ELISA (Ensayo por Inmunoabsorcion Ligado a Enzimas)

Daniela MurilloElizabeth PereaNatalia Villegas

Historia

• 1959 Yalow y Berson• Precursores de los ensayos inmunoenzimáticos

que fueron descritos originalmente en 1971 por Engvall y Perlman.

• El uso de material radiactivo ha limitado el uso del radioinmunoensayo, y a la vez a popularizado el empleo del inmunoensayo enzimático (EIA), del que hay dos técnicas principales:

• El ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas • El ensayo inmunológico multiplicado por enzimas.

• Reacción antígeno-anticuerpo• El color generado por la interacción de un

sustrato cromogénico y una enzima

ANTICUERPOS CONTRA AGENTES INFECCIOSOS Toxoplasma Cisticerco Amebas

CMV Hepatitis A-B-C Helycobacter pyloriEpstein Barr Rubeola HIV

ANTIGENOS TUMORALESACE (Antigeno Carcinoembrionario)APS (Antigeno prostatico especifico)

CA 125 (Antigeno Carbohidrato)AFP (Alfafetoproteina)

AUTOANTICUERPOSANA (Anticuerpo Antinuclear)

Anticuerpos antitiroideosFR (Factor Reumatoide)

Anticardiolipinas

Determinación de:

Formación de colores por la acción enzimática sobre diferentes cromógenos

Otras Enzimas

• β-galactosidasa• Penicilinasa• Ureasa • Glucosa Oxidasa

Fase Pre-Analítica

Toma de la muestra

Muestra

• Obtención de suero• Tubos de tapa amarilla o de tapa roja• Centrifugación

Condiciones de la muestra

• No hemolizada• No lipemica

Condiciones del Paciente• Ayuno ideal de 10 a 12 horas• No consumo de tabaco ni alcohol

Fase Analítica

Fundamento del ELISA

Pasos Generales

• Tapizado• Lavado• Adición muestra problema• Unión antígeno o anticuerpo• Lavado• Adición de Ac secundario• Lavado• Adición sustrato• Desarrollo del color

Tipos de ELISA

Anticuerpos Marcados:• ELISA directo• ELISA indirecto• ELISA sandwich- DAS (Doble)- HADAS (Heterologo)

Antigenos Marcados• ELISA competitivo

ELISA directo

ELISA Indirecto

ELISA Sandwich “DAS” (Double Antibody Sandwich)

ELISA Sandwich “HADAS”

ELISA Competitivo

Revelación de la actividad enzimática

• Adición de ácidos o bases fuertes para detener la reacción

• Lectura de la densidad óptica (DO) por espectrofotómetro

Fase Post-Analítica

Densidad óptica (DO)

Concentración

Reporte de Resultados

Reporte Cualitativo• Positivo• Negativo

Reporte Cuantitativo• ng o μg/ ml• Unidades Internacionales de ELISA (EIU)

Falsos Positivos

• Reacciones cruzadas entre anticuerpos con especificidades similares

Enfermedades AutoinmunesEmbarazadasPresencias de virus como Epstein Barr, VIH, etc.

• Contaminación cruzada entre muestras• Deterioro de los reactivos• Errores técnicos

Falsos Negativos

• Paciente no ha generado los anticuerpos de estudio

• Los anticuerpos de la muestra no tienen especificidad contra el antígeno de la prueba o viceversa

• Deterioro de los reactivos• Errores técnicos

Ventajas de la prueba ELISA

• Muy sensible• Gran numero de muestras procesadas

simultáneamente• Resultados rápidos• Utilización de Reactivos menos tóxicos• Menor Costo

Gracias