Espectrofotometría de Espectrofotometría de Absorción Molecular UV/VISAbsorción Molecular UV/VIS
50 MPR/100 /300
Varian Ibérica
NUEVA GAMA CARYNUEVA GAMA CARY
Cubre el rango completo de aplicaciones espectrofotométricas:
• Cary 50 Rutina y cinéticas rápidas
• Cary 100 Doble haz de prestaciones medias
• Cary 300 Altas prestaciones, cinéticas.
Espectrofotómetro de barrido ultra rápido.
CARY 50CARY 50Calidad Cary a buen precioCalidad Cary a buen precio
• Ganador de numerosos premios de diseño
• Premio a la Excelencia en Ingeniería
• Premio a la Innovación Revista R&D
• Premio al mejor desarrollo instrumental IBO
Cary 50Cary 50La revoluciónLa revolución
• Un instrumento que permite barrer de 190 a 1100 nm en menos de 3 segundos. (24.000 nm /min).
• Completamente inmune a la luz ambiental.• Haz muy estrecho para microcubetas.• Especialmente recomendado para cinéticas ultra rápidas:
• Permite la adquisición de hasta 80 puntos por segundo• Ideal para acoplar a Fibra Óptica• Un estándar de la espectrofotometría, con gran número de
unidades instaladas.• Robustez y fiabilidad ampliamente comprobadas.
Cary 50Cary 50Diseño ópticoDiseño óptico
• Lámpara de Xe • Alta intensidad• Totalmente fría• “Eterna”• Sólo ilumina en la medida
• Corrección de referencia (Doble Haz)
• Resolución 1,5 nm• Elimina la fotodegradación de
muestras• Cumple con 21CFR P-11
Cary 50 Cary 50 Accesorios de Fibra ópticaAccesorios de Fibra óptica
• Acopladores de Fibra óptica– Cuantificación sin cubeta
– Cinéticas en medios complejos
– Mínima pérdida de sensibilidad
– Sin mantenimiento
– Amplia gama de fibras disponible
– Máxima productividad
Cinéticas RápidasCinéticas Rápidas
Reacciones que se producen en pocos segundos
Requiere muy alta velocidad de medida.
Control de temperatura preciso y rápido
El CARY 50 aporta las características necesarias:• Hasta 80 puntos / segundo
• Lámpara fria sin calentamiento
• Compartimento abierto para adición de reactivos
• Sistema “STOP-FLOW” SFA-20
Cary 50:Cary 50:Accesorios multicubetasAccesorios multicubetas
• Accesorio automático 18 cubetas• A temperatura ambiente
• Termostatizado mediante baño externo peltier
• Permite la medida de 18 cinéticas inatendidas
• Paquete con espectrofotómetro muy competitivo
• Totalmente automático
Cary 50Cary 50Gama de AccesoriosGama de Accesorios
• Gama completa de accesorios para muestras sólidas y líquidas
CARY 50 TRAYCELLCARY 50 TRAYCELL
•Wavelength range: 220-750nm•Pathlength: 0.2mm or 1.0mm
CARY 50 TRAYCELLCARY 50 TRAYCELL
•260nm peak of DNA
•WinUV DNA/RNA Application
•Cary 50 + Traycell
•4ul DNA
•Reproducibility +/-0.29%RSD
•260nm peak of DNA
•WinUV DNA/RNA Application
•Cary 50 + Microcell
•400ul DNA
•Reproducibility +/-0.17%RSD
CARY 50 MPRCARY 50 MPR
CARY 50 MPRCARY 50 MPR
• El lector de microplacas Varian CARY 50 combina la alta capacidad de rendimiento de un lector de microplacas con la flexibilidad y grado de desarrollo de un espectrofotómetro.
• Soluciones de medida para trabajos de rutina e investigación en el laboratorio.
• Las mayores prestaciones en precisión de temperatura para aplicaciones cinéticas.
• WinUV Microplate Reader Software que incluye metodos para aplicaciones bioquímicas.
CARY 50 MPR CARY 50 MPR especificacionesespecificaciones
Specifications
Source High intensity Xenon flashlamp
Detectors Silicon photodiode
Wavelength range 190-1100 nm
Wavelength selection Czerny-Turner 0.25 m monochromator
Wavelength data interval 0.15–5.0 (nm)
UV/VIS limiting wavelength resolution < 1.5 nm
Wavelength accuracy ± 0.5 nm at 541.9 nm
Wavelength reproducibility ± 0.1 nm
Maximum scan rate(single well) 24,000 nm/min
Maximum data collection rate (single well)
80 points/sec
Photometric range 0.0-2.5 Abs
Temperature range Ambient + 4.0 to 45.0 °C set in 0.1 °C increments
Temperature uniformity +/- 0.5 °C
Microplate compatibility 6, 12, 24, 48, 96, 384 wells
Time to read 96 wells < 50 s
Time to read 384 wells < 100 s
Operating system Windows XP PRO
Recommended PC requirements As discussed
Cary 100/300Cary 100/300
Instrumentos de máximas prestaciones en el rango medio.
Cary 100/300Cary 100/300Diseño ÓpticoDiseño Óptico
Barrido conFase de NoMedida
Doble hazDoble Chopper
OpticaRecubiertade Cuarzo
RendijaVariable
Haz DobleReal
CARY 100 UV/VISCARY 100 UV/VISCaracterísticasCaracterísticas
• Reproducibilidad de barridos a distintas velocidades• Sistema óptico de doble haz real• Rendija Variable contínua de 0.2 a 4 nm a intervalos
de 0.1 nm• Rango fotométrico hasta 3.7 Abs• Luz difusa a 220nm (%T) 0.0074• Estabilidad fotométrica < 0.0003 Abs/hr• Exactitud de long. de onda ± 0.02 nmm @ 656.1 nm• Excelente estabilidad para cinéticas• Amplio rango de accesorios
CARY 300 UV/VISCARY 300 UV/VISCaracterísticasCaracterísticas
• Reproducibilidad de barridos a distintas velocidades• Sistema óptico de doble haz real• Premonocromador• Rendija Variable contínua de 0.2 a 4 nm a intervalos de
0.1 nm• Rango fotométrico hasta 5.0 Abs• Luz difusa a 220nm (%T) 0.00008• Estabilidad fotométrica < 0.0003 Abs/hr• Exactitud de long. de onda ± 0.02 nmm @ 656.1 nm• Excelente estabilidad para cinéticas• Amplio rango de accesorios
¿Qué es una cinética?¿Qué es una cinética?
• Seguimiento de un proceso de reacción.
• Sigue la formación de uno o varios productos.
• Midiendo la absorción de los mismos frente al tiempo.
• Permite estudiar los mecanismos de reacción.
Control de TemperaturaControl de Temperatura
• En todos los casos es necesario termostatizar.
• Normalmente se utilizan multicubetas.
• Sistema Peltier control preciso y programable
• Baño termostático para Tª Constante.
• Sistema Peltier con rampa de hasta ± 0.06 º C/min
Cinéticas de BarridoCinéticas de Barrido
• Para monitorizar especies desconocidas.
• Realiza gran número de barridos.
• Obtención directa de la cinética a cualquier longitud de onda
• Monitorización de varias longitudes de onda simultáneas
Cinéticas; cálculo de Cinéticas; cálculo de resultadosresultados
• En todos los casos se necesita ajustar la curva a una determinada función.
• Esta función nos indicará el orden de reacción, y el mecanismo de la misma.
• El Software Cary realiza estas operaciones automáticamente
Cinéticas EncimáticasCinéticas Encimáticas
Caso especial de reacciones catalizadas por encimas
Trabajan con un mecanismo de “llave”.E + S ES E + P
• Solamente se produce la reacción si se combina la Encima (E) con el sustrato apropiado (S).
• Máxima selectividad. La mayoría de reacciones biológicas se producen de esta forma
Importancia de la actividad Importancia de la actividad encimáticaencimática
Díagnóstico Clínico:• La mayoría de enfermedades afectan a la actividad
encimática normal.
• Tras un ataque al corazón, el nivel de CPK aumenta rápidamente hasta un máximo entre las 16 a 36 horas volviendo a valores normales en 3 días.
• Hay una relación directa entre la actividad encimática y la severidad de la gravedad del ataque.
• Se suele medir en hígado, corazón, pancrea, músculo, hueso, etc...
Actividad encimáticaActividad encimática
Investigación Bioquímica y farmacéutica:• La mayoría de drogas actúan sobre las encimas.
–La aspirina actúa inhibiendo la actividad de la encima que cataliza la síntesis de prostaglandinas causantes del dolor.
–La potencia, y especificidad del medicamento.
• En investigación pura:
–Clasificación y síntesis posterior de encimas. Cálculo de Km y Vmax en distintos sustratos
–Investigación de mecanismos metabólicos
Mecanismos EncimáticosMecanismos Encimáticos
• Definidos por la ecuación de Michaelis/Menten
v = Vmax[S]/[S]+Km
• Cada par E/S, se caracteriza por su Km y Vmax
• El software Cary permite el cálculo directo y automático de éstos valores.
Cálculo automáticoCálculo automático
• A 260 nm absorben fuertemente ARN/ADN.
• A 280 nm absorben proteinas y contaminantes.
260/280= 1.8 ADN PURO
260/280= 2.0 ARN PURO• Valores menores indican
contaminación
Warburg-ChristianWarburg-Christian11
• Permite medir la concentración de ADN y ARN en mg/mL
• Introduce factores para cada longitud de onda
• Corrige el fondo a 320 nm• También mide la
concentración de proteinas
1. Warburg, O. and Christian, W. (1942) Biochem. Z., 310, 384.
Análisis TérmicoAnálisis Térmico
• Proceso de Denaturalización/renaturalización de la doble hélice del ADN.
• La hipercromaticidad provoca que la cadena simple de ADN absorba más a 260 nm que la cadena doble.
• Monitorizando Abs (260) vs. Temp. Permite hallar la Tm (Temperatura a la altura media)
• El valor de Tm es característico de la cadena ADN y permite caracterizar la muestra.
• Al dismunir la temperatura lentamente la cadena se renaturaliza sin destruir la muestra.
Análisis Térmico de ADNAnálisis Térmico de ADN
• Requiere un control muy preciso de la temperatura.
• Disponible con el accesorio Peltier en los Cary 100/300/400
• Sondas de temperatura para el control preciso
• Rampas menores de 0.5ºC/min
Análisis TérmicoAnálisis Térmico
• El software automático del Cary permite:
• Cálculo de derivadas• Hipercromaticidad• Parámetros termodinámicos• Delta S, Delta G, Delta H• %GC (Guanina-Citosina)• Cálculo de Tm teóricas• Corrección de la expansión
térmica• Normalización a T dada
Análisis Térmico Análisis Térmico (Instrumentación)(Instrumentación)
•Requiere un CARY 100/300•Sistema multiceldas 6*6 peltier•Controlador de temperatura Peltier•Sondas de temperatura•Microceldas
CARY UV/VISCARY UV/VIS¿Validación Sencilla?¿Validación Sencilla?
El Software Cary Win-UV incorpora, una serie de ayudas a la validación, incluyendo todos los test de las normas internacionales:
• Farmacopea US
• Farmacopea Británica
• Normas de Buena Fabricación (GMP)
• Tests instrumentales
• Protocolos de acceso GLP.
Resúmen y ConclusionesResúmen y Conclusiones
La espectrofotometría UV/VIS es una herramienta imprescindible en el trabajo bioquímico.
Requiere unas características ópticas especiales según el tipo de análisis.
Además es necesario disponer de accesorios para control de temperatura y multi-cubetas.
Requiere un software especializado al tipo de trabajo habitual en el laboratorio bioquímico
Resúmen y ConclusionesResúmen y Conclusiones
La Gama CARY soluciona todos los requerimientos para el laboratorio bioquímico
• Excelentes características ópticas
• Máxima precisión en el control de Temperatura
• Software enfocado al trabajo bioquímico
• Facilidad de operación y potencia de cálculo
• Numerosas herramientas de validación
• Rango de precios adaptable a sus necesidades