diagnóstico molecular de las enfermedades infecciosas en el perú

7/25/2019 Diagnstico Molecular de Las Enfermedades Infecciosas en El Per

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Diagnstico Molecular de

las EnfermedadesInfecciosas en el Per


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CONSIDERACIONES (1)

Enfermedades Infecciosas noTransmitidas por Vectores

Sintomtico

Bsqueda del agente infeccioso

Portador asintomtico

Infeccin


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CONSIDERACIONES (2)Enfermedades Infecciosas

Transmitidas por Vectores

Vector

Paciente Reservorio

Bsqueda del

agente

infeccioso


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Historia

Francis Crick

James atson

!ar" #ullis


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Enfermedades Infecciosas

ADN

ARN


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Por qu utilizar una

prueba molecular en eldiagnstico de

EnfermedadesInfecciosas?


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Jsti!caci"n de# Dia$n"stico%o#ec#ar

& Dia$n"stico temprano'

Inicio tratamiento

Eitar diseminaci"n deinfecci"n

Eisten a$entesinfecciosos no c#tia*#es

o dif+ci#mente c#tia*#es


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Jsti!caci"n de# Dia$n"stico%o#ec#ar

Crecimiento #ento

,imitada mestra*io#"$ica

Diferenciaci"n dea$entes anti$-nicamentesimi#ares

Epidemio#o$+a mo#ec#ar


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%-todos %o#ec#ares


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Tipos de T-cnicas%o#ec#ares

.re*as Sondas Directas'

Identi!caci"n

%enor sensi*i#idad

%-todos de Amp#i!caci"n

Amp#i!caci"n ADN/ARNAmp#i!caci"n Sondas

Amp#i!caci"n Se0a#es


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Tipos de T-cnicas%o#ec#ares

R,.

.3

Secenciamiento


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Sondas

Acido Nucleco

Puede ser marcado paraidentificacin ycuantificacin

Hibridiza otro cidonucleco complementario

Marcadores

Sustancia Radioactiva (!P"#S" $%&" H'

Sustancia luorescente$ )SH

*iotinilado (avidina+estreptavidina'


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.re*as %o#ec#ares' ADN/ARN

Amp#i!caci"n NAAT(ca#itatio ocantitatio)

.CR Conenciona# 4in house5

.CR en Tiempo Rea#RT .CR

%#tip#e .CR

,A%.


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.CR Conenciona#

02 03 04 08 09 19 21 22 23 29 32 CN

%&'

(ermociclador


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.CR Tiempo Rea#' RT6.CR

Sistema ,i$7tC8c#er

)*+c

PCR (i R l


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Fig, - .uantification of Pseudomonas aeruginosa /" real0time 1ig2t0 C"cler PCR using standard curve anal"sis, In t2e u33er 3art of

t2e diagram4 fluorescence signals of a 5657 dilution series of defined P, aeruginosa genome equivalents %58579 to 5857-' are

dis3la"ed %measurement in du3licates', Based on t2e correlation of crossing3oint CP %PCR c"cle :2ic2 is significantl" different to

t2e /ackground fluorescence noise' to P, aeruginosa *+) concentration4 a standard curve :as calculated %lo:er 3art of t2e

diagram', (2e linear correlation of t2is standard curve %t2eoretical slo3e; determined slo3e;


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,A%.,oop6mediatedisot7erma#

amp#i!cation 4Amp#i!cacion

Isotermica mediada

pore#tas/asas/*c#es/cras5

+ucleic )cids Res, -777 June 5@>

-9%5-'6 e?=,


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.rincipio de ,A%.

No denatraci"n de#ADN (RT9ARN)

Inc*aci"n continaisotermica (:;6:< C)

ADN po#imerasa'desp#a=amiento decadena

Catro primers ( I.>?> 3I. 8 3?)'reconocen : distintasre$iones en e# $en


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CO3AS A%.,ICOR

Base de Presentacin Blgo, Aiovanni .uinte

.reparaci"n de #a%estra

Amp#i!caci"n por .CRHi*ridaci"n de prodctosAmp#i!cados

Detecci"n pordeterminaci"nco#orim-trica


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Chlamydia trachomatis :

.#asmido criptico de 2 prodcto 2; p*

Neisseria gonorrhoeae:

en %6N$o .II codi!ca citosina DNAmeti#transferasa

.rimers SS;1 8 SS;2> prodcto 2;1 p*

A%.,IICACION .OR .CR

Base de Presentacin Blgo, Aiovanni


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A.TI%ACO%3O 2

Detecta ARNrDisponi*#e Chlamydiatrachomatis (2?S) yNeisseria gonorrhoeae

(1:S)

ases'Captra de *#ancoAmp#i!caci"n%ediada porTranscripci"n(T%A)Ensa8o Cin-tico Da#(DBA)

Base de Presentacin Blgo, Aiovanni .uinte


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.rocesamiento A.TI%A

Fuente fotos6 Blgo, Aiovanni .uinte

"


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Separaci"n' R,.Restriction ra$ment ,en$t7

.o#8morp7ism


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Separaci"n' .E

E# t f i d C . # d


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E#ectroforesis de Campo .#sado.#sed6ie#d e# E#ectrop7oresis

(.E)A partir de *acteriasais#adasenotipi!caci"n de*acterias

nosocomia#esso de en=imas derestricci"n no comnes


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%icroarre$#osC7ips de ADN (%icroarra8s)Epresi"n de $enes

Ea#aci"n de resistencia anti*i"ticos


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Secenciamiento6enotipi!cacion

1:S 8 2?S ri*osoma#&estdiostaon"micos

%-todo Sander

.irosecencia

Secencia de na so#a c-##a


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Inicio

Introdcci"n m-todos comercia#es

Atomati=aci"nDiersi!caci"n de so'

Estdio de 3rotes

Vi$i#ancia

Ap#icaciones en Nestro .a+s


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%-todos %o#ec#ares enViro#o$+a

VIH6 Car$a Vira#6Secenciamiento

HCV6 Car$a Vira#

H3V6 Car$a Vira#

C%V6 Car$a Vira#

.VH Detecci"n6enotipi!caci"n

HT,V


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%-todos %o#ec#ares en3acterio#o$+a

Chlamydia trachomatis 6Detecci"n

Neisseria gonorrheae-

Detecci"n

No comercia#es'

Bartonella-Detecci"nEntero*acterias6 Detecci"n

8 Resistencia


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%-todos %o#ec#ares en.arasito#o$+a

Trichomona vaginalis6 Detecci"n

No comercia#es'

Trypanosoma cruzi- Detecci"n

,eis7mania6 Detecci"n

Plasmodium- Detecci"n>Resistencia

Entamoeba Detecci"n>diferenciaci"n

Ventaas 8 Desentaas de #os


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Ventaas 8 Desentaas de #os%-todos de Estdio %o#ec#ar

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(?)



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(@)



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