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7/25/2019 Diagnstico Molecular de Las Enfermedades Infecciosas en El Per
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Diagnstico Molecular de
las EnfermedadesInfecciosas en el Per
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CONSIDERACIONES (1)
Enfermedades Infecciosas noTransmitidas por Vectores
Sintomtico
Bsqueda del agente infeccioso
Portador asintomtico
Infeccin
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CONSIDERACIONES (2)Enfermedades Infecciosas
Transmitidas por Vectores
Vector
Paciente Reservorio
Bsqueda del
agente
infeccioso
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Historia
Francis Crick
James atson
!ar" #ullis
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Enfermedades Infecciosas
ADN
ARN
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Por qu utilizar una
prueba molecular en eldiagnstico de
EnfermedadesInfecciosas?
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Jsti!caci"n de# Dia$n"stico%o#ec#ar
& Dia$n"stico temprano'
Inicio tratamiento
Eitar diseminaci"n deinfecci"n
Eisten a$entesinfecciosos no c#tia*#es
o dif+ci#mente c#tia*#es
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Jsti!caci"n de# Dia$n"stico%o#ec#ar
Crecimiento #ento
,imitada mestra*io#"$ica
Diferenciaci"n dea$entes anti$-nicamentesimi#ares
Epidemio#o$+a mo#ec#ar
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%-todos %o#ec#ares
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Tipos de T-cnicas%o#ec#ares
.re*as Sondas Directas'
Identi!caci"n
%enor sensi*i#idad
%-todos de Amp#i!caci"n
Amp#i!caci"n ADN/ARNAmp#i!caci"n Sondas
Amp#i!caci"n Se0a#es
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Tipos de T-cnicas%o#ec#ares
R,.
.3
Secenciamiento
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Sondas
Acido Nucleco
Puede ser marcado paraidentificacin ycuantificacin
Hibridiza otro cidonucleco complementario
Marcadores
Sustancia Radioactiva (!P"#S" $%&" H'
Sustancia luorescente$ )SH
*iotinilado (avidina+estreptavidina'
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.re*as %o#ec#ares' ADN/ARN
Amp#i!caci"n NAAT(ca#itatio ocantitatio)
.CR Conenciona# 4in house5
.CR en Tiempo Rea#RT .CR
%#tip#e .CR
,A%.
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.CR Conenciona#
02 03 04 08 09 19 21 22 23 29 32 CN
%&'
(ermociclador
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.CR Tiempo Rea#' RT6.CR
Sistema ,i$7tC8c#er
)*+c
PCR (i R l
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Fig, - .uantification of Pseudomonas aeruginosa /" real0time 1ig2t0 C"cler PCR using standard curve anal"sis, In t2e u33er 3art of
t2e diagram4 fluorescence signals of a 5657 dilution series of defined P, aeruginosa genome equivalents %58579 to 5857-' are
dis3la"ed %measurement in du3licates', Based on t2e correlation of crossing3oint CP %PCR c"cle :2ic2 is significantl" different to
t2e /ackground fluorescence noise' to P, aeruginosa *+) concentration4 a standard curve :as calculated %lo:er 3art of t2e
diagram', (2e linear correlation of t2is standard curve %t2eoretical slo3e; determined slo3e;
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,A%.,oop6mediatedisot7erma#
amp#i!cation 4Amp#i!cacion
Isotermica mediada
pore#tas/asas/*c#es/cras5
+ucleic )cids Res, -777 June 5@>
-9%5-'6 e?=,
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.rincipio de ,A%.
No denatraci"n de#ADN (RT9ARN)
Inc*aci"n continaisotermica (:;6:< C)
ADN po#imerasa'desp#a=amiento decadena
Catro primers ( I.>?> 3I. 8 3?)'reconocen : distintasre$iones en e# $en
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CO3AS A%.,ICOR
Base de Presentacin Blgo, Aiovanni .uinte
.reparaci"n de #a%estra
Amp#i!caci"n por .CRHi*ridaci"n de prodctosAmp#i!cados
Detecci"n pordeterminaci"nco#orim-trica
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Chlamydia trachomatis :
.#asmido criptico de 2 prodcto 2; p*
Neisseria gonorrhoeae:
en %6N$o .II codi!ca citosina DNAmeti#transferasa
.rimers SS;1 8 SS;2> prodcto 2;1 p*
A%.,IICACION .OR .CR
Base de Presentacin Blgo, Aiovanni
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A.TI%ACO%3O 2
Detecta ARNrDisponi*#e Chlamydiatrachomatis (2?S) yNeisseria gonorrhoeae
(1:S)
ases'Captra de *#ancoAmp#i!caci"n%ediada porTranscripci"n(T%A)Ensa8o Cin-tico Da#(DBA)
Base de Presentacin Blgo, Aiovanni .uinte
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.rocesamiento A.TI%A
Fuente fotos6 Blgo, Aiovanni .uinte
"
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Separaci"n' R,.Restriction ra$ment ,en$t7
.o#8morp7ism
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Separaci"n' .E
E# t f i d C . # d
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E#ectroforesis de Campo .#sado.#sed6ie#d e# E#ectrop7oresis
(.E)A partir de *acteriasais#adasenotipi!caci"n de*acterias
nosocomia#esso de en=imas derestricci"n no comnes
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%icroarre$#osC7ips de ADN (%icroarra8s)Epresi"n de $enes
Ea#aci"n de resistencia anti*i"ticos
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Secenciamiento6enotipi!cacion
1:S 8 2?S ri*osoma#&estdiostaon"micos
%-todo Sander
.irosecencia
Secencia de na so#a c-##a
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Inicio
Introdcci"n m-todos comercia#es
Atomati=aci"nDiersi!caci"n de so'
Estdio de 3rotes
Vi$i#ancia
Ap#icaciones en Nestro .a+s
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%-todos %o#ec#ares enViro#o$+a
VIH6 Car$a Vira#6Secenciamiento
HCV6 Car$a Vira#
H3V6 Car$a Vira#
C%V6 Car$a Vira#
.VH Detecci"n6enotipi!caci"n
HT,V
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%-todos %o#ec#ares en3acterio#o$+a
Chlamydia trachomatis 6Detecci"n
Neisseria gonorrheae-
Detecci"n
No comercia#es'
Bartonella-Detecci"nEntero*acterias6 Detecci"n
8 Resistencia
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%-todos %o#ec#ares en.arasito#o$+a
Trichomona vaginalis6 Detecci"n
No comercia#es'
Trypanosoma cruzi- Detecci"n
,eis7mania6 Detecci"n
Plasmodium- Detecci"n>Resistencia
Entamoeba Detecci"n>diferenciaci"n
Ventaas 8 Desentaas de #os
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Ventaas 8 Desentaas de #os%-todos de Estdio %o#ec#ar
(1)
Ventaas 8 Desentaas de #os
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Ventaas 8 Desentaas de #os%-todos de Estdio %o#ec#ar
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Ventaas 8 Desentaas de #os
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Ventaas 8 Desentaas de #os%-todos de Estdio %o#ec#ar
(?)
Ventaas 8 Desentaas de #os
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Ventaas 8 Desentaas de #os%-todos de Estdio %o#ec#ar
(@)
Ventaas 8 Desentaas de #os
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Ventaas 8 Desentaas de #os%-todos de Estdio %o#ec#ar
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