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8/16/2019 Determinación de Plomo Inorgánico en Orina
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D ETERM IN ACIÓ N D EPLO M O IN O RG ÁN ICO EN
O RIN A
Francy Julieth Atuesta Hernández.
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Indicadores deexposición
Indicadores de efecto
LA PLUMBURIA (Pb-U) se expresa en µg/g decreatinina o en µg/l de orinade 24 horas. La muestra deorina se recoge en
recipientes exentos de plomoy de!e ser mantenida entre2 "# y $ "# de temperatura.%e!e tenerse especialcuidado en e&itar la
contaminaci'n am!iental dela muestra. La plum!uria sedetermina por m(todos dea!sorci'n at'mica. )l &alornormal de *!+, es in-erior a µg/g de creatinina.
ÁCIDO DL!AAMI"OL#UL$"ICOURI"ARIO (ALA-U)
La acumulaci'n de ALA yposterior aumento de la excreci'nurinaria del ALA+, se producecomo consecuencia de lainhi!ici'n del plomo so!re el ALA+% y la estimulaci'n del ALA+
sintetasa. 0umerosos estudioshan demostrado 1ue la excreci'nurinaria de este indicador estáasociada a la cantidad de plomometa!'licamente acti&o en elorganismo lo 1ue podrá indicar
su utilizaci'n para e&aluar lacantidad de plomo mo&iliza!leantes del tratamiento 1uelante
e mide en mg/g de creatinina.#omo t(cnica anal3tica se utilizael m(todo %a&is.
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Determinación de plomo en orina - Método de
quelación-extracción / Espectrofotometría de
absorción atómica
la determinaci'n de plomo en orinapor espectro-otometr3a de a!sorci'n
at'mica con llama en un rango deconcentraciones de + µg de*!/litro de orina 524+ 64µmol/litro7.
)l m(todo es 8til para realizar elseguimiento de po!lacionesla!orales potencialmente expuestas
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Fundam ento
La muestra de orina se recoge en un -rascode polietileno utilizando ácido n3trico comoconser&ante. )l plomo se comple9a con
pirrolidinditiocar!amato de amonio 5A*%#7 yel comple9o se extrae con iso!utilmetilcetona5:;caci'n.
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Tom a de m uestra
Las muestras de orina pre-erentemente de 24 horasse toman en -rascos de polietileno 1ue contienen ml de ácido n3trico concentrado. %espu(s dehomogeneizar la muestra agitando se trans>ere unaal3cuota de 4 ml a un -rasco para en&iar al la!oratorio.
Hasta el momento de e-ectuar el análisis las muestrasde!en conser&arse re-rigeradas.
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Procedim iento
?odo el material de &idrio utilizado enel análisis despu(s de su la&adode!e mantenerse sumergido durante&arios minutos en ácido n3trico 1:1 yser despu(s cuidadosamenteen9uagado con agua !idestilada.
Limpieza delmaterial
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*reparaci'n de lamuestra
6. *ipetear 6 ml de orina en un tu!o de centr3-uga.
2. A@adir 6 ml de disoluci'n de ?rit'n +6/A*%# y agitarmecánicamente durante 6 segundos.
. A@adir 2 ml de :;
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*reparaci'n depatrones y cur&a de
cali!raci'n6. *reparar las disoluciones de B 6B 2 y µg
*!/ml
2. %e cada una de estas disoluciones pipetear 6 ml en
tu!os de ensayo.. #on cada uno de los patrones se sigue el mismo
proceso 1ue para las muestras
4. %e!e someterse al mismo proceso 1ue las muestrasy patrones un ensayo en !lanco de agua !idestilada.
. #on las lecturas o!tenidas para los patronescorregidas con el &alor del !lanco se construye lagrá>ca se@al+concentraci'n a9ustando los puntoso!tenidos a una recta.
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Cálculos
Los resultados expresados en micro gramo de plomo porlitro de orina se o!tienen mediante la siguiente expresi'nC
%ondeC# D #oncentraci'n de plomo en µg/litro de
orina. c D #oncentraci'n de plomo en µg/ml
le3da en la cur&a de cali!raci'n.Los resultados pueden re-erirse a la cantidad de creatininapresente en la muestra mediante la siguiente expresi'n
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Determinación del ácido delta-aminolevulínico
(AA! en orina - Método de intercambio iónico /
Espectrofotometría
La determinaci'n del ácido delta+aminole&ul3nico 5ALA7 enorina utiliza un m(todo espectro-otom(trico.
)s aplica!le a la determinaci'n de ni&eles de ALA >siol'gicos y
patol'gicos de hasta $ mg/; e1ui&alente a EE mg/gcreatinina para una creatinuria de 62 g/;.
La determinaci'n de ALA en orina es aplica!le como parámetrocomplementario del ni&el de plomo en sangre al seguimientode po!laciones la!oralmente expuestas a plomo o sus
compuestos i'nicos especialmente en el caso de ni&eles deexposici'n altos 5plum!emias superiores a µg/6 ml7.
#omo -actores 1ue pueden inGuenciar el aumento de ALA enorina aparte de la exposici'n a plomo o sus compuestosi'nicos hay 1ue tener en cuenta el alcoholismo agudoen-ermedades gra&es del h3gado y algunas -ormas de por>rias
hepáticas
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Fundam ento
La orina se hace pasar a tra&(s de un sistema dedos columnas de intercam!io i'nico. )n la primera1ue contiene una resina ani'nica 1ueda retenido
el por-o!ilin'geno 9unto a otras inter-erencias.o!re la segunda conteniendo una resinacati'nica se retiene el ALA 1ue es posteriormenteelu3do con acetato s'dico. A continuaci'n se hacereaccionar con acetilacetona a pH 4E -ormándose
un compuesto pirr'lico 1ue a su &ez reacciona conel p+dimetilamino!enzoaldehido del reacti&o de)hrlich dando un crom'geno de color rosado 1uese mide espectro-otom(tricamente a nm
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Tom a de m uestra
ecoger la orina de 24 horas. A@adir mlde ácido clorh3drico concentrado. :ezclar
!ien y medir el &olumen total. #onser&arlore-rigerado. )n estas condiciones el ALA esesta!le al menos en 2 semanas.
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Procedim iento
e realiza una suspensi'n de la resinautilizando g de resina y ml de agua paracada columna. e depositan 6 ml de dichasuspensi'n en una columna de &idrio o
plástico con&enientemente cerrada con&idrio o algod'n de manera 1ue resulte unacolumna de 2 cm de altura y 6 cm dediámetro.
#olumnas deintercam!io
i'nico
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*reparaci'n delpatr'n
Diso%&ción patrón de ALA (' *+,*%)
*esar 2E mg de ALA+H#; disol&i(ndolo ya-orándolo a 6 ml con la disoluci'ntamp'n pH D 4E
Diso%&ción patrón de traba.o de ALA (*+,/'' *%)
)n el momento del análisis diluir 6. ml dela disoluci'n patr'n de ALA a 6. ml contamp'n acetato de pH D 4.E
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*rocedimiento deanálisis
6. #olocar la columna 1ue contiene la resinaani'nica so!re la cati'nica de manera 1ue laprimera descargue so!re la segunda.
2. *ipetear en la columna superior 1,0 ml de lamuestra de orina y 20,0 ml de agua !idestilada
. etirar y descartar la columna superior yreemplazar el matraz por un tu!o de ensayo de15 x 100 mm.
4. *ipetear 10,0 mL de la disoluci'n de acetatos'dico 1 : en la columna restante recogiendo eleluato en su totalidad
. A@adir a cada tu!o 2 ml de acetilacetona.
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E.*reparaci'n de !lanco y patr'nCI B%anco0 6 ml de acetato de sodio 6 : y 2 ml deacetilacetona.
IPatrón0 ml de acetato de sodio 6 :B 6 ml dedisoluci'n patr'n de tra!a9o de ALA y 2 ml deacetilacetona.
.agitar en(rgicamente los tu!os de muestras !lanco ypatr'n y mantenerlos al !a@o :ar3a hir&iente durante 6minutos.
$. )n cu!etas adecuadas colocar al3cuotas de 6 ml del!lanco patr'n y muestras. A@adir a cada una 6 ml delreacti&o crom'geno.
.:ezclar y esperar 6 minutos para 1ue se desarrolle elcolor
6.Leer las a!sor!ancia a nm -rente al !lanco. Lacoloraci'n o!tenida es esta!le s'lo durante 6 minutospor lo 1ue es necesaria su medida antes de 1uetranscurra este periodo.
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Cálculos
La concentraci'n de ALA en orina se calculamediante las siguientes ecuacionesC
donde #p es laconcentraci'n de
ALA en mg/6 mldel patr'n
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Referencias
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Gracias