatif, tidak

menghasilkan spora dan tidak motil, umumnya tumbuh berpasangan

maupun berkelompok (Gorchev and Ozolins, 2011). Bakteri ini

merupakan bakteri ekstraseluler yang dapat bereplikasi diluar sel, di

dalam sirkulasi, di jaringan ikat ekstraseluler, dan di berbagai

jaringan.Bakteri ekstraseluler biasanya mudah dihancurkan oleh sel

fagosit. S.aureus merupakan mikroflora normal manusia. Bakteri ini

biasanya terdapat pada saluran pernafasan atas dan kulit. Hal ini

menyebabkan infeksi lokal pada kulit, hidung, uretra, vagina, dan

saluran gastrointestinal (Harris et al., 2002; Gorchev and Ozolins,

2011; Tong et al., 2015)

20

Tabel. 2.1. Taksonomi bakteri Staphylococcus aureus

Taksonomi

Kingdom Bacteria

Filum Firmicutes

Kelas Bacili

Ordo Bacillales

Family Staphylococcaeceae

Genus Staphylococcus

Species Staphylococcus aureus

Gambar 2.2.Bakteri Staphylococcus aureusyang dilihat dari Mikroskop Eelektron

Sumber Todar, 2008

Staphylococcus aureus dapat tumbuh pada berbagai media dan

berkembang biak dengan cara pembelahan biner,dimana dua anakan

sel tidak terpisah secara sempurna sehingga terlihat seperti

membentuk koloni kluster seperti anggur. S.aureus merupakan flora

normal pada kulit sehat dan dapat menjadi patogen padajarigan kulit

yang terbuka, hidup sebagai saprofitdidalam saluran pengeluaran lendir

dari tubuh manusia seperti hidung,mulut, dan tenggorokan, dan dapat

dikeluarkan pada saat batuk atau bersin. Staphylococcus aureus juga

21

terdapat pada pori-pori dan permukaan kulit, kelenjar keringat dan

saluran usus (Brooks et al., 2007).

Staphylococcus aureus dapat tumbuh dengan baik pada media

bakteriologi dengan suasana aerobik atau mikroaerofilik dan pada

suhu 20-35oC. Pada media biakan, akan terlihat koloni berbentuk bulat

dan mengkilat. S.aureus memiliki 4 karakteristik, yaitu faktor virulensi

yangmenyebabkan penyakit yang berat pada individu normal, faktor

diferensiasi yang menyebabkan penyakit berbeda pada sisi atau

tempat berbeda, factor persisten bakteri pada lingkungan, faktor

resistensi terhadap berbagai antibiotik.

Imunitas atau kekebalan adalah sistem mekanisme pada

organisme yang melindungi tubuh terhadap pengaruh biologis luar

dengan mengidentifikasi dan membunuh patogen serta sel tumor.

Sitem ini mendeteksi berbagai macam pengaruh biologis luar yang

luas, organisme akan melindungi tubuh dari infeksi, bakteri, virus,

sampai cacing parasit, serta menghancurkan zat-zat asing lain dan

memusnahkan mereka dari sel organisme yang sehat dan jaringan

agar tetap dapat berfungsi seperti biasa (Miller et al., 1994;

Baratawidjaja dan Rengganis, 2012).

Respon imun terhadap S. aureus bertujuan untuk menetralkan

efek toksin dan mengeliminasi bakteri. Respon imun alamiah terutama

melalui fagositosis oleh neutrofil, monosit serta makrofag jaringan.

Endotoksin merangsang makrofag dan sel lain seperti endotel vaskular

22

untuk memproduksi sitokin seperti TNF, IL-1, IL-6, dan IL-8. Sitokin

akan menginduksi adesi neutrofil dan monosit pada endotel vaskular,

pada tempat infeksi, diikuti dengan migrasi, akumulasi lokal serta

aktivasi sel inflamasi. Kerusakan jaringan yang terjadi adalah akibat

efek samping mekanisme pertahanan untuk eliminasi bakteri. Sitokin

juga merangsang demam dan sintesis protein fase akut (Foster, 2004;

Liu, 2009; Tong et al., 2015).

Pada saat infeksi S.aureus terjadi, sitokin proinflamasi (TNF-α,

IL-1, IL-6, dan IL-8) disintesis dan terjadi inflamasi sistemik. IFN-γ juga

dikenal sebagai macrophage activating factor (MAF) berperan penting

dalam infeksi persisten yang dipengaruhi oleh durasi aktivasi

makrofag, juga sangat penting terhadap resistensi host terhadap

infeksi. Sekresi IFN-γ tergantung kepada IL-18.

Setelah sitokin disekresi maka aktivasi Th1 dan Th2 dimulai.

Aktivasi klasik bakteri atau IFN-γ akan mengantarkan perubahan profil

sekresi sel melalui produksi organik nitrat nitric oxide (NO).

keberadaan bakteri S.aureus menyebabkan sekresi sitokin dan reaksi

inflamasi atau program kematian sel melalui apoptosis. Sinyal dari

sitokin yang diinjeksi oleh interaksi sel host dan bakteri adalah hal yang

krusial dalam perkembangan S.aureus. Keseimbangan antara sitokin

proinflamasi dan antiinflamasi akan mengontrol pencegahan kerusakan

host karena inflamasi yang berlebihan (Sladek et al., 2005; Liu, 2009)

23

D. Tinjauan tentang Interleukin-6 pada Staphylococcus Aureus

Interleukin-6 merupakan sitokin yang memprovokasi efek seluler

dan respon fisiologis yang luas. Dalam keadaan normal, kadar IL-6

sangatlah rendah, akan tetapi pada stimulus yang tepat seperti

inflamasi, kebanyakan sel akan memproduksi IL-6. IL-6 berfungsi

dalam imunitas nonspesifik dan spesifik, diproduksi fagosit monoculer,

sel endotel vasculer, vibrolast dan sel lain sebagai respon terhadap

mikroba dan sitokin lain. IL-6 mempunyai berbagai fungsi.Dalam

imunitas nonspesifik, IL-6 merangsang hepatosit untuk memproduksi

Acute Phase Protein (APP) dan bersama cairan serebrospinal (CSF)

merangsang progenitor di sumsum tulang untuk memproduksi netrofil.

Dalam imunitas spesifik IL-6 merangsang pertumbuhan dan

diferensiasi sel B menjadi sel mast yang memproduksi antibodi

(Baratawidjaja, 2012)

Interleukin 6 merupakan sitokin proinflamasi yang berperan

penting dalam maturasi dan aktivasi neutrofil, maturasi makrofag, serta

deferensiasi dari limfosit-T sitotoksik dan sel NK. IL-6 adalah salah

satu mediator yang paling awal dan penting dalam induksi dan

mengontrol sintesa protein fase akut pada trauma, infeksi,

pembedahan, dan luka bakar. Setelah terjadi cedera, konsentrasi

plasma IL-6 bisa di deteksi dalam 60 menit dengan konsentrasi puncak

antara 4 sampai 6 jam, dan dapat bertahan sampai 10 hari. IL-6 terlibat

24

dalam mekanisme kekebalan tubuh serta modulasi pertumbuhan dan

diferensiasi dalam berbagai keganasan (Miller et al., 1994).

IL-6 adalah glikoprotein terfosforilasi yang mengandung 185

asam amino, termasuk sitokin pleiotropic yang terlibat dalam proses

fisiologis dan patofisologis yang berbeda seperti peradangan,

metabolisme tulang, sintesis protein C-reaktif, dan karsinogenesis.

Sitokin dan reseptor ini merupakan kelas polipeptida yang memediasi

proses inflamasi (Verri et al., 2006).

IL-6 juga berperan dalam respon imun normal terhadap antigen

asing seperti yang digambarkan oleh penelitian yang menunjukka

bahwa IL-6 yang terlibat dalam sel B-mukosa diferensiasi serta

proliferasi dan diferensiasi sel T(McGhee et al., 1991), selain itu IL-6

akan meningkat dalam serum pasien yang mengalami infeksi saluran

kemih (Hedges et al., 1991) dan mastitis (Liu et al., 2015).

Demam, nyeri, serta peradangan yang ditimbulkan oleh infeksi

S.aureus merupakan respon terhadap zat antigen bakteri berupa

lipopolisakarida sebagai respon exogenous pyrogen yang

menstimulasi monosit/makrofag dan limfosit-T menghasilkan sitokin-

sitokin proinflamasi. Sitokin proinflamasi yaitu TNF-α, IL-1, IL-6 yang

saling berinteraksi membentuk cascade (Kamimure et al., 2014).

25

E. Tinjauan tentang Daun Pagoda (Clerodendrum Paniculatum. L)

1. Taksonomi

Taksonomi adalah pengelompokan atau pengklasifikasian jenis

tumbuhan ke dalam kelompok tertentu.Pengelompokan ini disusun

secara runtut sesuai dengan tingkatannya (hierarkinya), yaitu mulai

dari yang lebih besar tingkatannya hingga ke tingkatan yang lebih kecil.

Berikut ini dipaparkan taksonomi tanaman daun pagoda (EOL., 2013).

Tabel 2.2. Taksonomi tanaman beruwas laut

Taksonomi

Kingdom Plantae

Subkingdom Tracheophyta

Division Spermatophyta

Class Magnoliophyta

Ordo Lamiales

Family Verbenaceae

Genus Clerodendrum L.

Spesies Clerodendrum paniculatum L..

2. Morfologi tanaman

Bunga pagoda adalah salah satu tanaman yang termasuk

dalam famili Verbenaceae, biasa ditanam di taman, pekarangan

rumah, atau di tepi jalan daerah luar kota sebagai tanaman hias.

Tanaman ini merupakan jenis tanaman semak dengan tinggi 1-4 meter

dengan percabangan pada 4 sisi.Batangnya dipenuhi rambut

halus.Panjang tangkai daun 0,5-15 cm, berdaun tunggal, letak

berhadapan dengan bentuk bulat telur dengan pangkal berbentuk hati,

ukuran daun 8-36 cm x 6-24 cm. Bunganya majemuk berwarna

26

merah.Terdiri dari bunga kecil-kecil yang berkumpul membentuk

piramida keluar dari ujung tangkai (Dalimartha, 2008; Ganeshaiah,

2013).

Gambar 2.3. Bunga pagoda (Clerodendrum paniculatum L.)

Sumber : (Hafiz, Rosidah and Silalahi, 2016)

3. Sinonim

Sinonim dari bunga (Clerodendrum panicuatum L.) menurut

situs theplantlist.org (2010), yaitu Cleianthuscoccineus Lour. ex

B.A.Gomes, Clerodendrum diversifolium Vahl, Clerodendrum

pyramidale Andrews, Volkameriaangulata Lour., Volkameriadiversifolia

Vahl. Nama asing yaitu pagoda flower di Inggris dan bai jek hong atau

he bao hua di China. Nama daerahnya antara lain: tumbak raja (Bali),

singgugu (Sunda), srigunggu (Jawa), tinjau handak (Lampung),

27

punggur tosek (Madura)(Dalimartha, 2008; Hariana, 2008; Anonim,

2010).

Akar bunga pagoda berkhasiat sebagai antiradang, peluruh

kencing, dan mencegah pembekuan darah. Daun dari bunga pagoda

memiliki khasiat sebagai anti radang dan mengeluarkan nanah.

Bunganya berkhasiat sedatif dan menghentikan perdarahan

(Dalimartha, 2008). Penggunaan terapi C.paniculatum secara

tradisional di India, China, Thailand, Korea dan Jepang sebagai

pengobatan berbagai penyakit seperti HIV, sipilis, tipoid, kanker,

jaundis dan hipertensi (Florence, Joselin and Jeeva, 2012)

Khasiat berdasarkan hasil penelitian yang pernah dilakukan

terhadap daun dan akar Clerodendrum paniculatum L. diantara lain:

aktivitas antibakteri teerhadap Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis,

Escherichia coli dan Klebsiella pneumonia, Salmonella Newport, Vibrio

parahaemoliycus, Pseudomonas aeruginosa, Candida albicans (Leena

et al., 2012; Praveen et al., 2012; Joseph, Bindhu and Aleykutty, 2013),

akarnya terbukti memiliki aktivitas antioksidan (John, Jesil Mathew and

Manjunath Setty, 2008), sebagai antiinflamasi dan antimutagenik

(Joseph, Bindhu and Aleykutty, 2013; Phuneerub et al., 2015).

4. Senyawa aktif

Penelitian yang pernah dilakukan menunjukkan kandungan

senyawa kimia yang paling besar dari Clerodendrum adalah steroid,

seperti: β-sitosterol, γ-sitoterol octacosanol, clerosterol, bungein A,

28

acteoside, betulinic acid (Shrivastava and Patel, 2007). Kandungan lain

adalah senyawa tannin, terpen, termasuk di dalamnya monoterpen,

diterpen, triterpen, iridoid dan sesquiterpen. Flavonoid yang terdapat

pada genus Clerodendrum antara lain yang terbanyak adalah

cynaroside, kaempferol, salvigenin, 4-methyl scutellarein, hispidulin,

dan lain-lain. Glikosida yang terkandung pada Clerodendrum adalah

glikosida sianogenik seperti lucumin dan prunasin (Shrivastava and

Patel, 2007) Adapun aktivitas antiinflamasi genus Clerodendrum dapat

dilihat pada tabel dibawah:

Tabel 2.3. Aktivitas antiinflamasi genus Clerodendrum

No Bahan Tanaman Aktivitas

Antiinflamasi

Sumber

1 Akar Clerodendrum serratum 180 mg/kg Bhangare, et al.,

2012

2 DaunClerodendrum

viscosum

150 mg/kg Chandrashekar dan

Rao, 2013

3 Akar Clerodendrum

phlomidis

Tidak signifikan Parekar, et al., 2012

4 Daun Clerodendrum inerme positif Yankanchi dan Koli,

2010

5 Ekstrak Petroleum Eter dan

Kloroform Daun

Clerodendrum paniculatum

200 dan 400

mg/kg

Joseph, et al., 2013

Sumber : Hafiz, Rosidah and Silalahi, 2016

29

F. Tinjauan tentang Daun pagoda dengan IL-6

Salah satu jenis senyawa aktif pada Daun pagoda adalah

flavonoid. Flavonoid biasanya bermanfaat sebagai antiinflamasi, anti

kanker, antifertilitas, dan antidiabetes. Proses inflamasi yang

disebabkan oleh berbagai jenis bahan kimia dan agen biologis,

termasuk enzim proinflamasi dan sitokin. Enzim siklo oksigenase-2

(COX-2) dalam proses inflamasi mengkatalisis metabolisme asam

arakidonat menjadi prostaglandin. Bahkan COX-2 diekspresikan dalam

premalignant dan kondisi ganas.Senyawa flavonoid dalam Daun

pagoda bertanggung jawab untuk aktivitas antiinflamasi. Mekanisme ini

melibatkan kegiatan proinflamasi COX-2 atau diinjeksi nitrat oksida

sintase (iNOS) melalui senyawa flavonoid (Leyva-López et al., 2016).

Flafonoid bekerja dengan cara membentuk kompleks dengan

protein ekstraseluler dan terlarut dengan dinding mikroba, flavonoid

juga berperan secara langsung dengan mengganggu fungsi sel

mikroorganisme dan penghambatan siklus sel mikroba, mendenaturasi

protein sel bakteri dan merusak membran sel yang dapat berakibat lisis

pada sel bakteri (Shashank and Pandey, 2013; Parubak, 2013; Leyva-

López et al., 2016). Tanin menghambat dan membunuh pertumbuhan

bakteri, inaktivasi enzim-enzim esensial pada bakteri dan destruksi

fungsi dan materi genetic, menggangu transport protein pada lapisan

dalam sel, menyebabkan pembentukan dinding sel menjadi kurang

sempurna sehingga sel bakteri menjadi lisis karena tekanan osmotik

30

maupun fisik sehingga sel bakteri akan mati (Okuda, 2005; Ashok and

Upadhyaya, 2012)

Dalam penelitian lain didapatkan fakta bahwa flavonoid (6 –

demethoxytangeretin/6-DMT) menekan aktifitas sel human mast cell

line (HMC-1) melalui inhibisi aktifitas anaflastik limforma kinase (ALK)

dan mitogen activated protein kinase (MAPKs) yang akhirnya menekan

produksi dan ekspresi gen TNF-alpha dan IL-6. Hal ini menunjukkan

bahwa 6-DMT bisa berperan dalam pengaturan mast sel yang

memediasi respon inflamasi (Kim et al., 2014).

Penelitian dengan menggunakan total flavonoid secara oral

dengan dosis 0.5,10,15 mg/20 g BB yang diisolasi dari Radix

tetrastigmae akar dari T. hemsleyanum Diels et Gilg mampu menekan

perkembangan sel T regulator pada tikus. Flavonoid diberikan setiap

hari hingga 14 hari. Analisis HPLC menunjukkan bahwa kuersetin dan

keempferol adalah flavonoid yang terdapat dalam Radix tetrastigmae.

Dosis tertinggi menunjukkan total flavonoid yang diberikan mampu

menurunkan secara signifikan Transforming Growth Factor β (TGF β) .

prostaglandin E2 dan Cycloaxygenase 2 (Feng et al., 2014).

31

G. Hewan Coba

1. Taksonomi

Tikus putih (Rattus norvegicus) merupakan hewan pengerat dan

sering digunakan sebagai hewan percobaan atau digunakan untuk

penelitian, dikarenakan tikus merupakan hewan yang mewakili dari kelas

mamalia, kelengkapan organ, kebutuhan nutrisi, metabolisme biokimia,

sistem reproduksi, pernafasan, peredaran darah dan ekskresi menyerupai

manusia. Berikut ini dipaparkan pengklasifikasian hewantikus sebagai

berikut (Akbar, 2010) :

Tabel 2.4 . Taksonomi tikus putih

Taksonomi

Kingdom Animalia

Filum Chordata

Sub filum Vertebrata

Kelas Mamalia

Sub kelas Theria

Ordo Rodentia

Subordo Muridae

Famili Muridae

Genus Rattus

Spesies Rattus norvegicus L.

Tikus putih galur Sprague dawley paling sering digunakan sebagai

hewan percobaan karena memiliki berbagai sifat menguntungkan, seperti

(Wolfensohn, dan Lloyd, 2013) :

a. Cepat berkembang biak

b. Mudah dipelihara dalam jumlah banyak

c. Lebih tenang, dan ukurannya lebih besar daripada mencit

32

d. Pola makan ominivora seperti manusia

e. Memiliki saluran pencernaan dengan tipe monogastrik seperti

manusia

f. Kebutuhan nutrisi hampir menyerupai manusia

g. Mudah diberi makan per oral dan tidak mengalami muntah

karena tikus ini tidak memiliki kantung empedu.

2. Fisiologi tikus

Tikus putih umumnya memiliki ciri–ciri albino, kepala kecil dan ekor

yang lebih panjang dibandingkan badannya, pertumbuhannya cepat,

temperamennya buruk, kemampuan laktasi tinggi, dan tahan terhadap

perlakuan sedangkan galur Sprague dawley memiliki kepala yang lebih

besar dan ekor yang lebih pendek. Selain itu, tikus hanya mempunyai

kelenjar keringat di telapak kaki.Ekor tikus menjadi bagian badan yang

paling penting untuk mengurangi panas tubuh. Mekanisme perlindungan

lain adalah tikus akan mengeluarkan banyak ludah dan menutupi bulunya

dengan ludah tersebut (Wolfensohn, dan Lloyd, 2013).

33

H. Kerangka Teori

PAYUDARA IBU MENYUSUI

PUTING SUSU LECET

STASIS ASI TEKANAN DUKTUS

LACTIFERUS

BAKTERI

STAPHYLOCOCUS

AUREUS

Jalan masuk

SEL EPITEL DUKTUS LACTIFERUS

ADHESI, KOLONISASI, INVASI

MASTITIS OLEH BAKTERI

SITOKIN PROINFLAMASI IL-6

Stimulasi Sel T dan Sel B

DAUN PAGODA

(Clerodendrum

panuculatum L)

Flavonoid

Tanin

Produksi antibodi

immunomodulator

Mengaktifkan

respon imun

terhadap

infeksi bakteri

Menurunkan dan menghambat IL-6

Stimulasi Limfosit Nitrik Oksida

Menurunkan Prostaglandin

Stimulasi Sel B dan T

ImunitasHumoral

ProduksiAntibodi

LOBUS SEKRESI

RESPON INFLAMASI OLEH

SISTEM IMUN

ELIMINASI

BAKTERI

Sumber : (Banks, Kastin and Gutierrez, 1994; Baratawidjaja dan Rengganis,

2010; Amir, 2014; Abbas et al., 2016; Tong et al., 2015)

34

I. Kerangka konsep

: Variabel Independent

: Variabel Antara

:Variabel Dependent

J. Hipotesis

Ekstrak daun pagoda (Clerodendrum paniculatum. L) dapat digunakan

sebagai terapi komplementer untuk menstabilkan kadar sitokin IL-6

pada mammae Tikus betina sprague dawley yang di induksikan bakteri

staphylococcus aureus.

Tikus yang disuntikkan S. aureus

Ekstrak Daun Pagoda (Clerodendrum Paniculatum. L)

Kadar

IL-6

35

K. Definisi Operasional

Definisi operasional dalam penelitian ini adalah sebagai berikut :

1. Pemberian ekstrak Daun pagoda50 mg/kg BB

Definisi: daun pagoda adalah tanaman yang digunakan dalam

pengobatan inflamasi. Khususnya untuk pengobatan malaria,

penyakit kulit, kanker, tifus, dan hipertensi. Dalam penelitian ini

digunakan ekstrak daun pagoda 50 mg/KgBB.

Alat ukur : randomisasi

Satuan yang digunakan : miligram

Skala pengukuran : nominal

2. Pengukuran kadar IL-6

Kadar sitokin IL-6 adalah jumlah kadar sitokin yang banyak

disekresi oleh monosit, yang memiliki efek pleiotrofik pada sistem

kekebalan dan peradangan, diukur sebelum, selama dan setelah

diberikan perlakuan.

Alat ukur : diukur dengan metode elisa

Satuan yang digunakan : pg/ml

Skala pengukuran : rasio

36

BAB III

METODE PENELITIAN

A. Rancangan Penelitian

Jenis penelitian yang digunakan dalam penelitian ini adalah true

experimental atau eksperimen murni yaitu percobaan pada

laboratorium, dengan rancangan pre dan posttest control design.

Kelompok dibagi menjadi 3 (tiga) kelompok yaitu kelompok kontrol

negatif, kelompok kontrol positif, kelompok perlakuan.

B. Lokasi dan Waktu Penelitian

1. Lokasi Penelitian

Pembuatan ekstrak daun pagoda dilakukan di laboratorium

Biofarmaka fakultas farmasi Universitas Hasanuddin Makassar dan

Laboratorium Farmasi Biologi UIN Makassar. Penelitian dilakukan

di laboratorium Animal Fakultas Kedokteran Universitas

Hasanuddin Makassar. Sedangkan, untuk pemeriksaan kadar IL-6

pada sampel dilakukan di laboratorium RSP Universitas

Hasanuddin Makassar.

2. Waktu Penelitian

Penelitian ini telah dilaksanakan pada bulan Desember 2017 -

Maret 2018.

37

C. Populasi dan teknik sampel

Populasi dalam penelitian ini adalah tikus strain sprague dawley

dengan berat badan 200-250 gram sebanyak 18 ekor. Sampel dalam

penelitian ini adalah tikus strain sprague dawley dengan berat badan

200-250 gram sebanyak 18 ekor, namum dilakukan pengelompokan

secara acak untuk menghindari bias karena faktor umur. Penarikan

sampel dilakukan berdasarkan uji coba research guidelines for

evaluating the savety and efficaty of herbal medicine sesuai dengan

standar WHO yaitu minimal 5 (lima) ekor tikus strain sprague dawley

pada masing – masing kelompok dan cadangan ditambah 1 (satu)

setiap kelompok sehingga jumlah tikus yang dibutuhkan adalah 18

ekor yang dibagi menjadi 3 kelompok.

Guna mengantisipasi kekurangan sampel maka sebelum

perlakuan tikus strain sprague dawley yang disiapkan adalah 21 ekor

untuk dipelihara di Laboratorium Animal Fakultas Kedokteran Unhas

selama 7 (tujuh) hari agar kondisi fisik dan psikis tikus stabil dalam

ruangan dengan sirkulasi udara yang cukup dan dipertahankan pada

suhu ruangan dengan kondisi standar. Lampu ruangan dengan siklus

12 jam menyala dan 12 jam dipadamkan. Tikus dikandangkan terbuat

dari kawat ukuran 90

Selama pemeliharaan tikus diberikan makan diet standar

alamih dan diberi minum secukupnya secara ad libtum. Berikut kriteria

sampel :

38

1. Kriteria inklusi

a. Tikus strain Sprague Dawley

b. Berat badan 200-250 gram.

2. Kriteria eksklusi

a. Tikus tidak mau makan

b. Tikus sakit selama penelitian

3. Kriteria drop out

a. Tikus`mati sebelum pengambilan darah yang terakhir (akhir

perlakuan).

D. Instrument pengumpulan data

1. Bahan dan peralatan

a. Bahan yang akan digunakan dalam penelitian ini adalah sebagai

berikut :

1) Daun pagoda di dapatkan di pekarangan rumah masyarakat,

tepatnya di daerah Belopa Kabupaten Luwu dan ekstraksi

dilakukan di laboratorium Biofarmaka Unhas.

2) Hewan uji, tikus strain Sprague Dawley, berat badan 200-250

gram.

3) Makanan hewan (pallet)

4) Aqua pro injeksion

5) Antibiotik Amoxicillin @ 500 mg sebanyak 5 butir.

39

6) Bakteri S.aureus standar yang diperoleh dari laboratorium RSP

Unhas yang telah dibiakkan dan diinduksikan dengan jumlah

0,2 x 108 CFU pada mammae tikus tepatnya pada duktus

laktiferus.

b. Peralatan yang digunakan dalam penelitian ini adalah :

1) Kandang hewan coba

2) Timbangan digital

3) ELISA kit

4) Sarung tangan

5) Mikropipet dan spoit 1 mL.

2. Protokol penelitian

a. Ekstraksi

Daun pagoda diperoleh dari daerah Belopa Kabupaten Luwu

sebesar 5 kg daun mentah, kemudian dibersihkan dari kotoran

yang melekat dengan menggunakan air mengalir lalu sampel

dipotong-potong kecil, lalu dikeringkan menggunakan herb dryer

hingga mengandung kadar air dibawah 10%, setelah itu daun

pagoda diayak dengan ukuran mesh 40 sehingga didapatkan

sampel simplisia yang halus, setelah itu sampel siap untuk

diekstraksi dengan metode maserasi.

Ekstraksi dengan cara metode maserasi menggunakan

pelarut etanol 70%. Pada proses meserasi terlebih dahulu sampel

dibasahkan dengan etanol 70% hingga terendam sepenuhnya

40

selama 15 menit, setelah itu dicukupkan lagi menjadi 2 Liter dengan

etanol 70% pada suhu ruang selama 3 x 24 jam sambil sesekali di

aduk. Maserat kemudian disaring dan ampasnya dimaserasi

kembali.ekstrak yang diperoleh kemudian diuapkan dengan

menggunakan rotavapor hingga mengental, kemudian dikeringkan

dengan bantuan penangas air. Ekstrak kental yang dihasilkan

dimasukkan ke dalam vial / cawan porselen dan ditimbang bobot

ekstrak.

b. Uji Kualitatif ekstrak daun pagoda (Clerodendrum Paniculatum. L)

1. Uji Alkaloid

Ekstrak daun pagoda ditimbang 100 mg ditambahkan 1 ml asam

klorida 2 N dan 9 ml air suling, dipanaskan di atas penangas air

selama 2 menit dan didinginkan kemudian dituang ke dalam tiga

tabung reaksi.Pada masing-masing tabung reaksi ditambahkan

2 tetes pereaksi Mayer, tabung 2 diitambahkan 2 tetes pereaksi

Bouchardat, pada tabung 3 ditambahkan 2 tetes pereaksi

Dragendorff. Alkaloid positif jika terjadi endapan atau kekeruhan

pada dua dari tiga percobaan.

2. Uji Flavonoid

Ekstrak daun pagoda sebanyak 50 mg ditambahkan 10 ml air

panas, dan didinginkan. Ke dalam tabung pereaksi ditambahkan

0,1 g serbuk magnesium dan 1 ml asam klorida pekat dan 2 ml

amil alkohol. Dikocok dan dibiarkan memisah.Flavonoid positif

41

jika terjadi warna merah atau kuning atau jingga pada lapisan

amil alkohol.

3. Uji Steroid/ Terpenoid

Ekstrakdaun pagodaditimbang sebanyak 1 gr, dimaserasi

dengan 20 ml n-heksan selama 2 jam ditambahkan pereaksi

asam sulfat pekat melalui dinding cawan. Apabila terbentuk

warna ungu atau merah yang berubah menjadi biru ungu

ataubiru hijau menunjukkan adanya triterpenoid/steroid.

4. Uji Saponin

Ekstrak daun pagoda sebanyak sebanyak 0,5 gr dan

dimasukkan ke dalam tabung reaksi, lalu ditambahkan 10 ml air

panas, didinginkan, kemudian dikocok kuat-kuat selama 10

menit. Jika terbentuk busa setinggi 1-10 cm yang stabil tidak

kurang dari 10 menit dan tidak hilang dengan penambahan 1

tetes asam klorida 2 N menunjukkan adanya saponin.

5. Uji Tanin

Ekstrak daun pagoda sebanyak 1 gr ditambahkan aquadest 20

ml kemudian dipanaskan dan ditambahkan 1-2 tetes pereaksi

besi (III) klorida 1% b/v, jika terjadi warna biru kehitaman atau

hijau kehitaman menunjukkan adanya tanin.

c. Kultur bakteri

1. Bakteri S.aureus di tanam dalam medium BHIB dan diinkubasi

selama 18-24 jam dengan suhu 37°C dalam inkubator.

42

Kemudian bakteri tersebut ditanam pada medium Nutrient Agar

(NA) dan diinkubasi kembali selama 18-24 jam dengan suhu

37°C.

2. Setelah inkubasi bakteri, lakukan pewarnaan gram.

3. Koloni yang tumbuh pada NA dilakukan uji biokimia untuk

bakteri S. aureus dengan menanam pada medium DNAse agar

kemudian manitol salt agar, lalu lakukan bacitracin dan

Novobiocin test dilanjutkan dengan katalase koagulase test.

Kemudian diinkubasi kembali selama 18-24 jam dengan suhu

37°C.

4. Bakteri yang tumbuh pada uji biokimia dicocokkan dengan tabel

identifikasi bakteri S.aureus.

5. Untuk membuat sampel bakteri yang disuntikkan ke tikus

dengan cara membuat suspensi dalam larutan NaCl fisiologis

sebanyak 10 ml dicampurkan dengan koloni bakteri S. aureus

yang berwarna kuning emas dengan tingkat kekeruhan Mc

Farland 2 x 108 CFU. Keakuratan tingkat kekeruhan Mc Farland

diukur dengan alat Densi check.

d. Perlakuan pada subjek penelitian

Tikus dipelihara dari laboratorium animal Unhas. Uji coba

dilakukan berdasarkan uji coba research guidelines for evaluating

the savety and efficaty of herbal medicine sesuai dengan standar

WHO yaitu minimal 5 (lima) ekor. Tikus wistar betina pada masing –

43

masing kelompok dan cadangan ditambah 1 (satu) setiap kelompok

sehingga jumlah tikus yang dibutuhkan adalah 18 ekor yang dibagi

menjadi 3 kelompok. Percobaan akan dilakukan sesuai dengan

panduan penggunaan dan perawatan hewan laboratorium dan telah

mendapat izin dari Komite Etik Fakultas Kedokteran Unhas

Makssar.

Tikus betina sprague dawley sebanyak 18 ekor dibagi

menjadi 3 (tiga) kelompok dengan random, masing-masing

kelompok terdiri dari 6 (enam) ekor tikus dengan pembagian

kelompok sebagai berikut:

1) Kelompok kontrol negatif (I): injeksi bakteri S.aureus + air + diet

standar

2) Kelompok kontrol positif (II) : injeksi bakteri S.aureus +

Pemberian antibiotik amoxicillin 9,6 mg/250 grBB

3) Kelompok perlakuan (III) : injeksi bakteri S.aureus + Pemberian

antibiotik amoxicillin 9,6 mg/250 grBB + ekstrak daun pagoda 50

mg/kg BB

Pengukuran dilakukan dalam tiga tahapan sebagai berikut :

1) Pengukuran pertama (pre-test) kadar sitokin IL-6 pada masing-

masing kelompok dilakukan pada hari ke 8 setelah adaptasi,

pengambilan darah sebanyak 0,5 ml dilakukan pada mata dan

dilakukan penginduksian bakteri S.aureus pada payudara.

44

2) Pengukuran kedua untuk kadar sitokin IL-6 dilakukan setalah

18-24 jam setelah induksi bakteri dilakukan, dengan mengambil

darah pada daerah mata sebanyak 0,5 ml . Selanjutnya pada

hari ke-9 masing kelompok diberikan pengobatan yaitu pada

kelompok kontrol negatif hanya diberikan air saja dengan dosis

1 ml/250grBB tikus/24 jam selama 5 (lima) hari kedepan,

kelompok kontrol positif diberikan antibiotik amoxicillin dengan

dosis 9 mg/ml/200gramBB/24 jam selama 5 (lima) hari kedepan,

dan kelompok perlakuan diberikan antibiotik amoxicillin dengan

dosis 9 mg/250 grBB/24 jam + ekstrak daun pagoda dengan

dosis 50 mg/kgBB 24 jam selama 5 (lima) hari kedepan.

3) Pengukuran ketiga untuk kadar sitokin IL-6 dilakukan pada hari

ke-14 pada semua kelompok, dengan mengambil darah pada

daerah mata sebanyak 0,5 ml .

e. Uji histopatologi

1. Sebelum tikus di induksikan bakteri S.aureus pada semua

kelompok, maka akan dilakukan uji histopatologi pada satu ekor

tikus sebagai parameter bahwa teknik injeksi dan pertumbuhan

bakteri tepat pada bagian duktus laktiferus.

2. Setalah dilakukan uji histopatologi dan menunjukkan hasil yang

diharapkan bahwa terdapat radang pada mammae tikus

khususnya bagian duktus laktiferus.

45

f. Pemeriksaan kadar interleukin 6 (IL-6)

Instrumen pengumpulan data penelitian dilakukan dengan

metode Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA). Sebuah

monoklonal antibodi spesifik untuk tikus IL-6 sebelumnya telah

dilapisi ke lempeng standar, Control, dan sampel dipipet ke dalam

sumur dan IL-6 terikat oleh antibodi. Setelah membasuh zat terikat,

sebuah enzim-linked poliklonal antibodi khusus untuk tikus IL-6

ditambahkan ke sumur. Berikut mencuci untuk menghilangkan

enzim reagenyang terikat di antibodi, solusi substrat ditambahkan

ke sumur. Reaksi enzim menghasilkan produk biru yang berubah

menjadi kuning ketika Stop Solution ditambahkan. Intensitas warna

diukur secara proporsional dengan jumlah IL-6 terikat pada

langkah awal. Nilai sampel dibaca dengan kurva standar.

Tahap yang dilakukan adalah :

1. Kontrol Rat IL-6 disiapkan dengan 1 ml air deionisasi atau air

suling sebagai kontrol murni. Kemudian menyiapkan wash

buffer, jika kristal telah terbentuk dalam konsentrat, hangat

untuk suhu kamar dan aduk sampai kristal telah benar-benar

larut. Untuk mempersiapkan cukup Wash Buffer untuk satu

piring, tambahkan 20 ml Wash Buffer Berkonsentrasi untuk air

deionisasi atau suling untuk mempersiapkan 500 ml Wash

Buffer.

2. Substrat solusion yaitu reagen Warna A dan B harus dicampur

46

bersama-sama dalam volume yang sama dalam waktu 15 menit

penggunaan. Lindungi dari cahaya. 100 µL campuran yang

dihasilkan diperlukan per sumur. Menyiapkan Rat IL-6 mengacu

pada label botol untuk volume pemulihan.

3. Rat IL-6 Standard disusun kembali dengan calibrator Pengencer

RD1-54 dengan tidak mengganti pengencer lainnya. Proses ini

menghasilkan larutan stok 850 µL memungkinkan standar

melekat selama minimal 5 menit dengan lembut pencampuran

sebelum membuat pengenceran. Menggunakan tabung

polypropylene. Pipet 200 µL Calibrator Pengencer RD1-54 ke

masing-masing tabung. Gunakan larutan stok untuk

menghasilkan serangkaian pengenceran. Campur masing-

masing tabung secara menyeluruh sebelum transfer berikutnya.

Standar Rat IL-6 murni 800 µL berfungsi sebagai standar yang

tinggi. Kalibrator Pengencer RD1-54 berfungsi sebagai standar

nol (0 pg/mL).

4. Sampel serum disiapkan sebelum digunakan, dibiarkan di suhu

ruangan selama 4 jam dan di fortex. Hapus kelebihan strip

lempeng dari frame piring, kembalikan ke kantong foil yang

berisi paket pengering, dan reseal.

5. Sebanyak 50 µL Assay Pengencer ditambahkan untuk masing-

masing well dan ditambahkan 50 µL Standar, kontrol, atau

sampel. Campur dengan menekan lembut frame piring untuk 1

47

menit dan tutup dengan strip perekat yang disediakan lalu

diinkubasi selama 2 jam pada suhu kamar.

6. Masing-masing well diaspirasi dan cuci, dan mengulangi proses

cuci empat kali sampai lima kali dengan mengisi masing-masing

well dengan Wash Buffer (400 µL) menggunakan botol semprot,

dispenser manifold, atau autowasher. Penghapusan lengkap

cair pada setiap langkah sangat penting untuk kinerja yang baik.

Setelah mencuci terakhir, menghilangkan sisa Wash Buffer

dengan membalik piring menghadap handuk atau kertas bersih.

7. Rat IL-6 Conjugate ditambahkan pada masing-masing well

sebanyak 100 µL. Tutup dengan strip perekat baru. Inkubasi

selama 2 jam pada suhu kamar.

8. Mengulangi pencucian seperti pada langkah 6.

9. Substrat Solusion ditambahkan sebanyak 100 µL pada masing

masing well. Inkubasi selama 30 menit pada suhu kamar.

Lindungi dari cahaya. Kemudian tambah Stop Solution

sebanyak 100 µL untuk setiap well. Tekan dengan lembut piring

untuk memastikan menyeluruh pencampuran.

10. Kepadatan optik ditentukan pada masing-masing well dalam

waktu 30 menit, menggunakan microplate reader ELISA ke 450

nm. Jika koreksi panjang gelombang tersedia, set ke 540 nm

atau 570 nm. Jika koreksi panjang gelombang tidak tersedia,

kurangi pembacaan pada 540 nm atau 570 nm dari pembacaan

48

pada 450 nm. Pengurangan ini akan mengoreksi

ketidaksempurnaan optik di piring. Pembacaan dilakukan secara

langsung di 450 nm tanpa koreksi mungkin lebih tinggi dan

kurang akurat.

E. Etika penelitian

Dalam hal memanfaatkan hewan percobaan untuk penelitian

kesehatan digunakan prinsip 3R, yaitu: replacement, reduction dan

refinement. (Hume and Russel, 1957)

1. Replacement

Ada dua alternatif untuk replacement, yaitu:

a. Replacement relatif, yaitu tetap memanfaatkan hewan percobaan

sebagai donor organ, jaringan, atau sel.

b. Replacement absolut, yaitu tidak memerlukan bahan dari hewan,

melainkan memanfaatkan galur sel (cell lines) atau program

komputer.

2. Reduction

Mengurangi pemanfaatan jumlah hewan percobaan sehingga sesedikit

mungkin dengan bantuan ilmu statistik, program komputer, dan teknik-

teknik biokimia serta tidak mengulangi penelitian dengan hewan

percobaan apabila tidak perlu.

49

3. Refinement

Mengurangi ketidak nyamanan yang diderita oleh hewan percobaan

sebelum, selama, dan setelah penelitian, misalnya dengan pemberian

analgetik.

F. Analisis data

Data diolah dan dianalisis dengan bantuan menggunakan piranti

komputer. Efek pemberian ekstrak daun pagoda, kadar sitokin IL-6

ditampilkan dalam bentuk mean (standar deviasi). Uji bivariat

menggunakan uji repeted anova apabila data terdistribusi normal

untuk melihat perbedaan kadar IL-6 pada masing-masing kelompok

yaitu kelompok kontrol negatif, kontrol positif, dan kelompok perlakuan

sebelum, selama dan setelah diberikan perlakuan. Selain itu dilakukan

pula uji one way anova untuk melihat perbedaan kadar IL-6 antar

kelompok yaitu kelompok kontrol negatif, kontrol positif, dan kelompok

perlakuan, dilanjutkan dengan analisis post hoc.

50

G. Alur Penelitian

POPULASI

SAMPEL

PRE-EKSPERIMEN

HARI KE-9HARI 1-7 HARI KE-8HARI KE-8

PENGAMBILAN

DARAH UNTUK

PENGUKURAN

KADAR IL-6

PROSES ADAPTASI

INJEKSI

STAPHILOCOCCUS

AUREUSPENGAMBILAN

DARAH UNTUK

PENGUKURAN IL-6

P0ST EKSPERIMEN

HARI KE-14HARI KE 9-13

PEMBERIAN PAKAN NORMAL DAN AIR

PENGAMBILAN DARAH UNTUK

PENGUKURAN KADAR IL-6

KELOMPOK I

KONTROL NEGATIF

PRE-EKSPERIMEN

HARI KE-9HARI 1-7 HARI KE-8HARI KE-8

PENGAMBILAN

DARAH UNTUK

PENGUKURAN

KADAR IL-6

PROSES ADAPTASIINJEKSI

STAPHILOCOCCUS

AUREUS

PENGAMBIAN

DARAH UNTUK

PENGUKURAN IL-6

PRE-EKSPERIMEN

HARI KE-14HARI KE 9-13

Antibiotik amoxicillin 9,6 mg/250

grBB

PENGAMBILAN DARAH UNTUK

PENGUKURAN KADAR IL-6

KELOMPOK II

KONTROL POSITIF

PRE-EKSPERIMEN

HARI KE-9HARI 1-7 HARI KE-8HARI KE-8

PENGAMBILAN

DARAH UNTUK

PENGUKURAN

KADAR IL-6

PROSES ADAPTASI INJEKSI

STAPHILOCOCCUS

AUREUS

PENGAMBILAN

DARAH UNTUK

PENGUKURAN IL-6

HARI KE-14HARI KE 9-13

Antibiotik Amoxicillin 9,6 mg/

250 grBB + EDP 50 mg/kg BB

PENGAMBILAN DARAH UNTUK

PENGUKURAN KADAR IL-6

KELOMPOK III

PERLAKUANPRE-EKSPERIMEN

PENGOLAHAN DATA

KESIMPULAN

51

BAB IV

HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN

A. Hasil Penelitian

Penelitian ini dilaksanakan pada bulan Desember 2017 – Maret

2018, penelitian ini menggunakan 4 laboratorium yaitu laboratorium

Biofarmaka Unhas untuk proses pengeringan simplisia daun pagoda,

laboratorium Farmasi Biologi UIN Makassar untuk pembuatan ekstrak

etanol daun pagoda, laboratorium Animal Fak. Kedokteran Unhas untuk

pemeliharaan dan perlakuan hewan coba. Laboratorium penelitian RSP

Unhas untuk pembuatan slide histopatologi dan untuk mengukur kadar IL-

6 dengan teknik ELISA.

Sebelum penelitian utama dilakuan terlebih dahulu dilakukan

pengekstrakan. Daun pagoda dibersihkan dari kotoran yang melekat

dengan menggunakan air mengalir lalu sampel dipotong-potong kecil, lalu

dikeringkan hingga mengandung kadar air dibawah 10%, setelah itu Daun

pagoda diayak dengan ukuran mesh 40 sehingga didapatkan sampel

simplisia yang halus hingga sampel siap untuk diekstraksi dengan metode

maserasi. Ekstraksi dengan metode maserasi menggunakan pelarut

etanol 70%. Pada proses meserasi, terlebih dahulu sampel dibasahi

dengan etanol 70% hingga terendam sepenuhnya selama 15 menit,

setelah itu dicukupkan lagi menjadi 2 Liter dengan etanol 70% pada suhu

ruang selama 3 x 24 jam sambil sesekali di aduk. Maserat kemudian

52

disaring dan ampasnya dimaserasi kembali.Ekstrak yang diperoleh

kemudian diuapkan dengan menggunakan rotavapor hingga mengental,

kemudian dikeringkan dengan bantuan penangas air.

Sampel dalam penelitian ini adalah tikus betina strain Sprangue

Dawley dengan berat badan 200-250 gr gram sebanyak 18 ekor. Setiap

kelompok terdiri dari 6 ekor tikus betina. Sebelum perlakuan tikus ini

diadaptasi di Laboratorium Animal Fakultas Kedokteran Unhas selama 7

(tujuh) hari agar kondisi fisik dan psikis tikus stabil. Selanjutnya dilakukan

pengambilan darah pertama pada hari ke-8, pada hari ke-9 penyuntikan

bakteri S.aureus secara intraduktal pada salah satu payudara tikus. Hari

ke-10 pengambilan darah ke 2, kemudian diberikan perlakuan selama 5

hari. Adapun Perlakuan yang diberikan pada kelompok kontrol negatif

berupa air + diet standar, pada kelompok kontrol positif diberikan antibiotik

amoxicillin 9,6 mg/250 grBB dan pada kelompok perlakuan diberikan

antibiotik amoxicillin 9,6mg/250 grBB + EDP 50 mg/kgBB. Dan dilakukan

pengambilan darah terakhir pada hari ke-15.

1. Uji fitokimia dasar ekstrak daun pagoda

Kandungan fitokimia atau metabolit sekunder pada ekstrak daun

pagoda telah ditentukan secara kualitatif.Hasil analisis fitokimia pada

ekstrak daun pagoda secara kualitatif menunjukkan adanya kandungan

senyawa fitokimia meliputi plavonoid dan tannin, namun ekstrak etanol

53

daun pagoda tidak terdeteksi adanya senyawa fitokimia alkaloid, steroid,

dan saponin (Tabel 5.)

Tabel 4.1. Analisis kandungan fitokimia ekstrak daun pagoda

Fitokimia Hasil Analisis

Alkaloid -

Flavonoid +

Steroid/Triterpenoid -

Saponin -

Tanin +

2. Rerata berat badan tikus pada masing-masing kelompok

Tabel 4.2. Rerata berat badan tikus pada masing-masing kelompok

Berat badan Rerata +

SD (Min-Maks)

Nilai

ρ

Kelompok kontrol negatif 216 ± 8 207 – 225

Kelompok kontrol positif 220 ± 11 207 – 232 0,14

Kelompok kontrol perlakuan 227,3 ± 6,9 220 – 234

Data disajikan dalam bentuk rerata±SD.

Berdasarkan tabel 4.2. menunjukkan bahwa rerata berat

badan tikus pada kelompok kontrol negatif adalah 216 ± 8 gram,

pada kelompok kontrol positif adalah 220 ± 11 gram, dan pada

kelompok perlakuan adalah 227 ± 6,9 gram.

54

3. Rerata perbedaan kadar IL-6 pada masing- masing kelompok tikus betina sebelum, selama dan setelah pemberian ekstrak daun pagoda (Clerodendrum Paniculatum. L)

Tabel 4.3.

Rerata perbedaan kadar IL-6 pada masing- masing kelompok tikus betina sebelum, selama dan setelah pemberian ekstrak daun

pagoda (clerodendrum paniculatum.L)

Kelompok

Kadar IL-6 (pg/ml)

Nilai ρ Sebelum

Setelah diinduksi

S.A

Setelah perlakuan

Mean±SD Mean±SD Mean±SD

Kontrol negatif

(n =6) 725,0 ± 16,9 913,8 ± 17,3

992,9 ± 9,7 0,00

a

Kontrol positif

(Antibiotik flukloksasilin

9,6 mg/250grBB )

(n =6)

722,0 ± 24,9 915,3 ± 28,1 834,6 ± 31,7 0,00 a

Perlakuan

(Antibiotik flukloksasilin

9,6 mg/250grBB +

ekstrak daun pagoda

50 mg/kgBB

(n =6)

717,0 ± 22,54 914,6 ± 21,8 753,3 ± 28 0,00 a

Nilai ρ 0,84 b 0,99

b 0,00

b

* ANOVA. a Repeated ANOVA

b One Way Anova

Berdasarkan tabel 4.3 diatas menunjukkan bahwa dari hasil uji

statistik repetead ANOVA diperoleh nilai ρ = 0.00 lebih kecil dari nila α =

0.05 pada semua kelompok yaitu kelompok kontrol negatif, positif dan

perlakuan. Hal tersebut berarti terdapat perbedaan kadar IL-6 baik pada

kelompok kontrol negatif, positif dan perlakuan sebelum, setelah

diinduksi S.aureus ± 24 jam dan setelah diberikan treatment.

55

Hasil uji statistik menggunakan One Way Anova diperoleh nilai ρ =

0,84 pada pengukuran sebelum diinduksi S.Aureus dan nilai ρ = 0,99

pada pengukuran setelah diinduksi ± 24 jam. Hal tersebut berarti tidak

terdapat perbedaan kadar IL-6 baik pada pengukuran sebelum, dan

setelah induksi S.Aureus pada masing-masing kelompok. Sedangkan

pada pengukuran setelah diberikan treatment diperoleh nilai ρ=0,00.

Hal tersebut berarti terdapat perbedaan kadar iL-6 setelah diberikan

treatment pada masing-masing kelompok.

Gambar 4.1. Trend kadar IL-6 pada masing-masing kelompok tikus betina strain Sprague Dawley sebelum, setelah diinduksi S.aureus dan setelah diberikan treatment.

56

4. Analisis perbedaan kadar IL-6 sebelum perlakuan, setelah diinduksi staphylococcus aureus dan setelah diberikan treatment antar kelompok

Guna melihat analisis perbedaan kadar IL-6 sebelum, setelah

diinduksi s.aureus dan setelah diberikan treatment pada masing-masing

kelompok tikus betina yang induksi bakteri staphylococcus aureus

dilanjutkan dengan analisis post hoc Bonferroni karena telah memenuhi

syarat data terdistribusi normal dan varian data sama, disajikan dalam

bentuk tabel, sebagai berikut :

Tabel 4.5 Analisis perbedaan kadar IL-6 sebelum, setelah diinduksi

s.aureus dan setelah diberikan treatment pada masing-

masing kelompok.

Pengukuran Mean ± SD Selisih Mean

Nilai

ρ*

Nilai

ρ

Sebelum perlakuan

0,84

Kontrol negative 725,0 ± 16,9 2,7 1,00

Kontrol positif 722,3 ± 24,9

Kontrol negative 725,0 ± 16,9 7,4 1,00

Perlakuan 717,6 ± 22,54

Kontrol positif 722,3 ± 24,9 4,7 1,00

Perlakuan 717,6 ± 22,54

Setelah induksi bakteri S. aureus

Kontrol negative 913,8 ± 17,3 -1,5 1,00

0, 99

Kontrol positif 915,3 ± 28,1

Kontrol negative 913,8 ± 17,3 -0,8 1,00

Perlakuan 914,6 ± 21,8

Kontrol positif 915,3 ± 28,1 -0,7 1,00

Perlakuan 914,6 ± 21,8

Setelah treatment

0,00

Kontrol negative 992,9 ± 9,7 158,3 0.00

Kontrol positif 834,6 ± 31,7

Kontrol negative 992,9 ± 9,7 239,6 0.00

Perlakuan 753,3 ± 28

Kontrol positif 834,6 ± 31,7 81,3 0.00

Perlakuan 753,3 ± 28 *One Way ANOVA + post hoc Bonferroni

57

Pada tabel 4.5 hasil analisis post hoc sebelum dan setelah

diinduksi bakteri s. aureus diperoleh nilai ρ > 0,05 antar masing-masing

kelompok. Hal ini menunjukkan tidak ada perbedaan kadar sitokin

IL-6, baik sebelum dan setelah diinduksikan bakteri staphylococcus

aureus ± 24 jam pada semua kelompok. Sedangkan setelah diberikan

treatment diperoleh nilai p < 0,05 antar semua kelompok. Hal ini

menunjukkan ada perbedaan kadar IL-6 setelah diberikan treatment

antar semua kelompok.

5. Analisis perbedaan kadar IL-6 antar kelompok tikus betina strain Sprague Dawley sebelum, setelah diinduksi bakteri staphylococcus aureus dan setelah diberikan treatment pada semua kelompok.

Guna melihat analisis perbedaan kadar IL-6 pada kelompok

perlakuan tikus betina strain Sprague Dawly sebelum, setelah diinduksi

bakteri staphylococcus aureus dan setelah diberikan treatment

dilanjutkan dengan analisis post hoc Bonferroni karena telah memenuhi

syarat data terdistribusi normal dan homogen, disajikan dalam bentuk

tabel, sebagai berikut :

58

Tabel 4.6 Analisis perbedaan kadar IL-6 antar kelompok tikus betina strain sprague dawley sebelum, setelah diinduksi bakteri staphylococcus aureus dan setelah diberikan treatment.

Pengukuran Mean ± SD Selisih Mean

Nilai ρ*

Nilai ρ

Kontrol negative

0,000

Sebelum 725,0 ± 16,9 -188,8 0,000

Setelah induksi S.aureus 913,8 ± 17,3

Sebelum 725,0 ± 16,9 -267,9 0,000

Setelah treatment 992,9 ± 9,7

Setelah induksi S.aureus 913,8 ± 17,3 -79,1 0,000

Setelah treatment 992,9 ± 9,7

Kontrol positif

Sebelum 722,3 ± 24,9 -192,7 0,000

0, 001

Setelah induksi S.aureus 915 ,0 ± 28,1

Sebelum 722,3 ± 24,9 -112,3 0,000

Setelah treatment 834,6 ± 31,7 Setelah induksi S.aureus 915 ,0 ± 28,1

80,4 0,001 Setelah treatment 834,6 ± 31,7

Perlakuan 0,000

Sebelum 717,6 ± 22,54 -197 0,000

Setelah induksi S.aureus 914,6 ± 21,8

Sebelum 717,6 ± 22,54 -35,7 0,101

Setelah treatment 753,3 ± 28 Setelah induksi S.aureus 914,6 ± 21,8

161,3 0,000 Setelah treatment 753,3 ± 28

*Repeated ANOVA + post hoc Bonferroni

Pada tabel 4.6 menunjukkan hasil uji repetead ANOVA pada

kelompok perlakuan sebelum dan setelah diberikan treatment diperoleh

nilai ρ = 0,10 lebih besar dari nilai α = 0,05. Hal ini menunjukkan tidak

ada perbedaan kadar sitokin IL-6 sebelum diinjeksi S.aureus dan

setelah diberikan treatment pada kelompok perlakuan. Sedangkan

pada kelompok kontrol negatif dan positif diperoleh nilai ρ < 0,05, baik

sebelum, setelah induksi s. aureus ± 24 jam dan setelah diberikan

59

treatment. Hal ini menunjukkan ada perbedaan kadar sitokin IL-6 pada

kelompok kontrol negatif dan positif, baik sebelum, setelah induksi s.

aureus ± 24 jam dan setelah diberikan treatment.

6. Uji histopatologi

a. Kelompok kontrol normal

Gambaran mikroskopik pada payudara tikus kelompok

kontrol normal menunjukkan duktus laktiferus yang dilapisi sel

epitel normal dan dikelilingi oleh jaringan ikat serta pembuluh

darah.

A B C

Gambar 4.2.

Gambaran mikroskopik pada payudara tikus kelompok kontrol normal. (A) Tampak adanya pembuluh darah, (B) tampak adanya sel epitel yang normal dikelilingi oleh jaringan ikat, (C) tampak adanya duktus laktiferus.

60

b. Kelompok kontrol negatif

Gambaran mikroskopik pada payudara tikus kelompok

kontrol negatif yaitu kelompok yang diinduksikan bakteri

staphylococcus aureus tanpa diberikan pelakuan menunjukkan

adanya sel-sel radang Polimorfonuklear (PMN) disekitar jaringan

ikat yang tidak dijumpai pada kelompok kontrol normal. Nampak

penebalan lapisan sel epitel yang mengelilingi duktus laktiferus.

A

B

Gambar 4.3.

Gambaran mikroskopik pada payudara tikus kelompok kontrol negatif. (A) tampak adanya sel-sel radang PNM disekitar jaringan ikat (B) tampak adanya sel radang disekitar lapisan sel epitel.

61

c. Kelompok kontrol positif

Gambaran mikroskopik pada payudara tikus kelompok

kontrol positif yaitu kelompok yang diinduksikan bakteri

staphylococcus aureus dan diberikan antibiotik amoxilcillin 9 mg

/hari secara oral selama 5 (lima) hari menunjukkan sel-sel radang

Polimorfonuklear (PMN) disekitar jaringan ikat dan sekeliling sel

epitel dan duktus laktiferus berkurang.

A B

Gambar 4.4.

Gambaran mikroskopik pada payudara tikus kelompok kontrol positif (A) Tampak adanya sel-sel radang PMN yang mengelilingi kelenjar susu (B) tampak adanya sel radang disekitar jaringan ikat.

62

d. Kelompok perlakuan

Gambaran mikroskopik pada payudara tikus kelompok

kontrol perlakuan yaitu kelompok yang diinduksikan bakteri

staphylococcus aureus dan diberikan antibiotik amoxilcillin dengan

dosis 9 mg/kgBB + ekstrak daun pagoda dengan dosis 50

mg/kgBB perhari secara oral ditambah dengan ekstrak daun

pagoda 50 mg / Kg BB selama 5 (lima) hari dan menunjukkan sel-

sel radang Polimorfonuklear (PMN) disekitar jaringan ikat, kelenjar

susu dan sel epitel berkurang.

A

Gambar 4.5.

Gambaran mikroskopik pada payudara tikus kelompok perlakuan (A) Tampak adanya sel-sel radang PMN disekitar jaringan ikat.

63

B. Pembahasan

1. Analisis hasil uji fitokimia dasar ekstrak daun pagoda

Hasil uji kualitatif ekstrak daun pagoda (clerodendrum

paniculatum. L), didapatkan senyawa kimia yang terkandung dalam

tanaman yaitu flavonoid dan tannin. Hal ini sejalan dengan penelitian

terdahulu yang melakukan uji kualitatif EDP menunjukkan hasil positif

terdapat flavonoid, tanin, saponin, glikosida, steroid dan terpenoid

(Shrivastava and Patel, 2007; Arun. P. V, Sachin. S, 2011; Hafiz,

Rosidah and Silalahi, 2016). Hasil skrining ekstrak etanol daun pagoda

dalam penelitian ini tidak menunjukkan adanya senyawa alkaloid,

saponin, dan steroid yang teridentifikasi.

Perbedaan hasil skrining ini tidak memberikan pengaruh besar

terhadap nilai penelitian, karena senyawa yang sebenarnya diharapkan

ada pada ekstrak etanol daun pagoda yang berpengaruh dominan

dalam aktivitas antiinflamasi adalah flavonoid dan tanin, hal ini di

diperkuat dengan penelitian yang mendapati bahwa flavonoid yang

terkandung dalam ekstrak metanol dan kloroform Daun Pagoda

merupakan anti inflamasi yang efektif terhadap bakteri Staphylococcus

Aureus, Pseudomonas aeruginosa dan Candida albicans (Rathee et

al., 2009; Praveen et al., 2012; Shashank and Pandey, 2013)

Flavonoid dan tanin merupakan senyawa polifenol yang terdapat

pada tumbuhan yang memiliki efek biologis seperti anti bakteri,

antioksidan, dan aktivitas antiinflamasi. Flavonoid bersifat polar

64

sehingga senyawa inilah yang mengakibatkan senyawa lebih mudah

menembus dinding sel bakteri. Sementara tanin menyebabkan dinding

bakteri yang telah lisis akibat senyawa flavonoid sehingga senyawa

tanin dapat dengan mudah masuk ke dalam sel dan mengkoagulasi

protoplasma sel bakteri (Okuda, 2005; Ashok and Upadhyaya, 2012;

Joseph, Bindhu and Aleykutty, 2013; Leyva-López et al., 2016)

2. Efek pemberian ekstrak daun pagoda terhadap kadar IL-6 pada

tikus Sprague dawley yang di induksi bakteri Staphylococcus

Aureus

Pada kelompok kontrol negatif, rerata kadar IL-6 terus

meningkat baik sebelum, setelah di injeksi S.aureus dan setelah 5 hari

diberi diberi air + pakan standar. Hal ini dikarenakan IL-6 merupakan

salah satu mediator yang paling awal dan penting dalam induksi dan

mengontrol sintesa protein fase akut. Pada saat terjadi inflamasi

konsentrasi plasma IL-6 bisa di deteksi dalam 60 menit dan dapat

bertahan sampai 10 hari. selain itu IL-6 akan terus meningkat dalam

serum pasien yang mengalami infeksi saluran kemih dan mastitis

(Miller et al., 1994; Hedges et al., 1991; Liu et al., 2015).

Peningkatan kadar IL-6 disebabkan oleh adanya respon imun

seluler yang dilakukan dengan memberikan injeksi s.aureus sehingga

terjadi respon imun terhadap bakteri ini. Sebagai respon terhadap

bakteri S.aureus dan bakteri gram positif yang lain maka aktivitas

65

sitokin proinflamasi IL-6 dan TNF-α akan meningkat, sitokin

proinflamasi disintesis dan terjadi inflamasi sistemik.IFN-γ juga dikenal

sebagai macrophage activating factor (MAF) berperan penting dalam

infeksi persisten yang dipengaruhi oleh durasi aktivasi makrofag

(Wyant et. al,. 1999; Baratawidjaja, 2006).

Pada kelompok kontrol positif, setelah diinduksi bakteri rerata

kadar il-6 meningkat dan setelah diberikan antibiotik amoksillin selama

5 hari mengalami penurunan sebesar 834,6 pg/ml. Penurunan rerata

kadar il-6 terkait dengan mekanisme kerja antibiotik amoksillin dalam

membunuh bakteri S.Aureus dengan cara menghambat sintesis

dinding sel bakteri, protein bakteri, protein asam nukleat bakteri dan

menghambat jalur metabolisme utama bakteri. Materi genetik bakteri

yang ada didalamnya terurai keluar akibat mekanisme kerja amoksillin

dan menyebabkan bakteri mati sehingga inflamasi menurun dan kadar

IL-6 juga menurun (Nester., 2009).

Sebuah penelitian memperlihatkan bahwa pemberian antibiotik

disertai dengan pengosongan payudara pada mastitis mempercepat

penyembuhan bila dibandingkan dengan pengosongan payudara saja.

Satu percobaan kecil membandingkan amoksisilin dengan cephradine

tidak menemukan perbedaan yang signifikan antara kedua antibiotik

tersebut dalam hal pembentukan gejala dan abses. Namun peneliti

menyarankan menggunakan antibiotik amoksisilin untuk meringankan

66

gejala mastitis dengan cepat pada wanita postpartum. (Elliman et. al,.

2012; Bolman et al., 2013; Jahanfar et. al., 2013).

Pada kelompok perlakuan didapatkan kadar IL-6 meningkat

setelah diinjeksi bakteri S.aureus kemudian mengalami penurunan

setelah diberikan treatment ekstrak daun pagoda 50 mg/kgBB +

amoxicillin 9,6 gr/ 250 grBB selama 5 hari. Penurunan rerata kadar IL-

6 pada kelompok perlakuan dikarenakan mekanisme kerja antibiotik

amoxicillin di gabungkan dengan ekstrak daun pagoda yang

mengandung senyawa fitokimia seperti flavonoid dan tanin yang

apabila bekerja bersama sama memiliki efek biological sebagai

antioksidant, antibakteri, dan antiinflamasi sehingga kadar IL-6 yang

meningkat akibat infeksi bakteri S.aureus pada mammae tikus menjadi

normal kembali (Nester., 2009; Kim et al., 2016).

Senyawa flavonoid dan tanin dalam Daun pagoda bertanggung

jawab untuk aktivitas antiinflamasi. Mekanisme ini melibatkan kegiatan

proinflamasi COX-2 atau diinjeksi nitrat oksida sintase (iNOS) melalui

senyawa flavonoid. Dalam penelitian lain didapatkan fakta bahwa

flavonoid (6-DMT) menekan aktifitas sel HMC-1 dengan PMA melalui

inhibisi aktifitas anaflastik limforma kinase (ALK) dan mitogen activated

protein kinase (MAPKs) yang akhirnya menekan produksi dan ekspresi

gen TNF-alpha dan IL-6.hal ini menunjukkan bahwa 6-DMT bisa

berperan dalam pengaturan mast sel yang memediasi respon inflamasi

(Kim et al., 2014; Leyva-López et al., 2016).

67

Tidak terdapat perbedaan rerata kadar IL-6 yang signifikan

antara kontrol negatif, kelompok kontrol positif, kelompok perlakuan

sebelum induksi bakteri. Ini merupakan kode bahwa semua tikus yang

digunakan dalam penelitian ini benar sehat. Menurut Bruunsgaard

(2005) produksi IL-6 bertujuan untuk menghentikan hipertrofi jaringan

yang terinfeksi karena dianggap memiliki peran penting dalam dalam

aktivitas antiinflamasi yang bagus untuk kesehatan, akan tetapi

peningkatan IL-6 yang berlebihan juga merupakan penanda yang kuat

pada tubuh bahwa terjadi gangguan kronis yang terkait dengan

peradangan sistemik dan semua bisa menjadi penyebab kematian.

Hasil penelitian ini mendapatkan perbedaan kadar IL-6 yang

bermakna pada masing -masing kelompok perlakuan dengan rerata.

992,9 pg/ml pada kelompok kontrol negatif, 834,6 pg/ml pada

kelompok kontrol positif dan pada kelompok perlakuan adalah 753,3 ±

28 pg/ml. Ekstrak daun pagoda sebagai suplemen komplementer

secara signifikan dapat menekan produksi IL-6 pada tikus betina yang

terinfeksi bakteri S.aureus serta meningkatkan kerja makrofag

melakukan fagositosis. Hal ini sejalan dengan penelitian sebelumnya

yang mengatakan bahwa flavonoid yang terkandung dalam ekstrak

metanol dan kloroform Daun Pagoda merupakan antiinflamasi yang

efektif terhadap bakteri S.aureus. Penelitian lain menunjukkan bahwa

ekstrak daun pagoda memiliki aktivitas antiinflamasi sebesar 50 mg/kg

(Praveen et al., 2012; Hafiz, Rosidah and Silalahi, 2016)

68

Ekstrak daun pagoda menunjukkan aktivitas ampuh melawan

Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Escherichia coli dan

Klebsiella pneumoniae. Studi tersebut menunjukkan bahwa

Clerodendron paniculatum memiliki aktivitas antibakteri yang lebih baik

daripada spesies lainnya. Ekstrak daun pagoda mampu merangsang

limfosit B dan limfosit T dan mengaktifkan neutrophil untuk melakukan

fagositisis. Pada saat IL-6 terinduksi secara sementara, IL-6 akan

segera berpartisipasi dalam pertahanan tubuh terhadap gangguan

dalam sel seperti infeksi dan trauma dan pada saat yang bersamaan Il-

6 akan memberikan sinyal dengan memicu spectrum yang luas yang

terlibat dalam meningkatkan kekebalan tubuh, penyakit inflamasi kronis

dan kanker (Kishimoto, 1989; Leena and Aleykutty; 2012).

Mastitis merupakan peradangan payudara pada ibu menyusui

yang disebabkan oleh stasis ASI. Peradangan payudara menyebabkan

retak pada puting yang merupakan jalan masuk bagi patogen, yang

mengakibatkan terjadinya inflamasi atau infeksi. Dalam kaitan ini

adalah sitokin yang dihasilkan oleh tumor dan sel imun. Sitokin

merupakan salah satu mediator terlarut, yang membantu komunikasi

sel-sel dalam respon kekebalan tubuh yang diperlukan pada awal

reaksi inflamasi. IL-6 adalah sitokin pro inflamasi yang terlibat dalam

imuno patogenesis S.aureus (Hirano,.2010; kamimura et. al,. 2014;

Tanaka and Kishimoto; 2014).

69

Pada saat infeksi S.aureus terjadi, sitokin pro inflamasi seperti IL-

1β, dan IL-6, IFN-ɣ dan TNF-α di sintesis dan terjadi inflamasi sitemik.

Setelah sitokin disekresi maka aktivitas sel T helper 1 (Th1) dan T

helper 2 (Th2) dimulai. Aktivitas bakteri atau IFN-ɣ akan mengantarkan

perubahan profil sekresi sel melalui produksi organik nitrat.

Keberadaan S.aureus pada sel menyebabkan sekresi sitokin dan

reaksi inflamasi atau program kematian sel melalui opoptosis. Sinyal

dari sitokin yang di injeksi oleh interaksi host dan bakteri adalah hal

yang krusial dalam perkembangan penyakit (Álvarez, 2009).

Hasil studi ini menunjukkan bahwa ekstrak daun pagoda memiliki

efek farmakoterapi untuk penyakit mastitis atau penyakit infeksi lainnya

yang disebabkan oleh bakteri S.aureus. Daun pagoda sebagai salah

satu tanaman obat yang sudah digunakan secara empiris. Ekstrak

daun pagoda pada penelitian ini mampu menekan kadar IL-6. Alasan

tumbuhan dikatakan sebagai tanaman obat yaitu tanaman atau bagian

tanaman dapat memperkuat fungsi organ tubuh, dapat menyingkirkan

racun atau penyakit dan dapat membangun sistim kekebalan tubuh.

Salah satu syarat tanaman herbal dikatakan sebagai terapi

komplementer atau pengobatan alternatif dalam meningkatkan

imunitas tubuh adalah memodulasi respon pathogen – pengaturan sel

T, dan hal ini terdapat dalam daun pagoda (Hidayat, 2008;

Venkatesha, 2011).

70

Dengan demikian peneliti berasumsi bahwa antibiotik yang

diberikan bersama dengan ekstrak daun pagoda dijadikan sebagai

pengobatan yang efektif pada kasus mastitis, terutama pada mastitis

yang di sebabkan oleh bakteri S.aureus.

C. JAWABAN HIPOTESIS

Ekstrak daun pagoda (Clerodendrum paniculatum. L) dapat

digunakan sebagai terapi komplementer untuk menekan produksi

sitokin IL-6 pada mammae Tikus betina sprague dawley yang di

induksikan bakteri staphylococcus aureus.

D. KETERBATASAN PENELITIAN

1. Peneliti tidak menambahkan kelompok untuk kelompok perlakuan

yang hanya diberikan ekstrak daun pagoda dan juga tidak

melakukan perbandingan dosis

2. Peneliti tidak melakukan uji kuantitatif pada ekstrak daun pagoda

untuk mengetahui seberapa besar kadar flavonoid dan tanin yang

terkandung dalam daun pagoda yang diteliti.

71

BAB V

KESIMPULAN DAN SARAN

A. Kesimpulan

1. Ekstrak daun pagoda (Clerodendrum paniculatum. L) efektif

untuk menekan produksi sitokin IL-6 pada mammae tikus betina

strain Sprague Dawley yang di induksi bakteri staphylococcus

aureus. Ekstrak daun pagoda (Clerodendrum paniculatum. L)

dapat digunakan sebagai terapi komplementer untuk mastitis

yang disebabkan oleh bakteri staphylococcus aureus.

B. Saran

1. Perlu dilakukan penelitian lanjutan secara uji klinis

menggunakan subjek manusia terkait dengan efek ekstrak

daun pagoda sebagai antiinflamasi, khususnya pada kasus

mastitis pada ibu menyusui atau pada kasus penyakit infeksi

lainnya.

2. Bagi peneliti selanjutnya diharapkan untuk melakukan uji

kuantitatif ekstrak daun pagoda terlebih dahulu.

3. Dari hasil penelitian ini dapat dikembangkan untuk penelitian

yang lebih kompleks dan hasilnya dapat digunakan untuk

peningkatan ilmu kebidanan.

72

DAFTAR PUSTAKA

Abbas, M. F. et al. (2015) ‘ISSN 2249-8516 Original Article Role of

Sulphur in salinity tolerance of Date Palm ( Phoenix dactylifera L

.)’, 5(3), pp. 92–97.

Adiguzel, A. et al. (2005) ‘Antimicrobial Effects of Ocimum basilicum

(Labiatae) Extract’, Turkish Journal of Biology, 29, pp. 155–160.

Akiyama, H., Fujii, K., Yamasaki, O., 2001, Antibacterial Action of Several

Tannins Against Staphylococcus aureus, Journal of Antimicrobial

Chemotherapy., 48:487-491.

Álvarez, J. L. P. (2009) ‘La interleucina 6 en la fisiopatología de la artrirtis

reumatoide’, Reumatologia Clinica. Elsevier, 5(1), pp. 34–39. doi:

10.1016/S1699-258X(09)70203-7.

Amir, L. H. (2014) ‘ABM Clinical Protocol #4: Mastitis, Revised March

2014’, Breastfeeding Medicine, 9(5), pp. 239–243. doi:

10.1089/bfm.2014.9984.

Amir, L. H., Forster, D. and Mclachlan, H. (2004) ‘Incidence of breast

abscess in lactating women : report from an Australian cohort’,

111(December), pp. 1378–1381.

Anonim. (2010). Clerodendrum paniculatum L is an Accepted Name.

Sumber: http://www.theplantlist.org. Diakses pada 6 September

2015.

Arun. P. V, Sachin. S, P. S. (2011) ‘Antioxidant potential of Clerodendrum

paniculatum’, Journal of Pharmacy Research, 4(6), pp. 1796–

1799.

Ashok, P. and Upadhyaya, K. (2012) ‘Tannins are Astringent’, Journal of

Pharmacognosy and Phytochemistry, 1(3), pp. 45–50. doi:

10.11648/j.ijnfs.20140304.18.

Banks, W. A., Kastin, A. J. and Gutierrez, E. G. (1994) ‘Penetration of

interleukin-6 across the murine blood-brain barrier’, Neuroscience

Letters, 179(1–2), pp. 53–56. doi: 10.1016/0304-3940(94)90933-

4.

73

Baratawidjaja, K. G., dan Rengganis, I. 2012. Imunologi Dasar. Badan

Penerbit FKUI. Jakarta. 259-282

BFN Mastitis and breastfeeding (2015). Available at: www.breas t

feedingnetwork.org.uk.

Bolman, M. et al. (2013) ‘Recapturing the Art of Therapeutic Breast

Massage during Breastfeeding.’, Journal of human lactation :

official journal of International Lactation Consultant Association,

(March), p. 0890334413475527-. doi:

10.1177/0890334413475527.

Branch-Elliman, W. et al. (2012) ‘Risk factors for staphylococcus aureus

postpartum breast abscess’, Clinical Infectious Diseases, 54(1),

pp. 71–77. doi: 10.1093/cid/cir751.

Brooks, G.F., Carrol, K.C., Butel, J.S., Morse, S.A. 2007 Mikrobiologi

kedokteran. Alih Bahasa. Mudihardi E, Kuntaman,WasitoEB et al.

Jakarta: Salemba Medika, 2008: 317-27

Chen, H. et al. (2013) ‘Alpinetin attenuates inflammatory responses by

interfering toll-like receptor 4/nuclear factor kappa B signaling

pathway in lipopolysaccharide-induced mastitis in mice’,

International Immunopharmacology. Elsevier B.V., 17(1), pp. 26–

32. doi: 10.1016/j.intimp.2013.04.030.

Chinchali, J. F. and Kaliwal, B. B. (2014) ‘Histopathology of mammary

gland in Staphylococcus aureus induced mastitis in mice’, Asian

Pacific Journal of Tropical Disease, 4(S1). doi: 10.1016/S2222-

1808(14)60463-1.

Dalimartha, S. (2008). Atlas Tumbuhan Obat Indonesia. Jilid 2. Jakarta:

Trubus Agriwidya. Hal. 38-40.

EOL, (Encyclopedia of Life). (2013). Clerodendrum paniculatum Pagoda

Flower. Sumber http://eol.org/pages/2893552/names. Diakses

pada 6 September 2015

Feng, Z. et al. (2014) ‘Antitumor activity of total flavonoids from

Tetrastigma hemsleyanum Diels et Gilg is associated with the

inhibition of regulatory T cells in mice’, OncoTargets and Therapy,

7, p. 947. doi: 10.2147/OTT.S61794.

Florence, A. R., Joselin, J. and Jeeva, S. (2012) ‘Intra-specific variation of

74

bioactive principles in select members of the genus Clerodendrum

L’, Journal of Chemical and Pharmaceutical Research, 4(11), pp.

4908–4914.

Fonseca, I. et al. (2009) ‘Expression profile of genes associated with mastitis in dairy cattle’, Genetics and Molecular Biology, 32(4), pp. 776–781. doi: 10.1590/S1415-47572009005000074.

Foster, T. J. (2004) ‘Staphylococcus aureus’, Journal of Clinical

Investigation, 114(12), pp. 1693–96. doi:

10.1172/JCI200422123.7.

Ganeshaiah, K.N. (2013). Clerodendrum paniculatum L. Sumber:

http://indiabiodiversity.org/species/show/266140. Diakses pada 6

September 2015

Gorchev, H. G. and Ozolins, G. (2011) ‘Guidelines for Drinking-water

Quality’, Who, 1, p. 564. doi: 10.1016/S1462-0758(00)00006-6.

Guo, M. et al. (2013) ‘Baicalin plays an anti-inflammatory role through

reducing nuclear factor-κB and p38 phosphorylation in S. aureus-

induced mastitis’, International Immunopharmacology. Elsevier

B.V., 16(2), pp. 125–130. doi: 10.1016/j.intimp.2013.03.006.

Guo, Y.-F. et al. (2017) ‘Luteolin reduces inflammation in Staphylococcus

aureus-induced mastitis by inhibiting NF-kB activation and MMPs

expression’, Oncotarget, 8(17), pp. 28481–28493. doi:

10.18632/oncotarget.16092.

Hafiz, I., Rosidah and Silalahi, J. (2016) ‘Antioxidant and anti-inflammatory

activity of pagoda leaves (clerodendrum paniculatum l.) ethanolic

extract in white male rats (Rattus novergicus)’, International

Journal of PharmTech Research, 9(5), pp. 165–170.

Hamor G.H., 1989, Nonsteroidal anti-inflammatory drugs, dalam Foye

W.O., (Ed.), Principles of Medicinal Chemistry, 3rd Ed., 503–530,

Lea & Febiger, Philadelphia.

Hariana, A. (2008). Tumbuhan Obat dan Khasiatnya. Seri 1. Jakarta: Penebar Swadaya. Hal. 60-62

Harris, L. G. et al. (2002) ‘An introduction to Staphylococcus aureus, and

techniques for identifyingand quantifying S. aureus adhesins in

relation to adhesion to biomaterials:Review’, European Cells and

75

Materials, 4, pp. 39–60. doi: 10.22203/eCM.v004a04.

Hedges, S. et al. (1991) ‘Interleukin-6 response to deliberate colonization

of the human urinary tract with gram-negative bacteria’, Infection

and Immunity, 59(1), pp. 421–427.

Hidayat S, Wahyuni S, Andalusia S, 2008. Seri tumbuhan obat

berpotensihias, Jakarta: Penerbit PT. Elex Media Komputindo

Hirano, T. (2010) ‘Interleukin 6 in autoimmune and inflammatory diseases:

a personal memoir.’, Proceedings of the Japan Academy. Series

B, Physical and biological sciences, 86(7), pp. 717–30. doi:

10.2183/pjab.86.717.

History, C. (2017) ‘Mastitis guidelines V 4.0 August 2015’, (August 2015).

Ishartadiati, K. (2010) ‘Peranan Tnf, Il-1, Dan Il-6 Pada Respon Imun

Terhadap Protozoa’, 1.

Jahanfar, S., Ng, C. J. and Teng, C. L. (2016) ‘Antibiotics for mastitis in

breastfeeding women’, Sao Paulo Medical Journal, 134(3), p. 273.

doi: 10.1590/1516-3180.20161343T1.

John, J., Jesil Mathew, A. and Manjunath Setty, M. (2008) ‘Free radical

scavenging and anticancer activity of clerodendron paniculatum’,

Pharmacologyonline, 3, pp. 730–743.

Joseph, J., Bindhu, A. and Aleykutty, N. (2013) ‘In vitro and in vivo

antiinflammatory activity of Clerodendrum paniculatum linn.

leaves’, Indian Journal of Pharmaceutical Sciences, 75(3), p. 376.

doi: 10.4103/0250-474X.117428.

Judarwanto, W., 2012, Imunologi Dasar : Radang dan Respon Inflamasi,

allergyclinic.wordpress.com/2012/02/03/imunologi-dasar-radang-

dan-respon-inflamasi/ , 30 Sep 2017.

Juliantina., Farida R. Manfaat sirih (Piper crocatum) sebagai agen anti

bakterial terhadap gram positif dan gram negatif. JKKI – Jurnal

Kedokteran danKesehatan Indonesia; 2009 No 1 (I).h.5

Kamimure, D. et al. (2014) ‘IL-6 and Inflammatory Diseases’, Cytokine

Frontiers: Regulation of Immune Responses in Health and

Disease, 6, pp. 1–396. doi: 10.1007/978-4-431-54442-5.

Katzung B.G., 2009, Introduction to autonomic pharmacology, dalam

76

Katzung B.G., (Ed.), Basic and Clinical Pharmacology, 9th Ed,

McGraw-Hill, New York.

Kim, Y.-M. et al. (2014) ‘A Citrus flavonoid, 6-demethoxytangeretin,

suppresses production and gene expression of interleukin-6 in

human mast cell - 1 via anaplastic lymphoma kinase and mitogen-

activated protein kinase pathways.’, Biological & pharmaceutical

bulletin, 37(May), pp. 871–876. doi: 10.1248/bpb.13-00875.

Kishimoto T. (1989). The biology of interleukin 6. Blood. 74:1-10.

Kumar, V., Abbas, A.K., & Fausto, F., 2005, Robbins and Cotran

Pathologic Basis of Disease, 7th ed., 47-86, Elsevier Inc.,

Philadelphia.

Lai, J. L. et al. (2017) ‘Indirubin Treatment of Lipopolysaccharide-Induced

Mastitis in a Mouse Model and Activity in Mouse Mammary

Epithelial Cells’, Mediators of Inflammation, 2017. doi:

10.1155/2017/3082805.

Lal, G. and Bromberg, J. S. (2009) ‘Review article Epigenetic mechanisms of regulation of Foxp3 expression’, Blood, 114(18), pp. 3727–3735. doi: 10.1182/blood-2009-05-219584.

Leena, P. N. et al. (2012) ‘Comparitive Study on Antibacterial Activities of

Clerodendron infortunatum Linn and Clerodendron paniculatum

linn Root Extract’, 1(3), pp. 325–327.

Leyva-López, N. et al. (2016) ‘Flavonoids as cytokine modulators: A

possible therapy for inflammation-related diseases’, International

Journal of Molecular Sciences, 17(6). doi: 10.3390/ijms17060921.

Liu, G. Y. (2009) ‘Molecular Pathogenesis of Staphylococcus aureus

Infection’, Pediatr Res, 65, pp. 71–77. doi:

10.1203/PDR.0b013e31819dc44d.Molecular.

Liu, Y. et al. (2015) ‘<IL-6_STAT3 signaling pathway is activated in plasma

cell mastitis.pdf>’, 8(10), pp. 12541–12548.

Lowy, F. (1998) ‘the chromosome, as well as the extrachromosomal el-

ements. 6 These genes are transferred between staphy- lococcal

strains, species, or other gram-positive bacte- rial species through

the extrachromosomal elements. 7’, New England Journal of

Medicine, 339, pp. 520–532. doi:

77

10.1056/NEJM199808203390806.

Matsushima, K. et al. (2011) ‘Chemokines in inflammatory and immune

diseases’, Inflammation and Regeneration, 31(1), pp. 11–22. doi:

10.2492/inflammregen.31.11.

McGhee, J. R. et al. (1991) ‘Role of interleukin-6 in human and mouse

mucosal IgA plasma cell responses’, Immunologic Research,

10(3–4), pp. 418–422. doi: 10.1007/BF02919734.

Miller, V. L. et al. (1994) Molecular Genetics of Bacterial Pathogenesis.

Myles, I. A. and Datta, S. K. (2012) ‘Staphylococcus aureus: An

introduction’, Seminars in Immunopathology, 34(2), pp. 181–184.

doi: 10.1007/s00281-011-0301-9.

Nester, E. W., Anderson, D. G., Roberts, C. E., & Nester, M. T. 2009. Microbiology A Human Perspective (6th Edition ed.). New York : McGraw-Hill.

Okuda, T. (2005) ‘Systematics and health effects of chemically distinct

tannins in medicinal plants’, Phytochemistry, 66(17 SPEC. ISS.),

pp. 2012–2031. doi: 10.1016/j.phytochem.2005.04.023.

Parubak, A.S.,2013, Senyawa Flavonoid yang Bersifat Antibakteri dari

Akway (Drimys becariana Gibbs), Skripsi Jurusan Kimia, Fakultas

Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Negeri

Papua, Papua

Phuneerub, P. et al. (2015) ‘In vitro anti-inflammatory, mutagenic and

antimutagenic activities of ethanolic extract of Clerodendrum

paniculatum root.’, Journal of advanced pharmaceutical

technology & research, 6(2), pp. 48–52. doi: 10.4103/2231-

4040.154529.

van der Poll, T. et al. (1997) ‘Interleukin-6 gene-deficient mice show

impaired defense against pneumococcal pneumonia.’, The

Journal of infectious diseases, 176(2), pp. 439–44. doi:

10.1086/514062.

Praveen, M. et al. (2012) ‘Preliminary Phytochemical , antimicrobial and

toxicity studies on Clerodendrum paniculatum Linn leaves’, 4(1),

pp. 41–50.

78

Rathee, P. et al. (2009) ‘Mechanism of Action of Flavonoids as Anti-

inflammatory Agents: A Review’, Inflammation & Allergy - Drug

Targets, 8(3), pp. 229–235. doi: 10.2174/187152809788681029.

Russel, W.M.S and Burch, R.L.,1959. Principles of humane experimental

technique. London: Methuen.

Shashank, K. and Pandey, A. K. (2013) ‘Chemistry and biological activities

of flavonoids’, Hindawi The Scientific World Journal, 2013(12), pp.

533–548. doi: 10.1016/j.tifs.2005.08.006.

Shrivastava, N. and Patel, T. (2007) ‘Clerodendrum and Heathcare: An

Overview’, Different species of Clerodendron infortunatum have

been known to possess antioxidant and hepatoprotective

properties, 1(1), pp. 142–150. Available at:

http://www.globalsciencebooks.info/Online/GSBOnline/images/07

06/MAPSB_1(1)/MAPSB_1(1)142-150o.pdf.

Sladek, Z. et al. (2005) ‘Neutrophil apoptosis during experimentally

induced Staphylococcus Staphylococcus aureus mastitis’,

Veterinary Research, 36(3), pp. 629–43. doi: 10.1051/vetres.

Spencer, J. P. (2008) ‘Management of Mastitis in Breastfeeding Women -

American Family Physician’, American Family Physician, 78(6),

pp. 727–732. Available at:

http://www.aafp.org/afp/2008/0915/p727.html.

Sugimoto, Y. et al. (2015) ‘Associations between polymorphisms of

interleukin-6 and related cytokine genes and serum liver damage

markers: A cross-sectional study in the Japan Multi-Institutional

Collaborative Cohort (J-MICC) Study’, Gene, 557(2), pp. 158–

162. doi: 10.1016/j.gene.2014.12.025.

Suradi, R dan Hegar. 2010. Indonesia Menyusui. Jakarta: IDAI

Tanaka, T. and Kishimoto, T. (2014) ‘The Biology and Medical Implications

of Interleukin-6’, Cancer Immunology Research, 2(4), pp. 288–

294. doi: 10.1158/2326-6066.CIR-14-0022.

Tong, S. Y. C. et al. (2015) ‘Staphylococcus aureus infections:

Epidemiology, pathophysiology, clinical manifestations, and

management’, Clinical Microbiology Reviews, 28(3), pp. 603–661.

doi: 10.1128/CMR.00134-14.

79

Venkatesha, S., Rajaiah, R., & Berman, B. (2011). Immunomodulation of

Autoimmune Arthtritis by Herbal C AM. Evidence Based

Complementari and Alternative Medicine, 1-13.

Verri, W. A. et al. (2006) ‘Hypernociceptive role of cytokines and

chemokines: Targets for analgesic drug development?’,

Pharmacology and Therapeutics, 112(1), pp. 116–138. doi:

10.1016/j.pharmthera.2006.04.001.

De Vliegher, S. et al. (2012) ‘Invited review: Mastitis in dairy heifers: Nature of the disease, potential impact, prevention, and control’, Journal of Dairy Science. Elsevier, 95(3), pp. 1025–1040. doi: 10.3168/jds.2010-4074.

Wolfensohn, S. Dan Lloyd, M. 2013. Handbook of Laboratory Animal Management and Welfare. Edisi ke 4. Wiley-Blackwell, New Delhi.

World Health Organization (2000) ‘Mastitis - Causes and Management’,

World Health Organization, pp. 1–44.

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1 : Perhitungan dosis ekstrak daun pagoda

Lampiran 2 : Perhitungan dosis antibiotik

Lampiran 3 : Daftar arti lambing dan singkatan

Lampiran 4 : Dokumentasi penelitian

Lampiran 5 : Hasil output SPSS

LAMPIRAN 1

Perhitungan Dosis Ekstrak Daun Pagoda Pada Hewan Coba

DOSIS EKSTRAK

1. Menentukan konsentrasi sediaan. (Berdasarkan dosis dan rute

pemberian)(Kamimure et al., 2014)

Dosis : 50 mg/kbBB

Rute pemberian per oral (konsentrasi 1% = )

Rumus :

2. Menentukan berat obat (Berdasarkan dosis dan total berat hewan)

=

=

=

3. Menentukan volume yang disediakan

4. Jumlah dosis yang diberikan perhewan

LAMPIRAN 2

Perhitungan Dosis Antibiotik Floxaxilin

1.

2.

3.

4.

5.

Nb : 1 ml/9,59 mg

9,59 mg x 0,9 ml= 8,9 mg (Didalam 0,9 ml terdapat 8,9 mg

kandungan antibiotic flucloxacillin)