Download - Hplc
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HPLC
Jesús Anzano
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Copyright-2002-J.A.
Esquema de separación en cromatografía líquida
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N, número de platos teórico .
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GENERALIDADES
Introducción de muestras
• Inyección directa• No es necesario que las muestras sean muy solubles en la fase móvil • Rara es la vez en la que se produce descomposición de la muestra • Algunas veces se inyectan derivados de la muestra. • Poca preparación de la muestra• Muestra inyectada: ng-2 mg
Columnas
• Columna: 25-50 cm• Diámetro interno de columna: 2-5 mm• Diámetro de partícula: 5-15 µm
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Mecanismos de reparto
Tipo Fase estacionaria Fase móvil Aplicaciones ADSORCIÓN Gel de sílice Hexano, cloroformo, isopropanol Eteres, esteres, vitaminas
Alúmina Hexano, cloroformo, isopropanol AminasREPARTO:Fase Normal Amino Hexano, cloroformo, isopropanol Azucares, nitroderivados
Ciano Hexano, cloroformo, isopropanol Nitroderivados, aminoácidosFase inversa Dimetilsilano Agua, acetonitrilo, metanol Aminas,fenoles, vitaminas
Octilsilano Hexano, cloroformo, isopropanol Aceites, esenciales, esteroidesINTERCAMBIO IÓNICO:Intercambiador fuerte de cationes Ácido sulfónico Na2HPO4 Aminoácidos
Intercambiador fuerte de aniones Amonio cuaternario Na2HPO4 Nucleótidos
Intercambiador débil de aniones -NH2 H3PO4 Colorantes, carbohidratos
EXCLUSIÓN Gel acuoso Agua Proteínas, péptidos,
Gel orgánico Cloroformo, THF PolímerosGel de sílice THF, alcoholes, agua Compuestos biológicosVidrio poroso Hexano, cloroformo, isopropanol Compuestos biológicos
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Instrumentación en HPLC
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Columnas
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Características de los detectores
Detector Límite de detección(masa)
Absorbancia 100 pg-1ngFluorescencia 1-10 pgElectroquimico 10 pg- 1ngIndice de refracción 100 ng-1µgConductividad 500 pg-1ngEspectrometría de masas 100 pg-1 ngFT-IR 1µgDispersión de luz 10µg
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ACOPLAMIENTO HPLC-EA
- La conexión entre CL y un ICP es bastante fácil
- El caudal de aspiración de las muestras es compatible con el caudal de los eluyentes cromatográficos líquidos
- W. SLAVIN: formación de una gota la salida del eluyente cuando éste alcanza un determinado tamaño (100 mL) se desprende y cae sobre un micro-embudo de teflón conectado directamente al nebulizador.
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INTERFASES
• Conexión sencilla• Dilución del analito.• Los ompuestos termolábiles, se descomponen• Posible obturación de la interfase. Interfase con cinta transportadora móvil Interfase con formación de un termosprayInterfase con ionización a presión atmosféricaIntroducción directa
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