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RECUENTO BACTERIANO
Dra. Natalia Izurieta CergneuxPRÁCTICA No. 4 – LABORATORIO DE BACTERIOLOGIA Y MICOLOGIA
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GENERALIDADES Replicación bacteriana: fisión
binaria o bipartición.
De una célula madre se
originan dos células hijas
idénticas.
Crecimiento ordenado de todos
los constituyentes y estructuras
celulares.
Aumento exponencial en el
número de células.
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TIPOS DE CRECIMIENTO
CRECIMIENTO INDIVIDUAL
La bacteria alcanza un tamaño y peso fijo. Constituye el paso previo
a la división celular.
CRECIMIENTO POBLACIONAL
Es el incremento en el número de células como consecuencia del
crecimiento y división celular.
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RECUENTO BACTERIANO
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CONTEO DE CÉLULAS VIABLES
La célula viable es aquella capaz de dividirse y formar una colonia en el
medio de cultivo.
Se basa en que cada colonia surge de una simple célula.
Cada colonia contiene una sola especie bacteriana.
ALIMENTO
CAJA PETRIMICROSCOPIO
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CONTEO DE CÉLULAS VIABLES
El número de bacterias viables por muestra se expresa en:
UNIDADES FORMADORAS DE
COLONIAS (UFC) Representa cada colonia contada y su número total representa el
número total de bacterias viables en la muestra.
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DETERMINACIÓNNo. UFC
Método de vertidoen placa
Método de extensiónen placa
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CONTEO DE CÉLULAS VIABLESMÉTODO DE EXTENDIDO EN PLACA
Es el método de elección para anaerobios facultativos y cultivo de microaerófilos.
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CONTEO DE CÉLULAS VIABLES
MÉTODO DE VERTIDO EN PLACA. Esta técnica se usa generalmente para bacterias aerobias obligatorias.
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CONTEO DE CÉLULAS VIABLES
Útil para la técnica de
vertido en placa o extensión
en placa.
Se siembran volúmenes
conocidos de cada dilución
Luego se incuba a 35 – 37 0C
durante 24 – 48 horas.
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TÉCNICAS DE RECUENTO
Finalizado el tiempo de incubación, se realiza el recuento.
Se toman en cuenta únicamente aquellas cajas Petri que tengan
entre 30 y 300 colonias.
Este número de colonias es estadísticamente representativo.
Aquellas placas que tengan más de 300 colonias se reportan como
“INCONTABLES”.
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TÉCNICAS DE RECUENTO Para el recuento bacteriano se puede usar cuentacolonias.
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RECUENTO CON CUENTACOLONIAS
Puede ser contada toda la placa o por cuadrantes.
Cuando la carga bacteriana es alta, se toma en cuenta un cuadrante con
carga alta, un cuadrante con carga media y un cuadrante con carga baja.
Se realiza la sumatoria de los tres cuadrantes y se saca el promedio.
Finalmente el promedio se multiplica por 65
No. Colonias = (CA + CM + CB /3) * 65
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CA = 32
CM = 19
CB = 10
Sumatoria
Σ = 61
Promedio
61/3 = 20.33
Factor
= 20.33*65
= 1322
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OBTENCIÓN DE RESULTADOS
Terminado el conteo por cualquier método, se debe aplicar la
siguiente fórmula para obtener el No. de UFC/ ml o UFC/g.
UFC/ml ó UFC/g = No. de colonias por placa X el factor de
dilución *
ml de la muestra sembrada
*Factor de dilución: inversa de la dilución.
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EJEMPLOS
EJEMPLO 1
No. de colonias: 280
Dilución: 10 -3
Volumen de siembra: 1 ml
UFC/ ml = 280 X 1000 /1
UFC/ ml= 280.000
EJEMPLO 2
No. de colonias: 56
Dilución: 10 -4
Volumen de siembra: 0.2 ml
UFC/ ml = 56 X 10000 /0.2
UFC/ ml= 2 800.000
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Cuando se realiza más de una dilución para cada uno de los
parámetros se garantiza los resultados obtenidos.
Este método disminuye el margen de error y abaliza la calidad de las
pruebas.
Para obtener los resultados por duplicado se aplica la siguiente
fórmula:
UFC / ml parámetro = UFC / ml dilución A + UFC / ml dilución B
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EJEMPLOS Ejemplo 1Dilución A: 5 600.0000Dilución B: 6 000.000Resultado : 5 600.000 + 6 000.000 / 2 = 5 800.000 UFC / ml FLORA TOTAL
Ejemplo 2Dilución A: 1 245.647Dilución B: 2 340.500Resultado: 1 245.647 + 2 340.500 / 2 = 1 793.074 UFC / ml FLORA
COLIFORME