efecto del conteo de células somáticas sobre … 2- evaluar el impacto de diferentes niveles del...
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UNIVERSIDAD NACIONAL DE CÓRDOBA
FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS
ESCUELA PARA GRADUADOS
INSTITUTO DE REPRODUCCIÓN ANIMAL CÓRDOBA (IRAC)
Efecto del conteo de células somáticas sobre diferentes
parámetros de eficiencia reproductiva en vacas lecheras a
base pastoril
MV. Santiago Nicolás Lorenti
Director: Dr. Rodolfo Luzbel de la Sota
Lugar de Trabajo: Catedra y Servicio de Reproducción Animal
Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad Nacional de La Plata
Para optar al Grado Académico de
Especialista en Reproducción Bovina
Córdoba 2017
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INDICE
1. RESUMEN ............................................................................................... 3
2. INTRODUCCIÓN ................................................................................... 4
2.1. HIPÓTESIS DE TRABAJO ...................................................................... 5
2.2. OBJETIVO GENERAL ............................................................................. 5
2.3. OBJETIVOS ESPECÍFICOS .................................................................... 5
3. MATERIALES Y MÉTODOS ............................................................... 6
3.1. RODEOS Y CRITERIOS DE SELECCIÓN DE ANIMALES................. 6
3.2. RECOLECCIÓN DE DATOS ................................................................... 6
3.3. DEFINICIÓN DE GRUPOS ..................................................................... 7
3.4. MANEJO REPRODUCTIVO ................................................................... 9
3.5. ANÁLISIS ESTADISTICO ...................................................................... 9
4. RESULTADOS ...................................................................................... 11
5. DISCUSIÓN ........................................................................................... 17
6. CONCLUSIONES ................................................................................. 21
7. BIBLIOGRAFÍA ................................................................................... 22
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1. RESUMEN
El objetivo de este estudio fue determinar el grado de asociación entre los recuentos
de células somáticas en leche (RCS) y fertilidad en vacas lecheras Holando Argentino.
Fueron incluidas en el estudio 52.843 lactancias, iniciadas entre los años 2003 y 2015,
provenientes de cinco establecimientos lecheros de la cuenca Abasto Sur en la provincia
de Buenos Aires. Se ajustaron cinco modelos estadísticos para explicar los índices de
fertilidad a partir de grupos de vacas clasificados según su nivel de los RCS y su
asociación temporal con los servicios. Los principales resultados que arroja el estudio
indican que existe una asociación negativa entre la presencia de mastitis subclínica y la
fertilidad. La preñez a los 150 DEL (días en leche) de los grupos con altos RCS,
respecto de las vacas sanas, disminuyó entre un 4,3% y un 46,3% (Modelo1). La tasa de
concepción al primer servicio en vacas que han sido definidas con mastitis sub-clínica
crónica graves, respecto de vacas sanas, disminuyó un 9,19% (Modelo 3). En vacas que
presentaron RCS altos antes del primer servicio respecto de las que no lo presentaron, el
intervalo parto- primer servicio fue 6 días mayor (Modelo 4). El presente estudio
demostró una clara asociación entre los RCS elevados y una falla en eficiencia
reproductiva. La misma se ve afectada por un aumento en el intervalo parto primera
inseminación, una disminución en la probabilidad de concepción al primer servicio, y en
la preñez final de las lactancias.
Palabras clave: vacas lecheras, conteo de células somáticas, eficiencia
reproductiva, sistema pastoril
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2. INTRODUCCIÓN
La eficiencia reproductiva es uno de los principales factores a tener en cuenta al
momento de evaluar la rentabilidad económica de un sistema lechero. Diferentes
variables modifican los resultados esperados de los parámetros reproductivos, entre ellas
las enfermedades, como la mastitis. La mastitis representa graves pérdidas económicas
en los rodeos lecheros de todo el mundo. Se estima que, de las pérdidas producidas por
mastitis, el 29 % representa costos directos y 71% indirectos, entre estos últimos el
aumento de los días en leche, especialmente en vacas que sufren la enfermedad al inicio
de la lactancia (Miller et al., 1993). La ocurrencia de la mastitis ha sido asociada con el
aumento del intervalo parto primera inseminación (Barker et al., 1998; Schrick et al.,
2001; Santos et al., 2004), con un aumento en el número de servicios por concepción
(Schrick et al., 2001; Santos et al., 2004), con una disminución en la concepción al
primer servicio (Santos et al., 2004; Fuenzalida et al., 2015) y con un aumento en las
pérdidas de preñez (Risco et al., 1999; Santos et al., 2004). El primer trabajo que
encontró una asociación entre la mastitis clínica y la fertilidad sugirió que aquellas
afecciones causadas por bacterias Gram negativas como Escherichia Coli, podían alterar
el intervalo interestro (Moore et al., 1991). Más tarde, otros estudios concluyeron que
tanto las bacterias Gram negativas como Gram positivas aisladas de las mastitis tenían
un efecto muy similar sobre la fertilidad (Barker et al., 1998). El mayor impacto sobre
los parámetros reproductivos fue observado cuando el evento de mastitis clínica ocurrió
cerca al momento de la inseminación artificial (IA) (Hertl et al., 2010; Hudson et al.,
2012) o, entre ésta y el diagnostico de gestación (Barker et al., 1998; Santos et al.,
2004). Por otro lado, se observó que cuando la enfermedad evolucionaba de mastitis
subclínica a clínica producía un mayor detrimento en la eficiencia reproductiva (Hansen
et al., 2004).
Muchos autores concuerdan que las endotoxinas y las exotoxinas bacterianas
sumadas a las citoquinas producidas durante dicha enfermedad como las prostaglandinas
F2α, el factor de necrosis tumoral-α, interferón-γ y algunas interleuquinas son las
responsables de la alteración de los parámetros mencionados, mediante la producción de
hipertermia, disminución del consumo de alimentos y el efecto directos sobre las
estructuras ováricas, el útero, el conceptus y el eje hipotálamo-hipófisis-gonadal;
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alterando de esta manera el momento de la ovulación, el intervalo interestro y el
mantenimiento de la preñez, entre otras cosas (Barker et al., 1998; Schrick et al., 1991;
Hansen et al., 2004; Santos et al., 2004).
No existen en el país y en la región trabajos previos que utilicen vacas en un sistema
de producción pastoril semi-intensivo en el cual el diagnóstico de la mastitis subclínica
se haya realizado mediante recuento de células somáticas individual en leche que haya
estudiado la asociación de elevados conteos de células somáticas y una disminución de
la eficiencia reproductiva. El propósito del presente estudio, fue determinar la
asociación entre los recuentos de células somáticas elevados durante diferentes períodos
de riesgo posparto y la eficiencia reproductiva en rodeos lecheros de raza Holando
Argentino bajo condiciones de producción pastoril.
2.1. HIPÓTESIS DE TRABAJO
Los recuentos de células somáticas (RCS) por encima de las 150.000 células
somáticas (CS)/ml de leche tienen un impacto negativo sobre la eficiencia reproductiva
de las vacas lecheras.
Las vacas que tienen un RCS superior a 150.000 CS/ml en relación a un servicio
tienen menor riesgo de concebir que aquellas que tienen RCS inferiores.
La probabilidad de preñez está asociada con la gravedad de la mastitis crónica.
2.2. OBJETIVO GENERAL
El objetivo general de este estudio fue determinar el grado de asociación entre la
presencia de un RCS elevado y la eficiencia reproductiva en vacas lecheras Holando
Argentino en un sistema pastoril en la Cuenca Lechera Abasto Sur.
2.3. OBJETIVOS ESPECÍFICOS
Los objetivos específicos fueron:
1- Describir el efecto de un RCS elevado en diferentes períodos de riesgo sobre el
momento del primer servicio, la concepción y la preñez final.
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2- Evaluar el impacto de diferentes niveles del puntaje lineal de células somáticas
(PLCS) sobre la concepción.
3. MATERIALES Y MÉTODOS
3.1. RODEOS Y CRITERIOS DE SELECCIÓN DE
ANIMALES
Un total de 52843 lactancias terminadas de 5 rodeos lecheros, de la Cuenca Lechera
Abasto Sur, en la provincia de Buenos Aires, fueron incluidas para realizar en un estudio
de cohorte retrospectivo, en un período de tiempo que abarca desde el año 1981 al 2015.
El criterio para seleccionar dichos rodeos fue que realicen el Control Lechero
Oficial homologado por la Asociación de Criadores de Holando Argentino, que tuviesen
un manejo alimenticio, reproductivo y sanitario similar; y además, que contaran con un
mismo software de carga de datos reproductivos, productivos y sanitarios (DIRSA PRO
TAMBO, Master 3,1; M.B. Gonnet, BA).
3.2. RECOLECCIÓN DE DATOS
La rutina de ordeñe realizada por los operarios, constaba del uso de presellado de
los pezones, despunte, secado individual de cuartos, ordeñe y sellado; y dicha rutina fue
supervisada por el personal veterinario de los establecimientos. El diagnóstico de
mastitis clínicas (MC) fue realizado por los operarios. La totalidad de las vacas
encontradas con MC recibieron terapia antibiótica. Las vacas con mastitis subclínicas
(MS) fueron evaluadas por el veterinario asesor mediante California Mastitis Test y el
control lechero oficial mediante recuento de células somáticas en laboratorio. El mismo
se realiza en un rango de 25 a 40 días en todos los rodeos, se toman muestras de cada
vaca y se mide el CCS/ml de leche.
La ocurrencia de MC y MS fueron cargados periódicamente en el software DIRSA.
La información fue cargada con la correspondiente fecha a la historia de cada vaca. El
resto de los datos reproductivos (alta posparto, preñez, abortos, muertes embrionarias,
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etc.) y enfermedades reproductivas (endometritis, metritis, quistes ováricos, etc.) fueron
tomados y cargados por el veterinario al momento de la revisión reproductiva periódica
de los animales. La totalidad de los registros productivos y reproductivos de los cinco
establecimientos fueron centralizados en una base de datos única, mediante el software
MySQL®5.7 para el manejo relacional de la base de datos.
Se excluyeron los datos desde el año 1981 al 2002 inclusive (n=19.840), por resultar
en parte incongruentes e incompletos. Los animales que, no tuvieron un parto para el
inicio de la lactancia, (aborto inicia lactancia [n=965], inducciones de lactancias
[n=35]), y aquellos registros que tuvieron un rango entre controles lecheros inferiores a
25 días o superiores a 40 días del control anterior no fueron incluidos en el estudio. Las
vacas que no tuvieron diagnóstico de preñez fueron consideradas como Rechazos o
Muertes. En la Tabla 1 se presenta un resumen de los registros utilizados por tambo.
Tabla1. Indicadores de producción de leche y reproducción por tambo
PL305: producción de leche a 305 días de lactancia corregida al 3.5% grasa butirosa,
IP1S: intervalo parto 1 servicio, PC1S: porcentaje de concepción al 1 servicio, DEL:
días en leche, CSS/ml: conteo de células somáticas/ml.
3.3. DEFINICIÓN DE GRUPOS
Se realizaron tres estudios retrospectivos sometiendo a las vacas a cuatro análisis
diferentes. Se utilizó 150.000 CS/ml de leche como límite superior de CS, a partir del
cual se presentan disminuciones en la eficiencia reproductiva en vacas lecheras (Lavon
et al., 2011).
Para el primer análisis se realizó un estudio retrospectivo dividiendo a las vacas en 4
períodos de riesgo diferentes, basado en estudios previos (Santos et al., 2004; Barker et
al., 1998). Para este estudio se utilizaron 15.279 lactancias que fueron divididas en
Tambo Lactancias n PL305 IP1S PC1S DEL CSS/ml
1 4952 193 6403 93,40 47,60 439,6 421321
2 1376 141 6028 90,08 47,00 439,7 352654
3 26386 1832 7573 73,50 45,50 429,4 239129
4 9250 534 8252 87,71 47,40 415,1 238671
5 8043 284 7322 88,35 36,90 457,9 311254
Total 50007 597 7116 86,60 44,88 436,3 312.605
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cuatros grupos dependiendo del momento de la lactancia en el cual tuvieron un RCS
>150.000 CS/ml. En el Grupo 0 se incluyeron todas las vacas que no tuvieron en toda la
lactancia un RCS >150.000 CS/ml de leche (Sanas, n=4601);en el Grupo 1 se incluyeron
las vacas que tuvieron el primer RCS superior al límite establecido entre el parto y el
primer servicio (n=3945); en el Grupo 2 se incluyeron las vacas que lo tuvieron el
primer RCS superior al límite establecido entre el primer servicio y el diagnóstico de
preñez (n=2125); y en el Grupo 3 se incluyeron las vacas que tuvieron el primer RCS
superior al límite después del diagnóstico de preñez (n=4608).
En el segundo estudio se utilizaron 6642 lactancias que fueron categorizadas en
cuatro grupos de acuerdo a su evolución y a su relación con la primera inseminación
artificial (1IA) tomando como períodos de riesgo de 3 días antes a 32 días después y de
-3 a -43 antes de la misma (Fuenzalida et al., 2015; Santos et al., 2014; Hudson et al.,
2012). El grupo de Sanas (n=3067) corresponde a aquellas vacas que no tuvieron el RCS
previo ni el posterior al servicio por encima de las 150.000 CS/ml, el grupo Curadas
(n=1038) tuvieron un RCS>150.000 CS/ml antes de la 1IA pero <150.000 CS/ml post
1IA, el grupo Nuevos Casos presentó RCS>150.000 CS/ml previos a la 1IA y >150.000
CS/ml después de la 1IA, y por último el grupo Crónicas con RCS>150.000 CS/ml antes
y después de la 1IA respectivamente.
Las vacas con mastitis crónicas (MCR) fueron incluidas en otro análisis
dependiendo la Gravedad de los RCS que presentaron en el control posterior a la 1IA.
Las vacas fueron divididas en cuatro categorías (Fuenzalida et al., 2015): Sana (SANA,
n=3067), MCR leve (MCRL, n=728), MCR moderada (MCRM, n=376) y MCR severa
(MCRS, n=298) correspondiendo a los animales con <150.000, entre 150.000-400.000,
entre 400.000-1.000.000 y >1.000.000 de CS/ml de leche respectivamente.
Finalmente, las vacas fueron incluidas en otros dos estudios para evaluar el intervalo
de tiempo entre el parto y el primer servicio (IP1S) y el riesgo diario instantáneo de ser
servidas (RIS). El período de riesgo fue el IP1S, y las vacas fueron divididas
dependiendo el RCS en dos grupos, aquellas con <150000 CS/ml y aquellas >150.000
CS/ml respectivamente.
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3.4. MANEJO REPRODUCTIVO
En los cinco establecimientos se realizó el alta posparto de las vacas antes de los 40
DEL, y la duración del período de espera voluntario fue de 40 días. Los establecimientos
1, 2, 4 y 5 realizaron inseminaciones a tiempo fijo (IATF) a todas las vacas que no
hayan recibido servicio a los 100 DEL, mientras que en el establecimiento 3 realizaron
IATF a todas aquellas vacas que no hayan recibido un servicio después de los 70 DEL.
El protocolo de IATF utilizado constó de una aplicación de Benzoato de estradiol el Día
0 (BE; 2,0 mg; Benzoato de estradiol Zoovet, Zoovet, Santa Fe), y un dispositivo
intravaginal de progesterona (DIV; de 1,2 g, Diprogest 1200, Zoovet; Santa Fe). En el
Día 8, se retiró el DIV aplicación de una dosis de prostaglandina F2α (D+Clorprostenol;
0.150 mg, Ciclar Zoovet, Zoovet, Santa fe), Cipionato de Estradiol (CE; 2mg, Cipionato
Zoovet; Zoovet, Santa Fe) y gonadotrofina coriónica equina (eCG; 450 UI; Novormon
5000, Sintex SA; Luis Guillon, BA), en ese mismo momento las vacas fueron pintadas
en la base de la cola con pintura para celo (Celo-test; Biotay S.A; Grand Bourg, BA ).
Las vacas que manifestaban estro antes de las 48 h del retiro del DIV fueron IA con
regla am-pm, y el resto de las vacas fueron IATF a las 55 h del retiro del DIV. En
cuanto a las visitas profesionales, en el establecimiento 3, las revisaciones reproductivas
se hicieron cada 14 días, mientras que en los restantes establecimientos cada 30 días.
Todos los animales que presentaban cuerpo lúteo a la ecografía y que tenían <70 DEL
en el establecimiento 3 y <100 DEL para los establecimientos 1, 2, 4 y 5 recibían una
dosis de PGF para su posterior inseminación a celo detectado.
3.5. ANÁLISIS ESTADISTICO
El análisis estadístico fue realizado usando el programa SAS versión 9.4 (SAS
Institute, 2012). La unidad experimental del estudio fueron las lactancias. El impacto de
los CCS sobre la eficiencia reproductiva fue evaluado mediante las siguientes variables
respuesta, 1) Probabilidad de preñez en la lactancia (PPL); 2) Probabilidad de
concepción al primer servicio (PC1S); 3) intervalo parto primer servicio (IP1S).
Para el primer estudio, las vacas fueron consideradas preñadas sólo cuando tuvieron
diagnóstico veterinario por palpación rectal, y se consideraron no gestantes al servicio
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correspondiente cuando tuvieron un diagnóstico negativo de preñez o repitieron estro
entre 17 y 24 días posteriores al servicio precedente. Mediante el procedimiento
GLIMMIX de SAS (SAS Institute, 2012), se realizó una regresión logística para
explicar la probabilidad de preñez en la lactancia. Las variables explicativas utilizadas
fueron, Grupo PLCS (>150.000 CS/ml entre parto y el 1 servicio, entre el 1 servicio y el
diagnóstico de preñez o después de este último), número de parto (1, 2, 3, 4+), estación
de parto, estatus de salud (sanas vs enfermas [metritis, endometritis, retención de
placenta, piómetra, quistes ováricos]), Producción de Leche 150 DEL y el IP1A.
En el segundo estudio se ajustó un modelo mediante regresión logística similar al
primero mediante el procedimiento GLIMMIX de SAS (SAS Institute, 2012) para
explicar la probabilidad de concepción al primer servicio, que fue la variable respuesta a
analizada. El primer servicio se consideró exitoso cuando en la base de datos el IP1S fue
igual IPC de esa manera la vaca fue considerada gestante. Las variables explicativas
independientes consideradas en el trabajo fueron, evolución de la mastitis, número de
parto, estación de parto, producción de leche, establecimiento y año.
En tercer estudio, se utilizó un modelo logístico para explicar el efecto de los
niveles de PLCS en la probabilidad de concepción al primer servicio en vacas con
mastitis crónicas. Al igual que en el modelo anterior, el PC1S fue la variable respuesta a
considerar. Las variables explicativas incluidas en este modelo, son gravedad del caso,
número de parto, estación de parto, tambo, año y producción de leche 150 DEL.
En el cuarto estudio, la variable de respuesta explicada fue el IP1S. Las variables
explicativas que se usaron fueron dos solamente, vacas con un RCS <150.000 CS/ml
antes de la 1IA y vacas con un RCS >150.000 CS/ml antes de la 1IA, y se analizaron los
datos mediante un análisis de supervivencia con el procedimiento LIFETEST de SAS
(SAS Institute, 2012).
En el quinto y último estudio se utilizó un modelo de riesgos proporcionales de Cox,
para evaluar la probabilidad de ocurrencia diaria de un servicio. Los datos fueron
analizados mediante el procedimiento PHREG de SAS (SAS Institute, 2012). Se
determinó la probabilidad de recibir un servicio para las vacas que tenían un control
<150.000 comparado con las vacas que tenían un control>150.000 CS/ml.
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4. RESULTADOS
Se realizó un modelo de regresión logística con el objetivo de explicar la
variabilidad de la preñez final en la lactancia de vacas lecheras, de acuerdo al momento
en que tuvieron su primer RCS superior > 150.000 CS/ml de leche. El modelo fue
ajustado por diferentes predictores como grupo PLSC, número de parto, estación de
parto, estatus de salud, PL150 DEL e IP1IA.
Los valores de los cuadrados medios mínimos para los niveles de la variable Grupos
PLCS fueron 0,583; 0,540; 0,120; 0,586 para las vacas del Grupo 0, 1, 2 y 3
respectivamente, el grupo 3 no presentó diferencias significativas con el grupo 0,
mientras que el grupo 1 (razón de probabilidad [RP], RP=0.726, Intervalo de Confianza
[IC]=0.655-0.804 P=<0.0001) y 2 (RP=0.120, IC=0.085-0.111; P=<0.0001) presentaron
diferencias estadísticamente significativas (Tabla 2). Las chances de preñez para las
vacas de segundo y cuarto parto no difirieron significativamente respecto de las
primíparas, mientras que las de tercer parto tuvieron diferencias significativas
(RP=1.159; IC=1.031-1.301). Los resultados muestran que tanto las de segundo, tercer
como las de cuarto parto, tienen más riesgo de preñez que las de un solo parto. Con
respecto a la estación de parto las vacas paridas en el otoño tuvieron mejores resultados
en la preñez que sus compañeras paridas en el resto de las estaciones, siendo los valores
de RP=0.580 (IC=0.519-0.648) y RP=0.625 (IC=0.567-0.691) para primavera y verano
respectivamente. En cuanto al estatus de salud, las vacas que no presentaron en su
historia clínica ningún tipo de enfermedad tuvieron 2,15 veces más probabilidades de
preñez (RP=2.15; IC= 1.972-2.344) que aquellas que tuvieron algún evento que las
englobara dentro de vacas enfermas. Finalmente, los resultados de las razones de
probabilidad para las variables PL150 DEL (I) e IP1IA fueron de 0,982 y 0,978
respectivamente siendo estos estadísticamente no significativos.
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Tabla 2. Modelo logístico para explicar el efecto de PLCS en la probabilidad de preñez a
los 150 DEL.
PLCS=puntaje lineal de células somáticas,
RP=razón de probabilidad, IC=intervalo de confianza, NC=no calculado,
CCM=cuadrado medio mínimo,
Grupo PLCS, 0=sanas, 1=evento antes 1 IA, 2=evento entre 1 IA y servicio fecundante,
3=después diagnóstico de gestación,
PL150 DEL=producción de leche a 150 días de lactancia,
IP1IA=intervalo parto-1ra inseminación artificial.
Se ajustó un segundo modelo de regresión logística con el fin de explicar la
variabilidad en la tasa de concepción al primer servicio (C1S) a partir de los predictores
fijos evolución del puntaje lineal (PL), número de parto, estación de parto, producción
de leche a 150 DEL, tambo y año de parición. Los resultados del modelo se observan en
la Tabla 3. El valor de los cuadrados medios mínimos para los niveles de la variable PL
fueron 0,481; 0,431; 0,397 y 0,380 para las vacas de los grupos sanas, curadas, nuevos
casos y crónicas respectivamente, siendo este último grupo el único que presenta
diferencias significativas respecto de las vacas sanas (RP=0,854; P= <0,0001). La
probabilidad de preñez al primer servicio para las vacas de segundo y tercer parto
respecto de las primíparas es un 4% mayor (RP=1,040; P=<0,0001) y un 14,6 % menor
(RP=0,677; P= <0,0001) respectivamente. Las vacas que paren en invierno, primavera y
Variable Nivel N RP IC 95 % CMM P
Grupo PLCS Grupo 0 4601 1 0.583
Grupo 1 vs 0 3945 0.726 0.655-0.804 0.540 <0.0001
Grupo 2 vs 0 2125 0.097 0.085-0.111 0.120 <0.0001
Grupo 3 vs 0 4608 1.010 0.917-1.112 0.586 0.8426
Número de parto 1 parto 5217 1
2 vs 1 3843 1.101 0.996-1.218 NC
3 vs 1 2663 1.159 1.031-1.301 NC
4 vs 1 3556 1.034 0.928-1.102 NC
Estación de parto Otoño
4832
1
Otoño vs verano 3889 0.625 0.567-0.691 NC
Otoño vs
primavera 2752
0.580 0.519-0.648 NC
Otoño vs invierno 3806 0.956 0.865-1.058 NC
Estatus de salud Sanas vs enfermas 2.150 1.972-2.344 NC
PL150 DEL (l) 0.982 0.943-1.022 NC
IP1IA (d) 0.978 0.977-0.979 NC
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verano respecto de las que paren en otoño presentaron una C1S un 3% (RP=0,962;
P=<0,0001), 20,5% (RP=0,795; P=<0,0001), y 8% (RP=0,920; P=<0,0001) menor
respectivamente. La producción de leche a 150 DEL no tuvo efecto significativo sobre
la concepción al primer servicio. Con respecto a las diferentes explotaciones lecheras, el
tambo 5 presentó los peores valores de eficiencia de C1S, siendo la C1S de los tambos
1, 2, 3 y 4; 1,8 (RP=1,848), 2,24 (RP=2,245), 1,47 (RP=2,467) y 1,87 (RP=1,875) veces
más probables que en el tambo de referencia. El efecto del año de parición en C1S no
fue constante a lo largo de todo el período de estudio. El año 2015 fue el que mejores
resultados obtuvo, con diferencias estadísticamente significativas respecto de los años
2014 (RP=0,457), 2013 (RP=0,587), 2012 (RP=0,641), 2011 (RP=0,716), 2010
(RP=0,628) y 2004 (RP=0,449), pero no se observaron diferencias respecto de los otros
años.
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Tabla 3. Modelo logístico para explicar el efecto de la evolución del PLCS en la
probabilidad de concepción al primer servicio.
PLCS=puntaje lineal de células somáticas, INV=invierno, PRI=Primavera,
VER=verano, OTO=otoño, IC=intervalo de confianza, CMM=cuadrado medio mínimo,
NC=no calculado, PL150 DEL= producción de leche a 150 días de lactancia (x 1000 l), a=RCS<150.000 CS/ml antes de 1IA (-3d) y después de la 1IA (+32d), b=RCS>150.000 CS/ml antes de 1IA (-3d) y <150.000 CS/ml después de la 1IA (+32d), c=RCS< 150.000 CS/ml antes de 1IA (-3d) y >150.000 CS/ml después de la 1IA (+32d), d=RCS > 150000 CS/ml antes de 1IA (-3d) y >150.000 CS/ml después de la 1IA (+32d).
El siguiente modelo logístico se realizó para explicar la probabilidad de concepción
al primer servicio (C1S) según la gravedad del PLCS de las vacas con mastitis crónica
Variable Nivel N RP IC 95 % CMM P
Evolución Sanas a 3067 1 0.418
Curadas b 1038 0.982 0.843-1.140 0.413 0.8117
Nuevos
casos c
1134 0.919 0.793-1.061 0.397 0.2610
Crónicas d 1403 0.854 0.738-0.991 0.387 0.0357
Número de parto 1 1992 1.000
2 vs 1 1632 1.040 0.896-1.26 NC
3 vs 1 3018 0.677 0.583-0.785 NC
Estación de parto Otoño 2330 1
Invierno vs
Otoño
1579 0.97 0.845-1.11 NC
Primavera vs
Otoño
1046 0.795 0.675-0.938 NC
Verano vs
Otoño
1687 0.92 0.802-1.054 NC
PL150 DEL 1.04 0.963-1.123 NC
Tambo 1 303 1.848 1.388-2.464 NC
2 316 2.245 1.694-2.976 NC
3 1154 2.467 2.094-2.907 NC
4 2071 1.875 1.602-2.194 NC
5 2798 1
Año
2003 116 0.656 0.394-1.092 NC
2004 152 0.449 0.273-0.738 NC
2005 472 0.784 0.536-1.146 NC
2006 1150 0.948 0.688-1.305 NC
2007 605 0.967 0.675-1.384 NC
2008 559 0.813 0.563-1.165 NC
2009 432 0.901 0.618-1.314 NC
2010 606 0.628 0.438-0.900 NC
2011 659 0.716 0.513-0.999 NC
2012 629 0.641 0.460-0.894 NC
2013 634 0.587 0.421-0.817 NC
2014 416 0.459 0.322-0.653 NC
2015 206 1
15
(un RCS >150.000cs/ml antes y después del 1S). Los siguientes predictores fijos fueron
incluidos en el análisis, gravedad, tambo, número de parto, estación de parto, año,
producción de leche a 150 DEL con sus respectivos niveles. Los resultados del modelo
se observan en la Tabla 4.
Tabla 3. Modelo logístico para explicar el efecto de los niveles de PLCS en la probabilidad
de concepción al primer servicio en vacas con mastitis crónicas.
Variable Nivel N RP IC 95% LMS P
Gravedad Grupo 0 3067 1 0.4036
1 vs 0 728 0.941 0.783-1.132 0.3891 <0.0001
2 vs 0 376 0.823 0.642-1.053 0.3576 <0.0001
3 vs 0 298 0.669 0.503-0.891 0.3117 <0.0001
Tambo 5 1877
1 vs 5 198 1.504 1.053-2.147 NC NC
2 vs 5 221 1.893 1.352-2.650 NC NC
3 vs 5 768 2.262 1.849-2.768 NC NC
4 vs 5 1405 1.772 1.463-2.146 NC NC
N° Parto 1 1393
2 vs 1 1099 1.103 0.921-1.321 NC NC
3 vs 1 1977 0.706 0.586-0.850 NC NC
Estación de parto 1 1572
2 vs 1 1063 0.962 0.812-1.139 NC NC
3 vs 1 678 0.798 0.651-0.977 NC NC
4 vs 1 1156 0.944 0.800-1.114 NC NC
Año 2015 NC
2003 vs 2015 264 0.673 0.366-1.238 NC NC
2004 vs 2015 84 0.453 0.247-0.831 NC NC
2005 vs 2015 101 0.745 0.467-1.188 NC NC
2006 vs 2015 334 0.837 0.563-1.245 NC NC
2007 vs 2015 763 0.978 0.628-1.523 NC NC
2008 vs 2015 399 0.670 0.426-1.054 NC NC
2009 vs 2015 366 0.667 0.416-1.069 NC NC
2010 vs 2015 279 0.611 0.393-0.949 NC NC
2011 vs 2015 419 0.662 0.440-0.995 NC NC
2012 vs 2015 469 0.568 0.377-0.856 NC NC
2013 vs 2015 440 0.514 0.340-0.777 NC NC
2014 vs 2015 414 0.405 0.260-0.630 NC NC
PL150 DEL1 0.99 0.901-1.087 NC NC
PLCS=puntaje lineal de células somáticas, PL150 DEL=producción de leche a 150 días
de lactancia,
RP=razón de probabilidad, IC=intervalo de confianza, CMM=cuadrado medio mínimo,
NC=no calculado.
16
Con respecto a la gravedad del PLCS los resultados de los cuadrados medios
mínimos para la C1S del nivel 0 (n=3067), 1 (n=728), 2 (n=376) y 3 (n=298) fueron
0,4036; 0,3891; 0,3576 y 0,3117 respectivamente. Mientras que los valores de la RP
para el grupo 1, 2 y 3 fueron 0,941 (IC=0,783-1,132), 0,823 (IC=0,642-1,053) y 0,669
(IC=0,503-0,891) respectivamente, siendo el grupo 0 el valor de referencia. Para la
variable tambo, comparando el 1, 2, 3 y 4 con el 5 los valores de la RP fueron 1,504
(IC=1,053-2,147), 1,893 (IC=1,352-2,650), 2,262 (IC=1,849-2,768) y 1,772 (IC=1,463-
2,146) respectivamente siendo todos estadísticamente significativos. Para los niveles de
la variable número de parto lo valores de la RP fueron 1,103 y 0,706 para las de 2 vs 1 y
3 vs 1 parto respectivamente siendo este último estadísticamente significativo. Para la
estación de parto la RP de sus niveles fueron 0,962 (IC=0,812-1,139), 0,798 (IC=0,651-
0,977) y 0,944 (IC=0,800-1,114) para 2, 3 y 4 vs 1 respectivamente, siendo las vacas
paridas en la estación 1 (otoño) las que tuvieron mejor reproducción. En cuanto a la
variable año el 2004, 2010, 2011, 2012, 2013 y 2014 son los años que tuvieron
diferencias estadísticamente significativas con respecto al año 2015, sus valores son
0,453; 0,611; 0,662; 0,568; 0,514; 0.405 respectivamente. Finalmente, la PL 150DEL no
tuvo efecto significativo.
En el cuarto estudio se ajustó un modelo de supervivencia para explicar el tiempo
medio a la 1IA, los dos predictores fijos fueron, vacas que tuvieron >150.000 RCS antes
de la 1IA o <150.000 RCS antes de la 1IA, los resultados del primer cuartil fueron de 58
d y 55 d para las de > y < 150.000 RCS respectivamente, para las de segundo cuartil los
valores fueron 78 d y 72 d para las de > y < 150.000 RCS respectivamente y para las del
tercer cuartil de 105 d y 99 d para las de > y < 150.000 RCS respectivamente (Tabla 5).
Tabla 5. Modelos de supervivencia para el tiempo medio a la 1 IA según RCS anterior a
la 1IA Cuartiles >150.000 RCS antes dela1IA <150.000 RCS antes dela1 IA
Días IC 95% Días IC 95%
75 105 103-109 99 97-102
50 78 75-80 72 70-74
25 58 56-60 55 54-56
RCS=conteo de células somáticas, IC=intervalo de confianza.
17
Por último, se realizó un modelo de riesgo proporcionales de Cox para el riesgo
diario de recibir el primer servicio, comparándose vacas con > 150.000 vs <150.000
RCS, aquellas con menos RCS tienen un 14,5 % (IC=1.077-1.216) más de
probabilidades de recibir un servicio que aquellas con RCS superiores al límite
establecido (Tabla 6).
Tabla 6. Modelo de riesgo proporcionales de Cox para el riesgo diario de recibir el
primer servicio.
RCS antes dela 1 IA Estimador IC 95 %
>150.000 vs <150.000 1,145 1,077-1,216
RCS= conteo de células somáticas, IC=intervalo de confianza.
5. DISCUSIÓN
El estudio que realizado demuestra una fuerte asociación entre la mastitis y la
fertilidad de las vacas lecheras en base alimenticia pastoril. Los resultados obtenidos
confirman las hipótesis planteadas por el estudio, que RCS >150.000 tienen un impacto
negativo sobre la C1S y la eficiencia reproductiva, incluso aquellas vacas que tuvieron
mastitis crónicas con recuentos superiores a las compañeras sufrieron un impacto mayor
sobre dichos parámetros reproductivos.
En este estudio se consideraron sanas a todas las vacas que no tuvieron CCS
superiores a los 150.000 RCS/ ml de leche (Fuenzalida et al., 2015). Este límite
(150.000 CCS/ml) fue tomado de un meta-análisis de 21 estudios publicados, como el
umbral a partir del cual se ven efectos sobre la reproducción (Djabri et al., 2002; Lavon
et al., 2011). A diferencia de lo realizado por otros autores, que tomaban el corte en el
PLCS 4 pudiendo clasificar a vacas sanas como enfermas (Santos et al., 2004; Chebel et
al., 2007).
La notable disminución de la preñez en el grupo 1 y 2, del primer estudio, se debe
en parte probablemente al retraso de la ovulación, anovulación, efecto de la regresión
lútea prematura y pérdidas de preñez tempranas producidas por la liberación de
citoquinas como la prostaglandina F2α, TNF-α, INF-γ y/o el efecto de endotoxinas, como
el LPS (lipopolisacárido) y exotoxinas bacterianas, sobre el ovario, el útero y/o el
18
embrión (Hansen et al., 2004; Hertl et al., 2014). Los valores observados sobre el grupo
1 son menores a los observados en el grupo 2 debido en parte a que el efecto de la
mastitis sobre la concepción es mayor después que antes del servicio (Barker et al.,
1998; Schricket al., 2001; Santos et al., 2003; Chebel et al., 2007, Hensen et al., 2007;
Hertl et al., 2014). Un inadecuado desarrollo del cuerpo lúteo puede tener perjuicios en
dos ventanas de tiempo, pre-inseminación (grupo 1), ya que un inadecuado desarrollo
del cuerpo lúteo del ciclo precedente, lleva a concentraciones menores de P4, retraso en
la maduración ovocitaria dentro del folículo ovulatorio, lo que conduce a menores tasas
de concepción y más muertes embrionarias tempranas (Mihm et al., 1999), mientras que
post-IA (grupo 2) concentraciones menores de P4 en el plasma pueden conducir a menor
desarrollo embrionario y falta de producción de moléculas de reconocimiento materno
fetal (Mann y Lamming, 2001). Por otro lado, si bien muchos autores insisten en
agrupar las vacas de esta manera, es cierto que en el grupo 2, estaríamos involucrando a
aquellas vacas con diferentes problemas que ocasionan necesariamente la necesidad de
más de un servicio para concebir. Tanto grupo 1 y 2 presentaron diferencias
estadísticamente significativas respecto con el control, pero el grupo 3 no presentó las
mismas diferencias, lo que podemos inferir que las mastitis en la gestación avanzada
parece tener poca repercusión sobre el mantenimiento de la misma (Santos et al., 2004).
Vale mencionar la gran diferencia en preñez final que hay dentro de la variable estatus
de salud (sanas vs enfermas) en la cual las vacas sanas tienen 2,15 (66,0%) veces más
riesgo de preñez que aquellas con algún tipo de enfermedad.
Un resultado importante fue el obtenido cuando se clasificaron a la mastitis de
acuerdo a su evolución. Al igual que lo encontrado por otros autores (Fuenzalida et al.,
2015), las vacas categorizadas como curadas no presentaron diferencias estadísticamente
significativas con las vacas sanas, las primeras tuvieron una merma de la concepción del
1,8% con respecto al control. Hubo otros grupos de investigación (Hertl et al., 2014),
que encontraron un efecto de la mastitis sobre la fertilidad cuando ésta ocurría hasta 14
días previos al servicio, pero la asociación no fue con RCS sino con aislamiento
bacteriano y sólo con determinadas especies de bacterias. Las vacas que tuvieron un
caso de mastitis nuevo dentro del período de riesgo tuvieron un 8,1% menos de chance
de concepción que las sanas, lo que se traduce en un 2,1% menos de tasa de concepción,
esta asociación es menor a la que han hallado otros autores (Fuenzalida et al., 2015;
19
Hertl et al., 2014). Esto puede deberse a que en este grupo hay vacas con diferentes
gravedades en PLSC y que las de menor puntaje lineal estén ejerciendo un efecto de
dilución, ya que como indican otros autores la asociación entre las RCS y la fertilidad se
comporta de manera directamente proporcional con el aumento de RCS. Otra posible
causa es que el período de riesgo utilizado (-3 d a 32 d postIA) no es del todo apropiado
ya que se sabe, que a medida que nos alejamos del servicio la asociación causa-efecto es
menor (Hertl et al., 2014), y las vacas que tuvieron el CCS más alejado del mismo
diluyen el efecto que tiene el evento más cercano al servicio. Las vacas que tuvieron
ambos RCS elevados presentaron una mayor fuerza de asociación entre los RCS y la
fertilidad, esto puede deberse a un efecto aditivo de ambos RCS elevados sobre el
desempeño normal de la vaca. Ha sido reportado que vacas con mastitis tienen mayores
concentraciones en sangre de 13,14 dihidro-15-ceto PGF2α (el mayor metabolito de
PGF2α) seguidos de cambios en las concentraciones de oxitocina (Giri et al., 1984;
Hocket et al., 2000) y otras citoquinas como ON (óxido nítrico), TNF α que afectan la
maduración y desarrollo del ovocito y más tarde la del embrión pudiendo ocasionar
inclusive una luteólisis temprana. Por otro lado ha sido muy estudiado el impacto que
tiene el estrés calórico sobre la fertilidad, una elevación de la temperatura corporal
durante la maduración del ovocito o el desarrollo embrionario temprano conlleva a una
reducción en la sobrevida del embrión (Putney et al., 1988; Ealy et al., 1993), el efecto
de la temperatura es directo sobre la maduración del ovocito y la fase preimplantacional
del embrión (Edwards y Hansen, 1997), finalmente se ha observado una disminución de
la formación de blastocitos en fertilización in vitro de ovocitos colectados bajo efectos
de alta temperatura corporal (Dutt, 1963). Un grupo de investigadores mencionó que el
efecto de la mastitis sobre la reproducción se acentuaba cuando las vacas pasaban de
mastitis subclínica a clínica (Hansen et al., 2004) posiblemente por la manera que
agrupamos las vacas, aquellas que en el segundo recuento tuvieron un aumento
considerable en las RCS se estén comportando de esta manera y sean las que más están
padeciendo la enfermedad. Por otro lado, otro grupo encontró resultados similares a los
nuestros siendo las vacas que tenían mastitis clínica crónica y subclínica crónicas las
que presentaban una mayor merma en la performance reproductiva (Fuenzalida et al.,
2014).
20
Se observó una fuerte asociación de las vacas con mastitis crónica cuando se
focalizó sobre aquellas que tuvieron un segundo RCS >1.000.000 CS/ml, una posible
explicación es que, al experimentar un proceso evidentemente más agresivo, el efecto
sistémico de la enfermedad sea mayor. Otros autores (Wenz et al., 2001), concluyeron
en que las mastitis ocasionadas por cierto grupo de bacterias Gram negativas
(Escherichia Coli, Klebsiella spp entre otras) que liberan al torrente sanguíneo
endotoxinas (LPS), exacerban toda la cadena de citoquinas explicadas anteriormente, y
en un 30% de los individuos en los que se aisló Gram negativas en leche hubo
afecciones sistémicas, con mayores efectos sobre la reproducción.
Las vacas que presentaron RCS superiores a los 150.000 CS/ml de leche
presentaron un intervalo parto primera inseminación (IP1A) más prolongado que las
control (78d y 72d respectivamente), además de tener un menor riesgo instantáneo de
recibir un servicio. Biológicamente el retraso de la ovulación o anovulación se podría
explicar, por la acción de ciertas citoquinas como el INFα que ejercen parte la de acción
sobre el eje hipotálamo hipófisis ovárico, decreciendo la liberación de la hormona
leuteinizante (McCan et al., 2000), el cortisol producido durante inflamaciones como la
mastitis puede bloquear la liberación de la LH (Barros et al., 1992), mientras que
algunas interleucinas como la IL-6, bloquean a la hormona folículo estimulante (FSH) y
la secreción de estradiol, especialmente de folículos pequeños (Alpizar y Spicer, 1994).
Si bien dentro de estas dos variables analizadas hay cuestiones que no fueron tenidas en
cuenta como el factor humano de la detección de celo, hay autores que infieren que la
mastitis durante la lactancia temprana tiene un efecto deletéreo sobre la eficiencia
reproductiva de vacas lecheras, prolongando el retorno a la ciclicidad de los mismos
(Cullor, 1990; Moore et al., 1991; Barker et al., 1998; Schrick et al., 2001). Resultados
muy similares fueron hallados por otros autores (Santos et al., 2004) siendo la diferencia
entre grupos del IP1IA de 4 d, en contraste con los 6 días que presenta este trabajo.
21
6. CONCLUSIONES
Este estudio demostró una clara asociación entre los RCS elevados y una falla en
eficiencia reproductiva. La misma se ve afectada por un aumento en el intervalo parto
primera inseminación, y una disminución en la probabilidad de concepción al primer
servicio, y en la preñez final. La fuerza de asociación fue mayor en determinados
momentos de la lactancia, inherente al momento del evento en relación al servicio, la
evolución y la gravedad de la enfermedad.
22
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